СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПИЛОРИЧЕСКОГО ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗА Российский патент 2002 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики и лечения инфекции пилорического хеликобактера (Helicobacter pylori) (слизистой оболочки гастродуоденальной области)
Известно, что пилорическая хеликобактерия (НP) - Helicobacter pylori, является причиной развития хеликобактерного хронического гастрита, язвы желуда и двенадцатиперстной кишки, дуоденальной язвы, а также рака желудка.

Известен способ диагностики хеликобактериоза биохимическим методом (Крюков Н. Н. , Кочетков С.Г. Helicobacter pylori. Заболевания, ассоциированные с ним. Клиника, диагностика, лечение: учебное пособие. - Самарский государственный медицинский университет. Самара, 1999 г., с. 50-52), основанный на способности пилорической хеликобактерии (НР) с помощью уреазы расщеплять мочевину до аммиака, а следовательно, изменять среды в щелочную сторону.

Недостатками известного способа является необходимость ежедневного изготовления реактивов, которые не выдерживают длительного хранения из-за нестабильности раствора мочевины, склонной к саморазложению, с подщелачиванием среды за счет продуктов распада.

В известном способе невозможно установить количественные параметры: степень обсеменения слизистой оболочки желудка НР.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому техническому результату является способ диагностики хеликобактериоза (Старостин Б.Н., Петрутик А.В. Экспресс-метод диагностики инфицированности НР желудка и двенадцатиперстной кишки. Ж-л "Клиническая медицина", 2, 1989 г., с. 51), основанный на модификации быстрого мочевинного теста В. J. Marshall и соавторов с учетом отечественных реактивов (МБМТ-тест).

Недостатком известного способа диагностики пилорического хеликобактериоза также является невозможность определения степени обсеменения слизистой желудка хеликобактерией (HP), являющейся количественной характеристикой HP.

Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является повышение диагностической информативности и эффективности лечения хелибокатериоза путем обеспечения количественной оценки инфицированности пилорической бактерией.

Поставленный технический результат достигается тем, что в способе диагностики пилорического хеликобактериоза, основанном на выявлении хеликобактерии с помощью модифицированного быстрого мочевинного теста (МБМТ) и последующем анализе полученных результатов после получения положительного геста о наличии в биоптате пилорической хеликобактерии производят измерения оптической плотности раствора с помощью фотоэлектроколориметра, при этом используют зеленый светофильтр (λ=540 нм) и кювету объемом 2,5 мл и длиной оптического пути 0,5 см. Определяют цифровое значение оптической плотности раствора с помощью фотоэлектроколориметра (λ= 540 нм), зеленый светофильтр, по которой судят о концентрации пилорической хеликобактерии в биоптате, при этом степень обсемененности находится в пределах: I степень - 0,03-0,1; II степень - 0,2-0,5; III степень - 0,6-0,9; IV степень - 0,9-1,4; V степень - 1,1 и выше, что условно можно обозначить как: I степень +, II степень ++, III степень +++, IV степень ++++, V степень +++++, которая удобна для применения в клинической практике.

Рабочий раствор помещают в фотоэлектроколориметр и исследуют в зеленом цветофильтре, определяют цифровое значение плотности раствора, по которому судят о концентрации пилорической хеликобактерии в биоптате.

Количественные параметры степени обсемененности HP слизистой оболочки по оптической плотности раствора в зеленом цветофильтре можно отобразить следующим образом: I степень +, II степень ++, III степень +++, IV степень ++++, V степень +++++, которая удобна для применения в клинической практике.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого изобретения, позволили установить, что заявитель не обнаружил аналог, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявленного изобретения.

Определение из перечня выявленных аналогов прототипа позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому техническому результату отличительных признаков в заявляемом способе диагностики пилорического хеликобактериоза, изложенных в формуле изобретения.

Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию "Новизна".

Для проверки соответствия заявляемого изобретения условию "Изобретательный уровень" заявитель провел дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявляемого изобретения.

