ВАКЦИНА ПРОТИВ СТРЕПТОКОККОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2002 года по МПК A61K39/09 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, а именно к конструированию бактериальных вакцин для профилактики стрептококкоза крупного рогатого скота.

Стрептококкоз крупного рогатого скота повсеместно регистрируется в скотоводческих хозяйствах и наносит огромный ущерб. У взрослых животных стрептококкоз проявляется абортами, метритами и маститами. Телята болеют с первых дней рождения: пупочный сепсис, поражение суставов, энтерит, пневмония. Летальность молодняка может достигнуть 70%. При этом большие затраты дополняются нарушением технологии выращивания, снижением продуктивности, а также за счет проведения трудоемких и дорогостоящих ветеринарно-санитарных мероприятий при ликвидации этой болезни.

Известная вакцина против диплококковой инфекции содержит антиген только из патогенных штаммов D. Septicus, относящихся в настоящее время к стрептококкам серологической группы Д и не предохраняет от стрептококков серологических групп В и С, которые часто являются этиологическим фактором заболевания не только телят, но и коров (Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты, г. Москва, издательство сельскохозяйственной литературы, журналов и плакатов, 1963, с. 221-226).

Технический результат изобретения заключается в том, что вакцина согласно изобретению предохраняет от стрептококков серологических групп В, С и Д, в результате чего снижается количество заболевших телят, абортов, метритов и маститов у взрослых животных.

Сущность изобретения: вакцина дополнительно содержит адъювант из гидроокиси алюминия, а в качестве культурального антигена - инактивированную суспензию клеток патогенных штаммов стрептококков серогрупп В и Д, имеющих степень патогенности не ниже DLМ 10^-5 и клеток штамма К серогруппы С в культуральной среде с содержанием каждого штамма по 4•10⁹ кл/мл.

Для изготовления опытных серий вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота используют ампулы с лиофилизированной культурой стрептококков серогрупп В, Д и С. Содержимое каждой ампулы в отдельности высевают на 3-4 чашки Петри с МПА, содержащим 1% глюкозы, по следующей методике: 0,1-0,2 мл суспензии культуры вносят на поверхность агара и стеклянным шпателем распределяют ее по поверхности агара. Этим же шпателем проводят по поверхности агара последовательно еще 3-х чашек. Посевы на МПА инкубируют 48 часов при температуре 37-37,5^oС. Одновременно делают посевы в МПБ, МППБ и на среду Сабуро.

По истечении срока инкубации выделяют культуры стрептококков серогрупп В, Д и С, которые далее проверяют на патогенность.

Для приготовления вакцины используют любые штаммы стрептококков серогрупп В и Д, выделенные из хозяйств, имеющих степень патогенности на белых мышах не ниже DLМ 10^-5.

В качестве стрептококка серогруппы С используют штамм К (патент RU 2097422).

Для приготовления матричной расплодки из флаконов или колб суточную бульонную культуру каждой серии пересевают в подогретый до температуры 37-37,5^oС МПБ с глюкозой в 2,5-литровые баллоны из расчета 80-100 мл на 10 литров. Посевы культивируют при температуре 37-37,5^oС в течение 18-24 часов. К этому сроку концентрация бактериальной массы должна быть не ниже 4•10⁹ м. к. в 1 мл.

Убедившись в чистоте роста стрептококковые биомассы (каждой серогруппы в отдельности) сливают в 20-ти литровые бутыли и добавляют коммерческий формалин.

Инактивацию культур проводят в течение 48 часов при температуре 16-18^oС, подвергая взбалтыванию каждую бутыль до 3-4 раз в течение 60 минут.

После инактивации отбирают пробы из каждой бутыли в отдельности для контроля полноты инактивации. С этой целью проводят посевы в пробирки с МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом.

По истечении срока инкубации и получения требуемых результатов контроля полноты инактивации в бактериальную массу вносят стерильный адъювант 3% раствор гидроокиси алюминия.

Адъювант вносят при непрерывном взбалтывании бактериальной массы.

Примечание: 3% раствор гидроокиси алюминия на физиологическом растворе стерилизуют в автоклаве при температуре 120^oС в течение 30 минут.

Через трое суток после внесения адъюванта формируют серию вакцины, рН готовой вакцины должен быть в пределах 7,0-7,2.

Расфасовку вакцины производят в стерильные флаконы, которые закрывают алюминиевыми колпачками, обеспечивая герметичность укупорки содержимого флакона.

