СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПИЕЛОНЕФРИТА У ДЕТЕЙ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/52 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии и урологии, и может найти применение в диагностической и лечебной работе как в стационарах, так и в поликлинических условиях.

Пиелонефрит (ПН) занимает одно из ведущих мест в детской патологии как по тяжести процесса, так и по распространенности. Лечение ПН в основном зависит от точной диагностики, которая позволяет определить тактику лечения.

Часто усилия клиницистов бывают безуспешными, ибо они в периоды обострения в основном направлены на подавление общепринятых возбудителей этого тяжкого заболевания. Как показывает практика, одним из основных критериев диагностики ПН является обнаружение в моче больных большого количества (100 тыс. КОЕ/мл и более) бактерий: эшерихий, клебсиелл, протея, стафилококков, энтерококков, сине-гнойной палочки и др., однако проводимая антибактериальная терапия не всегда дает положительные результаты и воспалительный процесс полностью не купируется.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе выявлены различные способы диагностики ПН у детей. Так, в статье Руденко Л. М. , Матвеевой Л. Н., Хариной О.П. "Влияние вирусной инфекции на течение и исход острого пиелонефрита у детей" (Педиатрия, - 1990. - 4. - С. 108-109) указывается на выявление в 83,7% случаев в клетках осадка мочи, наряду с бактериями, вирусов Коксаки А и В, гриппа А, В, С, парагриппа I, II, III типов и аденовирусов с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции. Недостатком этого метода диагностики является его меньшая чувствительность по сравнению с полимеразной цепной реакцией, а также полная неэффективность в отношении обнаружения латентных патогенов с длительной персистенцией (герпетические вирусы, вирусы папилломы, хламидии и микоплазмы) в исследуемом материале.

В статье Запруднова А.М., Съемщикова Ю.П., Бадяевой С.А. "Особенности хламидийной инфекции у детей с нефрологической, урологической и гинекологической патологией" (Педиатрия, - 1999. - 1. - С.23-26) подчеркивается, что пиелонефриту, ассоциированному с хламидийной инфекцией, свойственно хроническое течение, а также наличие аномалий развития почек.

К сожалению, в этой работе также не исследовались герпетические вирусы, передающиеся через плаценту и оказывающие тератогенное действие на плод, в том числе вызывающие аномалии развития почек.

Из патентных источников АС 1334090, G 01 N 33/48, БИ 32, 1987, защищен "Способ диагностики острого пиелонефрита" путем определения в лейкоцитах крови больного щелочной фосфотазы.

Наиболее близким к заявляемому и взятым за прототип является патент РФ 2033614, МПК 6 G 01 N 33/68, БИ 11, 1995, "Способ диагностики пиелонефрита" путем высушивания капли мочи обследуемого на стеклянной подложке и при наличии полной непрозрачной кристаллизации капли в сочетании с положительной реакцией на наличие белка в моче диагностируют калькулезную форму пиелонефрита.

Недостатком этого способа является то, что диагностика ПН основывается на исследовании биохимических показателей мочи, что снижает точность диагностики, так как не позволяет выявить истинных возбудителей этой патологии.

Теоретической предпосылкой настоящего технического решения явились публикации в медицинской литературе данных, свидетельствующих о том, что у больных ПН детей при исследовании мочи обнаруживаются не только бактериальные патогены, но также вирусы и хламидии. Это натолкнуло на мысль о необходимости более широкого обследования больных детей для повышения эффективности диагностики ПН. Анализ результатов этого обследования показал, что в моче больных детей действительно обнаруживаются хламидии, вирусы простого герпеса, Эпштейна-Барр, цитомегалии и папилломавирусы, а также микоплазмы, нередко колонизирующие мочеполовые органы детей и вызывающие смешанную вирусо-бактериальную инфекцию почек с более тяжелым хроническим течением заболевания.

Дальнейшие наблюдения за больными подтвердили предположение о том, что эти возбудители являются источником проявления воспалительных процессов в периоды обострения, что требует изменения тактики лечения этих пациентов с назначением противовирусной, противомикоплазменной и противохламидийной терапии.

Целью настоящего изобретения является повышение точности диагностики пиелонефрита у детей. Эта цель достигается следующим образом. У обследуемых детей с ПН в активной фазе заболевания, до назначения антибиотикотерапии, на исследование забирают среднюю порцию утренней мочи при естественном мочеиспускании в две стерильные пробирки в количестве 5 мл в каждой. Мочу из первой пробирки центрифугируют в течение 15 минут на центрифуге ОПН-8 со скоростью 2 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. В осадке мочи определяют присутствие ДНК хламидий, микоплазм, вирусов простого герпеса I и II типа (HSVI, HSVII), цитомегаловируса (CMV), вируса Эпштейна-Барр (EBV), вирусов папилломы человека (HPV) с помощью стандартной полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Mullis K. B., Faloona F.A. Methods Enzymol. 1987. V. 155. Р. 335-350), используя при этом коммерческие ПЦР-диагностические наборы производства АО "ДНК-технология", "Диа-Лат", "Литех" (Москва). Выделение ДНК и постановку ПЦР проводят согласно рекомендациям фирм-изготовителей диагностических наборов.

