СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ПРОСТАТИТА Российский патент 2002 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, касается моделирования хронического простатита и может быть использовано при разработке методов диагностики и лечения хронического простатита.

Одной из наиболее сложных проблем в урологии является в настоящее время проблема хронического простатита. Существуют различные теории возникновения этого заболевания и различные подходы к его диагностике и лечению. Поэтому важным для изучения механизмов данного заболевания является разработка методов диагностики и лечения простатита на экспериментальных моделях, среди которых можно выделить инфекционную, аутоиммунную и гемодинамическую модели.

Обычно для моделирования инфекционного простатита в качестве бактериального агента использовали взвесь E.coli, которую вводили различными способами экспериментальным животным.

Так, в работе (Baumuller A., Hoyme V., Madsen P.O., Z Urol, 1977, Bd70, s. 589-593) описана модель инфекционного простатита, в которой бактериальная взвесь E.coli вводилась в одну из простатических ветвей, т.е. ангиогенно.

В другой работе (Каплун М.И. и др. Урология и нефрология, 1976, No.2, с. 32-35) применяли прямое введение бактериальной суспензии E.coli в паренхиму предстательной железы предварительно кастрированных самцов крыс.

Наиболее адекватным методом получения инфекционной модели простатита является трансуретральное введение бактерий E.coli, впервые описанное в работе (Чернышев В.П. Вопросы диагностики, клиники и терапии аллергических заболеваний, Респ. конференция по аллергии, 1-я Тезисы докладов, Киев, 72, с. 37-38).

Все описанные выше инфекционные модели имеют низкую воспроизводимость, связанную с невозможностью точного повторения модели на других особях, поскольку введение бактерий E.coli производят путем проведения хирургических операций под наркозом, и организмы экспериментальных животных в силу индивидуальности их естественной зашиты по-разному реагируют на такое вмешательство (стресс, наркоз, операция).

Классическим примером аутоиммунных моделей является модель Чернышева В. П. (Чернышев В. П. Съезд патофизиологов, 2-ой: Тезисы докладов, Ташкент, 1976, т.2, с.305-306), который иммунизировал экспериментальных животных суспензией простаты с целью получения сыворотки, введение которой вызывает у животных деструктивные изменения в железе (простатический аллергоз).

Недостатком аутоиммунных моделей является техническая сложность и низкая воспроизводимость этих моделей, кроме того, они травматичны и не учитывают большого значения гемодинамических расстройств в простате.

Известны гемодинамические модели хронического простатита, в которых осуществляют криогенное воздействие на предстательную железу (Чернышев В.П. и др. Урология, Республиканский межведомственный сборник, Киев, 1982, вып.16, с. 60-62) или прошивают ткань предстательной железы шелковой лигатурой (Бондаренко Л. А. и др. Проблемы эндокринологии, 1977, т.23, No.4, с.111-114).

Известна гемодинамическая модель хронического простатита (Горбачев А.Г. и др. Изобретательство и рационализаторство в медицине и медицинской промышленности, Л., 1986, с.40-41), в которой под наркозом осуществляют разрез передней брюшной стенки половозрелых животных (кроликов) и нанесение раздражителя, в качестве которого используют метаксилол, на заднюю поверхность предстательной железы экспериментальных животных. Через два месяца экспериментальных животных забивали, производили забор и гистологическое исследование предстательной железы. При этом у животных отмечались расширение и тромбоз вен пузырно-предстательного венозного сплетения, а при микроскопическом исследовании предстательной железы больных животных помимо гистологических изменений, характерных для хронического простатита, был выявлен тромбоз венозных сосудов с выраженной лейкоцитарной инфильтрацией стромы вокруг них.

Недостатками описанной выше гемодинамической модели являются низкая воспроизводимость, техническая сложность, а также необходимость травматичного подхода (операции и наркоза), вызывающего выраженные изменения гомеостаза у экспериментальных животных.

Наиболее близким аналогом к заявляемому способу является модель хронического простатита, описанная в статье Хейфеца В.Х. и др. "Экспериментальные модели хронического простатита. Обзор." ("Урология", 1999, No.5, с.48-52). Согласно данному способу, выбранному за прототип, моделирование хронического простатита осуществляют путем ректального введения смеси 10% димексида и скипидара в количестве 1 мл и используют модель через 28 суток после введения смеси. Микроскопические исследования тканей предстательной железы крыс, умерщвленных на 28-е сутки, подтвердили развитие хронического простатита в 100% случаев на 28-е сутки после введения раздражителя.

Однако на получение качественной модели хронического простатита у крыс и ее воспроизводимости сильное влияние оказывает режим введения раздражителя. В прототипе недостаточно отработан как состав раздражителя, так и режим его введения. Поэтому, несмотря на указание автора прототипа о том, что хронический простатит развивается в 100% случаев, данная модель не является качественной.

