Изобретение относится к лечебно-пищевой биотехнологии и может быть использовано для приготовления лечебно-профилактических препаратов на основе живых бактерий.
Широко известны препараты, направленные на восстановление нормального биоценоза кишечника, в частности эубиотики - бактерийные препараты из живых микроорганизмов - представителей облигатной микрофлоры кишечника - это колибактерин, лактобактерин, бифидумбактерин, бификол и т.п. сухие препараты (см. книгу под ред. В.А.Княжева. Дисбактериозы. Теория и практика. Нижний Новгород, 1999, с.70-73).
При всех положительных качествах этих препаратов при использовании их в сухом виде теряются многие свойства. При высушивании препарата снижается количество живых штаммов микроорганизмов, для активизации антагонистической активности штаммов необходимо длительное время экспозиции в кишечнике человека.
Известно, что для улучшения усвояемости готовят закваски из бифидо- и лактобактерий, которые вносят в молоко, см., например, способ приготовления пробиотика на основе живых бифидобактерий и лактобактерий по патенту РФ 2060673, А 23 С 9/12, C 12 N 1/20, 1996 г.
Недостаток этого способа состоит в том, что основой пробиотика является цельное молоко, в которое вносится закваска. pН конечного продукта всего 4,4-4,8, а концентрация живых бактерий всего 108.
В качестве прототипа принят способ приготовления закваски для получения кисломолочного бифидумбактерина (см. Инструкция по приготовлению молочного бифидумбактерина на молочных кухнях. М., 1987., с.5-6, 9-10).
Способ включает приготовление гидролизатно-молочной среды, включающей гидролизат обрата молока 500 мл, дистиллированную воду 500 мл, хлористый натрий до 5% (с учетом хлоридов в гидролизате), лактозу 10 г, кислую составляющую (L-цистин солянокислый) 100 мг, пептон 2 г, агар-агар 750 мг, внесение в нее бактерий, их культивирование, пересев культур бактерий во флаконы в количестве 3-5% посевного материала по объему. Аминный азот равен 93-98 мг%.
Закваска имеет вид мутной жидкости светло-коричневого цвета с кислым вкусом. В 1 мл закваски содержится не менее 107-108 живых бактерий, значит, в конечном продукте их меньше. Продукт обладает довольно высокой антагонистической активностью к патогенным и условно-патогенным микробам.
Недостатком известного способа является довольно короткий срок годности закваски (1-2 сут). В закваске используется ограниченное количество штаммов, что позволяет влиять только на бифидумный компонент микрофлоры кишечника человека. Закваска используется в составе кисломолочного продукта.
Эти недостатки устраняются предлагаемым решением.
Решаемая задача - совершенствование способа приготовления лечебно-профилактического препарата на основе живых штаммов микроорганизмов.
Технический результат - получение готового к употреблению живого, жидкого, многокомпонентного препарата из нескольких штаммов бифидо- и лактобактерий, воздействующего как на бифидо-, так и на лактокомпоненты микрофлоры человека, со сроком годности 60 сут.
Этот результат достигается тем, что в способе приготовления лечебно-профилактического препарата на основе живых штаммов микроорганизмов с использованием гидролизатно-молочной среды (ГМС), включающей гидролизат обрата молока, хлористый натрий, лактозу, пептон, агар-агар и кислую составляющую, путем культивирования в ней штаммов-продуцентов, расфасовку препарата, в качестве штаммов-продуцентов используют набор бифидо- и лактобактерий, причем каждый штамм из набора культивируют отдельно и смешивают их по окончании культивирования, в качестве основы ГМС используют гидролизат обрата молока, аминный азот в котором поддерживают не менее 160 мг%, в качестве кислой составляющей используют аскорбиновую кислоту в количестве 230-250 мг на 1000 мл гидролизата, расфасовывают готовый к употреблению препарат с учетом необходимой для пациентов суточной дозы; результат достигается также тем, что из штаммов- продуцентов используют L.plantarum 8РАЗ, два штамма L.fermentum 90-ТС-4 и 39, B.infantis, два штамма В.bifidum 1 и 791, В.longum 379. При смешивании их берут в соотношении 1:1, a расфасовку осуществляют по 2,5 и 5 мл препарата.
Таким образом, предложен оптимальный комплекс, позволяющий получить препарат из живых бактерий с более длительным сроком хранения.
