Способ прогнозирования течения псориаза Советский патент 1986 года по МПК A61K39/00 G01N33/49 

ю

О5

со

1C

ел Изобретение относится к медицине, касается вопросов прогнозирования течения заболевания кожи, в частности прогнозирования наступления ремиссии псориаза. Целью изобретения является разработка повышения точности прогнозирования течения псориаза. Способ осуществляется следующим образом. Для определения антителозависимой цитотоксичности лимфоцитов (АЦЛ) периферической крови используют в качестве клеток-мишеней эритроциты барана, сенсибилизированные кроличьей антисывороткой к ним в субагглютинирующем титре. Для этого 1 мл 2,5%-ного раствора эритроцитов барана смешивают с 1 мл кроличьей гемолитической сыворотки в разведении 1:6401:1280. Инкубируют при 37°С 30 мин и затем отмывают 2 раза раствором Хенкса центрифугированием при 1500 об/мин в течение 5-7 мин. Сенсибилизированные эритроциты разводят до концентрации 2-10 кл/мл и используют в дальнейшем Лимфоциты периферической крови, выделенные общепринятым способом на градиенте плотности фиколл - верографина (d 1,078 г/см), отмывают 3 раза раствором Хенкса и доводят до концентрации 2-10 кл/мл. Затем в 96-луночных круглодонных планшетах для иммунологических исследований смешивают 0,1 мл лимфоцитов-эффекторов и.0,1 мл сенсибилизированных эритроцитов смешивают в 3 лунках (опыт). 0,1 мл эритроцитов и 0,1 мл раствора Хенкса смешивают в следующих 3 лунках для определения спонтанного разрушения эритроцитов (СРЭ). Для определения максимального лизиса (мл) 0,1 мл эритроцитов смешивают с 0,1 мл дистиллированной воды. Плату инкубируют 3 ч при 37°С в атмосфере с избытком СО г., центрифугируют 10 мин при 1350 об/мин и по 0,1 мл супернатанта снимают в микропробирки (V 0,5 мл). Для определения цитолитической активности к исследуемым супернатантам добавляют по 0,2 мл 0,1%ного раствора бензидина в ацетатном буфере (рН 4,6) и 0,2 мл З /о-ного раствора перекиси водорода. Интенсивность появляющегося голубого окрашивания определяют на спектрофотометре СФ 26 при длине волны 765 мм в единицах экстинции. Процент антителозависимой цитотоксичности определяют по формуле: АЦЛ (%) .lOOo/o, где используют средние показатели 3-х параллельных определений оптической плотности супернатантов. Пример 1. Больной М. М., 53 года, болеет псориазом 40 лет. На коже больного множество псориатичсских высыпаний (псориати10 еские папулы, чешуйки) в патологический роцесс выявлен бО/o кожного покрова. На 19-й день при определении с помощью пособа-прототипа содержание лизоцима периферической крови было выявлено ,5 мкг/мл, что указывает на затяжное теение или скорости рецидивов заболевания. При определении К-клеток предложенным способом выявлено 28,8%, на основе чего прогнозировано наступление ремиссии. Дальнейщее наблюдение за больным подтвердило правильность прогноза, поскольку была отмечена регрессия высыпания, и с помощью общепринятой терапии был достигнут полный регресс патологического кожного процесса. Таким образом, учитывая наступление ремиссии (по данным К-клеток), больного можно было выписать для амбулаторного лечения. Пример 2. Больной С. А., 36 лет, мужчина, болеет псориазом 4 мес. На коже больного множество псориатических поражений (псориатические папулы, чешуйки и т.д.) в патологический процесс вовлечено 70% кожного покрова. На 20-и день с помощью прототипа выявлено содержание лизоцима 4 мкг/мл, что свидетельствует о затяжном течении псориаза. С по.мощью нового способа на 22-й день выявлено К-клеток 67,0% (при режиме лимфоцитов, инкубации 3 ч и 36°С), что свидетельствует о наступлении ремиссии. Дальнейшее наблюдение полностью подтверждает правильность прогноза новым способом, так как у больного с общепринятыми средствами был достигнут полный регресс высыпаний, а дальнейшее наблюдение в течение 4 мес подтвердило прогноз, в частности не отмечены рецидивы. Пример 3. Больная Ю. И., 41 год, болеет псориазом 21 год. Лечилась неоднократно стационарно. У больной поражено 90% кожного покрова, на котором имеются псориатические папулы и чешуйки, и т.д., в процесс вовлечены и суставы (болезненность) . При обследовании больной на 24-й день стационарного лечения выявлено содержание лизоцима, что свидетельствует о неблагоприятном прогнозе - 5,0 мкЕ/мл. В тот же день активность К-клеток крови была равна (при режиме лимфоцитов, инкубации 3,5 ч и 38°С) 0%, что также свидетельствует о неблагопрнятности прогноза. Дальнейшее наблюдение за больной подтвердило новый способ неблагоприятности прогноза заболевания - затяжное течение, так как, несмотря на длительное стационарное и амбулаторное лечение, спустя 4 мес после выписки из стационара развился рецидив (появление новых папул по всему телу, усилились боли в суставах) в связи с

