СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАТИВНОЙ СПОРОВОЙ СУСПЕНЗИИ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННЫХ ВАКЦИН Российский патент 2003 года по МПК C12N1/20 A61K39/07 C12N1/20 C12R1/07 

Описание патента на изобретение RU2198921C2

Изобретение относится к лекарственным препаратам, содержащим живые бактерии, в частности к производству сибиреязвенных вакцин, и может быть использовано в медицине и ветеринарии.

Известны способы получения нативной споровой суспензии (НСС) для приготовления живой сибиреязвенной вакцины при аэробном культивировании B. anthracis на плотных и жидком питательных средах /1-4/. Наиболее производительным способом получения НСС является глубинное аэробное культивирование некапсулирующих, непротеолитических и авирулентных штаммов B. anthracis.

Недостатком этого способа являются значительные различия в выходах полноценных нормально окрашиваемых по Цилю-Нильсену спор, из-за гетерогенности в развитии популяции к концу процесса глубинного культивирования - одновременное нахождение в культуральной жидкости (КЖ) вегетативных клеток, проспор, незрелых спор, спор и проросших спор. Причем процентное соотношение клеток и спор, находящихся на различных стадиях развития, относительно быстро изменяется и точно определить момент завершения процесса, когда в КЖ находится максимальное процентное содержание полноценных спор, не всегда удается.

Прототипом изобретения служит способ получения НСС /3/ при глубинном аэробном культивировании штамма В. anthracis с введением добавки КУКа в период завершения накопления вегетативной биомассы.

Недостатком этого способа является относительно низкий процентный выход полноценных зрелых спор в КЖ.

Заявляемое изобретение направлено на повышение производительности стадии культивирования за счет синхронизации развития популяции на завершающем этапе процесса культивирования и, как следствие, к увеличению в КЖ процентного содержания полноценных спор.

Поставленная цель достигается тем, что предложен способ получения нативной споровой суспензии при глубинном аэробном культивировании вакцинных штаммов В. anthracis, отличающийся тем, что для получения полноценных спор процесс выращивания культур необходимо осуществлять в два этапа: на первом этапе, когда последовательно идет прорастание спор, накопление вегетативной биомассы и ее переход в стадию спорообразования, культивирование проводят при непрерывном перемешивании и аэрации воздухом, поддерживая температуру нативной жидкости 30-34oС, а на втором этапе, когда завершается созревание спор - в статике, повышая температуру культуральной жидкости до 35-38oС, с периодическим кратковременным перемешиванием нативной жидкости.

При этом переход с первого этапа культивирования на второй осуществляется при образовании в культуре суммарно не менее (70±10)% проспор и спор.

Для поддержания в статике заданной температуры культивирования осуществляется перемешивание КЖ за счет периодического включения мешалки каждые 10-15 минут на 2-3 минуты.

Указанный способ позволяет почти до 100% повысить содержание полноценных зрелых спор в КЖ и примерно на два часа сократить продолжительность процесса культивирования.

Пример 1. Получение НСС для приготовления живой сибиреязвенной вакцины (существующий способ).

В качестве исходной культуры для получения НСС используют эталонный вакцинный, некапсулирующий, непротеолитический сибиреязвенный штамм СТИ-1. В стерильную питательную среду на основе 1%-ного солянокислотного гидролизата рыбной муки, кукурузного экстракта с добавлением солей вводится посевной материал в количестве (3-5)•105 спор на 1 мл (один из вариантов). Процесс культивирования вакцинного штамма СТИ-1 ведут при температуре 32oС, осуществляя постоянное перемешивание и аэрацию КЖ воздухом.

Динамика изменения цитоморфологических показателей в процессе культивирования штамма СТИ-1 при температуре 32oС и постоянном перемешивании и аэрации КЖ воздухом (без статики) приведена в табл. 1.

Пример 2. Получение НСС дня приготовления живой сибиреязвенной вакцины (предлагаемый способ).

Начальные условия проведения процесса культивирования те же, что и в примере 1. Отличие заключается в том, что процесс культивирования осуществляется в два этапа - на первом при температуре 32oС и постоянном перемешивании и аэрации КЖ, а на втором - в статике при температуре 37оС.

Динамика изменения цитоморфологических показателей в процессе культивирования штамма СТИ-1 в два этапа - на первом при температуре 32oС и постоянном перемешивании и аэрации КЖ, а на втором - в статике при температуре 37oС приведена в табл. 2.

Как видно из данных, приведенных в табл. 1 и 2, предлагаемый способ получения НСС позволяет почти до 100% повысить содержание полноценных зрелых спор в КЖ, более точно определять время завершения процесса культивирования и сократить его продолжительность.

Полученная при культивировании вакцинного штамма СТИ-1 по предлагаемой технологии НСС концентрировалась, и из нее готовилась живая сибиреязвенная вакцина.

Все серии полученной вакцины удовлетворяли требованиям ГИСК им. Л.А. Тарасевича /1/.

Источники информации
1. Межреспубликанские технические условия на сибиреязвенную живую сухую вакцину для скарификационного применения (МРТУ-42 10), 1964.

2. Регламент производства сибиреязвенной живой вакцины СТИ для людей. Тбилисский НИИВС, 1958.

3. Патент 2142010. Способ глубинного культивирования сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ-1. Заявка 97115505/13(016405) от 23.09.97 г.

4. Шенцев И.В., Шумилов Г.П., Садовой Н.В. и др. Стабильность основных свойств живой сибиреязвенной вакцины, полученной в жидких и на плотных питательных средах - ЖМЭИ, 1981, 7. - С. 113-114.

