СРЕДСТВО И СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ИНФЕКЦИИ Российский патент 2002 года по МПК A61K38/21 

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, иммунологии, фармакологии, касается создания средства и разработки способа повышения неспецифической резистентности организма, которые могут быть использованы для предупреждения инфицирования вирусами и другими инфекционными агентами (вирусы гриппа, парагриппа, аденовирусы, простого герпеса, Эпштейн-Барра, короновирусы, энтеровирусы, риновирусы, респираторно-синтициальный вирус, хламидии, микоплазмы), а также лечения вызываемых ими заболеваний. Кроме того, предлагаемое средство и способ могут быть использованы в терапии аутоиммунных, онкологических и других заболеваний и состояний, связанных с развитием вторичных иммунодефицитов.

В профилактике и лечении вышеперечисленных инфекций наряду с традиционными химиопрепаратами и антибиотиками используются препараты интерферона (ИФН) и различные индукторы интерферонов (ИИФН), обладающие сочетанным неспецифическим противовирусным, иммуномодулирующим и антипролиферативным действием.

Технической задачей данного изобретения является быстрое и эффективное повышение неспецифической резистентности слизистой и подлежащих тканей полости рта и носоглотки к инфицированию различными вирусами и другими инфекционными агентами или их оздоровление при уже имеющем место инфицировании и наличии заболевания.

Для решения поставленной задачи в полость рта вводится препарат ИФН, для чего используются сублингвальные гранулы, содержащие низкие дозы препарата реаферон или реальдирон (рекомбинантный человеческий ИФНα2а) или ИИФН (ридостин, ларифан, полудан, амиксин, циклоферон, кагоцел, неовир, дибазол, курантил и др.).

При рассасывании таких гранул в полость рта поступают низкие дозы ИФН, которые, с одной стороны, обеспечивают невосприимчивость слизистой полости рта к инфицированию, с другой - стимулируют иммунокомпетентные клетки лимфоидных образований полости рта и носоглотки к дополнительной продукции ряда других про- и противоспалительных цитокинов в потенциальных воротах инфекции. В случае использования сублингвальных гранул, содержащих низкие дозы ИИФН, их взаимодействие с клетками слизистой и лимфоидной ткани полости рта и носоглотки вызывает синтез смеси различных α,β,γ- эндогенных ИФНов и других цитокинов в потенциальных воротах инфекции. В силу неспецифического характера противовирусного действия ИФНы и ИИФНов, содержащиеся в сублингвальных гранулах, повышают неспецифическую резистентность обработанных ими тканей к воздействию различных вирусов и других инфекционных агентов или их ассоциаций, предупреждая их размножение в воротах инфекции, дальнейшее проникновение и распространение в организме.

Таким образом, сублингвальные гранулы, содержащие низкие дозы ИФН или ИИФН, создают своеобразный неспецифический интерфероно-цитокиновый барьер, препятствующий распространению инфекций. Наряду с местным неспецифическим противовирусным действием при использовании сублингвальных гранул низкие дозы ИФН заглатываются, что предполагает возможность его системного действия через желудочно-кишечный тракт (ЖКТ).

Препараты рекомбинантных (и природных) ИФНов традиционно используются в высоких дозах (от 10⁶ ME до 3-5•10⁶ ME и более, однократно) парентерально (в/м, п/к или в/в) в лечении гепатитов В и С, рассеянного склероза и различных онкологических заболеваний. Причем известно, что парентеральное применение препаратов ИФНов (рекомбинантных и природных) в высоких дозах сопряжено, как правило, с развитием гриппоподобного синдрома: повышение температуры тела, ломота, артралгия, катаральные явления, головная боль.

Пероральный путь введения препаратов ИФНов не применяется, поскольку считается, что под действием протеолитических ферментов ЖКГ интерфероны разрушаются (инактивируются) и не всасываются в нативной форме. Однако в зарубежных научных публикациях последних лет появился ряд сообщений о противовирусной, противоопухолевой эффективности перорального введения низких доз рекомбинантного ИФН (мышиного и человеческого) у мышей (1-5) и положительных иммунологических и клинических сдвигах у больных СПИДом, рассеянным склерозом и диабетом I типа при длительном применении низких доз рекомбинантного человеческого ИФНα2а(10⁴-3•10⁴ ME) (6-9). В России для предупреждения разрушения ИФНа разработаны таблетированные формы рекомбинантного человеческого ИФНα2а (реаферон) в дозе 10⁶ ME в липосомах (ДГУПП "Вектор-Фарм", Новосибирск), которые были испытаны в лечении острого гепатита В. Созданы также таблетки реаферона в дозе 10⁵ ME с ингибитором протеаз, которые могут применяться у детей, часто болеющих различными респираторно-вирусными инфекциями.

