СПОСОБ ТЕСТИРОВАНИЯ НА НАЛИЧИЕ РЕВМАТИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/48 G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, в частности к физическому анализу жидких биологических материалов, и может быть использовано в качестве дополнительного теста при диагностике ревматического заболевания.

Известен способ тестирования на наличие ревматического заболевания, в соответствии с которым определяют ревматоидный фактор в крови человека и в синовиальной жидкости. (Л.Т. Пяй "Основы клинической ревматологии", Таллин: Валгус, 1987, с. 55, с. 135). Способ используют при диагностике ревматоидного артрита в качестве вспомогательного.

Из литературы известно, что, в частности, ревматоидный фактор при низких титрах часто выявляется и у здоровых людей, что снижает информативность и достоверность способа тестирования и не позволяет отнести его к претендующим на специфичность (там же, с. 54, 136). Кроме того, способ является сложным и трудоемким, что снижает его оперативность.

Наиболее близким к предлагаемому является способ тестирования на наличие ревматического заболевания, в соответствии с которым исследуют синовиальную жидкость, полученную путем пункции сустава (там же, с. 57). Способ включает ферментологическое и гистологическое изучение синовиальной жидкости, а также иммунологические исследования, в том числе определение ревматоидного фактора.

Способ, в первую очередь, дает неспецифическую информацию о наличии или отсутствии воспаления, что снижает его информативность и достоверность. Получение данных, имеющих определенную ценность при установлении характера артрита, требует более детальных ферментологических и гистологических исследований. Это усложняет способ, повышает его трудоемкость и в результате снижает оперативность. Определение ревматоидного фактора в синовиальной жидкости, как было показано выше, также не позволяет отнести данный способ к специфичным, что снижает его достоверность. Кроме того, использование в известном способе иммунологических исследований еще более усложняет его, повышает трудоемкость, а также требует значительных временных затрат на получение результатов исследований и снижает оперативность. Сложность способа также снижает его достоверность.

Таким образом, выявленные в результате патентного поиска способы тестирования на наличие ревматического заболевания при осуществлении не позволяют достичь технического результата, заключающегося в повышении информативности и достоверности результатов тестирования, в повышении оперативности способов за счет снижения сложности, трудоемкости и временных затрат на выполнение способа.

Предлагаемое изобретение решает задачу создания способа тестирования на наличие ревматического заболевания, осуществление которого позволяет достичь технический результат, заключающийся в возможности повышения информативности и достоверности результатов тестирования, а также в повышении оперативности способа за счет снижения сложности, трудоемкости и временных затрат на его выполнение.

Суть изобретения заключается в том, что в способе тестирования на наличие ревматического заболевания, включающем морфологическое исследование синовиальной жидкости, анализ результатов исследования и диагностику ревматического заболевания по результатам исследования, кроме того, проводят морфологические исследования сыворотки крови, при этом морфологические исследования проводят путем изучения текстуры (жидкокристаллической структуры) синовиальной жидкости и сыворотки крови в динамике в поляризованном свете, для этого готовят два препарата, при этом на одно из предметных стекол наносят сыворотку крови, а на второе предметное стекло наносят синовиальную жидкость, после этого препараты накрывают покровными стеклами и выдерживают при одинаковых условиях окружающей среды до появления на предметных стеклах выраженных типичных текстур, затем поочередно проводят поляризационно-оптическое исследование препаратов путем осмотра всей поверхности каждого образца, результаты осмотра препаратов сравнивают, при этом, если на первом и втором предметных стеклах наблюдают аналогичные текстуры в виде сферолитов с преобладанием точечных множественных форм, или в виде сферолитов и дендритов, или в виде дендритов, то текстуры сравнивают повторно и, если на поверхности обоих стекол наблюдают текстуру с преобладанием точечных множественных сферолитных форм (картина звездного неба) - диагностируют ревматоидный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру с преобладанием средних единичных дендритных форм, а на втором стекле - с мелкими множественными сферолитными формами, то диагностируют реактивный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру из средних единичных сферолитных форм, а на втором стекле наблюдают текстуру, в которой в равных количествах присутствуют точечные множественные сферолиты или сферолиты одновременно с дендритами, то диагностируют остеоартроз.

