ПРОТИВОПАРАЗИТАРНЫЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНЪЕКЦИОННЫЙ ПРЕПАРАТ Российский патент 2003 года по МПК A61K35/70 A61K9/08 

Изобретение относится к производству антипаразитарных препаратов на основе полученных путем микробиологического синтеза биологически-активных веществ, в частности авермектинов.

Актиномицет Streptomyces аvermitilis при культивировании в присутствии источников углерода, азота и фосфора при постоянной аэрации продуцирует восемь близких по строению веществ, названных авермектинами, которые обладают резко выраженным антипаразитарным действием (патент GB 1573955, 1980 г.). Все авермектины по химическому строению являются 16-членными макролидами и отличаются между собой заместителями у 5 и 26 атомов углеродного кольца. Индивидуальные авермектины, получившие обозначения A_1a, А_1b, А_2a, А_2b, B_1a, B_1b, В_2a и В_2b, имеют различную биологическую активность. Наиболее активными являются авермектины B₁, особенно B_1a.

Развитие технологии получения авермектинов происходит по нескольким направлениям, к числу которых относятся получение штаммов, продуцирующих повышенные количества всего комплекса авермектинов или продуцирующих авермектины с преобладающим содержанием группы B₁, совершенствование процесса выделения авермектинов из мицелия штаммов Streptomyces avermitilis и другие.

Известен штамм Streptomyces avermitilis ATCC 31272, продуцирующий в среднем 500 мкг/мл авермектинов (патент US 4310519, 1982 г.). Продуктивность штамма Streptomyces avermitilis ВНИИСХМ-51 (патент RU 2048250, 1995 г.) составляет 700 мкг/мл. Штамм Streptomyces avermitilis ВНИИСХМ-54 продуцирует уже 1500 мкг/мл авермектинов (патент RU 2054483, 1996 г.), причем содержание авермектина B_1a достигает 35% и более. Штамм Streptomyces avermitilis CCM 4697, депонированный в Чешской коллекции микроорганизмов в Брно, продуцируют в среднем 2300 мкг/мл авермектинов при размахе изменчивости 2000-3000 мкг/мл. Во всех приведенных случаях авермектины выделяют из мицелия одновременно экстракцией индивидуальным органическим растворителем, смешивающимся с водой, с последующим разделением, например хроматографическим.

Предлагаемое изобретение позволяет изготавливать ветеринарные инъекционные препараты на основе трех комплексов авермектинов с различным содержанием индивидуальных авермектинов. Все три комплекса эффективны против эктo- и эндопаразитов, но обладают разными сроками наступления гибели паразитов, сроками защитного действия и сроками ожидания.

Для выделения авермектиновых комплексов различного компонентного состава используют сухую биомассу, полученную при выращивании продуцента в глубинных условиях на известных питательных средах.

Экстракцию авермектинов из биомассы осуществляют смесью, состоящей из воды и низко- и высококипящих растворителей, смешивающихся с водой в неограниченном соотношении. В качестве низкокипящих используют растворители с температурой кипения, не превышающей температуру кипения воды, например этиловый, метиловый и изопропиловый спирты или ацетон, в качестве высококипящих - полиэтиленгликоль с молекулярной массой 200 (ПЭГ-200), полиэтиленгликоль с молекулярной массой 400 (ПЭГ-400), диметилсульфоксид (ДМСО) и др. Экстракты очищают от пигментов и неорганических примесей с помощью катионообменных и анионообменных смол. Затем в вакуум-испарителе отгоняют воду и низкокипящий растворитель. Путем отстаивания оставшейся части экстракта в высококипящем растворителе отделяют примеси липидного характера.

Далее из раствора можно в одном случае осадить при помощи воды сразу все присутствующие авермектины и получить суммарный авермектиновый комплекс. В другом случае в присутствии воды и этилового спирта осаждают только часть авермектинов с преимущественным содержанием авермектинов B_1a и B_1b. Маточный раствор, оставшийся после отделения части авермектинов, смешивают с водой, осаждая оставшиеся авермектины.

При этом получают:
1) суммарный авермектиновый комплекс, получивший название аверсектин С, содержащий 8 авермектиновых компонентов в соотношении, %:
Авермектин A_1a - 6-12
Авермектин A_1b - Следы
Авермектин A_2a - 15-25
Авермектин А_2b - 2-4
Авермектин В_1a - 30-40
Авермектин B_1b - 2-12
Авермектин B_2а - 14-24
Авермектин В_2b - 1-2
или
2) комплекс, получивший название аверсектин В, содержащий в основном авермектины B_1a и В_1b, %:
Авермектин B_1a - 76-83
Авермектин B_1b - 12-16
Остальные авермектины - Следы
Авермектин В_2a - 0,8-6
Авермектин А_1a - 1-6,
и
3) комплекс, названный аверсектином АВ, следующего состава, %:
Авермектин A_1a - 4-10
Авермектин A_1b - Следы
Авермектин A_2a - 25-45
Авермектин A_2b - 2,1-4,5
Авермектин B_1a - 12-18
Авермектин B_1b - 3-9
Авермектин В_2a - 25-45
Авермектин В_2b - 2,5-5,5
Изготовление и применение препаратов на основе аверсектинов С, В и АВ иллюстрируется следующими примерами.