Низкое качество и низкая воспроизводимость модели обусловлены тем, что при указанных режимах введения раздражителя развиваются побочные явления, такие как ожог слизистой прямой кишки или поражение пузырьковых желез, и поэтому полученная модель хронического простатита является неудовлетворительной, так как одновременно с хроническим простатитом развивается проктит или энтероколит.

Задачей заявляемого изобретения является создание качественной модели хронического простатита, обладающей высокой воспроизводимостью.

Поставленная задача решается тем, что в способе моделирования хронического простатита, включающем ректальное введение крысам раздражителя в виде смеси раствора димексида и скипидара и использование модели не ранее, чем через 28 суток после введения раздражителя, в качестве раздражителя используют смесь на основе 10% раствора димексида в воде и скипидара в объемном соотношении 4: 1 в количестве от 0,75 мл до 1,25 мл, введение раздражителя осуществляют в верхний отдел прямой кишки на глубину 20-25 мм, при этом смесь перед введением взбалтывают до получения мелкодисперсной эмульсии.

Необходимо отметить, что в указанной для ректального введения смеси скипидар используется для создания патологической гиперемии в предстательной железе, а водный раствор димексида является проводником, улучшающим внутритканевое проникновение скипидара, а также оказывает обезболивающее действие.

Смесь скипидара и димексида готовят непосредственно перед ректальным введением и взбалтывают до получения мелкодисперсной эмульсии. Невзболтанная смесь не является гомогенной, в ней наблюдается расслоение скипидара и димексида на фракции, что вызывает при ее введении массивные кровотечения в прямой кишке у 80% экспериментальных животных.

Оптимальный режим введения смеси, который обеспечивает создание качественной модели хронического простатита, обладающей высокой воспроизводимостью, подбирали опытным путем на трех группах крыс по 35 животных в каждой.

Результаты исследований по выбору режима введения раздражителя приведены в таблицах 1-3.

В таблице 1 представлены результаты по выбору объемного соотношения компонентов в смеси раздражителя.

В таблице 2 представлены результаты по выбору количества вводимого раздражителя.

В таблице 3 представлены результаты по выбору глубины введения раздражителя.

Как видно из таблицы 1, соотношение 4:1 10% раствора димексида в воде и скипидара в указанной смеси позволяет достигнуть наилучшего результата в создании воспалительного процесса, степень поражения предстательной железы ярко выражена, отсутствуют побочные явления и летальность животных. Развитие признаков хронического простатита наблюдается у 100% животных.

Таким образом, данное соотношение компонентов в смеси является оптимальным, поэтому полученная модель является качественной и имеет высокую воспроизводимость.

При увеличении в указанном соотношении количества скипидара (4:2) степень поражения предстательной железы ярко выражена, однако присутствуют побочные явления в виде сильного ожога слизистой оболочки прямой кишки и наблюдается развитие острого проктита. Развитие признаков, характерных для хронического простатита, наблюдается у 50% животных. Таким образом, полученная модель не является качественной и имеет низкую воспроизводимость.

При уменьшении в указанном соотношении количества скипидаpa (4:0,5) степень поражения предстательной железы отсутствует или слабо выражена. При этом развитие признаков хронического простатита наблюдается у 50% животных. Таким образом, полученная модель не является качественной и имеет низкую воспроизводимость.

Любые изменения в указанном соотношении количества 10% раствора димексида в воде (соотношения 3:1 и 5:1) также влияют на степень поражения предстательной железы, наличие побочных явлений и летальность животных. При указанных соотношениях компонентов полученная модель не является качественной.

Таким образом, уменьшение или увеличение содержания одного из компонентов относительно заявляемого объемного соотношения приводит к снижению воспроизводимости модели хронического простатита и снижению ее качества.

Как показано в таблице 2, количество смеси скипидара и 10% водного раствора димексида, вводимой экспериментальным животным, ограничено пределами от 0,75 мл до 1,25 мл, чтобы создать патологическую гиперемию только в предстательной железе.

Превышение количества ректально вводимой смеси свыше 1,25 мл вызывает значительные поражения не только предстательной железы, но и пузырьковых желез, а также ожог слизистой прямой кишки и кровоизлияния.

Уменьшение количества ректально вводимой смеси менее 0,75 мл вызывает незначительные поражения предстательной железы, либо наблюдается их отсутствие.

Таким образом, как увеличение, так и уменьшение количества ректально вводимой смеси за пределы заявляемого интервала приводит к снижению качества и воспроизводимости модели хронического простатита.

Указанная глубина введения смеси 20-25 мм определяется анатомическими особенностями расположения предстательной железы и прямой кишки у крыс.

Как показано в таблице 3, при введении 1 мл смеси 10% раствора димексида в воде и скипидара в объемном соотношении 4:1 в верхний отдел прямой кишки на глубину 20-25 мм степень поражения предстательной железы ярко выражена, отсутствуют побочные явления и летальность животных, признаки хронического простатита развились у 100% животных.

При введении указанной смеси на глубину менее 20 мм наблюдается поражение только прямой кишки и отсутствует поражение предстательной железы.

