ШТАММ ВИРУСА ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2002 года по МПК A61K39/155 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики парагриппа-3 (ПГ-3) крупного рогатого скота (КРС).

ПГ-3 (транспортная лихорадка КРС, параинфлюэнца-3) - остро протекающая контагиозная вирусная болезнь, главным образом телят, характеризующаяся поражением органов дыхания, но наиболее характерной является латентная форма парагриппозной инфекции. Часто осложняет течение других болезней, в сочетании с пастереллами обуславливают тяжелые формы респираторных инфекций у телят. ПГ-3 распространен повсеместно, практически во всех странах мира. Серологические исследования, проведенные в различных странах мира и в нашей стране, показали, что антитела к вирусу ПГ-3 обнаруживаются 95-97% обследованных животных. Указанная инфекция возникает у КРС как в виде моноинфекции, так в виде смешанных вирусных и вирусно-бактериальных инфекций, которые наносят значительный экономический ущерб из-за гибели и выбраковки животных, снижения продуктивности и нарушения воспроизводства.

Для специфической профилактики ПГ-3 применяют живые и инактивированные вакцины. Однако последние не нашли широкого применения по причине их низкой эффективности. Живые вакцины против ПГ-3 используют как монопрепараты или в составе ассоциированных вакцин (1).

В связи с этим актуальной остается проблема поиска новых штаммов вируса ПГ-3, сохраняющих свои нативные биологические свойства и после инактивации, для производства высокочувствительных и специфичных средств диагностики и высокоиммуногенных, безвредных и ареактогенных средств профилактики заболевания.

Известен аттенуированный штамм вируса ПГ-3 КРС, используемый для изготовления живой ассоциированной вакцины против респираторных инфекций КРС (2).

Его недостатками являются низкая иммуногенная активность и нестабильность при инактивации.

Известен аттенуированный штамм VR-ATCC-739 вируса ПГ-3, используемый для изготовления живой вакцины против ПГ-3 КРС (3).

Его недостатками являются также низкая иммуногенная активность и нестабильность при инактивации.

Известен штамм SF-4 вируса ПГ-3, используемый для изготовления ассоциированной вирусвакцины против ПГ-3, инфекционного ринотрахеита (ИРТ) КРС и вирусной диареи (4).

Его недостатками являются остаточная вирулентность и низкая иммуногенность.

Известен штамм Paramyxovirus "ПТК-45/86" вируса ПГ-3 КРС, используемый для изготовления ассоциированной вирусвакцины против ИРТ, ПГ-3 и вирусной диареи КРС (5).

Его недостатками являются низкая иммуногенная активность и высокая реактогенность для телят 1-3-месячного возраста.

Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм МВА (1) 77 14 вируса ПГ-3, используемый для изготовления вирусвакцины против ПГ-3 КРС (6).

Недостатки данного штамма состоят в его низкой биологической, антигенной и иммуногенной активности и нестабильности при инактивации.

В задачу создания настоящего изобретения входило получение нового производственного вируса ПГ-3, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивающего изготовление эффективных диагностических и вакцинных препаратов, гомологичных эпизоотическому вирусу, циркулирующему на территории Российской Федерации.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в получении нового производственного штамма вируса ПГ-3, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и стабильностью при инактивации и пригодного для изготовления средств диагностики и специфической профилактики заболевания.

Указанный технический результат достигнут получением штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 является новым, ранее неизвестным. Исходный вирус для получения штамма "ВГНКИ-4" выделен из легких 2-3-месячных телят с респираторной патологией.

Производственный штамм "ВГНКИ-4" получен путем адаптации к перевиваемой культуре клеток почек теленка "Таурус-1" (7).

Полученный штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) 30.09.99 г. под регистрационным наименованием "ВГНКИ-4" ДЕП.

По сравнению с прототипом штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 обладает более высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации.

Экспериментально подтверждена возможность его использования для изготовления средств диагностики и специфической профилактики ПГ-3 КРС. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 обеспечивает получение диагностических препаратов, позволяющих проводить серологическую диагностику ПГ-3, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в нашей стране, и эффективных живых и инактивированных вакцин, создающих защиту восприимчивых животных против указанного возбудителя заболевания.

Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства
Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 относится к семейству Paramyxoviridae, роду Parainfluenza, подтипу Parainfluenza virus 3 и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ПГ-3: полиморфной слегка овальной формы, размер вириона варьирует от 150 до 250 нм. Вирион состоит из оболочки и внутреннего компонента, который представлен рибонуклеопротеидной спиралью. Коэффициент седиментации - 1000 S в градиенте сахарозы.

Вирус ПГ-3 штамма "ВГНКИ-4" имеет 7 структурных белков:
1) фосфопротеины (Р, мол. м. 83 кД);
2) ГА - нейраминидазный гликопротеин (HN, мол. м. 69 кД);
3) главный нуклеокапсидный протеин (NP, мол. м.66 кД);
4) гликопротеин (F, мол. м. 55 кД);
5) матричный белок (М, мол. м. 38 кД);
6) белок L-полимераза (мол. м. 180 кД);
7) клеточный активный белок А (мол. м. 43 кД).

Антигенные свойства
Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 агглютинирует эритроциты морской свинки, кролика, свиньи, коровы, мыши, овцы, козы, человека, белой мыши. Клетки, инфицированные вирусом ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4", сорбируют эритроциты морской свинки, КРС, овцы, кролика и белой мыши. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител на 8-14 сутки после прививки, антитела достигают пика к 16-28 дню и сохраняются до одного года. Продолжительность и напряженность поствакцинального иммунитета обеспечивается преимущественно IgG и секреторными IgA, выработка которых стимулируется активным вакцинальным процессом. Привитые телята с титром гуморальных антител 6,3-10,3 лог₂ устойчивы к заражению вирусом ПГ-3. Полевые изоляты вируса ПГ-3 имеют близкое антигенное родство с вирусом ПГ-3 штамма "ВГНКИ-4".

Биотехнологические характеристики
Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 проявляет высокую биологическую антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации, соответствует полевым изолятам. Штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 предназначен для использования в качестве сырья для приготовления живых и инактивированных вакцин против ПГ-3 КРС. Этот вирус репродуцируется в культурах клеток ПЭК, ПТ, МДВК, ВНК-21, ПС и накапливается в титрах 5,0-7,5 Ig ТЦД₅₀/см³. Штамм "ВГНКИ-4" является стабильным и безвредным.

Устойчивость к внешним факторам
Вирус ПГ-3 штамма "ВГНКИ-4" быстро разрушается под действием высокой температуры. Возбудитель чувствителен к хлороформу, эфиру, формалину, детергентам.

Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ПГ-3.

По мнению заявителя, предлагаемый штамм соответствует критериям патентоспособности изобретений "новизна" и "изобретательский уровень".

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1.

Для изготовления вирусвакцины против ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4" используют перевиваемую монослойную культуру клеток ВНК-21, адаптированную к суспензионному культивированию. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла или раствор Хенкса без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 6,7-7,2. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,5-1,0 ТЦД₅₀/см³. Культивирование вируса ведут при температуре 36-37^oС в течение 24-32 часов до появления ЦПД на 80-90%. После замораживания и оттаивания вируссодержащую суспензию сливают в емкость и отбирают пробы для контроля стерильности и биологической активности вируссодержащего материала. Для составления серии вакцины используют только стерильные вируссодержащие жидкости, прошедшие контроль на МПА, МПБ и тиогликолевой среде. Одновременно берут пробы (1-2 см³) для определения титра вируса до их лиофилизации. Биологическая активность вируссодержащего материала должна быть не ниже 6,5-7,0 Ig ТЦД₅₀/см³. В полученный вируссодержащий материал вносят необходимое количество среды высушивания, в состав которой входят сахароза, гидролизат лактальбумина (ГЛА) и желатоза, смесь тщательно перемешивают, при необходимости доводят рН 6,7-7,2. Смесь разливают в стерильные флаконы (ампулы) по 2-4 см³ и подвергают лиофильному высушиванию с последующей укупоркой.

Сухая вирусвакцина против ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4" представляет собой мелкопористую массу светло-желтого или светло-розового цвета. Вакцину растворяют в физиологическом растворе и после этого она имеет вид слегка опалесцирующей жидкости розового цвета.

