Изобретение относится к новым аскомицинам, обладающим фармацевтической, например противовоспалительной активностью. В изобретении также предлагаются способ получения этих новых соединений и содержащие их фармацевтические композиции.
Аскомицины, из которых наиболее известны FK-506 и сам Ascomycin, составляют класс лактамных макролидов, многие из которых обладают мощной иммунодепрессивной или противовоспалительной активностью. FK-506 является макролидным иммунодепрессантом, продуцируемым Streptomyces tsukubaensis N 9993. Структура FK-506 известна (appendix to the Merck Index, 11 th ed. (1989)) как раздел A5. Ascomycin описан, например, патент США 3244592. Также известно большое число родственных соединений, сохраняющих основную структуру FK-506 и Ascomycin (EP 184162, EP 315973, EP 323042, EP 423714, EP 427680, EP 465426, EP 474126, WO 91/02736, WO 91/13899, WO 91/19495, EP 484936, ЕП 532088, ЕП 532089. WO 93/5059). Ascomycin, FK-506 и их структурно сходные аналоги и производные в данном описании все именуются как "аскомицины".
Как класс аскомицины являются сильными иммунодепрессивными и противовоспалительными соединениями, но их фармацевтическая полезность ограничена их токсичностью. FK-506, например, может быть токсичен для почек, печени и центральной нервной системы в фармацевтически целесообразных дозах. Кроме того, хотя системная иммунодепрессия может быть желательна при некоторых состояниях, например при отторжении трансплантата, обычно она нежелательна при лечении локальных воспалительных состояний, например астмы или дерматита.
В настоящее время установлено, что определенные аскомицины, несущие одну или более чем одну физиологически гидролизуемых и приемлемых оксикарборнильных группировок, являются высоко эффективными локально активными противовоспалительными агентами, например на коже или в дыхательных путях, но при этом представляют собой так называемые "пластичные" лекарственные средства, что означает, что они быстро трансформируются in vivo до аскомицинов, несущих незащищенные карбоксильные группы, и эти соединения не являются системно активными. Дополнительно открыто, что соответствующие аскомицины, несущие незащищенные карбоксильные группы, хотя намного менее активны по существу, чем аскомицины, несущие физиологически гидролизуемые оксикарбонильные группировки, тем не менее являются очень сильнодействующими при местном, особенно кожном применении. Как кислотные, так и эфирные формы аскомицинов, описываемые здесь, хорошо переносимы и в отличие от аскомицинов, применяющихся в настоящее время, не вызывают системной иммунодепрессии или заметных побочных эффектов в фармакологически активных дозах.
Таким образом, аскомицин по данному изобретению представляет собой аскомицин, несущий одну или более чем одну физиологически гидролизуемую и приемлемую оксикарбонильную группировку, или одну или более чем одну карбоксильную группировку, который применим для изготовления системно неиммунодепрессивного, локально активного лекарственного средства для местного нанесения, например на кожу или в дыхательные пути, в частности соединение формулы I, Iа или Iб, как описано и представлено ниже.
Физиологически гидролизуемая и приемлемая оксикарбонильная или карбоксильная группировка или группировки соответствующим образом присоединены к аскомицину через неметаболически лабильный спейсер, состоящий в длину из 1-18 углеродных единиц, предпочтительно из 6-8 углеродных единиц, и возможно содержащий циклическую (например, ароматическую) или разветвленную структуру и/или один или более чем один гетероатом, например азот, кислород или серу. Спейсер предпочтительно содержит ариленовую группировку, например фениленовую группировку. При определении длины спейсерной группировки следует понимать, что указанная длина - это длина самой длинной последовательной цепи атомов в этой группировке, не считая боковых цепей или мостиковой части циклических структур. Таким образом, длину п-фенилкарбамоильного спейсера, например, можно считать равной 6 углеродным единицам - четыре для п-фенилена, одна для азота и одна для карбонила. Этот спейсер соответственно соединен с аскомицином посредством гидроксила в 4-ом положении циклогексильного кольца аскомицина (т.е. в 28-ом положении, применяя стандартную нумерацию для FK-506), например посредством O-карбаматного или O-тиокарбаматного сочетания. Например, изобретение включает в себя 28-O-карбамоил- или 28-O- тиокарбамоил-аскомицин, в котором карбамоильная или тиокарбамоильная группировка не является метаболически лабильной, но несет или связана с одной или более чем одной (например, до 4-х) карбоксильной или физиологически гидролизуемой группировкой, предпочтительно через углеродную цепь, имеющую длину до 16 углеродных единиц, предпочтительно 4-6 углеродных единиц, предпочтительно содержащую фениленовую группировку. Под "системно неиммунодепрессивным, локально активным" подразумевают соединение, которое по меньшей мере в 10 раз более активно при локальном введении, чем при внутривенном введении, в подходящей модели воспаления, например, по меньшей мере десятикратно более активно при введении путем ингаляции, чем при внутривенном введении, в сенсибилизированной модели на Brown-Norway крысах, описанной ниже.
Под физиологически гидролизуемым и приемлемым оксикарбонилом подразумевают группировку формулы RO-CO-, которая отщепляется при физиологических условиях с образованием (1) спирта (ROH), переносимого во вводимых дозах, и (2) аскомицина, несущего одну или более чем одну карбоксильную группу. Приемлемые оксикарбонильные группировки включают в себя, например, алкоксикарбонил, например,
(C1-6)алкоксикарбонил и арилоксикарбонил; предпочтительно метоксикарбонил, этоксикарбонил, трет.-бутоксикарбонил или бензилоксикарбонил.
