СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОБМЕННЫХ НАРУШЕНИЙ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, точнее к лабораторной диагностике. Проблема ранней диагностики обменных нарушений, приводящих к развитию того или иного заболевания по-прежнему остается актуальной.

Сыворотка крови /СК/ - биологическая жидкость, отражающая состояние метаболического гомесотата организма. Ее главные компоненты - вода, белки, липиды, микроэлементы гликопротеиды в начале любого заболевания подвергаются изменениям - качественным и количественным, что отражается на изменении структуры и пространственной ориентации этого биоколлоида.

Поэтому поиски способов диагностики ранних обменных нарушений требуют и специфического подхода и тактики выявления метаболических сдвигов по структуре СК.

Известен способ исследования структуры СК по картинам кристаллизации раствора сернокислой магнезии, которую вводят в исследуемую биологическую жидкость /Кристаллографический метод исследования биологических субстратов. Методические рекомендации. М., 1981/.

Недостатком способа является:
- разрушение нативной структуры СК введением в нее раствора сернокислой магнезии,
- наблюдение за структурами в виде кристаллов сернокислой магнезии.

Известен способ исследования сывороточной системы крови. Авторское свид. N 1399681. Бюл. N 20 от 30.05 1988 г. Приоритет от 3.04.1985 г. Авторы: Савина Л.В., Туев А.В., Чирвинский Н.П. и др.

Цель изобретения по прототипу - упрощение способа и повышение информативности за счет возможности оценки структурно-пространственной ориентации СК.

Способ позволяет изучать структуры ксерогеля СК человека и животных, а также исследовать процесс кристаллизации собственных солей СК, тип которой обусловлен структурно-пространственной ориентацией белков самой системы.

Способ позволяет наблюдать преимущественно за ориентационным поведением солевой компоненты СК.

Способ осуществляют следующим образом:
СК венозной крови наносят в виде 10 - 30 капель на изотропную подложку /чашка Петри, предметное стекло/ и помещают в электрический суховоздушный шкаф при обычном атмосферном давлении и при 37^oC.

СК наносят пипеткой, диаметр капель 4-5 мм. Сушка происходит на протяжении 3-4 ч до полного удаления влаги.

Полученный препарат микроскопируют в проходящем свете.

Основные этапы способа:
1. Берут венозную кровь 3-5 мл.

2. Центрифугируют для получения СК.

3. В каплях наносят на предметное стекло.

4. Высушивают при 37 - 38^oC на протяжении 3-4 ч.

5. Микроскопируют в проходящем свете.

6. Определяют картину кристаллизации солевой компоненты
Примеры результатов исследования приведены на фото 1, 2, 3.

Фото 1. Общий вид препарата высушенной капли СК здорового человека, х 90.

Фото 2. Кристаллограмма солевой компоненты СК здорового человека, х 240.

Фото 3. Кристаллограмма /КГ/ СК больного с сахарным диабетом. Солевая компонента, х 240.

Недостатки прототипа:
1. Травмирование вены.

2. Длительность сушки пробы /3-4 ч/
3. Ограниченность способа в связи с тем, что возможно наблюдение только за солевой компонентой.

Цель предлагаемого изобретения:
1) повышение информативности,
2) упрощение способа,
3) обеспечение ранней диагностики заболевания и обменных нарушений по сыворотке крови
Задачи:
1) упростить способ приготовления препарата,
2) изучить структуры СК по различным кристаллограммам за счет метаболических нарушений:
- диспротеинемия,
- дислипидемия,
- гипермукополисахародемия,
3) изучить структуры СК при различных заболеваниях.

Сущность изобретения заключается в том, что для определения обменных нарушений берут не венозную, а периферическую кровь, размещают ее между изотропными пластинами и после высушивания под микроскопом определяют метаболические сдвиги по картинам кристаллизации.

Способ осуществляют следующим образом:
1. Для забора используют периферическую кровь /из пальца/, для чего скарификатором наносят повреждение в области пальца руки человека.

2. Капилляром Панченкова набирают кровь 0,06 - 0,1 мл
3. Полученный объем центрифугируют для получения сыворотки.

4. Сыворотку в виде капель объемом 0,01 - 0,02 мл каждая наносят на предметное стекло и покрывают покровным, т.е. размещают между двумя изотропными пластинками
6. Под микроскопом изучают картину кристаллизации отдельных компонентов, после чего по отклонению от нормы дифференцируют заболевание.

Примеры. Фото 4 - 8.

Пример 1. Фото 4. КГ СК здорового человека. Видны нитевидные кристаллы, х 240.

Кровь из пальца здорового человека, полученная при помощи скарификатора, забирается капилляром Панченкова в объеме 0,1 мл, центрифугируется и в виде капель тарированной пипеткой /объемом 0,01 мл/ наносится на предметное стекло покрывается покровным и сушится в суховоздушном шкафе на протяжении 1 ч при 37^oC, затем микроскопируется в проходящем свете. Нарушений метаболизма у данного исследуемого не выявлено.

Пример 2. Фото 5. КГ СК б-го с предполагаемым атеросклерозом. Б-ой И., 49 лет. История б-ни 1245.

В поле зрения виден кристалл холестерина, радиально-лучистый, х 240. Содержание ХС = 7,8 ммоль/л, норма - 4,3 ммоль/л.

Метаболический сдвиг представлен гиперхолестеринемией.

Диагноз атеросклероза подтвердился.

Технология: кровь из пальца при помощи капилляра Панченкова в объеме 0,08 мл центрифугируется, затем капли полученной сыворотки объемом 0,02 мл каждая наносят на предметное стекло, накрывают покровным и помещают в суховоздушный шкаф на протяжении 2 ч при 38^oC.

