СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЮМИНИЯ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ Российский патент 2005 года по МПК G01N33/48 G01N33/52 

Описание патента на изобретение RU2265842C2

Изобретение относится к химико-токсикологическому контролю при санитарно-гигиенической оценке продуктов животноводства, а также прижизненной и посмертной диагностике случайных отравлений животных соединениями алюминия.

В настоящее время соединения алюминия интенсивно используются в медицине, в пищевой промышленности, кормопроизводстве и ветеринарии (в качестве сорбентов, пищевых добавок, добавок в комбикорма, в качестве пестицидов). Соединения алюминия входят в состав лекарственных препаратов, применяемых в медицине и ветеринарии.

Признаки отравления соединениями алюминия включают определенную форму энцефалопатии, нарушение обмена фосфора, кальция, магния, железа и, как следствие, развитие рахита, анемии. В экспериментах на животных было подтверждено нейротоксическое и мутагенное действие алюминия. Кроме того, растет число побочных токсических эффектов при использовании алюминия в составе лекарственных препаратов, что также ставит под сомнение безопасность этого металла.

Для определения алюминия предложен ряд методов, из которых наиболее широко используются фотометрические, так как они легко осуществимы в условиях областных и районных ветеринарных лабораторий, а также в лабораториях санитарно-эпидемиологического надзора.

Известен способ определения алюминия с алюминоном в консервах из рыбы и морепродуктов. Перед проведением анализа необходима минерализация образцов по ГОСТ 26929. В колбу с пробой вносят азотную кислоту из расчета 10 см3 на каждые 5 г пробы. Выдерживают не менее 15 мин, закрывают грушевидной пробкой и кипятят, упаривая до объема 3-5 см3. Колбу охлаждают, вносят 10 см3 азотной кислоты, содержимое упаривают до объема приблизительно 5 см3. Процедуру повторяют 2-4 раза. Затем в колбу вносят 10 см3 азотной кислоты, 5 см3 серной кислоты, 4 см3 хлорной кислоты на каждые 5 г пробы, нагревают и выпаривают до объема примерно 5 см3. Затем колбу охлаждают, добавляют 5 см3 азотной кислоты и 2 см3 хлорной кислоты и нагревают до появления паров серного ангидрида. Последнюю процедуру повторяют до обесцвечивания раствора. Затем раствор охлаждают, добавляют 10 см3 дистиллированной воды и кипятят 10 мин с момента выделения белых паров, затем раствор снова охлаждают. Добавление воды и нагревание повторяют еще два раза.

После минерализации минерализат количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3. Затем в колбу добавляют 1 см3 раствора сульфата аммония, перемешивают и вносят 25-30 мг аскорбиновой кислоты. После перемешивания раствор оставляют стоять 10 мин. Затем в колбу приливают раствор уксуснокислого аммония для доведения рН среды приблизительно до 4,5, добавляют 10 см3 ацетатного буферного раствора, 1 см3 раствора алюминона и оставляют при комнатной температуре на 10 мин. Колбу опускают в кипящую водяную баню. Точно через 5 мин колбу быстро охлаждают до комнатной температуры и доводят содержимое колбы до метки дистиллированной водой. Через 30 мин интенсивность окраски определяют на фотоколориметре относительно раствора сравнения при длине волны 540±5 нм. Раствор сравнения готовят аналогично испытуемому, используя те же реактивы, в тех же объемах и последовательности, начиная с момента минерализации. Массу алюминия в аликвотном объеме минерализата находят с помощью калибровочного графика, который строится следующим образом. В мерные колбы вместимостью 50 см3 вносят 0,0; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0; 14,0 мкг алюминия. В каждую колбу добавляют 20 см3 дистиллированной воды. Далее добавляются те же реактивы и проводятся те же операции, которые описаны в ходе проведения анализа. Минимальная масса алюминия, определяемая данным методом, 3 мкг в колориметрируемом объеме (ГОСТ 28914-91. Консервы и пресервы из рыбы и морепродуктов. Метод определения алюминия. - М. - 1991).

Недостатками данного способа являются его длительность, трудоемкость, большой расход реактивов при минерализации. Реактивами, указанными в способе определения, не удается довести рН среды до 4,5 в указанном объеме. Кроме того, для построения калибровочного графика используют водные растворы, а определение алюминия проводится после предварительной минерализации в смеси кислот с последующей нейтрализацией щелочью. Из-за расхождений в условиях измерений результаты анализа оказываются заниженными.