Полученная вирусвакцина против ПГ-3 имеет оптимальный компонентный состав, мас.%:
Антиген из аттенуированного штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 - 65-75
Среда высушивания - До 100
Вирусвакцину из штамма "ВГНКИ-4" применяют в неблагополучных хозяйствах для профилактики ПГ-3 КРС. Вакцинации подлежат клинически здоровые животные при хороших условиях содержания и кормления. Телят вакцинируют перед переводом их из родильного отделения в телятники. Вакцину вводят внутримышечно в области крупа или средней трети шеи двукратно с интервалом 14-21 день в объеме 1 см³. Прививная доза вакцины должна составлять 10^5,0 ТЦД₅₀ вируса ПГ-3. В организме привитых животных вакцина индуцирует образование гуморального и клеточного иммунитета. Иммунитет формируется через 2 недели после начала вакцинации, после повторной вакцинации иммунитет длится не менее 6 месяцев. Применение вирусвакцины из штамма "ВГНКИ-4" позволяет существенно снизить уровень респираторной патологии в стадах КРС.

Пример 2.

Серию вирусвакцины против ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4", изготовленную так, как описано в примере 1, подвергают контролю на стерильность, инфекционную активность и антигенную активность.

Проверка стерильности.

Контролю на отсутствие бактериального и грибкового загрязнения подвергают среднюю пробу вакцины из пяти флаконов. Испытание проводят в соответствии с ГОСТ 28085-89. Вакцина признана стерильной.

Определение инфекционной активности.

Для этого содержимое 4 флаконов вакцины растворяют в 5 см³ ГЛА каждый, объединяют и делают из них десятикратные разведения. Для этого в 8 пробирок вносят по 9 см³ ГЛА. В первую пробирку добавляют 1 см³ используемого компонента вакцины и после тщательного перемешивания другой пипеткой переносят 1 см³ в следующую пробирку. Всего делают 8 разведений. Каждое разведение вакцины инокулируют по 1 см³ в 4 пенициллиновых флакона с выросшим монослоем культуры клеток. В качестве контроля оставляют незараженными 4 пенициллиновых флакона с монослоем. Флаконы с зараженными и контрольными культурами клеток помещают в термостат при 37^oС на 7 суток, ежедневно просматривая их под микроскопом на наличие ЦПД. С появлением ЦПД в пробирочных культурах ставят реакцию гемадсорбцин. Для этого в пенициллиновые флаконы с учтенным ЦПД вносят нестерильно 2-3 капли 1% взвеси эритроцитов морской свинки, флаконы встряхивают и ставят в термостат при 37^oС на 15-20 минут, после чего флаконы просматривают под микроскопом. Положительной считается реакция гемадсорбции в том случае, если не менее половины клеток монослоя покрыты эритроцитами, а в контроле отсутствует гемадсорбция: эритроциты проплывают в поле зрения. Через 5-7 суток независимо от появления ЦПД в пробирках, на которых титровали вакцину, во всех оставшихся разведениях ставят реакцию гемадсорбции. В пробирках, где полностью поражен монослой, эта реакция может отсутствовать, а может проявиться агглютинация эритроцитов. Культуры, в которых ЦПД наблюдается хотя бы в виде отдельных очагов, считаются положительными. Титр вакцины рассчитывают по методу Рида и Менча. Титр вакцины составляет 10^6,0 ТЦД₅₀/см³ по ЦПД и 10^6,0 по гемадсорбции.

Определение безвредности.

Содержимое 4 флаконов вакцины, растворенное так, как описано в разделе "Определение инфекционной активности", объединяют и вводят внутримышечно в объеме 1 см³ 10 морским свинкам. За свинками ведут наблюдение в течение 14 суток. Вакцина считается безвредной, если она не вызвала видимых патологических изменений в месте инъекций и изменений общего состояния животных.

Определение антигенной активности.

Определение антигенной активности вакцины проводят на морских свинках, на которых испытывали препарат. Животных ревакцинируют на 14-21 день и через 14 суток после ревакцинации обескровливают. Антигенную активность вакцины определяют по уровню антител к вирусу ПГ-3 в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). От морских свинок берут стерильно по 10-15 см³ крови, пробы ставят в термостат при 37^oС на 1 час, обводят стеклянной палочкой и оставляют на 4-8^oС на 24 часа. Отстоявшуюся сыворотку сливают в стерильные пенициллиновые флаконы и для освобождения от неспецифических ингибиторов гемагглютинации инактивируют при 56^oС в водяной бане в течение 30 минут, затем обрабатывают каолином, для чего к 1 см³ сыворотки добавляют 1 см³ 25% каолина, выдерживают 30 минут при комнатной температуре и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. Отбирают надосадочную жидкость и обрабатывают эритроцитами морской свинки, избавляясь от неспецифических агглютининов. Для этого к 1 см³ обработанной каолином сыворотки добавляют 1 см³ 5% суспензии морской свинки, инкубируют 1 час при 4^oС и центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость используют как сыворотку в разведении 1:4. Проведение РТГА включает следующие этапы:
- определение рабочей дозы гемагглютинирующего антигена;
- постановка основного опыта.