Раздельное культивирование штаммов-продуцентов исключает их возможное взаимное антагонистическое воздействие в процессе наращивания биомассы. Использование в качестве основы ГМС неразведенного гидролизата обрата молока обеспечивает повышение уровня аминного азота, что способствует более интенсивному наращиванию биомассы.
Использование в качестве кислой составляющей аскорбиновой кислоты позволяет вывести из основы довольно токсичный, импортный дорогостоящий препарат (L-цистин солянокислый).
Способ осуществляют следующим образом. Готовят среду ГМС по следующей схеме: кипятят обрат молока в течение 2-3 мин, охлаждают до 45o±1oС, устанавливают pН 10-20% раствором едкого натра, добавляют панкреатин, перемешивают, добавляют хлороформ и ставят в термостат. Первый час постоянно перемешивают. Затем фильтруют через бумажный фильтр. В готовом гидролизате контролируют аминный азот. В гидролизат добавляют агар-агар, хлористый натрий, пептон, лактозу и аскорбиновую кислоту, стерилизуют.
Культивирование штаммов-продуцентов лакто- и бифидобактерий производят по единому способу - каждый штамм отдельно в три этапа. В конечный препарат идет третья генерация штаммов. По окончании культивирования биомассы отдельных штаммов смешивают предпочтительно в соотношении 1:1. Осуществляют расфасовку готового препарата с учетом суточной дозы по 2,5 и 5,0 мл.
Пример осуществления способа.
Используют ГМС следующего состава:
Гидролизат обрата молока неразведенный - 1000 мл
Хлористый натрий - 5 г
Лактоза - 10 г
Пептон - 2 г
Агар-агар - 750 мг
Аскорбиновая кислота - 230-250 мг
pН 8,5-8,6.
Кипятят обрат молока (I-II категории) в течение 2-3 мин, охлаждают до 45o±1oС, устанавливают pН 7,6-7,8 10-20% раствором едкого натра, добавляют панкреатин из расчета 0,8 г/л (дозу рассчитывают по показателям активности порошка панкреатина, в данном случае показатель активности 166 по сертификату). Перемешивают в течение 10 мин, добавляют хлороформ 5 мл, перемешивают и помещают в термостат при 48o±1oС на 72 ч. В течение первого часа постоянно перемешивают каждые 5-10 мин. После выдержки в термостате сливают надосадочную жидкость через бумажный фильтр. В готовом гидролизате аминный азот должен быть не менее 160 мг%. Уменьшение этого параметра тормозит процесс размножения микроорганизмов, т. е. замедляется интенсивность наращивания биомассы. В гидролизат добавляют из расчета на 1 л 5 г хлористого натрия, 2 г пептона, 10 г лактозы, аскорбиновой кислоты 230-250 мг и 750 мг предварительно стандартно приготовленного агар-агара. Готовую среду стерилизуют при 0,5 атм. 30 мин.
Аскорбиновая кислота используется как стимулятор роста для бифидо- и лактобактерий, уменьшение количества не обеспечивает достаточный рост, а увеличение ведет к сильному закислению среды.
В качестве штаммов-продуцентов используют L-plantarum 8РАЗ, и L.fermentum 90-TC-4 и 39, имеющие высокую антагонистическую активность, оба штамма L.fermentum также характеризуются высоким уровнем β-галактозидазной активности. B.infantis и В.bifidum 1 и 791 чаще выявляются у детей в раннем возрасте, В.longum 379 - у взрослых.
Культивирование штаммов-продуцентов лакто- и бифидобактерий производится по единому способу.
I генерация - сухой штамм разводят в 10 мл ГМС и культивируют при 37o±1oС в течение 18 ч.
II генерация - 10 мл I генерации вливают в 100 мл ГМС и культивируют 18 ч при 37o±1oС.
III генерация - по 3 мл II генерации добавляют в 300 мл ГМС среды (т.е. из 100 мл II генерации получают 9,9 л III генерации) и культивируют 48 ч при температуре 37o±1oС.
По окончании культивирования биомассы отдельных штаммов смешивают из расчета 1: 1. Осуществляют расфасовку готового к употреблению препарата с учетом суточной дозы во флаконы по 2,5 и 5 мл, герметично закрывают резиновой пробкой и алюминиевым колпачком. Хранится препарат при температуре +6o±2oС до 60 сут с сохранением живых микробных клеток в 1 мл жидкого препарата 1010-1012 КОЕ/мл.
