СПОСОБ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ЗА ЛЕЧЕНИЕМ ПСОРИАЗА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматологии.

Существует диагностический способ авторадиографического определения митотической активности (размножение, деление) клеток кожи для контроля за эффективностью лечения псориаза. Способ трудоемкий, так как требует проведения биопсии (срезания кусочка кожи из очага поражения хирургическим путем при помощи скальпеля). Кроме того, данный способ весьма болезненный, требует стерильных условий, сопровождается кровотечением, заживление в участке биопсии происходит с образованием рубца. Это исключает проведение исследований при ограниченных поражениях в области лица или половых органов, а также у детей младшего возраста, страдающих псориазом. Возможность проведения авторадиографического исследования для контроля за эффективностью лечения ограничена: во-первых, необходимостью иметь в наличии радиоактивный изотоп - тимидин Н₃; во-вторых, наличием условий для его хранения (специальные свинцовые емкости и помещения для них); в-третьих, длительными сроками получения результата - не менее 4-х недель (Деденков А.Н., Пелевина И.И., Саенко А.С. Прогнозирование реакции опухолей на лучевую и лекарственную терапию. Медицина, М., 1987 г., 160 с.); в-четвертых, невозможностью повторных биопсий на одном и том же участке поражения в динамике лечения.

Вышеизложенное затрудняет широкое использование в дерматологии данного способа.

Известны также способы контроля за эффективностью лечения больных дерматозами, и в частности псориаза, на основании определения Т- и В-лимфоцитов и иммунноглобулинов (иммунограммы), а также по цитохимическим показателям ПУВА-терапии, на основании изменения показателя антителозависимой цитоксичности лимфоцитов после лечения псориаза (Каухова О.Я., Каплан Б.С. Симпозиум по псориазу дерматовенерологов социалистических стран, 3-й. Тезисы докладов. M. , 1987 г., с.58-59; Рубинс А.Я., Граудиня Ж.П., Машкиллейсон А.Л., Векслер Х.М. Способ прогнозирования течения псориаза: А.С. 1263250 СССР).

Делаются попытки прогнозировать течение псориаза и оценить эффективность терапии на ранних этапах, задолго до окончания нормализации клинических и лабораторных показателей (Довжанский С.И., Нарциссов Р.П., Румянцева Е.В., Утц С. Р. Прогнозирование течения псориаза. Вестник дерматологии и венерологии. 1990 г., 2, с.28-31) при помощи прогностических таблиц. Однако данные способы контроля являются неспецифичными для псориаза, так как аналогичные изменения показателей (иммунограммы, цитотоксичности лимфоцитов) наблюдаются и при других дерматозах.

Способ диагностики псориаза, предложенный Н.Г. Коротким, К.Н. Гримбергом, Г.Я. Шараповой, С.М. Тереховой, Н.А. Антоновой (заявлено 31.05.85 г., 3951550/28-14 (077889)), основан на оценке стимулирующей рост клеток активности сыворотки крови больных псориазом. Для этого необходимо получить культуру диплоидных фибробластов кожи человека в специальной лаборатории на специальных средах и оценить цитостимулирующее ее действие по включению радиоактивного Н₃ - тимидина. Данный способ диагностики возможен только для научных целей, так как необходимы специальные условия и сроки для выращивания культуры фибробластов, а также условия для работы с радиоактивным Н₃ - тимидином (см. выше).

Основой кожных высыпаний при псориазе является усиленная пролиферативная (митотическая) активность клеток кожи, характеризующаяся повышением скорости деления клеток в очагах поражения в 8 раз, по сравнению с нормой (в прогрессирующую стадию псориаза весь цикл образования эпидермиса происходит в течение 4-5 дней вместо 28-30 дней в норме - этим объясняется усиленное шелушение при псориазе, поэтому другое название болезни - чешуйчатый лишай). Общеклинические и иммунологические тесты не отражают в полной степени процессы, происходящие в самой коже, а характеризуют общее состояние больных псориазом, которое не нарушается даже при весьма распространенных поражениях кожного покрова.

Задача изобретения: усовершенствование способа цитологического определения пролиферативной активности клеток кожи у больных псориазом и возможность проводить данные исследования для контроля за эффективностью лечения в общеклинических лабораториях.

Цель изобретения - упростить диагностический процесс.

Цель достигается тем, что после соскабливания чешуек краем предметного стекла и удаления их с поверхности очага поражения делается мазок-отпечаток предметным стеклом клеток эпидермиса. Затем "отпечаток" на стекле окрашивается раствором серебра - 50% AgNО₃ в течение нескольких минут. После высыхания проводят подсчет гранул серебра Ag⁺, зафиксированных делящимися клетками в обычном микроскопе при увеличении в 90 раз. Таким путем можно определить стадию течения псориаза (прогрессирующую, стационарную, регрессивную), а также "промежуточные" стадии (прогрессивно-стационарную, стационарно-регрессивную) не только визуально, но и лабораторно, осуществлять контроль за эффективностью лечения на основании многократного изучения изменений пролиферативной активности. Исследования проводят при подсчете гранул Ag⁺ в ядре клеток кожи. Весь процесс взятия мазка-отпечатка и получения лабораторного результата занимает не более 1,5-2 часов. Необходимость определения в динамике лечения стадий псориаза и особенно "промежуточных" стадий заключается в том, что в прогрессирующую стадию нельзя назначать активное лечение (физиотерапию, мази с высокой концентрацией дегтя, серы, ихтиола и др.), также как и в прогрессивно-стационарную ("промежуточную") стадию. Неадекватное лечение приводит к тяжелым осложнениям в виде поражения всего кожного покрова (эритродермии).