Известен также способ минерализации смесью азотной, серной и хлорной кислот. Измельченный биологический материал помещают в колбу Кьельдаля объемом 500 см3. К исследуемому материалу добавляют через воронку по 25 см3 концентрированных азотной, серной кислот и 35 см3 37% или 42% раствора хлорной кислоты на 100 г пробы. Колбу закрепляют в штативе вертикально. Над колбой укрепляют воронку и начинают постепенно нагревать, добавляя по каплям азотную кислоту, сначала концентрированную, затем 35-45% раствор. Минерализацию ведут до тех пор, пока раствор не станет прозрачным (Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. - М. - Медицина. - 1975. - С.280-285).

Недостатками данного способа являются его трудоемкость и необходимость постоянного контроля количества азотной кислоты.

Из известных способов наиболее близким к заявляемому является способ определения алюминия в воде с применением эриохромцианина R, который является самым чувствительным реактивом на ион алюминия. В колбу вместимостью 50 см3 помещают аликвотную часть анализируемой воды, добавляют 0,5 см3 гидроксиламина солянокислого, 3 см3 0,1% эриохромцианина R, 10% раствор NaOH по каплям до фиолетовой окраски, затем по каплям 10% раствор уксусной кислоты до желтой окраски, 10 см3 ацетатной буферной смеси (рН 5,4), доливают дистиллированной воды до метки и перемешивают. Через 20 мин измеряют оптическую плотность раствора при длине волны (λ) 535 нм. Этим способом можно определить алюминий при содержании его в пределах от 0,05 до 1,2 мг/л (Руководство по химическому и технологическому анализу воды. - М. - Стройиздат. - 1973. - С.88).

Этот способ не применим к анализу биологических материалов без предварительной пробоподготовки.

Целью изобретения является повышение точности, упрощение и ускорение процесса анализа.

Поставленная цель достигается тем, что при минерализации образцов в колбу Кьельдаля добавляется сразу смесь концентрированных кислот (азотной, серной и хлорной). Колбу неплотно закрывают стеклянной пробкой и выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин. Затем нагревают, не допуская бурного вспенивания. После прекращения выделения бурых паров температуру постепенно повышают и кипятят раствор до полного обесцвечивания. Нагревание в закрытой колбе используют для предотвращения испарения кислот. Этим достигается сокращение времени анализа и расхода реактивов. Затем минерализат количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 20 см3 10% раствора NaOH и перемешивают. В колбу вносят 0,5 см3 гидроксиламина солянокислого, 2 см3 0,3% эриохромцианина R, 10% раствор NaOH по каплям до фиолетовой окраски, 10% раствор СН3СООН до желтой окраски, ацетатную буферную смесь, доливают до метки дистиллированной водой и перемешивают. Через 15 мин измеряют оптическую плотность при λ=535 нм и длине кюветы 1 см. Количество алюминия находят по калибровочному графику, который строится следующим образом. В колбы Кьельдаля вносят концентрированные азотную, серную и хлорную кислоты и кипятят, пока объем не станет равным 3-5 см3. Колбы охлаждают, содержимое количественно переносят в мерные колбы на 100 см3. В каждую колбу добавляют 20 см3 NaOH, 0,0; 1,0; 3,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0; 30,0 мкг алюминия, гидроксиламин солянокислый, эриохромцианин R, по каплям NaOH до фиолетовой окраски, по каплям СН3СООН до желтой окраски, ацетатную буферную смесь (рН 5,4), доливают водой до метки и перемешивают. Через 15 мин измеряют оптическую плотность растворов при λ=535 нм и длине кюветы 1 см. По результатам измерений строят калибровочный график в координатах «Оптическая плотность - содержание алюминия, мкг».

Использование большего количества эриохромцианина R (ER) объясняется тем, что при избытке ER соотношение компонентов в образующемся комплексе Al:ER равно 1:3. При недостатке ER образуются комплексы с соотношением компонентов 1:1 и 1:2, имеющие такую же окраску, но менее интенсивную. Также при использовании большего количества ER наблюдается меньшее отклонение от закона Бугера. Все вышеперечисленное повышает точность и чувствительность определения. Построение калибровочного графика в условиях, сходных с условиями проведения анализа, дает возможность повысить точность анализа. Использование для минерализации смеси кислот позволяет сократить расход реактивов и время проведения анализа. Минерализация образца в закрытой колбе исключает необходимость постоянного добавления азотной кислоты, что упрощает проведение и сокращает время минерализации.

Предлагаемый способ дает возможность осуществить контроль за качеством продуктов животного происхождения при использовании в рационе животных подкормок и ветеринарных препаратов на основе соединений алюминия, а также при случайных отравлениях осуществлять прижизненную и посмертную диагностику токсикоза.

Способ обладает достаточно высокой чувствительностью, относительно прост в исполнении, значительно сокращает время минерализации образца за счет использования смеси кислот и кипячения пробы в закрытой колбе.

Общие с прототипом признаки:

1. Предварительная минерализация образца.

2. Нейтрализация пробы.