Препарат может быть получен реакторным методом.
Препарат может использоваться как самостоятельно по 1 флакону в день за 30-40 мин до еды, так и в качестве добавки в кисель, компот, "тум", творог и т.д.
Для детей первых месяцев жизни препарат LB-комплекс вводится в любые адаптированные и искусственные смеси в количестве 2,5-5 мл в сутки (дробно на 3 кормления 1/2-1 флакон).
Показания к применению:
- заболевания, осложненные дисбактериозом кишечника; длительное лечение антибиотиками, химио- и гормональными препаратами; аллергические заболевания (аллергодерматозы, диатезы и др. ); хронические заболевания желудочно-кишечного тракта; острые кишечные инфекции бактериальной и вирусной этиологии (дизентерия, колиэнтериг, сальмонеллез, ОКИ невыясненной этиологии, ротавирусная и энтеровирусная инфекция); кандидоз;
- беременным группам риска по внутриутробному инфинированию;
- новорожденным детям, матери которых в период беременности и родов были отнесены к группе повышенного риска по гнойно-воспалительным заболеваниям; детям, матери которых во время беременности получали антибиотики и химиопрепараты; детям, получающим антимикробные средства по поводу различных патологических состояний;
- недоношенным детям;
- детям с ранними аллергическими заболеваниями;
- детям с дисбиотическими состояниями различной этиологии.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ЖИВЫХ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ ЛАКТОБАЦИЛЛ И БИФИДОБАКТЕРИЙ "LB-КОМПЛЕКС ПЛЮС" | 2012 |
|
RU2517734C1 |
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ЖИВЫХ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ ЛАКТО- И БИФИДОБАКТЕРИЙ "LB-КОМПЛЕКС Л" | 2010 |
|
RU2441907C1 |
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОБИОТИКА | 2004 |
|
RU2280465C2 |
Жидкий симбиотик и способ его получения | 2022 |
|
RU2805957C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИДКОГО ИЛИ СУХОГО КОНЦЕНТРАТА ИЛИ ЗАКВАСКИ БИФИДОБАКТЕРИЙ | 2006 |
|
RU2326940C2 |
МОЛОЧНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ БАКТЕРИЙ-ПРОБИОТИКОВ | 2006 |
|
RU2326939C2 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЗАКВАСКИ ДЛЯ КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА | 2000 |
|
RU2169472C2 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА | 1995 |
|
RU2092068C1 |
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КВАСА | 2006 |
|
RU2360956C2 |
КОНСОРЦИУМ БИФИДОБАКТЕРИЙ И ЛАКТОБАЦИЛЛ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙНЫХ ПРЕПАРАТОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ МИКРОФЛОРЫ ДЕТЕЙ В ВОЗРАСТЕ ОТ 3-Х ДО 14 ЛЕТ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ДОБАВКА К ПИЩЕ И БАКТЕРИАЛЬНЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ДИСБИОТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА В ВОЗРАСТЕ ОТ 3-Х ДО 14 ЛЕТ | 2012 |
|
RU2491335C1 |
Способ включает раздельное культивирование штаммов бифидо- и лактобактерий и смешивание их в соотношении 1:1 по окончании культивирования. Культивирование проводят на гидролизатно-молочной среде (ГМС). В качестве основы ГМС используют гидролизат обезжиренного молока и дополнительно вводят аскорбиновую кислоту в количестве 230-250 мг на 1000 мл гидролизата. Готовый препарат расфасовывают во флаконы с учетом необходимой суточной дозы. Способ позволяет получить готовый к употреблению препарат, воздействующий на бифидо- и лактокомпоненты микрофлоры человека, с длительным сроком годности. 1 з.п. ф-лы.
Инструкция по приготовлению кисломолочного бифидумбактерина на молочных кухнях | |||
- М., 1987, с.4-9 | |||
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОБИОТИКА НА ОСНОВЕ ЖИВЫХ БИФИДОБАКТЕРИЙ И ЛАКТОБАКТЕРИЙ | 1995 |
|
RU2060673C1 |
RU 2122800 С2, 10.12.1998 | |||
RU 95110211 А1, 27.06.1996. |
Авторы
Даты
2002-11-10—Публикация
2000-07-03—Подача