СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХИМИЧЕСКОГО ГАСТРИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2010 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, патологической физиологии и экспериментальной медицине и может быть использовано для изучения патогенеза химического гастрита и доклинического исследования эффективности новых методов лечения данной патологии.

На сегодняшний день известно несколько вариантов моделирования химического гастрита в эксперименте. Наиболее близким аналогом является способ моделирования химического гастрита у крыс-самцов линии Wistar путем одновременного введения животным нестероидных противовоспалительных препаратов и медицинской желчи (Кнышова В.В. Влияние борсодержащей минеральной воды на состояние процессов перекисного окисления липидов и факторов антиоксидантной защиты при экспериментальном гастродуодените // Вопросы курортологии, физиотерапии и ЛФК. - 2002. - №2. - С.34-36).

Недостатком данного способа является отсутствие таких патогномоничных для химического гастрита гистологических признаков, как гиперплазия ямочного эпителия с локальным истощением муцина, гипертрофия гладких мышц с минимально выраженными отеком и воспалением в собственной пластинке слизистой, увеличение в собственной пластинке слизистой оболочки желудка количества гладкомышечных клеток (Sobala, G.M. Reflux gastritis in the intact stomach / Sobala G.M., King R.F., Axon A.T., Dixon M.F. // J. Clin. Pathol. - 1990, Apr. - Vol.43. - 34. - P.303-306 Комптон К.К. Гастрит: новое в патоморфологической классификации и диагностике / К.К. Комптон // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. - 1998. - №3. - С.84-80). Напротив, автор отмечает появление диффузной лимфоцитарно-гистиоцитарной и плазмоклеточной воспалительной инфильтрации собственной пластинки слизистой, стазы и мелкоочаговые кровоизлияния, кубическую трансформацию покровного и железистого эпителия, что не характерно для химического гастрита. Поэтому в современных условиях разработка оптимального, приближенного к реальным условиям варианта моделирования химического гастрита является актуальной задачей.

Технический результат: создание модели, наиболее полно отражающей морфологическую картину поражения слизистой оболочки желудка при химическом гастрите у человека.

Указанная задача достигается путем перорального введения нелинейным белым крысам в течение 21 дня смеси 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Кеторол®» («Д-р Редди'с Лабораторис Лтд.», Индия, г.Хайдерабад, активное вещество - кеторолака трометамин) из расчета 5 мг/кг за 1 ч до кормления 1 раз в сутки.

Способ осуществляют следующим образом. Нелинейным белым крысам (самцам и самкам) в течение 21 дня перорально вводят смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кеторол из расчета 5 мг/кг за 1 ч до кормления 1 раз в сутки. По окончании эксперимента животных забивают под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии, материал (стенку желудка) фиксируют в 10% забуференном по Лилли (pH - 7,2) формалине. Используя общепринятые методики, готовят гистологические препараты, в которых выявляют типичные гистологические признаки химического гастрита: гиперплазию ямочного эпителия с локальным истощением муцина, увеличение количества обкладочных (париетальных) клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка, гипертрофию мышечной пластинки слизистой оболочки желудка, увеличение в собственной пластинке слизистой оболочки желудка количества гладкомышечных клеток, отек собственной пластинки слизистой оболочки.

Эксперимент выполнен на 30 животных - самцах и самках беспородных белых крыс четырехмесячного возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария. Все эксперименты проведены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N 755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.

Животные были разделены на 2 экспериментальных группы, состав групп был следующий:

I группа - контрольная (интактные животные), n=15;

II группа - животные, получавшие в течение 21 дня перорально 1 раз в сутки за 1 час до кормления смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Кеторол®» («Д-р Редди'с Лабораторис Лтд.», Индия) из расчета 5 мг/кг, n=15.

На 22-й день от начала эксперимента животных выводили из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. При проведении аутопсии гистологические образцы, полученные из различных отделов желудка крысы (пищеводный, кардиальный, пилорический отделы), фиксировали в 10% забуференном по Лилли формалине (pH 7,2), обезвоживали в спиртах восходящей крепости, заливали в парафин, срезы (3-4 мкм) получали на ротационном микротоме, наносили на стекла с адгезивным покрытием (яичный альбумин), окрашивали гематоксилином и эозином и пикрофуксином по ван Гизону.

При проведении гистологического исследования у всех животных, получавших в течение 21 дня смесь 5% аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кеторол, отмечали появление гистологических признаков, патогномоничных для химического гастрита: гиперплазию ямочного эпителия с локальным истощением муцина, уменьшение количества главных клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка, гипертрофию мышечной пластинки слизистой оболочки желудка, увеличение в собственной пластинке слизистой оболочки желудка количества гладкомышечных клеток и ее отек.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1. Самцу белой крысы массой 210 г в течение 21 дня перорально за 1 час до кормления 1 раз в сутки вводили смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кеторол из расчета 5 мг/кг. На 22-е сутки животное было умерщвлено под эфирным наркозом путем перерезки спинного мозга, проведено гистологическое исследование стенки желудка.

При исследовании гистологических образцов в проходящем свете светового микроскопа выявлены выраженное полнокровие сосудов и отек собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы желудка в пищеводном, кардиальном, фундальном и пилорическом отделах. В железистой части слизистой оболочки желудка отмечались гиперплазия ямочного эпителия, локальное уменьшение количества слизистых клеток, увеличение количества париетальных клеток в дне желез слизистой оболочки желудка, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки, появление в собственной пластинке слизистой оболочки желудка большого количества гладких миоцитов. Выявленные изменения соответствуют гистологической картине НПВП-гастропатии.

Пример 2. Самке белой крысы массой 178 г в течение 21 дня перорально за 1 час до кормления 1 раз в сутки вводили смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Кеторол®» из расчета 5 мг/кг. На 22-е сутки животное было умерщвлено под эфирным наркозом путем перерезки спинного мозга с соблюдением правил эвтаназии, проведено гистологическое исследование стенки желудка.

При микроскопии гистологических образцов отмечались выраженное полнокровие сосудов и отек собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы желудка в пищеводном, кардиальном, фундальном и пилорическом отделах. В железистой части слизистой оболочки желудка выявлены гиперплазия ямочного эпителия, локальное уменьшение количества слизистых клеток, уменьшение количества главных клеток за счет преобладания обкладочных клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки, появление в собственной пластинке слизистой оболочки желудка большого количества гладкомышечных клеток.

Таким образом, у данного животного ежедневное пероральное введение 5% раствора аскорбиновой кислоты в сочетании с нестероидным противовоспалительным препаратом («Кеторол®») привело к развитию химического гастрита, что подтверждается результатами гистологического исследования.

Положительный эффект от использования предлагаемого способа состоит в создании экспериментальной модели химического гастрита, обладающей 100%-ной воспроизводимостью и соответствующей по гистологической картине химическому гастриту, наблюдаемому у человека.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной гастроэнтерологии, и может быть использовано для моделирования химического гастрита. Для этого нелинейным белым крысам в течение 21 дня перорально вводят смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кеторол из расчета 5 мг/кг за 1 час до кормления 1 раз в сутки. Способ обеспечивает адекватное воспроизведение модели.

Способ моделирования химического гастрита в эксперименте путем перорального введения крысам нестероидного противовоспалительного препарата, отличающийся тем, что нелинейным белым крысам в течение 21 дня вводят смесь 200 мкл 5%-ного раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кеторол из расчета 5 мг/кг за 1 ч до кормления, 1 раз в сутки.