На первом этапе титруется вирусный гемагглютинирующий антиген ПГ-3 в реакции гемаглютинации микрометодом. Используя круглодонный планшет, в каждую лунку вносят 0,025 см³ растворителя. Затем в первую лунку первого ряда вносят 0,025 см³ гемагглютинирующего антигена ПГ-3 и готовят последовательные двойные разведения. Для этого после трехкратного пипетирования из первой луночки 0,025 см³ переносят во вторую лунку, из второй в третью и т.д. Из последней 0,025 см³ удаляют в дезраствор, затем во все луночки вносят по 0,025 см³ 0,5% суспензии эритроцитов. При этом обязательным является контроль на возможность спонтанной агглютинации, для чего взвесь эритроцитов капают в луночки с раствором, не содержащим антигена. Планшет накрывают крышкой, осторожно встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 60 мин. Учет результатов реакции проводят через час после добавления суспензии эритроцитов. За агглютинирующий титр вируса принимают наибольшее его разведение, которое вызывает агглютинацию эритроцитов не менее чем на 2+ (1 гемагглютинирующая единица - 1ГАЕ). Для основного опыта используются 4ГАЕ. Если 1ГАЕ установлена при разведении вируса 1:180, то при подготовке рабочей дозы (4ГАЕ) вирус разводят 1:40 (или через одну луночку влево от 1ГАЕ).

Для постановки основного опыта готовят двукратные разведения сывороток с 1: 8 до 1:2048. Для этого во все луночки планшета наливают по 0,025 см³ растворителя. Затем в первые луночки вносят по 0,025 см³ исследуемых сывороток в разведении 1: 4 трехкратного пипетирования, переносят последовательно из первых луночек во вторые и т.д. по 0,025 см³ вирусного гемагглютинина, содержащего 4ГАЕ. Наряду с испытуемыми сыворотками реакцию ставят со специфической и отрицательной контрольными сыворотками из диагностикума. После встряхивания и контакта в течение 60 мин при комнатной температуре добавляют 0,025 см³ 0,5% суспензии эритроцитов морской свинки, встряхивают и ставят в холодильник на +4^oС. Реакцию учитывают через 1-1,5 часа. Основанием для проведения учета результатов считается полное оседание эритроцитов. Вакцина обладает антигенной активностью, если у двукратно вакцинированных морских свинок обнаружены антитела с титрами 1:64 к вирусу ПГ-3.

Пример 3.

Эффективность сухой вирусвакцины из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 1, проверена на 300 головах телят 20-30-дневного возраста в ЗАО "Запрудновское" Кстовского района Нижегородской области.

До вакцинации в хозяйстве отмечался падеж среди телят 1-3-месячного возраста со следующей клинической картиной: угнетение, ухудшение аппетита, серозные или серозно-гнойные истечения из носа, пневмонии. При патологоанатомическом вскрытии павших телят отмечали следующие изменения: острые катаральные и катарально-гнойные абсцедирующие пневмонии, увеличение и отечность подчелюстных, предлопаточных, средостенных лимфоузлов, дистрофию сердца. Вакцину вводили животным внутримышечно в области крупа или средней трети шеи двукратно с интервалом 14-21 день в объеме 1 см³. После вакцинации отмечали более сглаженную клиническую картину, которая проявлялась в отсутствии угнетения, ухудшения аппетита, катарально-гнойных истечении из носа. Падеж телят в хозяйстве сократился с начала применения вакцины с 32% до 11%. Таким образом, вакцина против ПГ-3 КРС из штамма "ВГНКИ-4" является безвредной и способствует профилактике данного заболевания.

Пример 4.