3. Определение алюминия фотоколориметрическим методом с помощью калибровочного графика.

Отличительные признаки предлагаемого способа:

1. Минерализацию образца проводят смесью кислот в закрытой колбе.

2. Для построения калибровочного графика используют те же реактивы, в тех же количествах и в той же последовательности, начиная с момента минерализации, которые применяются для проведения анализа;

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. Навеску мышечной ткани, печени, почек или других органов берут на обеззоленный фильтр, заворачивают в него и помещают на дно колбы Кьельдаля. В колбу с пробой вносят 10 см3 концентрированной азотной кислоты, 3 см3 концентрированной серной кислоты и 3 см3 ˜40% хлорной кислоты на каждые 5 г навески и выдерживают 15-20 мин при комнатной температуре. Затем колбу закрывают грушевидной стеклянной пробкой и начинают нагревать на электроплитке, покрытой асбестом, сначала слабо, не допуская вспенивания и выплескивания образца. После бурного выделения паров NO2 (через 10-15 мин) нагрев постепенно увеличивают и кипятят до полного обесцвечивания пробы. Минерализация считается законченной, когда раствор в колбе станет бесцветным и над поверхностью появятся пары серного ангидрида. Колбу с раствором охлаждают. Минерализат количественно переносят дистиллированной водой в мерную колбу вместимостью 100 см3 и добавляют 20 см3 10% раствора NaOH. В колбу вносят 0,5 см3 10% раствора гидроксиламина солянокислого, 2 см3 0,3% эриохромцианина R, 10% раствор NaOH по каплям до фиолетовой окраски, 10% раствор СН3СООН по каплям до желтой окраски, 10 см3 ацетатного буферного раствора (рН 5,4), доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Через 15 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре или фотоколориметре при λ=535 нм и длине кюветы 1 см относительно раствора сравнения. Раствор сравнения готовится аналогично испытуемому, используя те же реактивы, в тех же объемах и той же последовательности, начиная с момента минерализации. Концентрацию алюминия в исследуемом образце определяют с помощью калибровочного графика. Построение калибровочного графика для фотометрического определения алюминия осуществляют следующим образом. Готовят рабочий стандартный раствор KAl(SO4)2*12H2O с содержанием алюминия 1 мкг/см3. В колбы Кьельдаля вносят 10 см3 концентрированной азотной кислоты, 3 см3 концентрированной серной кислоты и 3 см3 ˜40% хлорной кислоты. Колбы ставят на электрическую плитку, покрытую асбестом, и кипятят, упаривая содержимое до объема 3-5 см3. Остывшие растворы количественно переносят в мерные колбы вместимостью 100 см3 и добавляют 20 см3 10% раствора NaOH. В каждую колбу вносят 0,0; 1,0; 3,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0; 30,0 см3 рабочего раствора, 0,5 см3 10% гидроксиламина солянокислого, 2 см3 0,3% эриохромцианина R, 10% раствор NaOH по каплям до фиолетовой окраски, 10% раствор СН3СООН по каплям до желтой окраски, 10 см3 ацетатного буферного раствора (рН 4,5). Содержимое колб доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и через 15 мин измеряют оптическую плотность при λ=535 нм в кювете длиной 1 см относительно первого раствора (с содержанием алюминия 0,0 мкг). По результатам строят график: на оси абсцисс откладывают значения оптической плотности, на оси ординат - соответствующие значения количества мкг алюминия.

Содержание алюминия (X в мг/кг) вычисляют по формуле

,

где А - количество алюминия, найденное по калибровочному графику, мкг;

М - масса образца, взятого для исследования, г.

Чувствительность метода составляет 5 мкг в 100 см3 пробы. Метрологическая характеристика способа представлена в таблице (С.6).

Таблица
Метрологическая характеристика способа определения алюминия в биологических объектах
Анализируемая пробаПредел обнаружения, мг/лЧисло параллельных определений, nВарьирование степени определения, R%Среднее значение степени определения, С%Стандартное отклонениеДоверительный интервал при α=0,05, %Печень0,05588,20-92,2390,060,6990,06±1,76Почки0,05589,24-91,6190,250,4290,25±1,07Селезенка0,05592,99-94,5694,010,2994,01±0,76Головной мозг0,05587,34-88,9988,060,3088,06±0,76Сердце0,05589,24-90,4389,780,2289,78±0,56Легкие0,05588,20-93,1790,740,8690,74±2,21