Аскомицины по данному изобретению предпочтительно представляют собой соединения формулы I:
где Y - углеводород из 1-16 углеродных единиц в длину, имеющий линейную, разветвленную и/или циклическую (например, ароматическую) структуру и возможно содержащую до трех гетероатомов, например азота, кислорода или серы и несущий от 1 до 4 карбоксильных или физиологически гидролизуемых и приемлемых оксикарбонильных группировок;
Q - О или S;
R1 - H, алкил или арил:
R2 - водород или гидроксил;
R3 - метил, этил, пропил или аллил;
R4 - гидроксил или алкоксил;
R5 - оксогруппа или (H, OH);
R6 - оксогруппа, (H, OH) или (H, алкоксил);
n равно 1 или 2; и
связь, обозначенная параллельными сплошными или пунктирными линиями, есть либо простая, либо двойная связь;
при условии, что когда R1 - алкил или арил, тогда Y - карбоксиметил или (физиологически гидролизуемый и приемлемый оксикарбонил)метил или арил, или арил или (алкил-, алкокси-, алкиламино- или диалкиламино)-арил, несущий от 1 до 4 карбоксильных или физиологически гидролизуемых и приемлемых оксикарбонильных группировок;
в свободной форме или в форме физиологически приемлемой соли.
Для формулы I, независимо, предпочтительны следующие заместители:
Y - предпочтительно (1) алкил, арил, алкарил, алкоксиарил, аралкил, алк- или диалк-аминоалкил, или алк- или диалк-аминоарил, несущий от 1 до 4 физиологически гидролизуемых и приемлемых оксикарбонильных группировок, или (2) алкил, арил, алкарил, алкоксиарил, аралкил, алк- или диалк-аминоалкил, или алк- или диалк-аминоарил, несущий от 1 до 4 карбоксильных группировок. Наиболее предпочтительно, Y - карбоксиметил или (физиологически гидролизуемый и приемлемый оксикарбонил)метил, или арил или (алкил-, алкокси, алкиламино- или диалкил-амино)-арил, несущий от 1 до 4 карбоксильных или физиологически гидролизуемых и приемлемых оксикарбонильных группировок.
Q - предпочтительно О.
R1 - предпочтительно H, алкил или бензил, например H, метил, бензил, наиболее предпочтительно H.
R2 - предпочтительно гидроксил.
R3 - предпочтительно этил или аллил.
R4 - предпочтительно гидроксил.
R5 - предпочтительно оксо-группа.
R6 - предпочтительно (H, метокси-группа).
n - предпочтительно 2.
Связь, обозначенная параллельными сплошными или пунктирными линиями, - предпочтительно простая связь.
Особенно предпочтительными соединениями формулы I являются соединения формулы Ia:
в которой Q, R1 - R6, n и пунктирная линия такие, как определено выше,
W - метилен или фенилен, и
Z выбран из карбоксила и физиологически гидролизуемого и приемлемого оксикарбонила, и когда W - фенилен, его также выбирают из алкил, алкокси, алкиламино и диалкил-амино группы, несущей от 1 до 4 карбоксильных или физиологически гидролизуемых и приемлемых оксикарбонильных группировок,
в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.
Предпочтительно, W - п-фенилен.
Где W - фенилен, например п-фенилен, Z - предпочтительно выбран из бензилоксикарбонилалкила, алкоксикарбонила, (алкоксикарбонил)1-4алкила, (алкоксикарбонилалкил)1-2амино-группы и алкоксикарбонилалкокси-группы, например метоксикарбонилметила, этоксикарбонилметила, бензилоксикарбонилметила, 2-(метоксикарбонил)этила, 3- (метоксикарбонил)пропила, метоксикарбонила, 2-(метоксикарбонил)этенила, метоксикарбонилметокси-группы, ди(метоксикарбонил)-метила, ди(трет-бутоксикарбонил)-метила, 2-ди(метоксикарбонил)-этила, 1-(диметоксикарбонил-метил) -2-ди(метоксикарбонил)-этила или ди(метоксикарбонилметил)амино-группы или из карбоксила и карбоксиалкила, например карбоксиметила. Где W - метилен, Z - предпочтительно карбоксил или алкоксикарбонил, например метоксикарбонил или этоксикарбонил.
В частности, предпочтительным классом соединений являются, следовательно, соединения формулы Iб:
где Q, R1, R3 и Z - такие, как определено выше,
в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.
Наиболее предпочтительными являются соединения формулы Iб, в которых Q - это O, R1 - H, R3 - этил или аллил, и Z - карбоксиметил или метоксикарбонилметил.
Следует понимать, что соединения формул I, Iа и Iб могут существовать в свободной форме или в некоторых случаях могут образовывать соли, например соли, полученные присоединением кислоты или основания по амино- или карбоксильным группам соответственно. Считается, что все эти физиологически приемлемые формы солей входят в объем данного изобретения.
Применяемые здесь термины "алк-" или "алкил" предпочтительно относятся к алифатической группировке, содержащей до шести атомов углерода (цепь, которая может быть разветвленной, линейной или циклической, возможно ненасыщенной, возможно прерванной одной или более чем одной эфирной (-O-) связью и/или возможно замещенной, например, одной или более чем одной молекулой галогена), особенно к насыщенному разветвленному или линейному C1-4алкилу; и термины "ар-" или "арил" предпочтительно относятся к ароматической углеводородной группе с одиночным или двойным кольцом, например фенилу, бензилу, толилу, нафтилу и тому подобное (которые могут быть возможно замещенными, например одной или более чем одной молекулой галогена), особенно к фенилу или бензилу.
Следует понимать, что соединения формул I, Iа и Iб могут существовать в форме одного или более чем одного изомера, стереоизомера или таутомера, например в виде оптических или геометрических изомеров благодаря наличию ассиметричных атомов углерода и двойных связей, в виде таутомеров - благодаря енолизации или другим равновесным перегруппировкам, которые также включены в объем данного изобретения. Предпочтительная конформация та же, что у аскомицина или FK-506, например формулы Iб.