Эффективность сухой вирусвакцины из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 1, проверена на 1184 головах телят в ООО "Родина" и колхозе "Новый путь" Шахунского района Нижегородской области. Вакцину применяли так, как описано в примере 1. Применение вакцины позволило резко снизить заболеваемость респираторными болезнями и гибель телят. Все это свидетельствует, что испытанная вакцина против ПГ-3 КРС из штамма "ВГНКИ-4" является безвредным и иммуногенным препаратом, позволяющим эффективно профилактировать болезнь.

Пример 5.

Эффективность сухой вирусвакцины из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 1, проверена на 1662 головах телят в хозяйствах Уренского района Нижегородской области. Вакцину применяли так, как описано в примере 1. Наблюдение за привитыми телятами показали, что испытуемая вакцина является безвредным препаратом, позволившим ликвидировать респираторные болезни молодняка и снизить его гибель в 2-3 раза.

Пример 6.

Эффективность сухой вирусвакцины из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 1, проверена в хозяйствах Шахунского района Нижегородской области на 1825 телятах 30-40-дневного возраста. До применения вакцины заболеваемость органов дыхания молодняка КРС возрастом 2-6 месяцев составляла 65-85%, а падеж 15-25%. Вакцину применяли так, как описано в примере 1. После вакцинации заболеваемость молодняка респираторными болезнями и гибель регистрировалась в единичных случаях.

Указанный препарат оказался безвредным, авирулентным и иммуногенным для телят.

Пример 7.

Для изготовления сорбированной инактивированной вакцины против ПГ-3 из штамма "ВГНКИ-4" вирус культивируют так, как описано в примере 1. Полученную вируссодержащую суспензию очищают от балластных примесей центрифугированием.

Затем вирусную суспензию подвергают инактивации рабочим раствором аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ). Рабочий раствор АЭЭИ готовят за 30-60 минут до внесения в вирусную суспензию путем разбавления исходного препарата (15-19% водного раствора АЭЭИ) стерильной деминерализованной водой до 5-10% концентрации. Во избежание изменения рН вирусной суспензии рабочий раствор АЭЭИ предварительно доводят 5М раствором уксусной кислоты до рН 7,8-8,2.

Очищенную вирусную суспензию перед внесением инактиванта нагревают до 36-37^oС и добавляют в нее рабочий раствор АЭЭИ до конечной концентрации 0,1%. Инактивацию проводят в течение 24 часов при 36-37^oС и рН 7,0-7,6 с периодическим перемешиванием (3-5 мин через 5-6 часов). После окончания инактивации суспензию охлаждают до 4-6^oС и берут пробу для проверки на остаточную вирулентность. Для нейтрализации АЭЭИ в суспензию инактивированного и охлажденного вируса добавляют 1 М раствор тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ. Сорбирование полученного антигена осуществляют 3% гидроокиси алюминия (ГОА) из расчета 330 см³ на 1000 см³ антигена и в полученную смесь добавляют мертиолят из расчета 10 мг на 1000 см³ антигена. После седиментации ГОА в течение ночи сливают расчетный объем надосадочной жидкости в количестве 330 см³. К полученному адсорбату добавляют 10% раствор сапонина из расчета 4,0 см³ на 1000 см³ суспензии. Полученная таким образом вакцина представляет собой суспензию розового цвета. При хранении выпадает рыхлый осадок, легко разбивающийся при встряхивании. Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и подвергают контролю на стерильность по ГОСТу 28085-89. Безвредность вакцины проверяют на 10 морских свинках. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на антигенную активность на морских свинках или кроликах.

Полученная адсорбат-вакцина против ПГ-3 имеет оптимальный компонентный состав, мас.% по сухому веществу:
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС - 97,9
ГОА (3%-ный раствор) - 1,0
АЭЭИ - 1,02
Сапонин (10%-ный раствор) - 0,04
Тиомерсал - 0,001
Полученную вакцину применяют в неблагополучных по ПГ-3 КРС хозяйствах для профилактики этого заболевания. Вакцинации подлежат клинически здоровые животные. Телят вакцинируют в возрасте 20-25 суток. Вакцину вводят внутримышечно в области крупа или средней трети шеи двукратно с интервалом 14-20 суток в объеме 5 см³. В организме привитых животных вакцина индуцирует образование гуморального и клеточного иммунитета. Иммунитет формируется через 2 недели после начала вакцинации, после повторной вакцинации иммунитет сохраняется не менее 6 месяцев.

