ШТАММ МИКРОМИЦЕТА ТRICHODERMA VIRIDE, ШТ.23, ОБЛАДАЮЩИЙ ФУНГИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСНОГО БИОПРЕПАРАТА СО СВОЙСТВАМИ ФУНГИЦИДА И БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСНОГО БИОПРЕПАРАТА, КОМПЛЕКСНЫЙ БИОПРЕПАРАТ СО СВОЙСТВАМИ ФУНГИЦИДА И БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ Российский патент 2002 года по МПК C12N1/16 C12N1/20 C05F11/08 A01N63/00 A01N63/04 C12N1/16 C12R1/885 C12N1/20 C12R1/65 

Изобретение относится к биотехнологии, сельскохозяйственной микробиологии, фитопатологии и может быть использовано в земледелии, лесном хозяйстве, садоводстве и овощеводстве.

Известен штамм Trichoderma viride. F 3273 D (1), обладающий фунгицидными свойствами, недостатком его является ограниченный спектр действия.

Известен способ получения комплексного биопрепарата, обладающего свойствами фунгицида и азотного бактериального удобрения, где в качестве субстрата носителя используют сапропель (2); недостатком этого способа и препарата является трудность подготовки сапропеля (буртование, обезвоживание, выдерживание в течение нескольких месяцев) и непостоянный его состав.

Известен биопрепарат на основе Azotobacter chroococcum штамм 92 (3), обнаруживающий свойства азотного удобрения и фунгицида благодаря способности культуры синтезировать антибиотик; недостатком указанного биопрепарата является необходимость оптимизации условий получения для проявления свойств фунгицида.

Целью настоящего изобретения является оздоровление почвы, повышение ее плодородия, снижение техногенной нагрузки на почву химическими средствами защиты растений, сокращение расхода минеральных удобрений и ХСЗР, улучшение экологической ситуации, повышение урожайности и качества выращиваемой продукции, а также снижение утомляемости почвы.

Указанная цель достигается тем, что получают новый биопрепарат, обладающий более высокой фунгицидной активностью и азотфиксацией благодаря использованию микромицета Trichoderma viride. шт.23 (коллекционный С-03, коллекция ЗАО "БИОФЛОРА") с высокой фунгицидной активностью и азотфиксирующих бактерий Azotobacter chroococcum шт.2Е-16 (коллекционный В-05, коллекция ЗАО "БИОФЛОРА") (4).

Новый штамм Trichoderma viride.23 получен методом аналитической селекции природных изолят, отобранных после инкубирования на агаризованной среде смывов с поверхности персика. Штамм хранится в музее культур ЗАО "БИОФЛОРА", имеет С-03.

Культурально морфологические признаки штамма Trichoderma viride, шт.23 ( С-03) и известного штамма Trichoderma viride, F 3273D приведены в табл. 1 и 2.

Глубинное выращивание на качалке, n=220 об/мин, t=26±2^oC, 96 час.

Физиолого-биохимические признаки штамма Trichoderma viride, шт.23 ( С-03) и известного штамма Trichoderma viride, F 3273 В приведены в табл.3 и 4.

Методом агаровых блоков (5) обнаружено, что спектр активности заявляемого штамма против фитопатогенных микроорганизмов выше чем у прототипа.

Прямым подсчетом в камере Горяева определяли продуктивность заявляемого штамма в сравнении с прототипом Результаты продуктивности штамма представлены в табл.4.

Отношение к углеводам. Заявляемый штамм усваивает сахарозу, фруктозу, глюкозу, лактозу, глицерин, мальтозу.

Отношение к азоту: Заявляемый штамм растет на средах, содержащих минеральный (окисленный и восстановленный) азот, аминный (органический) азот.

Обнаруженные свойства штамма Trichoderma viride, С-03 в сочетании со свойствами штамма Azotobacter chroococcum шт.2Е-16 (коллекционный В-05, коллекция ЗАО "БИОФЛОРА") позволили разработать новый комплексный биопрепарат со свойствами фунгицида и бактериального удобрения, и способ его получения.