Соединения формул I, Iа и Iб предпочтительно получают путем взаимодействия 28-O-активированного аскомицина (например соединения формулы I, где кислород в 4-ом положении циклогесильного кольца несет активирующую группу вместо карбомоильной или тиокарбомоильной группировки) с соединением формулы Y-N(R1)H, где Y и R1 - такие, как определено выше (возможно в карбокси-защищенной форме, например, где Y несет один или более карбоксилов), снятия защиты с продукта в случае необходимости и выделения соединения формулы I, Iа и Iб в свободной или солевой форме, 28-O-активированный аскомицин соответственно получают путем взаимодействия исходного аскомицина, например соединения формулы I, имеющего гидроксил в 4-ом положении циклогексильного кольца, например Ascomycin или FK- 506, с O-активирующим реагентом, например трифосгеном в случае карбаматных соединений или тиофосгеном в случае тиокарбаматных соединений, при соответствующих условиях протекания реакции, например предпочтительно при низкой температуре (например, при температуре ниже 0oC, предпочтительней ниже -60oC) в присутствии органического основания. Возможно, исходный аскомицин может быть гидрокcизащищенным, чтобы предотвратить активацию по другой локализации, кроме желаемой, а защиту с продукта реакции снимают либо до, либо после введения аминозаместителя, но эта операция не является обязательной, особенно в случае, когда активация осуществляется при низких температурах, поскольку гидроксигруппа на циклогексильном кольце аскомицина, как правило, значительно более доступна и реактивна, чем какая-либо другая из гидрокисгрупп молекулы.
Соединения формул I, Iа, Iб получают, соответственно, следующим образом:
(1) для получения соединения формул I, Iа и Iб, несущего одну или более физиологически гидролизуемых и приемлемых оксикарбонильных группировок, этерифицируют соответствующий аскомицин, несущий одну или более карбоксильных группировок, соответствующим спиртом, например гидроксиалкилом или гидроксиарилом, в частности метанолом, этанолом, трет.-бутанолом или бензиловым спиртом; или
(2) для получения соединения формул I, Ia и Iб, несущего одну или более карбоксильных группировок, гидролизуют соответствующий аскомицин, несущий одну или более оксикарбонильных группировок,
и выделяют соединение формул I, Iа и Iб в свободной форме или в форме соли.
Аскомицины по изобретению обладают мощной локальной иммунодепрессивной и противовоспалительной активностью. Их особенностью является тот факт, что они ингибируют антиген-индуцированную инфильтрацию воспалительных клеток, например, в дыхательных путях или коже. In vivo данная активность проявляется после местного введения, например после местного введения в дыхательные пути через легкие или нанесения на кожу. Отличительной чертой аскомицинов по изобретению является то, что они проявляют заметно сниженную активность или в значительной мере лишены такой активности, как например противовоспалительная или иммунодепрессивная активность, in vivo при системном введении, например при пероральном или внутривенном введении.
Иммунодепрессивные и противовоспалительные свойства аскомицинов по изобретению могут быть продемонстрированы в стандартных тест-моделях in vitro и in vivo, например, следующим образом:
1. In vitro иммунодепрессия:
Реакция смешанной культуры мышиных лимфоцитов
Около 0,5 • 106 лимфоцитов из селезенок самок (8-10 недель) мышей линии Balb/c инкубируют в течение 5 дней в 0,2 мл клеточной ростовой среды с примерно 0,5 • 106 лимфоцитов из селезенок самок (8-10 недель) мышей линии СВА. Тестируемое вещество добавляют в среду в различных концентрациях. Активность оценивают по способности подавлять ассоциированную с синтезом ДНК пролиферацию, определяемую по включению меченного радиоактивным изотопом тимидина.
Аскомицины по настоящему изобретению, имеющие физиологически гидролизуемую оксикарбонильную группировку, ингибируют включение тимидина при концентрациях порядка 0,005 - 0,025 мкг/мл. Соединения из примеров 1, 2, 7 и 8 демонстрируют в этом анализе активность, примерно схожую или лишь слегка меньшую, чем сам FK-506, с относительной ИК50 примерно от 3 до примерно 15. Кислотные формы этих соединений, однако, значительно менее активны. Например, соединения из примеров 1 и 7 оба превращаются in vivo в кислоту из примера 19, которая имеет относительную ИК50, равную в этом анализе примерно 150.
2. Модель астмы:
Аллерген-индуцированная эозинофилия легкого
Воздействие на крыс линии Brown Norway вдыхаемым антигеном (овальбумин, ОА) вызывает эозинофилию легкого максимум через 48 часов. В дополнение к числу эозинофилов, статус активации этих клеток можно оценить путем измерения ферментной активности фермента из гранул эозинофила - пероксидазы эозинофилов (ЕРО). В настоящих экспериментах оценивают ингибирование накопления легочных эозинофилов аскомицинами по данному изобретению.