При введении указанной смеси на глубину более 25 мм поражаются предстательная железа, пузырьковые железы и прямая кишка, и таким образом, развивается модель не хронического простатита, а модель энтероколита.

Таким образом, как увеличение, так и уменьшение глубины введения смеси в верхний отдел прямой кишки за пределы заявляемого интервала приводит к снижению качества и воспроизводимости модели хронического простатита.

Приведенные в таблицах 1-3 данные подтверждают, что заявленный режим введения смеси обеспечивает развитие хронического простатита в 100% случаев и высокую воспроизводимость модели.

Способ осуществляют следующим образом.

Экспериментальным животным, в качестве которых используют крыс, на глубину 20-25 мм в верхний отдел прямой кишки с помощью устройства для ректальных вливаний (дозатора) вводят раздражитель, приготовленный в виде смеси 10% раствора димексида в воде и скипидара в объемном соотношении 4:1 в количестве от 0,75 мл до 1,25 мл. Смесь скипидара и димексида готовят непосредственно перед ректальным введением и предварительно взбалтывают ее до получения мелкодисперсной эмульсии. Используют модель не ранее, чем через 28 суток после введения раздражителя крысам.

Пример.

Моделирование хронического простатита согласно заявляемому способу осуществляли на 35 белых беспородных крысах - самцах массой 180±20 г.

Всем экспериментальным животным моделировали хронический простатит путем введения 10%-го раствора димексида в воде, смешанного со скипидаром в объемном соотношении 4: 1. Перед введением смесь встряхивали в течение 1 мин до образования мелкодисперсной эмульсии. Полученную свежеприготовленную эмульсию вводили крысам ректально на глубину 25 мм в объеме 1 мл с помощью устройства для ректальных вливаний (дозатора), обеспечивающего отсутствие травматичности процедуры. При этом животные фиксировались в горизонтальном положении рукой в холщовой перчатке.

Не ранее чем через 28 суток после ректальных вливаний у крыс под легким наркозом производили забор предстательной и пузырьковых желез, а также участка прямой кишки, прилегающей к предстательной железе.

Для оценки эффективности заявленного способа моделирования простатита проводили гистологическое исследование предварительно окрашенных гематоксилином, эозином и по Ван-Гизону гистологических срезов предстательной и пузырьковой желез, а также участка прямой кишки, прилегающей к предстательной железе, приготовленных из забранных органов, выявляя гистологические изменения, характерные для хронического простатита.

При этом были получены следующие результаты, которые приведены в таблице 4.

Приведенные в таблице 4 результаты гистологического исследования подтверждают наличие хронического воспаления в предстательной железе при использовании предлагаемого способа у 100% (35 особей). Из них у 28 особей, что составляет 80% от численности экспериментальной группы, наблюдалось ярко выраженное поражение предстательной железы; у 5 особей, составляющих 14,3% от численности экспериментальной группы, наблюдалось менее выраженное поражение предстательной железы; и у 2 особей, составляющих 5,7% от численности экспериментальной группы, наблюдалось слабое поражение предстательной железы.

Таким образом, у 100% экпериментальных животных на 28-й день после введения раздражителя развился хронический простатит.

Как видно из таблицы 4, гистологическое исследование пузырьковых желез в экспериментальной группе показало отсутствие патологических изменений у всех 35 (100%) животных.

Как видно из таблицы 4, у 27 животных не выявлено патологических изменений в прямой кишке и только у 8 животных имелось незначительное венозное полнокровие.

Итак, проведенное гистологическое исследование показывает развитие хронического воспаления в предстательной железе при использовании заявляемого способа у 100% экспериментальных животных, что подтверждает высокое качество и высокую воспроизводимость модели.

Таким образом, заявленный способ моделирования хронического простатита имеет высокую воспроизводимость, позволяет получить достоверные результаты при исследованиях и при разработке новых способов диагностики и лечения хронического простатита.

Изобретение относится к медицине, в частности к урологии, и может быть использовано для моделирования хронического простатита. В качестве раздражителя используют смесь на основе 10%-ного раствора димексида в воде и скипидара в объемном соотношении 4:1. Раздражитель вводят в верхний отдел прямой кишки на глубину 20-25 мм в количестве 0,75-1,25 мл. Перед введением смесь взбалтывают до получения мелкодисперсной эмульсии. Способ позволяет моделировать хронический простатит с высокой воспроизводимостью. Это позволяет получить достоверные результаты при разработке новых способов диагностики и для лечения данной патологии. 4 табл.

Способ моделирования хронического простатита, включающий ректальное введение крысам раздражителя в виде смеси раствора димексида и скипидара и использование модели не ранее чем через 28 суток после введения раздражителя, отличающийся тем, что в качестве раздражителя используют смесь на основе 10%-ного раствора димексида в воде и скипидара в объемном соотношении 4: 1 в количестве 0,75 - 1,25 мл, введение раздражителя осуществляют в верхний отдел прямой кишки на глубину 20-25 мм, при этом смесь перед введением взбалтывают до получения мелкодисперсной эмульсии.