Результаты поиска показали, что заявляемое изобретение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявляемого изобретения преобразований на достижение технического результата.

Следовательно, заявляемое изобретение "Способ диагностики пилорического хеликобактериоза" соответствует критерию "Изобретательский уровень".

Критерий "Промышленная применимость" подтверждается тем, что предлагаемое изобретение "Способ диагностики пилорического хеликобактериоза" может быть использован в практике врачей: эндоскописта, гастроэнеролога, хирурга с малыми затратами времени для проведения анализа с возможностью исключения рутинного микроскопического метода.

Способ осуществляют следующим образом, в основу которого положен принцип модифицированного быстрого мочевинного теста (МБМТ).

В пенициллиновый флакон асептически помещают 10 мг кристаллической мочевины (субстрат реакции): 10 ед. тетрациклина гидрохлорида (для подавления роста сопутствующей микрофлоры); данная концентрация тетрациклина не является бактерицидной для HP, и 1 мг кристаллов индикатора фенолового красного, служащего для изменения окраски в зависимости от рН среды с желтой на малиново-красную.

Рабочий раствор готовят ежедневно перед исследованиями, добавляя во флакон 10 мг воды для инъекций. При фиброгастродуоденоскопии берут биоптат из антрального отдела желудка или с края язвы 12-перстной кишки, помещают его в лунку полистироловой пластины, куда шприцем из флакона добавляют 0-5 мл рабочего раствора. Для более точного определения оптической плотности раствора объем кюветы заполняют полностью, поэтому рабочий раствор с биоптатом добавляют в пять лунок (объем кюветы 2,5 мл).

Тест оценивают от момента внесения биоптата до 24 часов по изменению цвета раствора в лунке с желтого до малинового, так как при положительном тесте, т. е. при наличии Helicobacter pylori в биоптате происходит гидролиз мочевины раствора.

При этом рН раствора изменяется в щелочную сторону. Далее измеряют оптическую плотность раствора с помощью фотоэлелектроколориметра (λ=540 нм) и зеленый светофильтр.

Далее помещают раствор в фотоэлектроколориметр с зеленым цветофильтром (λ=54 нм).

Доказано, что существует прямо пропорциональная зависимость между концентрацией иона аммония в растворе и оптической плотностью раствора, исследуемого в зеленом светофильтре в интересующих нас пределах.

Данный химический механизм лежит в основе нашей методики.

Выстраивается логическая цепочка процессов: биоптат, несущий Helicobacter pylori

Количественные параметры степени обсемененности HP слизистой оболочки по оптической плотности раствора можно отобразить следующим образом: I степень - 0,03-0,1; II степень - 0,2-0,5; III степень - 0,6-0,9; IV степень - 0,9-1,4; V степень - 1,4 и выше, что условно можно обозначить как: I степень +, II степень ++, III степень +++, IV степень ++++, V степень +++++, которая удобна для применения клинической практики.

Известно, что антибактериальная терапия в отношении HP основана на данных, полученных об антибактериальной активности разных лекарственных средств in vitro и их эффективности в кислой среде, по минимальной ингибирующей концентрации, по степени проникновения в клетку.

Следовательно, эрадикационная и репаративная активность препаратов будут различными. Необходимо отметить, что многие лекарства обладают и различными побочными действиями, такими как аллергические проявления (зуд, кожная сыпь, анафилаксия), головная боль, желудочно-кишечные расстройства (диарея, дискомфорт и боли в желудке), анемия; при применении препарата висмута - висмутовые энцефолопатии.

Учитывая вышесказанное, необходимо четко знать показания к назначению тех или иных традикационных препаратов.

Это можно достичь с использованием нашей количественной оценки: степени обсемененности НP слизистой оболочки гастродуоденальной области.

Для этого необходимо учитывать два фактора: с одной стороны, степени обсемененности HP слизистой желудка, с другой - эрадикационной характеристикой фармакологического препарата.

Пример 1: Больной К., 34 года.