Овальбумин (10 мкг/мл) перемешивают в смесителе (в течение 1 часа на льду) с гидроксидом алюминия (10 мг/мл) и вводят подкожно одновременно с вакциной В. pertussis (коклюш) (0,25 мл/крысу внутрибрюшинно) самцам крыс линии Brown Norway (около 200 г). Инъекцию ОА вместе с адъювантом повторяют через 15 и 21 день. На 28-ой день сенсибилизированных крыс изолируют в пластиковых трубках и подвергают действию аэрозоля ОА (3,2 мг/мл) в течение одного часа, применяя систему исключительно носового дыхания. Животных усыпляют спустя 48 часов фенобарбиталом (250 мг/кг внутрибрюшинно). Легкие промывают, применяя 3 аликвоты (4 мл) раствора Хенкса (Hank's) (сбалансированный солевой раствор Хенкса HBSS х 10, 100 мл; ЭДТА 100 мМ, 100 мл; N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновая кислота (HEPES), 1 М, 10 мл; 1 л воды), выделенные клетки объединяют, высушивают на воздухе методом мазка и окрашивают для дифференцировки по типам клеток. Клетки идентифицируют и подсчитывают при масляной иммерсии (х 1000). Отсчитывают минимум 500 клеток в мазке и рассчитывают общую популяцию клеток каждого типа.
Для того чтобы определить, является ли активность преимущественно локальной или системной, оценивают относительную эффективность различных способов введения. При пероральном введении тестируемое вещество вводят перорально суспендированным в трагаканте, посредством желудочного зонда либо за 1, либо за 6 часов до и через 24 часа после воздействия антигена. Для внутривенного или внутрибрюшинного введения соединение растворяют в смеси этанола (0,2%), полиэтиленгликоля (PEG) (66,7%) и воды. При внутритрахеальном введении соединение вводят в виде порошка, суспендированного в физиологическом растворе, содержащем диметилсульфоксид (DMSO) (2,5%). Для изучения действия вещества через ингаляцию тестируемое вещество микронизируют для введения опытным животным, фиксированным в камере, приспособленной для проточного дыхания только через нос. Во всех случаях введение совершают за 1 час или за 6 часов до и через 24 часа после введения овальбумина.
У необработанных животных введение ОА индуцирует увеличение всех типов клеток в BAL (бронхоальвеолярный лаваж)-жидкости через 24 часа после введения. Предварительное введение аскомицинов в соответствии с данным изобретением путем ингаляции в дозах порядка 0,1-15,0 мг/кг снижает число эозинофилов в BAL дозозависимым образом по сравнению с контрольными животными, не подвергавшимися обработке. Число других лейкоцитов (макрофагов, нейтрофилов) также снижается. Например, соединения из примеров 1, 2 и 7, приведенных ниже, после внутритрахеального введения в дозе примерно 1 мг/кг или ингаляции в дозе примерно 0,4 мг/кг демонстрируют способность ингибировать более чем на 50% накопление эозинофилов. В отличие от FK-506, который является слишком сильнодействующим в данной модели, введен ли он внутривенно, внутритрахеально, подкожно или посредством ингаляции, аскомицины по данному изобретению, например из примеров 1, 2 и 7, практически неактивны или по крайней мере в 10 раз менее активны при введении внутривенно, перорально или подкожно, демонстрируя тем самым, что их активность является локальной, а не системной.
3. Кожные модели:
3.1 Аллергический контактный дерматит у мыши
Оценивается противовоспалительная активность соединений при местном нанесении на модели аллергического контактного дерматита у мышей. Группам из 8 самок мышей линии NMRI (примерно 30 г) сенсибилизированных путем накожного нанесения 2%-ного оксазолона, наносят провокационную пробу оксазолона в районе правого уха. Через 30 минут тест-зоны обрабатывают местно 10 мкл испытываемого соединения (в тест-группах животных) или только носителем (контрольные группы). Левые уши остаются не обработанными провокационной пробой и не подвергаются лечению. Активность определяют через 24 часа после нанесения провокационной пробы путем определения веса наружного уха в качестве меры отека у опытных и контрольных животных. Активные соединения ингибируют увеличение веса наружного уха.
Аскомицины по данному изобретению, особенно те из них, что несут одну или более чем одну карбоксильную группу, демонстрируют в этой модели местную активность того же порядка или чуть выше, что и FK-506. Аскомицины по данному изобретению, имеющие одну или более чем одну карбоксильную группировку, особенно сильно действуют локально. В концентрациях 0,004 - 0,01% соединение из примера 21, например, показывает от 47% до 69% ингибирования по сравнению с 57%-ным ингибированием для FK-506 в концентрациях порядка 0,01%. Аскомицины по данному изобретению, имеющие одну или более чем одну физиологически гидролизуемую и приемлемую оксикарбонильную группировку, также активны, например, ингибируют опухание наружного уха примерно на 35% при концентрациях порядка 0,01% в случае соединения из примера 2.
3.2 Аллергический контактный дерматит у домашних свиней
Противовоспалительная активность вводимых местно соединений оценивают на известной модели свиного аллергического контактного дерматита (J. Invest. Dermatol. (1992) 98: 851-855). Молодым домашним свиньям, сенсибилизированным 2,4-динитрофторбензолом (DNFB), вводят провокационную пробу 1% DNFB на 24 тест-зонах на обеих дорсолатеральных сторонах спины. Тест-зоны обрабатывают местно растворенными тест-соединениями или только носителем через 0,5 и 6 часов после введения провокационной пробы. Через день после введения провокационной пробы полуколичественно оценивают общие изменения зон, обработанных тест-соединением и носителем. Активные соединения ингибируют эритему и инфильтрацию.
Аскомицины по данному изобретению проявляют местную активность в этой модели того же порядка, что и FK-506. Аскомицины по данному изобретению, несущие одну или более чем одну карбоксильную группировку, в некоторой степени более сильнодействующие, так например, при концентрации 0,13% соединение из примера 20 показывает 49%-ное ингибирование по сравнению с зонами, обработанными носителем, а соединение из примера 2 в той же концентрации показывает 25%-ное ингибирование.