Похожие патенты RU2198921C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННОГО НАТИВНОГО ПРОТЕКТИВНОГО АНТИГЕНА 2000
  • Орлов Ю.Н.
  • Садовой Н.В.
  • Махортова Е.Б.
  • Федорова Н.В.
  • Мельников С.В.
  • Кузьмич М.К.
  • Дербин М.И.
RU2223114C2
Способ приготовления посевных культур в технологии сибиреязвенных вакцин 2018
  • Шевцов Александр Николаевич
  • Фокина Вероника Владимировна
  • Хапаев Николай Геннадьевич
  • Пермяков Сергей Александрович
  • Луб Михаил Юрьевич
RU2694597C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭУБИОТИКА БИОСПОРИНА 1996
  • Поберий И.А.(Ru)
  • Харечко А.Т.(Ru)
  • Кузнецов В.В.(Ru)
  • Филин В.А.(Ru)
  • Доронин А.Н.(Ru)
  • Смирнов Валерий Вениаминович
  • Сорокулова Ирина Борисовна
RU2132196C1
СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННОГО ВАКЦИННОГО ШТАММА СТИ-1 1997
  • Юдников В.А.
  • Шевцов А.Н.
  • Кожухов В.В.
RU2142010C1
СПОСОБ ПОДДЕРЖАНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННОГО ВАКЦИННОГО ШТАММА СТИ-1 1997
  • Сероглазов В.В.
  • Кожухов В.В.
  • Строчков Ю.И.
  • Амосов М.Ю.
RU2142009C1
МАЛАЯ ФЕРМЕНТАЦИОННАЯ УСТАНОВКА (ВАРИАНТЫ) 1996
  • Фролов А.И.
  • Орлов Ю.Н.
  • Ворожцов А.С.
  • Юдин В.Г.
RU2142995C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ СИБИРЕЯЗВЕННОЙ ВАКЦИНЫ 1999
  • Кожухов В.В.
  • Пименов Е.В.
  • Сероглазов В.В.
  • Юдников В.А.
  • Меновщиков В.А.
RU2181294C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО СИБИРЕЯЗВЕННОГО АЛЛЕРГЕНА 2009
  • Логинов Михаил Сергеевич
  • Васильев Пётр Геннадьевич
  • Ильязов Айрат Арсланович
  • Столяров Виталий Михайлович
  • Фролов Владимир Иванович
  • Садовой Николай Васильевич
  • Саяпина Лидия Васильевна
  • Садовая Елена Александровна
  • Махортова Елена Борисовна
RU2415941C1
СИБИРЕЯЗВЕННЫЙ ВАКЦИННЫЙ ШТАММ СТИ-ПР-4 С РАСШИРЕННЫМ СПЕКТРОМ АНТИБИОТИКО-РЕЗИСТЕНТНОСТИ 2000
  • Сероглазов В.В.
  • Кожухов В.В.
  • Амосов М.Ю.
  • Строчков Ю.И.
RU2173342C1
КОМБИНИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ЖИВОТНЫХ 2001
  • Пименов Е.В.
  • Воронин Е.С.
  • Котляров В.М.
  • Левчук Б.А.
  • Комоско Г.В.
  • Жучихин Ю.С.
  • Кузнецов С.М.
  • Шведов В.В.
  • Девришов Д.А.
  • Тихонов И.В.
  • Гаврилов В.А.
  • Панин А.Н.
  • Хухоров И.Ю.
  • Гусейнов Мирсалех Гусейнович
RU2220742C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 198 921 C2

Реферат патента 2003 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАТИВНОЙ СПОРОВОЙ СУСПЕНЗИИ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННЫХ ВАКЦИН

Изобретение относится к медицине, в частности к производству сибиреязвенных вакцин. Получение нативной споровой суспензии при глубинном аэробном культивировании вакцинных штаммов B. acillus anthracis осуществляют в два этапа: на первом этапе культивирование проводят при непрерывном перемешивании и аэрации воздухом, поддерживая температуру 30-34oС. Когда завершается созревание спор, осуществляют переход на второй этап, повышая температуру до 35-38oС, и периодически кратковременно перемешивают культуральную жидкость. Способ позволяет почти до 100% повысить содержание полноценных зрелых спор в культуральной жидкости, более точно определять время завершения процесса культивирования и примерно на два часа сократить его продолжительность. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

Формула изобретения RU 2 198 921 C2

1. Способ получения нативной споровой суспензии при глубинном аэробном культивировании вакцинных штаммов Bacillus anthracis, отличающийся тем, что процесс культивирования осуществляют в два этапа: на первом этапе культивирование проводят при непрерывном перемешивании и аэрации воздухом, поддерживая температуру 30-34oС, а когда завершается созревание спор, осуществляют переход на второй этап, при этом повышают температуру культуральной жидкости до 35-38oС и периодически кратковременно перемешивают культуральную жидкость. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что переход с первого этапа культивирования на второй осуществляется при образовании в культуре суммарно не менее (70±10)% проспор и спор. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что на втором этапе перемешивание культуральной жидкости осуществляется за счет периодического включения мешалки каждые 10-15 мин на 2-3 мин.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2003 года RU2198921C2

СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННОГО ВАКЦИННОГО ШТАММА СТИ-1 1997
  • Юдников В.А.
  • Шевцов А.Н.
  • Кожухов В.В.
RU2142010C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ЖИВОТНЫХ 1995
  • Гаврилов В.А.
  • Числов Ю.В.
  • Николайчук Л.Ф.
RU2095409C1
ОНИЩЕНКО Г.Г
и др
Сибирская язва: актуальные аспекты микробиологии, эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики
- М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999, с.309-319.

RU 2 198 921 C2

Авторы

Орлов Ю.Н.

Садовой Н.В.

Махортова Е.Б.

Федорова Н.В.

Даты

2003-02-20Публикация

2001-03-06Подача