Пример. Изготовление лекарственных форм на основе аверсектинов для инъекционного применения
В смеситель емкостью 200 л налили 46 частей 96%-ного этанола. Затем добавили 1 часть аверсектина С и перемешивали в течение 30 мин. После растворения аверсектина С в смесь внесли 6 частей поливинилпирролидона с молекулярной массой 10000-15000. После растворения поливинилпирролидона в смеситель добавили 48 частей ПЭГ-400 и 9 частей воды. Полученную смесь снова перемешивали в течение 40 мин. Полученная композиция представляет собой готовую нерасфасованную лекарственную форму.

Поскольку в составе композиции содержится около 30% этанола, расфасовку препарата осуществляли в чистые флаконы в полуасептических условиях и выдерживали закупоренными в течение суток перед применением на животных. Экспериментально установлено, что за сутки препарат становится микробиологически стерильным.

Лечебная эффективность и оптимальные физико-химические свойства композиции сохраняются при следующем ее составе, мас.%:
Аверсектин С - 0,9-1,1
Поливинилпирролидон (10000-15000) - 0,5-8,0
Полиэтиленгликоль-400 - 42-60
Этиловый спирт (96%) - 30-42
Вода для инъекций - 8-10
Условия применения инъекционного препарата на основе авермектинов для разных видов животных приведены в табл.1. Эффективность препарата превышает 95%.

Уменьшение содержания аверсектина С ниже 0,9% приводит к снижению эффективности композиции против эктопаразитов. Увеличение содержания аверсектина С выше 1,1%, не изменяя эффективности композиции, повышает ее стоимость и увеличивает срок выведения из организма.

Содержание вспомогательных веществ обеспечивает оптимальную вязкость композиции, растворимость аверсектина С, предотвращает возможность выпадения в осадок индивидуальных авермектинов.

Вместо аверсектина С в композицию в тех же концентрациях можно вводить аверсектин АВ или аверсектин В.

Каждый из трех аверсектинов эффективен против экто- и эндопаразитов. Однако каждый из аверсектинов придает лекарственной форме свои особенности. Так аверсектин АВ предпочтительнее применять против эктопаразитов, поскольку гибель паразитов наступает раньше (на 5-й день) по сравнению с аверсектином В (на 7-й день) и аверсектином С (на 10-й день). Вместе с тем, срок защитного действия аверсектина В против эктопаразитов будет дольше, чем у аверсектина АВ приблизительно на 7-10 дней, так как аверсектин В медленнее выводится из организма. Аверсектин С обеспечивает такой же срок защитного действия против эктопаразитов, как и аверсектин В, но срок ожидания у него на уровне 14-21 дня, а у аверсектина В - на уровне 21-28 дней.

Таким образом, описанная лекарственная форма для инъекционного применения за счет наличия в своем составе этилового спирта позволяет исключить из технологического цикла такую трудоемкую и дорогостоящую операцию как стерилизация. С другой стороны, благодаря тщательному подбору вспомогательных компонентов и их концентраций, обеспечена оптимальная растворимость для всех индивидуальных авермектинов, которые имеют разную растворимость в водных растворах. Изготовление лекарственных форм на основе разных аверсектинов позволяет предложить инъекционные подкожные формы с разными лечебными свойствами.

Изобретение относится к производству антипаразитарных препаратов на основе авермектинов, полученных путем микробиологического синтеза. Противопаразитарный ветеринарный инъекционный препарат содержит активное начало и нейтральный растворитель. Активным началом служит комплекс авермектинов, а растворителем является смесь этанола, полиэтиленгликоля, поливинилпирролидона и воды при следующем соотношении компонентов, мас.%: комплекс авермектинов 0,9-1,1; поливинилпирролидон 0,5-8,0; полиэтиленгликоль 42-60; этиловый спирт (96%) 30-42; вода для инъекций 8-10. Для различных условий можно выбрать один из трех комплексов авермектинов, отличающихся по содержанию индивидуальных компонентов. Противопаразитарная эффективность препарата превышает 95%. 3 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Противопаразитарный ветеринарный инъекционный препарат, содержащий активное начало и нейтральный растворитель, отличающийся тем, что активным началом является комплекс авермектинов, а растворителем является смесь этанола, полиэтиленгликоля, поливинилпирролидона и воды при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Комплекс авермектинов - 0,9-1,1
Поливинилпирролидон - 0,5-8,0
Полиэтиленгликоль - 42-60
Этиловый спирт (96%) - 30-42
Вода для инъекций - 8-10
2. Противопаразитарный препарат по п. 1, отличающийся тем, что активным началом является комплекс авермектинов, содержащий индивидуальные компоненты в следующем соотношении, мас. %:
Авермектин A_1a - 6-12
Авермектин A_1b - Следы
Авермектин А_2a - 15-25
Авермектин А_2b - 2-4
Авермектин B_1a - 30-40
Авермектин В_1b - 2-12
Авермектин В_2a - 14-24
Авермектин В_2b - 1-2
3. Противопаразитарный препарат по п. 1, отличающийся тем, что активным началом является комплекс авермектинов, содержащий индивидуальные компоненты в следующем соотношении, маc. %:
Авермектин B_1a - 76-83
Авермектин В_1b - 12-16
Авермектин A_1a - 1-6
Авермектин В_2a - 0,8-6
Остальные авермектины - Следы
4. Противопаразитарный препарат по п. 1, отличающийся тем, что активным началом является комплекс авермектинов, содержащий индивидуальные компоненты в следующем соотношении, маc. %:
Авермектин A_1a - 4-10
Авермектин A_1b - Следы
Авермектин А_2a - 25-45
Авермектин А_2b - 2,1-4,5
Авермектин В_1a - 12-18
Авермектин B_1b - 3-9
Авермектин В_2a - 25-45
Авермектин В_2b - 2,5-5,5