Примеры осуществления изобретения приводятся ниже
Пример 1. Штамм Trichoderma viride, шт. 23 выращивали на жидкой питательной среде, имеющий состав, г/л:
мелассы - 30 г; NaNO₃ - 2 г; К₂НРО₄ - 2 г; MgSO₄•7H₂O - 0,5 г; КСl - 0,5 г; FeSO₄•7H₂O - 0,01 г.

Выращивание проводили в колбах на круговой качалке при 220 об/мин в течение 72 часов (температура выращивания 26±1^oС). Полученную жидкую культуру использовали в дальнейших работах для получения биопрепарата.

Бактериальную культуру Azotobacter chroococcum шт.2Е-16 выращивали на жидкой питательной среде содержащей, г/л:
К₂НРО₄ - 0,3 г, СаНРО₄ - 0,2 г; NaCl - 0,5 г, СаСО₃ - 5 г; К₂SO₄ - 0,2 г, MgSO₄•7H₂O - 0,3 г. Выращивание проводили в колбах на круговой качалке при 220 об/мин в течение 48 часов (температура выращивания 28±1^oС).

В полученную жидкую культуру Azotobacter chroococcum шт.2Е-16 вносили смесь микроэлементов ; Zn, Fe, Mo, Cu, Mn, Mg, Co в количестве 0,1% (суммарно), т.е. 10 мг в виде водного раствора, и в дальнейшем использовали для получения комплексного биопрепарата.

Пример 2. В твердофазный субстрат (свекловичный жом), содержащий питательные добавки (К₂НРО₄, карбамид, мел, мелассу в суммарном количестве 2,4 г на 100 г биопрепарата) вносили 10,0 г (мл) культуры Trichoderma viride, шт. 23, выращенной, как описано выше. Полученную смесь перемешивали и вносили в нее 10,0 г (мл) культуры Azotobacter chroococcum шт.2Е-16, подготовленной для получения комплексного биопрепарата, как описано выше. Смесь тщательно перемешивали, оставляли на доращивание при температуре 26±2^oС на 4 суток при периодическом перемешивании 2-3 раза в сутки.

Масса препарата после доращивания остается практически неизменившейся за счет потери влаги при испарении в процессе доращивания. Полученный препарат содержит:
- спор - 15,3•10⁹/г,
- клеток Azotobacter chroococcum шт.2Е-16 - 4,8•10⁹/г,
- питательные добавки 2,4% (К₂НРО₄, карбамид, мел, меласса),
- микроэлементы), 1%,
- остатки питательной среды Azotobacter chroococcum шт. 2Е-16,
- остатки питательной среды Trichoderma viride, шт.23,
- свекловичный жом до 100 г,
- влажность препарата 45-60%.

Пример 3. Проверяли биологическую активность и эффективность препарата методом колодцев, сравнивая ее с активностью исходных штаммов, составляющих основу препарата.

Результаты опыта представлены в табл. 5.

Пример 4. Препаратом, полученным, как описано в примере 2, обрабатывали посадки клубники при обнаружении первых признаков появления Botrytis cinerea. В качестве прототипа использовали сапропель (2). Препарат разбрасывали на опытном участке с помощью разбрасывающей машины из расчета 10,0 кг/га. Биометрические, морфофизиологические и фитопатологические наблюдения, а также обследование насаждений клубники проводили в процессе роста, развития растений и поспевания ягод. Результаты опытов представлены в табл. 6.

Пример 5. Биопрепаратом, полученным, как описано в примере 2, весной обрабатывали посевы озимой пшеницы при обнаружении "снежной плесени" (Fusarium sp.). Биопрепарат смешивали с 10-кратным количеством воды и поливали посевы. Биометрические, морфофизиологические обследования посева пшеницы проводили в процессе вегетации растений.

Результаты опытов представлены в табл. 7.

