СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЖИВОГО ОРГАНИЗМА К ЦИТОКИНУ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к диагностике состояния живого организма, в частности его иммунной системы.

Известен способ определения чувствительности живого организма к цитокину, включающий определение количества МхА белка и активности интерферона в клетках живого организма (J. Interferon Cytokine Res., 1998, Dec., 18(12), р.р. 1019-1024).

Известен способ определения чувствительности живого организма к цитокину, включающий определение количества 2'5'-олигоаденилатсинтетазы в клетках живого организма в ответ на действие интерферона (J. Interferon Cytokine Res., 1998, Dec., 18(12), р.р. 1011-1018).

Известные способы недостаточно точны для определения чувствительности живого организма к α-, β- и γ-интерферонам и не могут быть использованы для определения чувствительности живого организма к другим цитокинам.

Технический результат от использования предлагаемого способа заключается в повышении точности определения чувствительности живого организма к α-, β- и γ- интерферонам и возможности определения чувствительности живого организма к другим цитокинам.

Под чувствительностью живого организма к цитокину понимается его способность обеспечивать иммуномодулирующую, противоинфекционную, противоопухолевую, радиопротекторную и иную активность цитокина.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе определения чувствительности живого организма к цитокину воздействуют на клетки крови цитокином, а затем индуктором этого цитокина с последующим измерением количества активного интерферона, выработанного клетками крови, и вычислением соотношения между этим количеством и количеством активного интерферона, выработанного клетками крови в результате воздействия на них только индуктором этого цитокина. Соотношение вычисляют как модуль разности или отношение указанных величин.

Определение чувствительности живого организма к цитокину необходимо для оценки состояния живого организма, в частности иммунной системы, а также для подбора пациенту наиболее эффективного лечебного препарата из различных препаратов, содержащих цитокины.

Способ определения чувствительности живого организма к цитокину осуществляют следующим образом. Берут кровь у пациента и помещают ее в несколько емкостей (по количеству исследуемых препаратов). Воздействуют на клетки крови в емкостях различными цитокинами в низкой концентрации (прайминг), а затем через определенные промежутки времени (от 1 мин до 6 ч) - индукторами этих цитокинов. Через 2-96 ч (в зависимости от использованного цитокина и его индуктора) измеряют количество активного интерферона, выработанного клетками крови, в каждой емкости. Затем измеряют количество активного интерферона, выработанного клетками крови в ответ на воздействие только индукторами соответствующих цитокинов, и вычисляют соотношение (модуль разности между измеренными величинами или их отношение). По величине вычисленного соотношения судят о степени чувствительности живого организма к цитокину (большей величине соотношения соответствует большая чувствительность).

Возможность достижения указанного технического результата подтверждается приведенными ниже примерами.

Пример 1. У больного X. с диагнозом аденома простаты исследовали расширенный ИФН статус. При этом определяли количество сывороточного ИФН (8 Ед/мл), спонтанно вырабатываемый ИФН (<2 Ед/мл), продукцию ИФН-α (16 Ед/мл), продукцию ИФН-γ(4 Ед/мл). Интерфероновый прайминг был использован для определения индивидуальной чувствительности к препаратам ИФН-α (Интрон А, Роферон А, Виллферон, Реаферон, Лейкинферон. Человеческий лейкоцитарный ИФН - ЧЛИ, Реальдирон) и ИФН-γ (Гаммаферон). Цитокиновый прайминг применяли для определения чувствительности к фактору некроза опухоли (ФНО), интерлейкинам (ИЛ-2, ИЛ-4). При исследовании чувствительности к цитокинам вычислялось соотношение между количеством активного интерферона (цитокина), выработанного клетками крови в результате воздействия на них индуктором этого интерферона (цитокина) с использованием прайминга, т.е. предварительного воздействия интерфероном (цитокином), и количеством активного интерферона, выработанного клетками крови в результате воздействия на них только индуктором этого интерферона (цитокина) - чувствительность к цитокину обозначена знаком "+", отсутствие чувствительности обозначено знаком "-". Полученные данные выражены в следующих показателях, указанных в виде отношения измеренных величин:
Интрон А= 128Ед/мл /16Ед/мл (+), Роферон А=16/16 (-), Виллферон=32/16 (+/-), Реаферон= 320/16 (+), Лейкинферон=64/16 (+), ЧЛИ=16/16 (-), Реальдирон= 128/16 (+), Гаммаферон=64/4 (+), ФНО=64/8 (+), ИЛ-2=8/8 (-), ИЛ-4=16/8 (+/-). Т. е. показано, что пациент чувствителен к Интрону А, Реаферону, Лейкинферону, Реальдирону, Гаммаферону, ФНО, умеренно чувствителен к Виллферону и ИЛ-4 и нечувствителен к Роферону А, ЧЛИ, ИЛ-2.