чем больная была госпитализирована повторно.

Пример 4. Больной П. С. (история болезни № 4514 от 19.11.84 г.) 54 г., болеет псориазом 20 лет, электросварщик. У больного 50% кожного покрова было покрыто псориатическими элементами (папулы, чешуйки). Обострение процесса началось 2 мес назад. Лечился амбулаторно, но безуспешно. Был госпитализирован в кожное отделение.

При определении лизоцима выявлено 7,5 мкг/мл, что свидетельствует о затяжном течении. При определении К-клеток в периферической крови на 13-й день стационарного лечения их активность была 23,0%, что свидетельствует о затяжном течении псориаза. Дальнейшее лечение показало, что больной плохо поддавался терапии и улучшение наступило только на 34-й день стационарного лечения. С остаточными явлениями псориатических высыпаний был выписан из стационара. Однако через 3,5 мес после выписки из стационара развился следующий рецидив болезни.

Таким образом, с помощью только нового способа был поставлен правильный прогноз болезни об его затяжном течении:

АЦЛ(%) -5;§||--100% 23%.

Применение изобретения обеспечивает повышение точности прогнозирования наступления ремиссии или развитие затяжного течения псориаза на 40% (по прототипу только в 40-60% удавалось точно поставить диагноз, а по предложенному способу - в 100% случаев).

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения псориаза путем исследования крови больного, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, из исследуемой крови выделяют лимфоциты, добавляют сенсибилизированные эритроциты барана и специфическую гемолитическую сыворотку кролика, инкубируют 3-3,5 ч при 36-38°С, определяют цитотоксическую активность лимфоцитов по лизису бараньих эритроцитов и при активности лимфоцитов в пределах 28,8-67,0% прогнозируют ремиссию заболевания, а в пределах до 23% прогнозируют затяжное течение псориаза.

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - повышение точности прогнозирования течения псориаза. Раствор эритроцитов барана смешивают с гемолитической сывороткой, инкубируют и отмывают при центрифугировании. Смешивают лимфоциты и сенсибилизированные эритроциты. В следующих 3 лунках для определения спонтанного разрушения эритроцитов смешивают раствор Хенкса с эритроцитами. Для определения максимального лизиса эритроциты смешивают с дистиллированной .водой, инкубируют, центрифугируют и снимают супернатант. К супернатанту добавляют раствор бензидина в ацетатном буфере и перекись водорода. При спектрофотометрии определяют интенсивность окрашивания. Затем определяют процент антителозависимой цитотоксичности. При цитотоксической активности лимфоцитов & в пределах до 23% прогнозируют затяжное (Л течение псориаза.