Прототипом предлагаемого изобретения может быть применение препаратов ИФН и ИИФН в виде суппозиториев для профилактики и лечения заболеваний, передающихся половым путем (описанное нами в патенте РФ 2147873 от 27.04.2000 г. ). Предлагаемое изобретение отличается от прототипа тем, что представляет собой сублингвальные гранулы, содержащие низкие дозы реаферона (реальдирона) или ИИФН и предназначены для местного рассасывания в полости рта, т.е. экзогенной и эндогенной интерферонизации и стимуляции местного неспецифического противовирусного иммунитета. Причем использование сублингвальных гранул не исключает и системного воздействия смеси вводимых и индуцированных ИФНов и цитокинов, что создает дополнительное преимущество их неспецифического противовирусного и иммуномодулирующего действия на организм в целом.

Необходимо заметить, что в механизме действия низких пероральных доз рекомбинантного ИФН на мышах показана вовлеченность нейроэндокринной системы по гипоталамо-питуитрино-адреналовой оси (5).

Как средство для стимуляции неспецифической резистентности организма предлагаются:
1. Сублингвальные гранулы, содержащие в качестве ИФНа - реаферон (или реальдирон) (рекомбинантный человеческий ИФНα2а) в дозе от 2000 до 4000 ME каждая.

2. Сублингвальные гранулы-минитаблетки, содержащие ИИФН в дозе от 0,01 до 5 мг в зависимости от индуктора.

Сублингвальные гранулы весом по 0,05 г готовятся на основе сахарозы или лактозы. Для диабетиков возможно применение капель.

Интерферон - (реаферон, реальдирон) - человеческий рекомбинантный ИФНα2а (ДГУПП "Вектор-Фарм", Новосибирск) лиофилизированный порошок в ампулах по 1000.000 - 3000.000 ME для в/м инъекций при различных вирусных и онкологических заболеваниях.

Амиксин - производное флуоренона. Выпускается в таблетках по 0,125 во флаконах по 10 таблеток ("ЛЭНС-Фарма", Москва). Синтетический низкомолекулярный пероральный ИИФН индуцирует образование α,β-ИФН в крови, печени, легких, селезенке и т.д. Обладает широким диапазоном противовирусного и иммуномодулирующего действия. Применяется в профилактике гриппа и других ОРВИ, лечении гепатитов В и С, рассеянного склероза, папилломатоза гортани и др.

Результаты испытаний
Результаты испытания противовирусного действия различных убывающих концентраций реаферона в культуре клеток фибробластов эмбриона человека М-19 при заражении эталонным для определения противовирусного действия ИФН вирусом везикулярного стоматита (ВВС) сразу после введения препарата и через 24 часа после обработки, представленные в таблице 1, свидетельствуют, что при заражении ВВС сразу после обработки культуры наибольший эффект противовирусной защиты реаферона, составляющий в концентрациях от 10000-250 МЕ/мл 50%, через 48 часов снижается до 10% в дозах 10000-8000 МЕ/мл и полностью исчезает в остальных (4000-250 МЕ/мл). Однако через 24 часа после обработки культуры реаферон в дозах 10000-2000 МЕ/мл обеспечивает 100% защитный эффект в течение 24 часов, который сохраняется на достигнутом максимальном уровне в течение 48 часов в дозах 10000-8000 МЕ/мл. При этом наименьшая доза реаферона, обеспечивающая 100% противовирусную защиту в течение 24 часов, составляет 2000 МЕ/мл, а в течение 48 часов - 8000-10000 ME.

Приведенные данные являются экспериментальным обоснованием целесообразности включения реаферона в предложенное средство в минимальной дозе 2000 ME и использования в максимально эффективной - 8000-10000 ME (по 4-5 гранул).

Эффективность локального применения низких доз ИИФН была установлена в экспериментальных исследованиях на мышах на примере сравнительного интразального (и/н) введения низкомолекулярного ИИФН - амиксина и его традиционного перорального способа применения при и/н заражении вирусом гриппа (Aichi 68/H3N2/).

Результаты, представленные в таблице 2, показывают, что хотя пероральное введение амиксина в дозе 200 мг/кг индуцирует в крови высокие титры ИФН (до 1280 ед/мл), его содержание в легких минимально, а максимальная противовирусная защита составляет 10% и определяется только через 48 часов. При и/н введении амиксина в 8-20-кратно меньшей дозе (25-10 мг/кг) протективный эффект амиксина возрастает и достигает 48% уже через 4 часа после его введения, а интенсивность синтеза ИФН в легких превышает и опережает таковую в крови.