Жалобы на боль в верхней половине живота, усиливающиеся ночью и утром, стихающие после приема пищи. Больным себя считает около 5 лет, обострение язвенной болезни ежегодно.

При фиброгастродуоденоскопии: язва на задней стенке двенадцатиперстной кишки размером 0,8•0,3 см.

Был взят биоптат с края язвы желудка, тест оценивался после 24 часов. Окраска раствора была малиновой; на фотокалориметре это соответствовало оптической плотности 1,145 ед., что соответствует IV степени ++++ (высокая обсеменененность),
В связи с этим больному была назначена комбинированная эрадикационная четырехкомпонентная десятидневная терапия: ранитидин 300 мг 2 раза в день + калиевая соль двузамещенного цитрата висмута 108 мг 5 раз в день после еды + тетрациклин гидрохлорид 250 мг 5 раз в день после еды.

У больного язва зарубцевалась за 18 дней. В течение 2 лет обостренной язвенной болезни не было.

Пример 2: Больная Ю., 54 года.

Жалобы на тошноту после еды, боли, возникающие сразу после еды, периодическую рвоту.

Язвенной болезнью страдает 10 лет, обострения сезонные 2 раза в год.

При фиброгастродуоденоскопии обнаружена язва тела желудка размером 0,3•0,6 см.

Был взят биоптат с антрального отдела желудка.

Результат теста следующий: окраска малиновая; оптическая плотность 0,900, что соответствует III степени обсемененности +++.

Больной была назначена семидневная трехкомпонентная терапия: омепразол 20 мг 2 раза в день + кларитромицин 250 мг 2 раза в день + метронидазол 500 мг 2 раза в день после еды. Язва зарубцевалась за 14 дней, обострении нет в течение 2 лет.

Предположенный способ применен у 35 больных.

Преимуществом предлагаемого способа в отличие от прототипа является то, что он позволяет не только выявить качественную составляющую, т.е. наличие пилорических хеликобактерий (HP), но и количественную оценку, т.е. степень обсемененности бактериями Helicobacter pylori слизистой оболочки гастродуоденальной области.

Чем больше степень обсемененности HP биоптата, тем интенсивнее реакция и выше концентрация ионов аммония, следовательно, более значительный сдвиг среды в щелочную сторону, а значит и выше оптическая плотность раствора, так как зависимость прямо пропорциональная в интересующих нас пределах.

Значение степени обсемененности слизистой гастродуоденальной области HP является и конечным результатом, необходимым в практике клинициста.

Способ может быть использован в медицине, а именно в гастроэнтерологии для диагностики пилорического хеликобактера слизистой оболочки гастродуоденальной области. Хеликобактерии выявляют с помощью модифицированного быстрого мочевинного теста с последующим анализом результатов. После получения положительного теста о наличии в биоптате пилорической хеликобактерии производят определение цифрового значения оптической плотности раствора, являющейся величиной, прямо пропорциональной степени обсемененности пилорической хеликобактерии слизистой оболочки, распределяемой по пяти степеням следующим образом: I степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах 0,003-0,1; II степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах 0,2-0,5; III степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах 0,6-0,9; IV степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах 1,0-1,4; V степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах от 1,5 и выше. Способ повышает диагностическую информативность и эффективность определения степени инфицированности хеликобактериозом.

Способ количественной оценки инфицированности Helicobacter pylori (НР), основанный на выявлении хеликобактерии с помощью модифицированного быстрого мочевинного теста и последующем анализе полученных результатов, отличающийся тем, что после получения положительного теста о наличии в биоптате пилорической хеликобактерии производят определение цифрового значения оптической плотности раствора, являющейся величиной, прямо пропорциональной одной из пяти степеней обсемененности слизистой оболочки, при этом I степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах 0,03-0,1, II степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах 0,2-0,5, III степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах 0,6-0,9, IV степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах 1,0-1,4, V степени обсемененности соответствует оптическая плотность раствора в пределах от 1,5 и выше.