СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ЭНДОГЕННЫХ УВЕИТОВ У ДЕТЕЙ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/52 

Иобретение относится к офтальмологии и предназначено для прогнозирования течения эндогенных увеитов у детей.

Эндогенные увеиты относятся к числу актуальных, социально-значимых проблем в связи со значительной распространенностью этого заболевания среди детей. Заболеваемость увеитами у детей за последние 10 лет увеличилась в 5 раз и составляет до 12% в структуре глазной патологии [1]. Увеиты нередко протекают хронически, с частыми рецидивами, вызывают большое число осложнений, обуславливая инвалидизацию по зрению у 8-50% переболевших, и составляют 25% в структуре слепоты и слабовидения [2].

В связи с этим представляется особенно важным вопрос раннего прогнозирования течения заболевания, а также эффективности проводимой терапии.

За ближайший аналог принят способ прогнозирования течения эндогенных увеитов у детей, основанный на определении антиокислительной активности сыворотки крови [3] . В данной работе было показано, что при хроническом и рецидивирующем течении увеита наблюдается угнетение антиоксидантной активности, что свидетельствует об истощении эндогенных запасов антиоксидантов в сыворотке крови и неблагоприятном течении заболевания. Однако в данной работе были изучены хемилюминесцентные свойства липопротеидов сыворотки крови при увеитах у детей без анализа антиоксидантной активности слезной жидкости. Результаты такого прогнозирования недостаточно четкие, т.к. изменения в слезной жидкости не всегда сопровождаются аналогичными изменениями в сыворотке крови. Показатели антиоксидантной активности сыворотки крови при увеитах в меньшей степени коррелируют с фазой заболевания и не всегда отражают тяжесть его течения.

Известно также исследование антиоксидантной активности слезной жидкости в течение острого периода травмы для ранней диагностики и прогноза течения травматического увеита у взрослых [4], а также зависимость между уровнем антиоксидантной активности в слезной жидкости и степенью ожога при экспериментальной ожоговой болезни глаз [5] . Исследования по изучению антиоксидантной активности в слезной жидкости у детей в доступной литературе нам не встретились. Учитывая различие в патогенетических механизмах развития эндогенных увеитов по сравнению с вышеперечисленной патологией и наличие морфофункциональных особенностей структур глаза у детей, простая экстраполяция имеющихся данных по содержанию антиоксидантов в слезной жидкости у взрослых пациентов в отношении детей невозможна.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение точности прогнозирования течения эндогенных увеитов у детей.

Технический результат достигается за счет определения показателей антиоксидантной активности в слезной жидкости, сыворотке крови и их соотношения.

В слезной жидкости содержится большое количество биологически активных веществ, обладающих антиоксидантным действием: аскорбиновая кислота, небелковые SH-группы, γ-глутамилтранспептидаза, глутатион, глутатионредуктаза, Сu, Zn СОД, Са²⁺, лактоферрин, церулоплазмин, альбумин, урат. При развитии воспалительного процесса происходит выброс в слезную жидкость большого количества окислителей и активных форм кислорода из клеток роговицы, конъюнктивы, активированных нейтрофилов и макрофагов. Однако данных об изменении антиокислительного потенциала слезной жидкости при эндогенных увеитах у детей нами в литературе не найдено.

Антиоксидантную активность определяли путем измерения кинетики люминолактивированной хемилюминесценции в системе гемоглобин - пероксид водорода - люминол [6]. В данной модельной системе происходит свободнорадикальное окисление люминола, индуцированное смесью гемоглобина и пероксида водорода, сопровождающегося хемилюминесценцией. Регистрируемая антиоксидантная активность слезной жидкости и сыворотки крови в системе Нb-Н₂О₂-Лм определяется вкладом различных водорастворимых антиоксидантов, входящих в ее состав, а также взаимодействиями между отдельными радикальными ингибиторами.

Способ осуществляют следующим образом. Сыворотку получают путем центрифугирования 3 мл венозной крови, полученной из локтевой вены. Забор слезы производят стеклянным капилляром объемом 10 мкл.

Перед исследованием слезную жидкость разводили 0,05 М фосфатным буфером рН 7,4 в 20 раз, полученную сыворотку в 60 раз. В реакционную среду вносят по 30 мкл разведенной слезной жидкости или сыворотки крови. Реакционная среда общим объемом 500 мкл содержит 0,3 мкМ Нb и 10 мкМ люминола в 0,05 М фосфатном буфере рН 7,4 (50 мМ КН₂РO₄ и 100 мкМ ЭДТА Na соль). Инициирование свободнорадикального окисления люминола осуществляют пероксидом водорода, для приготовления которого используют свежеприготовленную дистиллированную воду и пергидроль (33,3%). Конечная концентрация Н₂О₂ в реакционной среде составляет 30 мкМ.

Кинетику хемилюминесценции регистрируют при комнатной температуре на хемилюминометре "Биотокс-7" (Москва). Антиоксидантную активность слезной жидкости выражают в эквиваленте тролокса. Для построения калибровочной кривой используют 4, 8 и 16 мкМ концентрации тролокса, приготовленного на фосфатном буфере рН 7,4. Реактив стабилен в течение недели при хранении при 4^oС.