Технический результат достигается следующим образом. Многие жидкие среды организма человека способны кристаллизоваться, а в определенных условиях - переходить в промежуточное (жидкокристаллическое) состояние. В жидкокристаллическом состоянии среда, сохраняя текучесть, проявляет в поляризованном свете специфические картины - текстуры. Известно, что биологические жидкости представляют собой многокомпонентные системы, часто проявляющие структурную гетерогенность (неоднородность) и обладающие высокой чувствительностью к составу и форме существования компонентов. Например, регуляторные механизмы и фармакологические факторы влияют на соотношение насыщенных и ненасыщенных липидов в сыворотке крови, характер агрегирования липидного комплекса желчи, количество фосфолипидов, производных холестерина и его эфиров, проявляющих жидкокристаллические свойства. Эти изменения на тонком молекулярном уровне проявляются, в частности, в особенностях агрегирования биологических жидкостей на уровне микроструктур. Морфология текстур жидкокристаллической фазы коррелирует с состоянием организма и изменяется при наличии патологии, что и позволяет наблюдать это в динамике в поляризованном свете при оптических обычных увеличениях (авт.св. СССР N 1209168, A 61 B 10/00, 07.02.86; авт.св. СССР N 1486932, G 01 N 33/92, 15.06.89; авт.св. СССР N 1723527, G 01 N 33/92, 30.03.92). В достоверности тестирования важную роль играет выбранный массив тестов, так как используемые способы тестирования не обязательно синхронно выявляют у больного наличие патологии, поскольку каждый в отдельности отражает различные виды метаболизма. Одним из признаков ревматического заболевания является нарушение белкового и жирового обмена. Так, например, у здоровых лиц C-реактивный белок в сыворотке крови определяется в следовых количествах, в то время как у больного человека, в частности при ревматическом заболевании, его концентрация в сыворотке крови может увеличиться в течение 24 - 48 часов в 100 - 1000 раз. Установлено, что способность образования жидкокристаллических структур при растворении в воде проявляют жиры, в первую очередь фосфолипиды и стерины (эфиры холестерина), полипептиды и белки, их комплексы. Белок входит в состав как сыворотки крови, так и синовиальной жидкости. В предлагаемом способе для исследований готовят два препарата: из синовиальной жидкости и из сыворотки крови, для чего их наносят тонким слоем на предметные стекла. Благодаря тому что препараты накрывают покровными стеклами, исключается возможность их химического взаимодействия с окружающей средой. Сохранение одинаковых условий окружающей среды при выдержке препаратов обеспечивает достоверность результатов исследований. Образование выраженных типичных базовых текстур на предметных стеклах означает окончание процесса агрегирования. Это делает нецелесообразным дальнейшее увеличение времени выдержки препаратов и определяет время начала сравнительного исследования текстур обоих препаратов. По результатам сравнения делают выводы. Благодаря тому что в предлагаемом способе проводят тестирование путем одновременного исследования двух жидкостей, а именно: синовиальной жидкости и сыворотки крови, которые отражают, в частности, нарушение белково-жирового обмена, т.е. нарушение метаболизма одного вида, повышается достоверность способа и информативность. Отражение данными биологическими жидкостями нарушения метаболизма одного вида обуславливает наличие совпадений в их текстурах. Поэтому, поскольку биологические жидкости препаратов относятся к одному и тому же пациенту и имеют сходные составляющие, то при корректном выполнении способа после выдержки препаратов при одинаковых условиях окружающей среды до появления на предметных стеклах выраженных типичных текстур их типичные текстуры должны содержать сходные формы. Это и дает возможность для их предварительного сравнения и использования результатов сравнения для дальнейшего анализа. При этом, если в результате сравнения выявляют, что на первом и втором предметных стеклах наблюдают аналогичные текстуры в виде сферолитов с преобладанием точечных множественных форм, или в виде сферолитов и дендритов, или в виде дендритов, то текстуры сравнивают повторно. Поскольку наличие сходных текстур отражает наличие аналогичных составляющих в исследуемых биологических жидкостях, то результаты предварительного сравнения текстур можно рассматривать как предварительное тестирование и, кроме того, они позволяют убедиться в корректности выполнения способа, в частности поддержания одинаковых условий окружающей среды до появления на предметных стеклах выраженных типичных текстур. Это повышает информативность и достоверность предлагаемого способа.

Повторное сравнение текстур препаратов исследуемых биологических жидкостей позволяет уточнить предполагаемый характер ревматического заболевания, что повышает информативность и достоверность предлагаемого способа. При этом, если в результате вторичного сравнения на поверхности обоих стекол наблюдают текстуру с преобладанием точечных множественных сферолитных форм (картина звездного неба) - диагностируют ревматоидный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру с преобладанием средних единичных дендритных форм, а на втором стекле - с мелкими множественными сферолитными формами, то диагностируют реактивный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру из средних единичных сферолитных форм, а на втором стекле наблюдают текстуру, в которой в равных количествах присутствуют точечные множественные сферолиты или сферолиты одновременно с дендритами, то диагностируют остеоартроз.