Аскомицины по данному изобретению соответственно полезны для лечения заболеваний или состояний, чувствительных или требующих местной противовоспалительной, иммунодепрессивной и родственной терапии, например для местного введения при лечении заболеваний или состояний глаз, носовых проходов, внутриротовой полости или прямой кишки и особенно кожи, дыхательных путей или легкого. Особенностью аскомицинов по данному изобретению служит тот факт, что они позволяют осуществлять местную противовоспалительную, иммунодепрессивную и родственную терапию, избегая или снижая нежелательные системные побочные эффекты, например общую системную иммунодепрессию.
Аскомицины по данному изобретению особенно полезны при лечении путем ингаляции заболеваний и состояний дыхательных путей или легкого, в частности воспалительных и обструктивных заболеваний дыхательных путей. Они особенно полезны при лечении заболеваний или состояний дыхательных путей или легкого, связанных или характеризующихся инфильтрацией воспалительных клеток или другим воспалительным событием, сопровождающимся воспалительными клетками, например накопления эозинофилов и/или нейтрофилов. Наибольшую пользу они имеют при лечении астмы.
Аскомицины по данному изобретению полезны при лечении астм любого типа и происхождения, включая как наследственную бронхиальную астму, так и приобретенную бронхиальную астму. Они полезны при лечении атонической и неатопической астмы, астмы, вызванной физической нагрузкой, бронхиальной астмы, включая аллергическую астму, бронхиальную астму, индуцированную астмой, вызванной физической нагрузкой, производственную астму, астму, индуцированную перенесенной бактериальной инфекцией, а также другие неаллергические астмы. Лечение астмы следует понимать также как обширное лечение синдрома "стерторозного дыхания ребенка", то есть лечения субъектов, например, в возрасте до 4-5 лет, проявляющих симптомы стридора, особенно по ночам, и диагносцируемых как "хрипящие младенцы", составляющих отдельную категорию пациентов, нуждающуюся в пристальном медицинском надзоре и в настоящее время более корректно определяемую как ранние астматики или астматики в начальной стадии. Аскомицины по данному изобретению особенно полезны для лечения астмы у субъектов, чей астматический статус является стероидозависимым, либо стероидоустойчивым.
Аскомицины по данному изобретению также полезны для лечения бронхита или для лечения хронических или острых респираторных заболеваний, связанных с бронхитом. Аскомицины по данному изобретению могут применяться для лечения бронхита любого типа или происхождения, включая, например, острый бронхит, арахидный бронхит, катаральный бронхит, хронический бронхит, крупозный бронхит, гнойный туберкулезный бронхит и так далее.
Аскомицины по данному изобретению также полезны при лечении пневмокониоза (воспалительное, широко распространенное заболевание легких, часто сопровождающееся закупоркой дыхательных путей, хронического и острого характера, возникающего при многократном вдыхании пыли) любого типа и происхождения, включая, например, аллюминоз, антракоз, асбестоз, бериллиоз, халикоз, птилоз, сидероз, силикоз, табакоз и особенно биссиноз.
Аскомицины по данному изобретению также могут быть использованы для лечения связанных с эозинофилами нарушений в дыхательных путях (включая патологическую инфильтрацию эозинофилов дыхательных тканей), включая гиперэозинофилию при ее действии на дыхательные пути и/или легкие, а также, например, эозинофил-связанные нарушения в дыхательных путях, являющиеся следствием или сопутствующие синдрому Леффлера (Loffler's), эозинофильной пневмонии, паразитической (особенно метазойной) инвазии (включая тропическую эозинофилию), бронхолегочному аспергиллезу, множественному узелковому артерииту (включая синдром Шарга-Штрауса (Churg-Strauss)), эозинофильной гранулеме и эозинофил-связанным нарушениям в дыхательных путях, вызванных реакцией на лекарственные средства.
Слово "лечение", примененное выше в связи с лечением заболеваний дыхательных путей и легких и особенно астмы, следует понимать как охватывающее как симптоматические, так и профилактические способы лечения, которое представляет собой экстренное лечение, например, острого воспаления (симптоматическое лечение), а также продвинутое лечение для профилактики или ограничения длительной симптомологии (профилактическое лечение). Термин "лечение", примененный в настоящем описании и в формуле изобретения в связи с таковыми заболеваниями, нужно интерпретировать соответствующим образом, включая как симптоматическое, так и профилактическое лечение, например в случае астмы - симптоматическое лечение для снятия острого воспаления и профилактическое лечение для ограничения текущего воспалительного статуса и для снятия в будущем бронхиального обострения, связанного с воспалением.
Аскомицины по данному изобретению могут быть также использованы для лечения любого заболевания или состояния дыхательных путей или легкого, требующего иммунодепрессивной терапии, например для лечения аутоиммунных заболеваний легких (например для лечения саркоидоза, альвеолита или хронического гиперсенситивного пневмонита) или для поддержания аллогенного трансплантата легкого, например, при пересадке легкого или сердца.
Как ранее указывалось для целей, указанных выше, аскомицины по данному изобретению следует вводить местно в пределах дыхательных путей, например через легкие и/или посредством ингаляции. Также ранее было указано, что аскомицины по данному изобретению высокоэффективны при местном введении, но лишены системной активности или проявляют относительно малую системную активность, например, при пероральном введении. Аскомицины по данному изобретению, таким образом, представляют собой средство для лечения вышеуказанных заболеваний и состояний дыхательных путей или легких, позволяющие избежать нежелательных системных побочных эффектов, например, в результате непреднамеренного заглатывания лекарственного препарата при ингаляционной терапии. (Замечено, что в ходе действий, необходимых для осуществления введения препарата путем ингаляции, до 90% и более вводимого лекарства будет в норме заглатываться нежели вдыхаться).
Путем применения аскомицинов, активных при местном введении, например, эффективных при вдыхании, но системно неактивных, данное изобретение делает лечение аскомицинами доступным для лиц, для которых данная терапия могла быть исключена, например, вследствие риска системных иммунодепрессивных побочных эффектов.