Представленные данные свидетельствуют, что и/н введение ИИФН в низких дозах обеспечивает преимущественный синтез ИФН в воротах инфекции и создает в них и в органах-мишенях более эффективный интерфероновый барьер (чем пероральный путь введения больших доз), который препятствует репликации в них вируса гриппа. Кроме того, они указывают на ведущую роль защиты входных ворот и органов-мишеней в достижении устойчивой неспецифической противовирусной резистентности.

Суммарные результаты экспериментальных исследований в культуре клеток и на животных явились основанием для испытания и сравнительной оценки эффективности профилактического использования предложенных сублингвальных гранул, содержащих низкие дозы реаферона (n=12) и низкие дозы одного из ИИФН дибазола (n= 7) у людей в период эпидемии гриппа, вызванного вирусом гриппа А (антигенный вариант H3N2). Испытание гранул реаферона проведены у добровольцев, лиц пожилого возраста (50-77 лет), входящих в группу риска по заболеваемости гриппом и ОРВИ, с характерным дефицитом продукции γ-ИФН. Испытание сублингвальных гранул дибазола проведены у ограниченного контингента лиц мужского пола в возрасте 18-20 лет, с характерной низкой α-ИФН-продуцирующей способностью лейкоцитов. Гранулы, содержащие по 2000 ME реаферона, использовались по схеме: 5 гранул (10000 ME) под язык 1 раз в день утром за 30 минут до еды в течение 10 дней.

Гранулы, содержащие дибазол по 0,01 мг использовались по схеме: 5 гранул (0,5 мг) под язык 1 раз в день утром за 30 минут до еды в течение 10 дней.

Оценка эффективности такой профилактики проводилась по результатам мониторинга основных показателей ИФН статуса до и после приема профилактических курсов реаферона или дибазола, а также через 1 месяц после их окончания.

Из данных таблиц 3 и 4 видно, что 10-дневный курс сублингвальных гранул по 10000 ME реаферона в курсовой дозе 100000 ME и дибазола по 0,5 мг в курсовой дозе 5 мг вызывает стимуляцию и нормализацию как характерной для пожилых людей сниженной γ-ИФН-продуцирующей способности лейкоцитов крови, так и α-ИФН продуцирующей способности лейкоцитов у лиц молодого возраста.

Сублингвальное использование низких доз реаферона оказывает иммуномодулирующее действие на систему ИФН в целом, т.е. не вызывает значительных изменений продукции α- или γ-ИФН при их нормальных значениях до приема препарата и стимулирует продукцию α- или γ-ИФН тем более, чем сильнее определяется их угнетение до приема препарата. Причем корригирующее действие на функциональную активность системы ИФН низких доз как реаферона, так и дибазола в предложенном средстве имеет эффект последействия до 1 месяца (срок наблюдения), а прием дибазола стимулирует продукцию сывороточного ИФН до 16-32 ед/мл.

Индекс эффективности (ИЭ) предлагаемых гранул низких доз реаферона и дибазола при учете заболеваемости в основной и контрольной группах по отношению к гриппу и ОРВИ составил в среднем 2,2 и 2,0, а коэффициент эффективности (КЭ) - 55,1 и 57,4% соответственно.

Гранулы низких доз реаферона и дибазола были использованы с лечебной целью у лиц контрольной группы, заболевших гриппом (n=12) по схеме: по 5 гранул под язык 2-3 раза в день за 30 минут до еды в течение 10-15 дней. Лечебный эффект предлагаемого средства у заболевших гриппом выражался в легком течении заболевания, отсутствии осложнений и снижении длительности нетрудоспособности. В контрольной группе она составила 11,6 дней, у получавших реаферон - 6,9 дней, а получавших дибазол - 8,6 дней, т.е. применение реаферона уменьшало продолжительность болезни в 1,7 раза, а дибазола - в 1,3 раза. Кроме того, после применения профилактического курса реаферона в гранулах у лиц пожилого возраста в течение 6 месяцев последующего наблюдения отмечалась возросшая сопротивляемость к различным респираторным вирусным инфекциям.

Таким образом, результаты применения предлагаемого средства выражались в быстрой, эффективной и продолжительной иммунореабилитации, опосредующей повышение неспецифической противовирусной резистенции организма. Более того, при экспериментальном заражении in vitro лейкоцитов крови лиц, получавших предлагаемые гранулы реаферона или дибазола, вирусом ВВС, репродукция вируса подавлялась на 2,5 и 2,3 Lg БОЕ/мл соответственно по сравнению с лицами, не получавшими указанные средства.