Таким образом, заявляемый штамм Trichoderma viride и полученный новый биопрепарат по заявляемому способу обладают способностью подавлять фитопатогенную микрофлору почвы при одновременном действии как бактериальное азотное удобрение, обеспечивают повышение урожая и возможность снижения расхода азотных удобрений. При этом наблюдается синергетическое взаимодействие двух штаммов в отношении подавления фитопатогенов. Состав биопрепарата обеспечивает его экологическую чистоту благодаря физиологическим свойствам штаммов микробных культур, входящих в его состав. Питательные добавки целиком потребляются и в процессе доращивания препарата, и почвенной микрофлорой при внесении препарата в почву. Микроорганизмы - основа биопрепарата становятся оздоровляющим фактором для посадок и почвы.

Источники информации
1. Патент РФ 2013055, опубл. 30.05.94. Бюлл. 10.

2. Патент РФ 2081866, опубл.20.06.97. Бюлл. 17.

3. А.с. СССР 922105, опубл.23.04.82. Бюлл. 15.

4. Заявка на патент РФ 99112161, приоритет 04.06.99. Положительное решение от 27.07.01.

5. Йожеф Сеги. В кн. Методы почвенной микробиологии. М.: Колос, 1983, стр.173.

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии, фитопатологии, земледелия. Предложен штамм микромицета Trichoderma viride, шт. 23, обладающий антагонистической активностью по отношению к фитопатогенным грибам, комплексный биопрепарат со свойствами фунгицида и бактериального удобрения, способ получения биопрепарата. Штамм Trichoderma viride 23 получен методом аналитической селекции природных изолятов, отобранных после инкубирования на агаризованной среде смывов с поверхности персика. Штамм хранится в музее культур ЗАО "БИОФЛОРА", имеет С-03. При приготовлении препарата, содержащего данный штамм, в стерильный свекольный жом, содержащий питательные добавки (K₂HPO₄, карбамид, мел, сахарозу) в суммарном количестве 2,4 г на 100 г биопрепарата, наносят 10 г (мл) культуры Trichoderma viride, шт. 23, выращенной на жидкой питательной среде Чапека-Докса, полученную смесь перемешивают и вносят в нее 10 г (мл) культуры Az.chroococcum, шт.2Е-16, выращенной на жидкой питательной среде Федорова с мелассой, и смесь микроэлементов Zn, Fe, Мо, Сu, Mg, Mn в количестве 0,1% (суммарно) в виде водного раствора. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на доращивание при той же температуре при периодическом перемешивании 2-3 раза в сутки. Полученный препарат при использовании его для выращивания растений снижает паражаемость растений заболеваниями и способствует повышению урожая. 3 с.п. ф-лы, 7 табл.

1. Штамм микромицета Trichoderma viride, шт.23 (коллекционный С-03, коллекция ЗАО "БИОФЛОРА"), обладающий антагонистической активностью по отношению к фитопатогенным грибам, для получения биопрепарата. 2. Способ получения комплексного биопрепарата со свойствами фунгицида и бактериального удобрения, содержащего Azotobacter chroococcum, отличающийся тем, что в твердофазный субстрат - свекловичный жом, содержащий питательные добавки (К₂НРO₄, карбамид, мел, мелассу в количестве 1,2-3,5% от массы субстрата), вносят культуру микромицета Trichoderma viride, шт.23 ( С-03, коллекция ЗАО "БИОФЛОРА") в количестве 8-14% от массы твердофазного субстрата, перемешивают и вносят 5-12% культуры Azotobacter chroococcum шт.2Е-16, ( В-05, коллекция ЗАО "БИОФЛОРА"), содержащей микроэлементы Zn, Fe, Мо, Сu, Mn, Mg, Co, в количестве 0,1-0,4% суммарно (от количества Azotobacter chroococcum), полученную смесь перемешивают и доращивают. 3. Комплексный биопрепарат со свойствами фунгицида и бактериального удобрения, полученный по п.2.