Проведенные исследования показали невозможность изолированного анализа полученных показателей антиоксидантной активности сыворотки крови и слезной жидкости, так как изменения в сыворотке крови не всегда коррелируют с сопутствующими изменениями в слезной жидкости (например, резкое снижение антиоксидантной активности в слезной жидкости при субнормальных показателях в сыворотке крови). Поэтому мы ввели понятие соотношения

которое является наиболее информативным в сочетании с абсолютными показателями антиоксидантной активности в слезной жидкости.

Изучение антиоксидантной активности (АОА) в сыворотке крови (СК) и слезной жидкости (СЖ) в острый период и период ремиссии выявило существенные различия в величине как самих показателей, так и их соотношений. В период обострения заболевания отмечается снижение величины антиоксидантной активности, k≤0,3, что указывает на истощение антиоксидантной системы детоксикации. В период ремиссии сниженные ранее показатели постепенно восстанавливаются, превышая нормальные возрастные значения, что является для организма патогенетически целесообразной реакцией, защищающей структуры глаза от свободно-радикального повреждения; k высокий и составляет ≥0,7.

Кроме того, клиническое улучшение в течение заболевания не всегда сопровождается восстановлением нарушенных показателей антиоксидантной активности. Низкие значения антиоксидантной активности при положительной динамике заболевания свидетельствуют о возможности рецидива и требуют своевременной коррекции терапии.

Таким образом, при антиоксидантной активности в слезной жидкости, равной или менее 102 мкМ, и соотношении, равном или менее 0,3, прогнозируют обострение или затяжное течение увеита. При антиоксидантной активности в слезной жидкости, равной или более 175 мкМ, и соотношении, равном или более 0,7, прогнозируют благоприятное течение заболевания или фазу ремиссии. Показатели антиоксидантной активности позволяют предсказать дальнейшее течение заболевания и могут служить критерием эффективности проводимой терапии.

Пример 1. Больная Л., 8 лет. Поступила с диагнозом OU-рецидивирующий ревматоидный увеит, осложненное течение, фаза обострения. Срок заболевания более 5 лет. 3,5 года назад оперирована по поводу осложненной катаракты OU. При биохимическом исследовании АОА (мкМ) в СЖ OD=66, 0S=0, в СК=246, k=0,27, т. е. показатели АОА в СЖ менее 102, а соотношение АОА в СЖ к АОА в СК менее 0,3, что указывало на неблагоприятный прогноз заболевания. Дальнейшие наблюдения показали, что, не смотря на проведенное лечение, отмечается ранний рецидив заболевания (через 2 мес после проведенного лечения), что подтверждает прогностическую ценность предлагаемого способа.

Пример 2. Больной К., 15 л. Поступил с диагнозом OS-рецидивирующий периферический увеит неясной этиологии, осложненное течение, фаза обострения. Срок заболевания более 5 лет. 2,5 года назад оперирован по поводу осложненной катаракты OS. С диагностической целью проведено биохимическое исследование: АОА (мкМ) в СЖ OD=160, OS=228, в СК=340, k≈0,7, т.е. показатели в СЖ более 175, а соотношение АОА в СЖ к АОА в СК равно 0,7, что указывает на благоприятный прогноз заболевания. Дальнейшее наблюдение показало, что после проведенного лечения наблюдается купирование воспалительного процесса с последующей ремиссией более 6 мес.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой степенью точности осуществлять прогнозирование течения эндогенных увеитов у детей с соответствующим выбором тактики лечения.

Источники информации
1, 3. Гусева М. Р. "Диагностика и патогенетическая терапия увеитов у детей". Дисс. на соиск. уч. ст. д.м.н., М. 1996, стр. 1, стр. 39-43.

2. Катаргина Л. А., Хватова А.В. "Эндогенные увеиты у детей и подростков". М. Медицина, 2000, стр. 17.

4. Тарасова Л. Н. , Киселева Т.Н., Орлова Н.С. "Значение биохимических показателей слезной жидкости для ранней диагностики и прогноза течения травматического увеита". Вестник офтальмологии, 1999, 2, стр. 11-13.

5. Гулидова О.В., Любицкий О.Б., Клебанов Г.И., Чеснокова Н.Б. "Изменение антиокислительной активности слезной жидкости при экспериментальной ожоговой болезни глаз". Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1999, 11, стр. 571-574.

6. Любицкий О.Б. "Определение АОА биологических жидкостей хемилюминесцентным методом". Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.б.н. , М. 1999, стр.4-5я

Изобретение относится к офтальмологии и предназначено для прогнозирования течения эндогенных увеитов у детей. Определяют антиоксидантную активность в слезной жидкости и сыворотке крови. При антиоксидантной активности в слезной жидкости, равной или менее 102 мкМ, и соотношении, равном или менее 0,3, прогнозируют обострение или затяжное течение увеита. При антиоксидантной активности в слезной жидкости, равной или более 175 мкМ, и соотношении, равном или более 0,7, прогнозируют благоприятное течение заболевания или фазу ремиссии. Способ обеспечивает возможность достоверного прогнозирования течения эндогенных увеитов у детей.

Способ прогнозирования течения эндогенных увеитов у детей, включающий проведение биохимического исследования, отличающийся тем, что определяют антиоксидантную активность методом хемилюминисценции в слезной жидкости, сыворотке крови и их соотношение, при антиоксидантной активности в слезной жидкости равной или менее 102 мкМ и соотношении равном или менее 0,3 прогнозируют обострение или затяжное течение увеита, при антиоксидантной активности в слезной жидкости равной или более 175 мкМ и соотношении равном или более 0,7 прогнозируют благоприятное течение заболевания или фазу ремиссии.