Полученный препарат микроскопируют
Пример 3. Фото 6. КГ сыворотки крови б-ой К., 26 лет. N истории б-ни 1523. Предполагаемый диагноз - хронический гепатит.

В поле зрения присутствуют пластинчатые агрегаты, образованные преимущественным повышением уровня гамма-фракций, уровень которых равен 22%, норма - 16 - 17%, тип метаболических сдвигов соответствует диспротеинемии.

Для ранних стадий метаболических изменений при хроническом гепатите характерны диспротеинемии. Предполагаемый диагноз подтвердился.

Технология: капилляром Панченкова кровь из пальца забирают в центрифужную мини-пробирку в количестве 0,08 мл, центрифугируют и полученную СК микропипеткой наносят на предметное стекло, каждая капля объемом 0,01 мл накрывается покровным стеклом, сушится в суховоздушном шкафе 1 ч при 37^oC и микроскопируется.

Пример 4. Фото 7. КГ сыворотки крови б-го с предполагаемым диагнозом - ревматоидный артрит. Видны скелетные кристаллы типа ледяных узоров, обусловленные преимущественным повышением уровня альфа-белковых фракций, содержание которых составляет 8%, норма - 3%. Метаболический сдвиг обусловлен диспротеинемией мелкодисперсных фракций, повышение которых характерно для ревматоидного артрита на ранних стадиях его развития.

Предполагаемый диагноз подтвердился.

Технология: Кровь из пальца при помощи капилляра Панченкова в количестве 0,1 мл набирают в центрифужную пробирку, центрифугируют и полученную СК микропипеткой наносят на стеклянную пластинку в виде капель, объемом каждая 0,01 мл, капли накрывают покровными стеклами, сушат в суховоздушном шкафу 2 ч при 38^oC, полученный препарат микроскопируют.

Пример 5. Фото 8. КГ СК б-го Н., 56 лет, история б-ни N 1656. Предполагаемый диагноз: латентный сахарный диабет.

В поле зрения образца присутствуют разветвленные дендритные кристаллы, характерные для повышения уровня триглицеридов, обусловленные наличием гипертриглицеридемии IV типа, маркера сахарного диабета, инсулинонезависимого. Уровень триглицеридов равен 2,5 ммоль, норма - 0,96 ммоль/л. Диагноз сахарного диабета подтвердился.

Технология: Сыворотку крови в виде капель, взятую капилляром Панченкова, наносят на предметное стекло, каждая капля объемом 0,02 мл. Препарат сушат в суховоздушном шкафе при 37^oC на протяжении 1 ч, полученный препарат микроскопируют.

Пример 6. Фото 9. КГ СК б-го К., 36 лет, подозреваемого в наличии гипотиреоза. История б-ни N 1434.

В поле зрения присутствует длинная фибрилла, образованная повышенным уровнем содержания мукополисахаридов, или гликопротеидов, х 240.

Уровень оксипролина в СК равен 3,24 мкг/мл, норма - 1,3 мкг/мл. Заболевание - гипотиреоз характеризуется накоплением в крови гликопротеидов/оксипролина/, по уровню которого и диагносцируется стадия развития болезни.

Предполагаемый диагноз гипотиреоза подтвердился.

Технология: сыворотку крови, полученную при центрифугировании 0,1 мл периферической крови наносят каплями объемом 0,01 мл каждая на предметное стекло, накрывают каждую покровным стеклом и сушат в суховоздушном шкафу при 37^oC на протяжении 1 ч. Полученный препарат микроскопируют.

Преимущество предлагаемого способа:
1. Упрощение - не надо травмировать вены пациента, берут периферическую кровь из пальца.

2. Количество забираемой крови минимально по сравнению с прототипом - от 0,06 до 0,1 мл /в прототипе - 3 - 5 мл/
3. Укорочение времени сушки - 1-2 ч, в прототипе - 3-4 ч.

4. Выявление различных типовых метаболических структур, представленных в виде кристаллограммы одного образца, в прототипе - только одна структура в виде кристаллограммы солевой компоненты.

Предлагаемый способ апробирован в клинических условиях - свыше 5000 примеров.

Способ помогает получить информацию о "структурном" течении патологических метаболических процессов на различных стадиях их развития, в т.ч. на ранних.

Полученные образцы - модель ин витро. Картины различной кристаллизации СК возникают за счет ее перенасыщения теми или иными продуктами метаболизма.

При раннем нарушении коллоидной защиты СК, обусловленном той или иной патологией, эти метаболиты самокристаллизуются за счет "раздавливания" капли изотропными пластинками, вследствие чего они выпадают в осадок. Ыа

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Проводят забор периферической крови, размещают ее между изотропными пластинками и после высушивания под микроскопом определяют метаболические сдвиги по картине кристаллизации. При наличие радиально-лучистых кристаллов диагностируют гиперхолестеринемию, разветвленных дендритов - гипертриглицеридемию, пластинчатых агрегатов и ледяных узоров - диспротеинемию, а при наличие фибриллов - гипергликопротоидемию. Способ обеспечивает снижение травматичности, упрощение процесса приготовления препарата, сокращение сроков диагностики заболевания, высокую информативность, а также возможность проводить обширное скранирующее метаболическое мониторирование. 9 ил.

Способ дифференциальной диагностики обменных нарушений, включающий микроскопическое исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что пробу периферической крови размещают между изотропными пластинками, высушивают до полного удаления влаги, изучают картину кристаллизации и при наличии радиально-лучистых кристаллов диагностируют гиперхолестеринемию, разветвленных дендритов - гипертриглицеридемию, пластинчатых агрегатов и ледяных узоров - диспротеинемию, а при наличии фибриллов - гипергликопротеидемию.