Для объективной оценки эффективности лечебных препаратов на течение псориаза использованы критерии, характеризующие пролиферативную активность, приведенные в таблице.

Последовательное снижение значений данных показателей расценивалось как положительная динамика течения псориаза на фоне проводимого лечения. Преимуществом предлагаемого способа являются:
1. Специфичность способа для диагностики псориаза.

2. Возможность многократного взятия мазка-отпечатка в динамике лечения из одного и того же участка поражения.

3. Быстрота получения результата (1,5-2 часа).

4. Безболезненность и бескровность способа.

5. Возможность определения "промежуточных" стадий псориаза, не диагностируемых визуально.

6. Возможность сравнительной оценки эффективности методов лечения.

7. Упрощение диагностического процесса.

8. Усовершенствование способа цитологического исследования пролиферативной активности клеток кожи.

Пример 1. Больной А. , 35 лет, поступил с диагнозом: распространенный псориаз, каплевидная форма, прогрессирующая стадия, неопределенный тип. Болен в течение нескольких лет, рецидивы последние годы возникают 2 раза в год - в весенний и осенний сезоны.

При поступлении в стационар у больного отмечалась однотипная ("каплевидная") форма дерматоза, когда новые элементы высыпания не отличаются от возникших ранее. Было назначено в амбулаторных условиях, в кожном диспансере, активное лечение: Т-активин в инъекциях, витамины группы В, наружно - серно-дегтярная 5-10% мазь, УФО в эритемных дозах. На 4-й день после начала терапии у больного усилилась эритема в элементах высыпания, более активно начали появляться новые псориатические папулы, в связи с чем лечение было отменено и начата терапия индифферентными средствами. Проведенный анализ ядерного показателя в мазках-отпечатках из "старых" элементов высыпания показал, что больной при поступлении на стационарное лечение имел прогрессирующую стадию заболевания, не диагностируемую визуально, в связи с отсутствием различий в размерах псориатических элементов. Это привело к активизации кожного процесса и возникновению осложнения в виде эритродермии (при назначении неадекватного лечения). Для снятия острых явлений пришлось назначать гормонотерапию.

Пример 2. Больная В., 28 лет, поступила в кожный стационар с диагнозом: распространенный псориаз с тенденцией к трансформации (переходу) в эритродермию. Больная получила активное мазевое и физиотерапевтическое лечение в амбулаторных условиях с диагнозом: бляшковидный псориаз, стационарная стадия, зимний тип. При исследовании мазка-отпечатка в первый день поступления в стационар была определена прогрессивно-стационарная стадия: среднее число гранул Ag⁺ в ядре соответствовало 3,78.

Таким образом, визуально врачом-дерматологом диспансера ошибочно была установлена стационарная стадия, в то время когда у больной еще продолжалось прогрессирование кожного процесса, но с менее выраженной интенсивностью. В стационарном отделении больной было назначено лечение, соответствующее лабораторно выявленной стадии.

Пример 3. Больной М., 14 лет, поступил в стационар с диагнозом: распространенный бляшковидно-нуммулярный ("монетовидный") псориаз, стационарная стадия. Учитывая неопределенность клинической картины высыпаний, затруднения в визуальной оценке стадии дерматоза, у больного до лечения было исследовано состояние ядерного клеточного показателя, который соответствовал "промежуточной" - прогрессивно-стационарной стадии: среднее число гранул в ядре составляло 3,70.

В связи с "промежуточным" состоянием данного показателя была установлена прогрессивно-стационарная стадия псориаза и назначен индифферентный метод терапии. Осложнений за весь период лечения не наблюдалось.

Использование настоящего изобретения обеспечивает быструю диагностику различных стадий псориаза и позволяет осуществлять контроль за эффективностью лечения больных в динамике, многократно. Способ является бескровным, легко выполнимым в общелечебной лаборатории, высокоинформативным и специфичным для псориаза.

Способ может быть использован в медицине, а именно - в дерматологии. Исследуются мазки-отпечатки с очагов поражения, окрашенные 50% нитратом серебра (ляписом) - AgNO₃, с последующим подсчетом (в обычном микроскопе) зафиксированных в ядре клетки гранул Ag⁺. При числе гранул 3,86±0,58% определяют стадию прогрессирования, при 3,79±0,69% - прогрессивно-стационарную стадию и при 3,66±0,10% - стационарную стадию. Способ может применяться в обычной общеклинической лаборатории, в амбулаторных и стационарных условиях, многократно для динамического контроля за эффективностью лечения больных псориазом. 1 табл.

Способ определения стадий псориаза, включающий цитологическое исследование, отличающийся тем, что из очага поражения на предметное стекло берут мазок-отпечаток клеток кожи после предварительного удаления с поверхности кожи чешуек, окрашивают препарат 50% нитратом серебра (AgNO₃), после фиксации мазка подсчитывают в ядре число гранул Ag⁺, зафиксированных делящимися клетками кожи, при числе гранул 3,86±0,58% определяют стадию прогрессирования, при 3,79±0,69% - прогрессивно-стационарную стадию и при 3,66±0,10% - стационарную стадию.