В моче из второй пробирки определяют количество бактерий и их видовую характеристику стандартным микробиологическим методом (Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике (справочник). - М.: Медицина, 1987. - С. 316 и 317). Посев мочи производят секторным способом на следующие питательные среды: кровяной агар, желточно-солевой агар, среды Эндо и Сабуро. Для этого вначале на пластинчатые среды стандартной бактериологической петлей в сектор А производят посев исследуемого материала в виде одного штриха, а затем после прожигания петли делают 4 штриховых посева из сектора А в сектор В и аналогичным образом из сектора В в сектор С, а затем в сектор D.

Через 18-24 часа инкубирования в термостате при 37^oС подсчитывают количество колоний, выросших в разных секторах, а затем производят определение степени бактериурии по количеству колониеобразующих единиц (КОЕ) микроорганизмов в 1 мл мочи соответственно таблице, представленной в справочнике Меньшикова В.В. (1987).

Выявление у обследованных детей ДНК вышеперечисленных микроорганизмов и обсемененности мочи бактериями в количестве 100 тыс. и более КОЕ/мл позволяет диагностировать наличие у больного хронического пиелонефрита.

Изобретение иллюстрируется двумя клиническими примерами.

Пример 1. В урологическое отделение поступил больной А., 3 лет, с подозрением на инфекцию мочевыводящих путей. В острой фазе заболевания было проведено исследование мочи микробиологическим и генетическим (ПЦР) методами.

При обследовании выявлена бактериурия (кишечная палочка) в количестве 100 тыс. КОЕ/мл. С помощью ПЦР обнаружены ДНК микоплазм, CMV и EBV. На основании обнаружения вышеперечисленных патогенов диагностировали хронический пиелонефрит.

Пример 2. Больная М., 9 лет, с диагнозом инфекция мочевыводящих путей. Неоднократно находилась на стационарном лечении. При очередном поступлении в стационар в острой фазе заболевания в моче обследуемой с помощью ПЦР были обнаружены ДНК хламидий, HSVII, HPV. Из мочи бактериологическим методом выделен золотистый стафилококк в количестве 1 млн КОЕ/мл. На основании проведенного обследования был диагностирован хронический пиелонефрит.

Аналогичные исследования были проведены 48 больным с хроническим пиелонефритом.

В таблице представлены данные о частоте обнаружения хламидий, микоплазм, вирусов и бактерий при хроническом пиелонефрите в сравнении с контрольной группой здоровых детей.

Как видно из таблицы, для более точной и эффективной диагностики хронического пиелонефрита необходимо учитывать присутствие в моче не только бактерий, но и хламидий, микоплазм, вирусов простого герпеса, цитомегалии, Эпштейна-Барр и папилломы человека, которые у здоровых детей, за исключением хламидий (5%), не обнаруживаются.

По сравнению с прототипом заявляемый способ обеспечивает выявление истинных возбудителей данной патологии, что способствует более точной диагностике пиелонефрита у детей.

Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии и урологии, и может найти применение в диагностической работе как в стационарах, так и в поликлинических условиях. Способ обеспечивает повышение точности диагностики. Для этого у детей с пиелонефритом в острой фазе заболевания, до назначения антибиотикотерапии, на исследование забирают среднюю порцию утренней мочи при естественном мочеиспускании. В моче определяют присутствие ДНК хламидий, микоплазм, вирусов простого герпеса, цитомегаловируса, вирусов папилломы человека с помощью стандартной полимеразной цепной реакции, а также количество и видовую характеристику бактерий - стандартным микробиологическим методом. При выявлении в моче вышеперечисленных патогенов, а также обсемененности мочи бактериями в количестве 100 тыс. КОЕ/мл и более диагностируют хронический пиелонефрит. 1 табл.

Способ диагностики хронического пиелонефрита у детей, включающий исследование мочи, отличающийся тем, что определяют в моче в острой фазе заболевания до назначения антибиотикотерапии возбудителей бактериальной природы, проводят выделение из мочи с помощью полимеразной цепной реакции ДНК хламидий, микоплазм, вирусов простого герпеса, Эпштейна-Барр, цитомегалии и вирусов папилломы человека и при выявлении обсемененности мочи бактериями в количестве 100 тыс. КОЕ/мл и более и ДНК вышеперечисленных микроорганизмов диагностируют хронический пиелонефрит.