КРАСИТЕЛЬ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2003 года по МПК C09B29/16 G01N1/30 

Изобретение относится к области гистологии.

Известно, что тривиальные методы окраски гистологических препаратов предусматривают применение следующих красителей: кислого фуксина, конго красного, эритрозина, оранжевого G, азокармина, пикриновой кислоты.

Недостатки перечисленных красителей заключаются в их непригодности для получения обзорных препаратов, так как каждый из них способен выявлять только отдельный элемент ткани, в их использовании, главным образом, в сочетании с другими красителями, в длительности и сложности процесса окрашивания препаратов, в неустойчивости окраски при хранении на свету, в их применимости чаще при определенных способах фиксации исследуемого материала [1].

Для изготовления обзорных препаратов наиболее часто применяется эозин с предварительным окрашиванием ядер клеток гематоксилином.

Недостатком использования в этом методе эозина в качестве цитоплазматического фонового индикатора является невозможность дифференцировки конкретных элементов ткани без дополнительной, длительной во времени процедуры обезвоживания "оттягивания" из них красителя растворами спиртов возрастающей концентрации, требующей специальных навыков работы [2].

Цель изобретения - изыскание красителя, позволяющего при прогрессивном способе окрашивания достигать хорошего эффекта дифференцировки внутри- и застенных желез серозного и смешанного типа, интенсивно окрашивать обкладочные клетки фундальных желез желудка, цитоплазму клеток поверхностных слоев многослойного эпителия, выявлять поперечную исчерченность мышечных волокон, сокращать время окраски препаратов, получать устойчивые во времени и на свету окрашенные срезы, применять любой способ фиксации исследуемого материала, упрощать процедуру окрашивания.

Это достигается применением в качестве красителя гистологических препаратов азопроизводного Аш-кислоты и 2-(n-аминобензолсульфамидо)-тиазола формулой

Данное вещество ранее отмечалось в качестве возможного органического реагента на металлы [3].

Методика испытания красителя
При испытании красителя окрашивались: эпителии (многослойный, однослойный и железистый), мышечные ткани (исчерченная и гладкая), соединительная ткань в языке, желудке и кишечнике.

Гистологический материал фиксировали в формалине, Ценкер-формоле, жидкости Карнуа, заливали в парафин.

Для окраски использовали 0,5% и 1,0%-ные водные растворы красителей. Время окраски варьировали от 15 с до 2 мин. Окрашивали срезы толщиной 7-8 мкм. Обезвоживание и просветление препаратов проводили по общепринятым методикам.

Результаты испытания
Краситель закрашивает цитоплазму клеток во всех указанных видах тканей в ярко-розовый цвет, оставляя неокрашенными ядра.

В многослойном эпителии особенно интенсивно окрашивается цитоплазма клеток нескольких поверхностных слоев пласта.

При окраске смешанных желез четко дифференцируются слизистые и белковые концевые секреторные отделы: цитоплазма сероцитов окрашивается в розовый цвет, при этом мукоциты остаются неокрашенными.

Не окрашивается и цитоплазма бокаловидных клеток в столбчатом эпителии кишечника.

В фундальных железах желудка цитоплазма эпителиоцитов окрашивается бледно, за исключением обкладочных клеток, приобретающих ярко-розовый цвет.

В скелетной мышечной ткани четко выявляется поперечная исчерченность. Краситель может быть использован в виде 0,5%-ного водного раствора при приготовлении обзорных препаратов как заменитель эозина. Ядра при этом можно докрасить гематоксилином. Оптимальное время окраски - 30 с. Применим любой метод фиксации тканей.

Источники
1. Основы гистологии и гистологической техники. // Под ред. Елисеева В. Г., Субботина М.Я., Афанасьева Ю.И., Котовского Е.Ф. - М.: Медицина, 1967.

2. Микроскопическая техника: Руководство. // Под ред. Саркисова Д.Ф., Петрова Ю.Л. - М.: Медицина, 1996.

3. Тарасова Л. В. Синтез азопроизводных Аш-кислоты и их применение для анализа металлов. // Научная конференция молодых ученых. Оренбург, 1972.

Описывается применение азопроизводного Аш-кислоты и 2-(n-аминобензолсульфамидо)-тиазола в качестве красителя гистологических препаратов. Предлагаемый краситель в виде 0,5%-ного водного раствора при использовании вместо эозина прогрессивным способом окрашивания интенсивно выявляет цитоплазму клеток разных видов тканей, обкладочные клетки фундальных желез желудка, четко дифференцирует сероциты и мукоциты белковых и смешанных желез, поперечную исчерченность скелетной мышечной ткани. Оптимальное время окраски 30 с. Может применяться при любом способе фиксации тканей.

Применение азопроизводного Аш-кислоты и 2-(n-аминобензолсульфамидо)-тиазола формулы

в качестве красителя гистологических препаратов.