Поскольку нарушение белково-жирового обмена характерно для ревматических заболеваний, то предлагаемый способ претендует на специфичность, что также повышает его достоверность. Предлагаемый способ может претендовать на специфичность еще и потому, что критерии оценки результатов исследований - характер текстур - получены опытным путем для конкретных случаев. Это также повышает достоверность предлагаемого способа.

Поскольку в способе в качестве критерия оценки используют характер текстуры (кристаллическую картину), которая соответствует вполне определенному составу исследуемой биологической жидкости, предлагаемый способ при тестировании пациента на наличие ревматического заболевания автоматически принимает во внимание физиологический коридор, который учитывает индивидуальные особенности организма пациентов, что также повышает информативность и достоверность способа.

Предлагаемый способ позволяет сократить время для получения окончательных результатов исследований. Это объясняется наглядностью способа, так как окончательную информацию получают без сложной обработки результатов исследований, простым обзором препаратов, по характеру текстуры. При этом не тратится время на обработку полученных результатов, что повышает оперативность способа.

Малое количество вещества, требуемое для анализа, повышает безопасность способа, так как его забор из организма человека практически не нарушает установившегося в нем равновесного состояния. Сравнительная простота выполнения способа повышает его достоверность, так как уменьшает вероятность ошибки.

Таким образом, предлагаемый способ тестирования на наличие ревматического заболевания при осуществлении обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в возможности повышения информативности и достоверности результатов тестирования, а также в повышении оперативности способа за счет снижения сложности, трудоемкости и временных затрат на его выполнение.

Кроме того, по сравнению с прототипом предлагаемый способ достигает дополнительного технического результата, заключающегося в расширении функциональных возможностей, а именно в возможности его использования для дифференциальной диагностики. При этом сам способ тестирования содержит в себе тесты, неизвестные ранее в практике тестирования ревматических заболеваний, что расширяет диапазон тестов, а следовательно, повышает достоверность результатов исследований.

Способ тестирования на наличие ревматического заболевания осуществляют следующим образом. Проводят морфологические исследования сыворотки крови и синовиальной жидкости путем изучения их текстуры (жидкокристаллической структуры) в динамике в поляризованном свете. Для этого готовят два препарата: на одно из предметных стекол наносят сыворотку крови, а на второе предметное стекла наносят синовиальную жидкость. После этого препараты накрывают покровными стеклами и выдерживают при одинаковых условиях окружающей среды до появления на предметных стеклах выраженных типичных текстур. Затем поочередно проводят поляризационно-оптическое исследование препаратов путем осмотра всей поверхности каждого образца. Результаты осмотра препаратов сравнивают. При этом, если на первом и втором предметных стеклах наблюдают аналогичные текстуры в виде сферолитов с преобладанием точечных множественных форм, или в виде сферолитов и дендритов, или в виде дендритов, то текстуры сравнивают повторно. Если на поверхности обоих стекол наблюдают текстуру с преобладанием точечных множественных сферолитных форм (картина звездного неба) - диагностируют ревматоидный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру с преобладанием средних единичных дендритных форм, а на втором стекле - с мелкими множественными сферолитными формами, то диагностируют реактивный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру из средних единичных сферолитных форм, а на втором стекле наблюдают текстуру, в которой в равных количествах присутствуют точечные множественные сферолиты или сферолиты одновременно с дендритами, то диагностируют остеоартроз.

Примеры выполнения способа. Для приготовления препаратов брали два предварительно прошедших идентичную обработку предметных стекла. На первое стекло наносили тонким слоем синовиальную жидкость, а на второе - сыворотку крови. Препараты выдерживали на воздухе в течение 1 минуты, затем накрывали покровными стеклами. Препараты выдерживали в течение суток при одинаковых условиях окружающей среды, так как по истечении этого времени на поверхности предметных стекол формировались типичные текстуры. Необходимо обратить внимание на качество обработки предметного стекла, чтобы избежать артефактов при исследованиях. Формирование текстур происходит за счет испарения с краев препарата и, в первую очередь, проявляется в периферийных областях, поэтому просмотр начинали с периферийных областей. После чего просматривали центральные области. Просмотр производили в поляризованном свете при скрещенных николях при увеличении х150...х250. Осмотр всей поверхности образца производили продольно поперечным сканированием с шагом, равным величине поля зрения. Все обнаруженные особенности фиксировали. Для исследований могут быть использованы микроскопы серий БИОЛАМ (с поляризованными фильтрами), ПОЛАМ, МБИ.