ЛИТЕРАТУРА
1. Tovey M.G., Maury С., Eid P. - Marked antiviral and antitumoral activity of Interferon α administered by the intranasal/ oral route. - European Cytokine Network. 1996, v.7, 3, р. 506.

2. Brod S.A., Nelson I., Wolinsky J.S. - Ingested IFN - α has biological effects in humans. - J. of Interferon & Cytokine Research. 1997, supp.2, p. 63.

3 Tovey M. G., Meritet J.F., Baonz S. et al. - Identification of genes induced by oral Interferon therapy.- J. of Interferon & Cytokine Research. 1999, v. 19, supp. 1, p.92.

4. Tovey M. G. , Meritet J.F., Dron M. et al. - Oromucosal interferon therapy: mechanism (s) of action. - European Cytokine Network. 2000, v. 11, р. 154.

5. Beilharz M., Cluning C., Bosio E. - Low dose oral Interferon therapy: Towards mechanism of action. - European Cytokine Network. 2000, v.11, p. 154.

6. Satoh Y., Kasama K., Yimin et al. - Involvement of hypothalamic pituitary adrenal (HPA) axis in an induction of 2-5 OAS by low dose oral administration of interferon β in mice. -J. of Interferon & Cytokine Research. 1999, v.19, p. 125.

7. Brod S.A., Phan Т., Katz S. et al. - Ingest IFN α delays islet allograft rejectin. - J. of Interferon & Cytokine Research. 1999, v. 19, p. 124.

8. Brod S.A., Henninger E.D., Brosnan P.G. et al. - Ingested IFNα prolongs the "honeymoon" period in newly diagnosed IDDM. - J. of Interferon & Cetokine Research. 1999, v. 19, p. 124.

9. Brod S. , Vriesendorp F.J., Ahn C. et al. - Ingested IFNα decreases new MRI brain lesions in relapsing-remiting multiple sclerosis (RRMS). European Cetokine Network. 2000, v. 11, p. 154.

10. Brod S. , Henniger E., Brosnan P. et al. - Ingested IFNα maintains residual β cell function in newly diagnosed IDDM. - European Cytokine Network. 2000, v.11, p. 156.

Изобретение относится к области медицины, а именно к вирусологии, иммунологии, фармакологии, касается создания средства и разработки способа повышения резистентности к инфекции. Сущность изобретения состоит в том, что разработан новый препарат интерферона (ИФН), для чего используют сублингвальные гранулы, содержащие низкие дозы препарата реаферон или реальдирон или ингибитор ИФН (ридостин, ларифан, полудан, амиксин и т.д.). Другой аспект изобретения - способ повышения резистентности к инфицированию вирусами и другими инфекционными агентами (вирусы гриппа, парагриппа, аденовирусы, простого герпеса, Эпштейна-Бара, короновирусы, энтеровирусы, риновирусы, респираторно-синтициальный вирус, хламидии, микоплазмы). Технический результат - расширение арсенала средств, стимулирующих иммунитет. 3 с. и 4 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Средство повышения резистентности к инфицированию слизистой оболочки полости рта, носоглотки и подлежащих тканей, отличающееся тем, что оно выполнено в виде сублингвальных гранул, каждая из которых содержит интерферон (ИФН) в дозе 2000 - 4000 ME и основу. 2. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве ИФН содержит реаферон или реальдирон. 3. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве основы оно содержит сахарозу или лактозу. 4. Средство повышения резистентности к инфицированию слизистой оболочки полости рта, носоглотки и подлежащих тканей, отличающееся тем, что оно выполнено в виде сублингвальных гранул, каждая из которых содержит индуктор интерферона (ИИФН) в дозе 0,01-5 мг и основу. 5. Средство по п.4, отличающееся тем, что в качестве индуктора интерферона оно содержит средства, выбранные из группы: амиксин, циклоферон, неовир, ридостин, полудан, ларифан, кагоцел, а также из группы дибазол, папаверин, кофеин, курантил. 6. Средство по п.4, отличающееся тем, что в качестве основы оно содержит сахарозу или лактозу. 7. Способ повышения резистентности к инфицированию слизистой оболочки полости рта, носоглотки и подлежащих тканей, характеризующееся тем, что вводят сублингвальное средство по п.1 в дозе 2000 - 4000 ME активного вещества по схеме 5 гранул под язык 1-3 раза в день за 30 мин до еды в течение 10-15 дней.