Пример 8.

Эффективность сорбированной инактивированной вакцины из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 6, проверена в хозяйствах Шахунского района Нижегородской области на 58 телятах 30-45-дневного возраста. Вакцину применяли так, как описано в примере 7.

Указанный препарат оказался безвредным, авирулентным и иммуногенным для телят.

Пример 9.

Эффективность инактивированной сорбированной вакцины из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3 КРС, изготовленной так, как описано в примере 6, проведена на 200 телятах 20-30-дневного возраста в колхозе им. Крупской Шуйского района Ивановской области. До вакцинации в хозяйстве отмечалось массовое заболевание среди телят 1-3-месячного возраста со следующей клинической картиной: угнетение, ухудшение аппетита, серозные или серозно-гнойные истечения из носа, кашель, пневмонии. Гибель среди заболевшего молодняка достигала ~ 30%. Вакцину применяли так, как описано в примере 7. Падеж телят в хозяйстве сократился с начала применения вакцины с 27,2% до 7,3%, а болезнь у отдельных животных протекала с более сглаженной клинической картиной.

Таким образом, вакцина против ПГ-3 КРС сорбированная инактивированная является безвредной и способствует профилактике данного заболевания.

Пример 10.

Эффективность инактивированной сорбированной вакцины из штамма "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3, изготовленная так, как описано в примере 6, проверена на 1929 телятах в хозяйствах Уренского района Нижегородской области. Вакцину применяли так, как описано в примере 7. Наблюдения за привитыми телятами показали, что испытуемая вакцина является безвредным препаратом, позволившим ликвидировать респираторные болезни молодняка и снизить его гибель.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:
штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3, воплощающий предлагаемое изобретение, предназначен для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
штамм "ВГНКИ-4" вируса ПГ-3, полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой специфической, иммуногенной и антигенной активностью как в нативном виде, так и после инактивации и пригоден для изготовления диагностикумов и вакцинных препаратов как из живого, так и из инактивированного вируса.

Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость".

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение "Штамм вируса парагриппа-3 для изготовления диагностических и вакцинных препаратов"
1. Инфекционные болезни животных. Справочник. Под ред. Д.Ф. Осидзе. - М. , Агропромиздат, 1987, 19-99.

2. Пат. США 3363458, С 12 К 5/00, 1968 г.

3. Пат. ФРГ 2323847, А 61 К 39/02, 1976 г.

4. Пат. Румынии 58827, С 12 К 5/00, 1975 г.

5. Пат. РФ 2111011; А 61 К 39/295, А 61 К 39/15, 39/155, 39/265; 20.05.98 г.

6. Сюрин В.Н. и др. Вирусные болезни животных М., ВНИТИБП, 1998, 242-251 (прототип).

7. Миронова Л. А., Преображенская Н.К. и др. Отечественные линии перевиваемых клеток почек теленка - субстрат для биотехнологии. Биотехнология, 1998, 5, 25-31.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Штамм "ВГНКИ-4" ДЕП вируса ПГ-3 КРС получен путем адаптации эпизоотического штамма к перевиваемой культуре клеток почек теленка "Таурус-1". Штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов ВГНКИ под регистрационным наименованием "ВГНКИ-4" ДЕП. Штамм "ВГНКИ-4" отличается как от производственных, так и от ранее выделенных эпизоотических штаммов вируса ПГ-3 КРС. Вирус штамма "ВГНКИ-4" хорошо размножается в культурах клеток ПЭК, ПТ, МДВК, ВНК-21, ПС и накапливается в титрах 5,0-7,5 lg ТЦД₅₀/см³. Штамм "ВГНКИ-4" является стабильным и безвредным. Сохраняет исходные характеристики при последовательном пассировании в чувствительных биологических системах в течение 9-10 пассажей (срок наблюдения). Новый производственный штамм вируса ПГ-3 КРС обладает широким антигенным спектром действия, высокой биологической и иммуногенной активностью, пригоден для изготовления эффективных диагностических и вакцинных препаратов.

Штамм вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, сем. Paramyxoviridae, род Parainfluenza, подтип Parainfluenza virus 3, коллекция ВГНКИ, регистрационное наименование "ВГНКИ-4" ДЕП, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.