В полученной вакцине содержатся патогенные штаммы стрептококков серологических групп В и Д, имеющих степень патогенности не ниже DLМ 10^-5 и серологической группы С (штамм К) в культуральной среде.

Для определения качества формолгидроокись алюминевой вакцины делают выборку из разных мест серии в количестве 10 флаконов по 200 мл, из которых 5 используют для проведения испытаний, 5 хранят в архиве в течение 12 месяцев.

Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, хлопьев, плесени, не разбивающегося осадка, флаконы с вакциной тщательно встряхивают и просматривают визуально в проходящем свете. Одновременно флаконы проверяют на герметичность укупорки и правильности этикетирования.

Концентрацию водородных ионов определяют электрометрическим методом, используя потенциометр марки ЛПУ-01 или другой прибор того же класса точности. Для испытания используют 3 флакона с вакциной. Содержимое каждого флакона испытывают отдельно. Определение рН вакцины проводят по инструкции, приложенной к потенциометру. Вакцина должна иметь рН в пределах 7,0-7,2.

Для проведения испытания на стерильность используют 5 флаконов с вакциной. Посевы проводят из каждого флакона в две пробирки с МПБ, МПА, МППБ и среду Сабуро. Посевы проводят в объеме 0,2-0,3 мл вакцины. Питательные среды с посевами выдерживают в течение 10 дней, при этом не должно быть наличие роста.

Безвредность вакцины проверяют на морских свинках массой 300-350 г и на белых мышах - 16-18 г. Три флакона с вакциной встряхивают и из каждого с соблюдением стерильности отбирают 20-30 мл препарата, переносят в стерильный флакон, общую пробу используют для определения безвредности и иммуногенной активности.

Для определения безвредности содержимое флакона тщательно встряхивают и вводят пяти морским свинкам подкожно в области спины в объеме 2 мл и десяти белым мышам подкожно в области спины в объеме 0,5 мл. Вакцина не вызывает заболевания и гибели морских свинок и белых мышей в течение 10-ти дневного срока наблюдения.

Для определения иммуногенной активности общую пробу вакцины во флаконе встряхивали и вводили 60-ти белым мышам массой 16-18 г подкожно с наружной стороны бедра в дозе 0,2 мл. Через 14 дней после иммунизации 20 вакцинированных и 20 контрольных белых мышей аналогичной массы заражали подкожно в области бедра подтитрованной пятикратной дозой вакцинных штаммов стрептококков серологических групп В, Д и С в отдельности. Срок наблюдения 10 дней.

Вакцину считают иммуногенной, если она предохраняет заболевание и гибель не менее 18 иммунизированных мышей, при заболевании всех и гибели не менее 19 белых мышей в контроле при заражении вакцинными штаммами стрептококков серогрупп В, Д и С в отдельности.

Полученную нами серию вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота мы испытывали в производственных условиях (см. таблицу).

Для лечения телят первой группы применяли коммерческие антибиотики. Животным второй и третьей группы вводили биопрепараты внутримышечно согласно наставлению по применению вакцины. В таблице представлены результаты испытаний эффективности разработанной вакцины для профилактики стрептококкоза крупного рогатого скота по сравнению с известной вакциной и медикаментозным лечением.

Разработанная вакцина на основе предложенных штаммов стрептококков серологических групп В, Д и С, обеспечивает изготовление препарата, применение которого позволяет предохранить наибольший процент животных от гибели и заболевания стрептококкозом крупного рогатого скота по сравнению с известной вакциной и медикаментозным лечением.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Вакцина дополнительно содержит адъювант из гидроокиси алюминия, а в качестве культурального антигена - инактивированную суспензию клеток патогенных штаммов стрептококков серогрупп В и Д, имеющих степень патогенности не ниже DLM 10^-5 и клеток штамма К серогруппы С в культуральной среде с содержанием каждого штамма по 4•10⁹ кл/мл. Вакцина позволяет предохранить наибольший процент животных от гибели и заболевания стрептококкозом крупного рогатого скота, снизить количество заболевших телят, а также количество абортов, метритов и маститов у взрослых животных. 1 табл.

Вакцина против стрептококкоза крупного рогатого скота, содержащая культуральный антиген из патогенных штаммов возбудителя и инактиватор на основе формалина, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит адъювант из гидроокиси алюминия, а в качестве культурального антигена - инактивированную суспензию клеток патогенных штаммов стрептококков серогрупп В и Д, имеющих степень патогенности не ниже DLM 10^-5 и клеток штамма К серогруппы С в культуральной среде с содержанием каждого штамма по 4х10⁹ кл/мл.