Аскомицины по данному изобретению (особенно несущие карбоксильную группировку) могут также вводиться дермально, а именно местно на кожу, например для лечения кожных заболеваний, опосредованных иммунными механизмами, таких как псориаз, контактный дерматит, атопический дерматит, очаговая аллопеция, множественная эритема, герпетический дерматит, склеродерма, витилиго, гиперсенситивный васкулит, крапивница, буллезный пемфигоид, красная волчанка, пузырчатка, врожденный буллезный эпидермолиз и другие воспалительные и аллергические состояния кожи. Аскомицины по данному изобретению могут вводиться совместно с противовоспалительными, иммуносудепрессивными или другими фармакологически активными агентами, например кортикостероидами, антигистаминами, антибиотиками, противогрибковыми препаратами и др.
Аскомицины по данному изобретению могут быть также полезны при лечении других заболеваний и состояний, в частности заболеваний и состояний, имеющих аутоиммунную или воспалительную компоненту, для лечения которых может применяться местная терапия, например при лечении заболеваний и состояний глаз, таких как конъюнктивит, сухой кератоконъюнктивит и весенний конъюнктивит, а также для поддержания роговичного трансплантата, заболеваний, действующих на носовую систему, включая аллергический ринит, а также заболеваний прямой кишки, например болезни Крона (Crohn's) и язвенного колита.
Для целей, указанных выше, аскомицины по данному изобретению можно применять в любой дозированной форме, подходящей для местного введения в нужную область.
Таким образом, для лечения заболеваний дыхательных путей или легких аскомицины по данному изобретению могут вводиться через легкие посредством ингаляции при помощи соответствующего распыляющего аппарата. Для этой цели аскомицины по данному изобретению могут выпускаться в любой приемлемой мелкодисперсной или легко диспергируемой форме, пригодной для введения в дыхательные пути или в легкие, например в форме тонкоизмельченных сухих частиц или в форме дисперсии или раствора в любой подходящей (удобной для введения через легкие) твердой или жидкой среде-носителе. Для введения в форме сухих частиц аскомицины по данному изобретению могут, например, использоваться в так называемой микронизированной форме без каких-либо дополнительных материалов, в разведении с другими подходящими тонкоизмельченными инертными твердыми носителями или разбавителями (например глюкозой, лактозой, маннитом, сорбитом, рибозой, маннозой или ксилозой), в форме частичек с оболочкой или иной подходящей форме, известной из уровня техники для введения через легкие тонкоизмельченных веществ.
Легочное введение может быть осуществлено с помощью любой подходящей системы, известной из уровня техники для введения лекарственных веществ в сухой или жидкой форме посредством ингаляции, например аэрозольного ингалятора, распылителя, ингалятора для сухого порошка и тому подобного устройства. Предпочтительно следует применять устройство дозированного введения, то есть устройство, способное при каждом приведении в действие выдавать определенные количества аскомицина. Такие устройства известны из уровня техники.
Приемлемые формы для местного введения для лечения заболеваний и состояний кожных покровов включают в себя, например, кремы, гели, мази, пасты, припарки, пластыри, трансдермальные наклейки и т.п. Препараты для нанесения на кожу должны содержать известное из уровня техники вещество, улучшающее проникновение в кожу, например озон.
При введения через нос аскомицины по данному изобретению должны, соответственно, вводиться в жидкой форме через назальный аппликатор. Формы, используемые для лечения глаз, будут включать в себя примочки, настойки, гели, мази и накладки для глаз, известные из уровня техники. Для ректального введения, например для местной терапии прямой кишки, аскомицины по данному изобретению могут вводиться в форме суппозитория или клизмы, в частности в растворе, например в растительном масле или в подобной масляной системе для применения в качестве удерживающей клизмы.
В настоящем изобретении дополнительно предлагается:
А. Способ лечения заболевания или состояния, требующего противовоспалительной, иммунодепрессивной или родственной терапии, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, при котором воздействуют местно эффективным количеством аскомицина по данному изобретению; а также
Б. Аскомицин по данному изобретению для применения в качестве фармацевтического средства, например для применения в лечении болезни и состояния, требующего противовоспалительной, иммунодепрессивной или родственной терапии, например для применения в вышеописанном способе А.
Способ, описанный выше в А, особенно применим для лечения заболеваний и состояний глаз, носа, горла, ротовой полости, прямой кишки или, особенно, дыхательных путей, легких и кожи. Он применим для любой болезни или состояния, описанного выше и приведенных далее. Аскомицины по данному изобретению, несущие физиологически гидролизуемую и приемлемую оксикарбонильную группировку или группировки, особенно хорошо подходят для лечения заболеваний или состояний дыхательных путей или легких, требующих противовоспалительной и подобной терапии, включая отторжение трансплантата легкого, и особенно любой болезни или состояния дыхательных путей или легких, характеризующихся инфильтрацией воспалительных клеток, например для лечения астмы. Аскомицины по данному изобретению, несущие карбокси-группировку или группировки, особенно хорошо подходят для лечения заболеваний или состояний кожи, требующих противовоспалительной или подобной терапии, например для лечения псориаза, контактного дерматита, атопического дерматита и других воспалительных или аллергических состояний кожи.
В настоящем изобретении дополнительно предлагается:
В. Фармацевтическая композиция для местного введения, а именно в форме, подходящей для местного введения, содержащая аскомицин по данному изобретению вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, или аскомицин по данному изобретению в форме, или в средстве, или в устройстве, способном осуществить или облегчить местное введение.