Пример 2. Больной А с диагнозом острый вирусный гепатит С (ОВГС), подтвержденный определением серологических маркеров (анти-HCV IgG, анти-HCV IgM, a/core-HCV IgG), а также анализом уровня РНК ВГС (положительный) с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). По показаниям расширенного ИФН статуса оптимальными препаратами для лечения являлись Реаферон и Интрон А. С помощью метода ИФА определяли in vitro способность к продукции цитокинов под действием препаратов ИФН. Выявлено, что Реаферон снижал продукцию ИЛ-1β, ИЛ-4 и ИЛ-6 in vitro. Также in vitro показано, что Интрон А снижал продукцию ИЛ-1β и ИЛ-6 и повышал выработку ИЛ-4 и ИФН-α. Т.е. по нашим данным Интрон А был более предпочтителен для лечения данного пациента. Уже через 14 дней лечения у больного отмечено восстановление показателей иммунного и ИФН статусов, через 1 месяц лечения наблюдалась нормализация биохимических показателей (ACT, АЛТ, билирубин, тимоловая проба), анти-HCV IgG, анти-HCV IgM, a/core-HCV IgG, а также благоприятная динамика клинических данных - уменьшение размеров печени, снижение выраженности интоксикационного синдрома. Через 3 месяца лечения не обнаружено присутствия РНК ВГС.

Обследование пациента, леченного Интроном А без предварительного определения чувствительности и подбора препарата, показало: наличие РНК ВГС через 6 месяцев лечения, нормализация иммунного и ИФН статусов, а также биохимических показателей лишь через 3 месяца лечения.

Пример 3. Больной Б. с диагнозом острый хламидиоз, подтвержденным культуральным методом "золотой стандарт". Предварительное исследование показало целесообразность применения в комплексном лечении Реаферона и Иммунала на фоне 1 месяца приема антибиотиков. Через 20 дней и через 3 месяца после лечения методом "золотой стандарт" хламидии не обнаруживались.

В отличие от этого пациента у другого больного с острым хламидиозом после одного курса антибиотиков и Реаферона, применяемого без предварительного определения чувствительности к иммуномодулирующим препаратам, были обнаружены хламидии.

Пример 4. Больной В. с верифицированным диагнозом рассеянный склероз (PC) в стадии обострения. Перед началом лечения была выявлена чувствительность к Бетаферону и Реаферону. Проведен курс Бетаферона. Затем в стадии ремиссии пациент применял Реаферон. Отмечено выраженное улучшение клинического состояния больного в более короткие сроки, а также увеличение времени ремиссии по сравнению с пациентами, получавшими лечение без подбора препаратов.

Пример 5. Больному Г. с меланомой кожи применяли в процессе лечения Гаммаферон и ИЛ-2 после предварительной оценки чувствительности к этим и другим иммуномодулирующим препаратам. После курса лечения отмечено значительное клиническое улучшение состояния пациента, повышение до нормы показателей иммунного и ИФН статусов, нормализация клинического и биохимического анализов крови. Метастазов в течение 1 года наблюдения не выявлено.

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии. Способ обеспечивает высокую точность определения чувствительности организма к цитокину. Определяют соотношение количества активного интерферона, выработанного клетками крови в результате воздействия на них цитокином и затем индуктором этого цитокина, и количества активного интерферона, выработанного клетками крови в результате воздействия на них только индуктором этого цитокина. 2 з.п. ф-лы.

1. Способ определения чувствительности живого организма к цитокину, отличающийся тем, что определяют соотношение количества активного интерферона, выработанного клетками крови в результате воздействия на них цитокином и затем индуктором этого цитокина, и количества активного интерферона, выработанного клетками крови в результате воздействия на них только индуктором этого цитокина. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что соотношение вычисляют как модуль разности указанных величин. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что соотношение вычисляют как отношение указанных величин.