Похожие патенты RU2265842C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ МЕДИ В РАСТИТЕЛЬНЫХ МАТЕРИАЛАХ 1968
SU209027A1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОРА В БИОЛОГИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛАХ 2000
  • Осадченко И.М.
  • Горлов И.Ф.
RU2183409C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАРГАНЦА В СИККАТИВЕ 1994
  • Гатиятуллина Л.Я.
  • Ахметова Т.И.
RU2069856C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ОБЩЕГО ХРОМА В ВОДЕ 1997
  • Ахметова Т.И.
  • Гатиятуллина Л.Я.
  • Галлямова Э.И.
RU2137112C1
Способ определения белка в хлебопродуктах 1987
  • Емцева Ирина Борисовна
  • Васин Михаил Иванович
  • Евдаев Альберт Яковлевич
SU1508146A1
Способ определения концентрации кадмия в пищевых продуктах 1984
  • Крылова Александра Николаевна
  • Жуленко Василий Николаевич
  • Малярова Марина Алексеевна
SU1278705A1
ФОТОКОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИНКА В СОДЕРЖАЩИХ ЕГО ПРОДУКТАХ 1971
SU305394A1
Способ амперометрического определения хрома 1977
  • Перевощиков Виктор Александрович
  • Перевощикова Валентина Васильевна
SU767033A1
Способ количественного определения азота и сырого протеина в биологических материалах 1985
  • Соболева Галина Алексеевна
  • Попова Екатерина Александровна
SU1325362A1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ПОЧВЕ МЕТОДОМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ С ИНДУКТИВНО-СВЯЗАННОЙ ПЛАЗМОЙ 2021
  • Кузьмин Сергей Владимирович
  • Федорова Наталия Евгеньевна
  • Егорова Марина Валентиновна
  • Родионов Александр Сергеевич
RU2756458C1

Реферат патента 2005 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЮМИНИЯ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ

Изобретение относится к химико-токсикологическому контролю при санитарно-гигиенической оценке продуктов животноводства, а также для прижизненной и посмертной диагностики случайных отравлений животных соединениями алюминия, а именно к способу определения алюминия в биологических объектах, заключающемуся в минерализации анализируемого образца азотной, серной и хлорной кислотами, выдерживании смеси при комнатной температуре, кипячении до полного ее обесцвечивания, охлаждении, нейтрализации, добавлении реакционной ацетатной буферной смеси, с последующим измерением оптической плотности и определением концентрации алюминия по калибровочному графику, отличающийся тем, что для минерализации образца азотную, серную и хлорную кислоту добавляют к образцу одновременно, смесь выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин, затем нагревают в закрытой колбе при постепенном повышении температуры, смесь кипятят до полного обесцвечивания, используют ацетатную буферную смесь, содержащую 10% раствор гидроксиламина солянокислого, 0,3% эриохромцианина R, 10% растворы NaOH и СН3СООН при рН 5,4, а измерение оптической плотности проводят при длине волны λ=535 нм. Технический результат - повышение точности, упрощение и ускорение процесса анализа. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 265 842 C2

Способ определения алюминия в биологических объектах, заключающийся в минерализации анализируемого образца азотной, серной и хлорной кислотами, выдерживании смеси при комнатной температуре, кипячении до полного ее обесцвечивания, охлаждении, нейтрализации, добавлении реакционной ацетатной буферной смеси, с последующим измерением оптической плотности и определением концентрации алюминия по калибровочному графику, отличающийся тем, что для минерализации образца азотную, серную и хлорную кислоту добавляют к образцу одновременно, смесь выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин, затем нагревают в закрытой колбе при постепенном повышении температуры, смесь кипятят до полного обесцвечивания, используют ацетатную буферную смесь, содержащую 10%-ный раствор гидроксиламина солянокнслого, 0,3% эриохромцианина R, 10%-ные растворы NaOH и СН3СООН при рН 5,4, а измерение оптической плотности проводят при длине волны λ=535 нм.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2005 года RU2265842C2

Устройство для производства земляных работ 1930
  • Красовский В.В.
SU28914A1
Метод определения алюминия
Циркуль-угломер 1920
  • Казаков П.И.
SU1991A1
Руководство по химическому и технологическому анализу воды
- М.: Стройиздат, 1973, с.88
Способ спектрофотометрического определения алюминия 1986
  • Мирзоян Фердинанд Вагаршакович
  • Вартапетян Самвел Мартунович
SU1343308A1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЮМИНИЯ (III) И МАРГАНЦА (II) В РАСТВОРАХ 1993
  • Моросанова Е.И.
  • Жалованная С.В.
RU2096764C1
Способ фотометрического определения алюминия 1977
  • Петрова Татьяна Владимировна
  • Саввин Сергей Борисович
  • Монгуш Кара-Кыс Долгаковна
SU791597A1
Sensitive detection of trace aluminium in biological tissues by contocal laser

RU 2 265 842 C2

Авторы

Герунова Л.К.

Бдюхина О.Е.

Даты

2005-12-10Публикация

2003-12-22Подача