Фармацевтически приемлемые разбавители или носители, указанные выше в В, являются разбавителями или носителями, приемлемыми для местного введения в указанной области терапии, а именно разбавителями или носителями, приемлемыми для местного введения через легкие, кожу, назально, в глаза или ректально. Препараты в форме для местного введения, то есть способные осуществить или облегчить местное введение, включают в себя, например, препараты активного ингредиента (т.е. по данному изобретению) в виде сухого порошка в существенно чистой форме, например подобные известным из уровня техники препаратам, применяемым для введения из ингаляционного устройства для сухого порошка. Средства или устройства, способные осуществить или облегчить местное введение, включают в себя такие устройства, как ингаляторы и контейнеры и подобные средства, при помощи которых активные ингредиенты могут быть доставлены в форме, приемлемой для местного нанесения. Предпочтительными воплощениями по пункту В являются следующие: (1) обеспечивающие возможность местного введения в дыхательные пути или легкие, например посредством ингалации, в случае аскомицинов по данному изобретению, несущих одну или более чем одну оксикарбонильную группировку, и (2) обеспечивающие возможность нанесения на кожу, например в виде мази или крема, в случае аскомицинов по данному изобретению, несущих одну или более чем одну карбоксильную группировку.
Дозы аскомицинов по данному изобретению, применяемые при реализации способа по данному изобретению, будут, естественно, варьировать в зависимости от места, предназначенного для лечения, конкретного состояния, предназначенного для лечения, серьезности состояния, субъекта, подлежащего лечению (например, относительно его веса, возраста и тому подобного), а также желаемого эффекта.
В общем, для лечения заболеваний или состояний дыхательных путей или легких, например при применении в лечении воспалительного или обструктивного заболевания дыхательных путей, например астмы, аскомицины по данному изобретению будут соответственно вводиться местно в дыхательные пути или легкие, например, путем ингаляции, в дозах порядка 0,01-50 мг в день, например 0,1-5 мг в день, наиболее предпочтительно от 0,4 до 1,6 мг/день, например при введении из системы дозированного введения в сериях от 1 до 5 вдохов при каждом введении с повторением введений от 1 до 4 раз в день, например, 200 - 800 мг один или два раза в день ингаляцией. Дозы при каждом введении будут, таким образом, составлять примерно 0,0025 - 10 мг, более приемлемо 0,1 - 1,0 мг, например, при введении при помощи системы дозированного введения, в частности дающего возможность ввести 0,02 - 1,0 мг аксомицинов за один прием.
Для лечения заболеваний глаз и носа аскомицины по данному изобретению будут, в основном, вводиться в форме соответствующей композиции, например глазных капель, геля, примочки для глаз и т.п. или капель для носа, аэрозоля для носа или т.п., при содержании от 0,005 до около 5%, особенно от примерно 0,01 до примерно 1% аскомицина по массе, в соответствующем приемлемом для глазного или носового введения разбавителе или носителе для введения на поверхность глаза или назально в количестве от примерно 0,05 до примерно 0,2 мл композиций, например от примерно 0,05 до примерно 0,1 мл композиции, однократно или от двух до трех раз ежедневно.
Для лечения заболеваний или состояний прямой кишки в общем приемлемая суточная доза аскомицинов по изобретению будет составлять порядка от примерно 0,01 до примерно 5, предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 1,0 мг/кг при введении в виде удерживающей клизмы однократно или в виде разделенных доз 2х в день. Каждая введенная доза будет, таким образом, соответственно содержать от примерно 0,1 до примерно 350, предпочтительно от примерно 1 до примерно 150, или более предпочтительно от примерно 5 до примерно 70 мг аскомицина по данному изобретению вместе с подходящим для ректального введения разбавителем или носителем. Приемлемые концентрации аскомицина для применения в таких системах на основе удерживающей клизмы составляют порядка от примерно 0,05 до примерно 2, предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 1,0 мг/мл.
Для кожного введения при лечении заболеваний и состояний кожи аскомицины по данному изобретению будут вводиться в основном в приемлемой для нанесения на кожу форме, содержащей терапевтически эффективную концентрацию аскомицина по данному изобретению, например от примерно 0,001 до 10%, например 0,004% - 1% по массе аскомицина по данному изобретению вместе с приемлемым для нанесения на кожные покровы разбавителем или носителем. Препараты для кожного введения могут быть в форме кремов, мазей, гелей и систем чрескожного введения, например пластырей, и в дополнение к инертным разбавителям или носителям могут также содержать соответствующие агенты, улучшающие проникновение в кожу, подобно составам, известным из уровня техники. Такие композиции будут соответственно наноситься на участок для лечения в количестве от примерно 0,005 до примерно 0,05 г/см2, 1, 2 или 3 раза в день.
ПРИМЕРЫ
Таблица I сравнивает соединения формулы Iб, в которой Z, Q, R1 и R3 являются такими, как задано. Bz означает бензил.
Таблица II предоставляет дополнительные примеры соединений формулы I, в которой R2 и R4 - гидроксил, R5 - оксо-группа, R6 - (H, метокси), n равно 2, и связь, представленная параллельными пунктирной и прямой линиями, является простой связью, a Y, Q, R1 и R3 такие, как задано. Стереохимия всех соединений относится к формуле Iб.
Пример 1 готовится следующим образом.
К раствору Ascomycin (6,0 г, 7,57 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (4,62 г, 37,8 ммоль) в 75 мл дихлорметана добавляют по каплям раствор трифосгена (0,84 г, 2,83 ммоль) в дихлорметане (15 мл) при -77oС. Через 1 час добавляют твердый диметиловый эфир 2-(4-аминофенил)-малоновой кислоты (2,7 г, 12,1 ммоль). Охлаждающую баню убирают и суспензию оставляют нагреваться до температуры окружающей среды. Реакционную смесь перемешивают еще час и добавляют этилацетат и насыщенный водный раствор NaCl. Затем органическую фазу дважды отмывают (1н. HCl) и выпаривают до сухости, получая пенистый осадок, который после очистки флэш-хроматографией дает чистый продукт, т.пл. 115-120oC (этанол-вода), (M + Li)+ = 1047.