Пример. Больная Б., возраст 30 лет, предварительный диагноз - реактивный артрит.

Для исследований у больной был произведен забор синовиальной жидкости и сыворотки крови. Были приготовлены для исследований препараты из синовиальной жидкости и сыворотки крови. После этого препараты накрывали покровными стеклами и выдерживали сутки. На предметном стекле формировались выраженные типичные текстуры. Затем проводили поляризационно-оптическое исследование препарата путем осмотра всей поверхности образца, затем поочередно проводили поляризационно-оптическое исследование препаратов путем осмотра всей поверхности каждого образца. Результаты осмотра препаратов сравнивали. При этом на первом и втором предметных стеклах наблюдали аналогичные текстуры в виде сферолитов и дендритов. Текстуры сравнивали повторно. При этом на первом предметном стекле наблюдали текстуру с преобладанием средних единичных дендритных форм, а на втором стекле - текстуру с мелкими множественными сферолитными формами, что позволяет диагностировать реактивный артрит.

Результаты диагностики подтверждены общеклиническими, лабораторными и рентгенологическими исследованиями.

Изобретение может быть использовано в медицине, а именно для физического анализа жидких биологических материалов. У пациента проводят морфологические исследования сыворотки крови путем изучения структуры синовиальной жидкости и сыворотки крови в поляризационном свете. Для этого готовят два препарата: на один наносят сыворотку крови, а на другой - синовиальную жидкость. После этого препараты накрывают покровными стеклами и выдерживают при одинаковых условиях окружающей среды до появления на предметных стеклах выраженных типичных текстур, затем поочередно проводят поляризационно-оптическое исследование препаратов путем осмотра всей поверхности каждого образца. Результаты осмотра препаратов сравнивают и, если на первом и втором предметных стеклах наблюдают аналогичные текстуры в виде сферолитов с преобладанием точечных множественных форм, или в виде сферолитов и дендритов, или в виде дендритов, то текстуры сравнивают повторно и, если на поверхности обоих стекол наблюдают текстуру картины звездного неба, с преобладанием точечных множественных сферолитных форм, - диагностируют ревматоидный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру с преобладанием средних единичных дендритных форм, а на втором стекле - с мелкими сферолитными формами, то диагностируют реактивный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру из средних единичных форм, а на втором стекле наблюдают текстуру, в которой в равных количествах присутствуют точечные множественные сферолиты или сферолиты одновременно с дендритами, то диагностируют остеоартроз. Способ более прост, менее трудоемок, повышает оперативность и снижает временные затраты на его выполнение.

Способ тестирования на наличие ревматического заболевания, включающий морфологическое исследование синовиальной жидкости, анализ результатов исследования и диагностику ревматического заболевания по результатам исследования, отличающийся тем, что кроме того проводят морфологические исследования сыворотки крови, при этом морфологические исследования проводят путем изучения текстуры жидкокристаллической структуры синовиальной жидкости и сыворотки крови в динамике в поляризованном свете, для этого готовят два препарата, при этом на одно из предметных стекол наносят сыворотку крови, а на второе предметное стекло наносят синовиальную жидкость, после этого препараты накрывают покровными стеклами и выдерживают при одинаковых условиях окружающей среды до появления на предметных стеклах выраженных типичных текстур, затем поочередно проводят поляризационно-оптическое исследование препаратов путем осмотра всей поверхности каждого образца, результаты осмотра препаратов сравнивают, при этом, если на первом и втором предметных стеклах наблюдают аналогичные текстуры в виде сферолитов с преобладанием точечных множественных форм, или в виде сферолитов и дендритов, или в виде дендритов, то текстуры сравнивают повторно и, если на поверхности обоих стекол наблюдают текстуру картина звездного неба, с преобладанием точечных множественных сферолитных форм, - диагностируют ревматоидный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру с преобладанием средних единичных дендритных форм, а на втором стекле - с мелкими множественными сферолитными формами, то диагностируют реактивный артрит, если на первом предметном стекле наблюдают текстуру из средних единичных сферолитных форм, а на втором стекле наблюдают текстуру, в которой в равных количествах присутствуют точечные множественные сферолиты или сферолиты одновременно с дендритами, то диагностируют остеоартроз.