Пример 2 готовится следующим образом.
К раствору FK506 (10,0 г, 12,4 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (7,5 г, 61,7 ммоль) в 60 мл дихлорметана добавляют по каплям раствор трифосгена (1,36 r, 4,6 ммоль) в дихлорметане (40 мл) при -77oC. Через час добавляют метиловый эфир 4-аминофенилуксусной кислоты (3,1 г, 18,5 ммоль). Охлаждающую баню убирают и суспензию оставляют нагреваться до температуры окружающей среды. Реакционную смесь перемешивают еще час и добавляют этилацетат и насыщенный водный раствор NaCl. Затем органическую фазу дважды отмывают (1н. HCl) и выпаривают до сухости, получая пенистый осадок, который после очистки методом флэш-хроматографии дает чистый продукт, т.пл. 105-109oC (этанол-вода); (M+Li)+ = 1001; 13C-ЯМР(CDCl3), отобранные данные: 212,79, 298,10, 172,03, 153,04, 137,03, 129,76, 119,75, 96,90, 51,94, 40,41, 39,57, 9,30.
Примеры 3-18 и 21-26 приготавливают аналогично, используя в качестве исходного материала Ascomycin, где R3 - этил, и FK506, где R3-аллил, и заменяя соответствующие молярные количества аминов формулы X-Y'-N(R')H (где X, Y' и R' те же, что указано выше) на диметиловый эфир 2-(4-аминофенил)-малоновой кислоты из примера 1 или метиловый эфир 4-аминофенилуксусной кислоты из примера 2. Тиокарбамидные соединения (например, где Q - S) готовятся аналогично, применяя тиофосген вместо трифосгена в качестве активирующкго реагента.
Пример 19 готовят следующим образом. К раствору Ascomycin (6,0 г, 7,57 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (4,62 г, 37,8 мМоль) в 75 мл дихлориметана добавляют по каплям раствор трифосгена (0,84 г, 2,83 ммоль) в дихлорметане (15 мл) при -77oC. Через час добавляют триметилсилиловый эфир 4-амино-фенилуксусной кислоты (12,1 ммоль). Охлаждающую баню убирают, и суспензию оставляют нагреваться до температуры окружающей среды. Реакционную смесь перемешивают еще час и добавляют этилацетат и насыщенный водный раствор NaCl. Затем органическую фазу дважды отмывают (1н. HCl) и выпаривают до сухости, получая остаток, который очищают методом флэш-хроматографии. Получившийся продукт можно подвергнуть дальнейшей очистке путем осаждения из смеси этанол-вода. Очищенное соединение имеет точку плавления 132-135oC.
Пример 20 готовят, как пример 19, используя FK-506 в качестве исходного материала вместо аскомицина для того, чтобы получить чистое соединение с точкой плавления 135-138oC.
Изобретение относится к новым аскомицинам общей формулы I, где Y, представляет собой фенилен; Z выбран из карбоксила и физиологически гидролизуемого оксикарбонила или из алкильной, алкоксильной, алкиламино- или диалкиламиногруппы, несущей от 1 до 4 карбоксильных или физиологически гидролизуемых оксикарбонильных группировки; Q-O или S; R1 - H, алкил или арил; R2 - водород или гидроксил; R3 - метил, этил, пропил или аллил; R4 - гидроксил или алкоксил; R5 -оксогруппа или (H, OH), R6 - оксогруппа, Н, ОН (H, алкоксил); n - целое число 1 или 2, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают противовоспалительной активностью. Описан также способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе. 4 с. и 11 з.п.ф-лы, 2 табл.
где Y представляет собой фенилен;
Z выбран из карбоксила, физиологически гидролизуемого и приемлемого оксикарбонила, или из алкильной, алкоксильной алкиламино- или диалкиламиногруппы, несущей от 1 до 4 карбоксильных или физиологически гидролизуемых оксикарбонильных группировок;
Q представляет собой O или S;
R1 представляет собой Н, алкил или арил;
R2 представляет собой водород или гидроксил;
R3 представляет собой метил, этил, пропил или аллил;
R4 представляет собой гидроксил или алкоксил;
R5 представляет собой оксогруппу или (Н, ОН);
R6 представляет собой оксогруппу, (Н, ОН) или (Н, алкоксил);
n является целым числом 1 или 2,
связь, обозначенная параллельными сплошной и пунктирной линиями, представляет собой или простую, или двойную связь,
в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.
где Q, R1 и R3 такие, как определено в п.1 для формулы I;
Z представляет собой карбоксил или физиологически гидролизуемый и приемлемый оксикарбонил или алкил, алкокси, алкиламиногруппу или диалкил-аминогруппу, несущую от одной до четырех карбоксильных или физиологически гидролизуемых оксикарбонильных группировок,
в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.
Приоритет по пунктам:
06.04.1995 и 20.12.1995 - изобретение в равной мере раскрыто в первых заявках, соответствующих указанным приоритетам.
| US 4929611 A, 29.05.1990 | |||
| Огнетушитель | 0 |
|
SU91A1 |
| Экономайзер | 0 |
|
SU94A1 |
| Экономайзер | 0 |
|
SU94A1 |
| Разборный с внутренней печью кипятильник | 1922 |
|
SU9A1 |
| Машковский М.Д., Лекарственные средства | |||
| - М.: Медицина, 1986, т.2, с.175-176. | |||
