СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ Российский патент 2003 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для лабораторных исследований при туберкулезе.

Известен способ выявления микобактерий путем сбора материала с применением раздражающих аэрозольных ингаляций. Больной в течение 10 мин вдыхает 30 мл подогретой смеси, состоящей из 1% воды и 15% поваренной соли. После ингаляции материал, откашливаемый из дыхательных путей, собирается в стерильную баночку для последующего культивирования. (Методические рекомендации: Современные методы лабораторной диагностики туберкулеза, Москва - 1992).

Недостатком указанного способа является невозможность его использования у больных с глубокими нарушениями психики, у которых возможны неадекватные реакции на применение методов активного сбора материала, либо у лиц, находящихся в бессознательном состоянии.

Наиболее близким к заявляемому способу является способ выявления микобактерий путем сбора мокроты, с последующим культивированием на питательных средах. Больной утром натощак откашливает мокроту в стерильную плевательницу, либо мокрота собирается в течение суток, а затем вместе с утренней порцией направляется в лабораторию. К исследуемому материалу добавляется равное по объему количество деконтаминанта в виде 10% раствора трехзамещенного фосфата натрия и проводится инкубация при 37^oС в термостате в течение 24 ч. После инкубации материал центрифугируется, надосадочная жидкость сливается, к осадку добавляется 1 мл среды Школьниковой или физиологического раствора и производится просев по 0,5 мл на 3 пробирки яичной среды (Методические указания по применению унифицированных микробиологических методов исследования при туберкулезе. Приложение 2 к приказу МЗ СССР 558 от 8 июня 1978 г.).

Этот способ используют для обследования больных с глубокими изменениями психики, однако, при этом сбор материала в достаточном количестве затруднен, что приводит к снижению информативности исследований. Способ не применим для обследования больных, находящихся в бессознательном состоянии.

В основу изобретения положена задача увеличения достоверности результатов за счет повышения информативности исследований по выявлению микобактерий у лиц, у которых по тем или иным причинам известные способы либо не применимы, либо мало результативны.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе выявления микобактерий путем сбора исследуемого материала, обработки деконтаминантом и последующего культивирования на питательной среде сбор материала производят с верхних отделов дыхательных путей смоченным тампоном, а культивирование осуществляют в жидкой питательной среде.

Применение способа сбора материала с верхних отделов дыхательных путей для обследования больных, у которых в силу тех или иных факторов нельзя использовать метод активного сбора материала, позволяет увеличить выявление микобактерий туберкулеза и тем самым повысить информативность исследований, что в свою очередь увеличивает достоверность результатов исследования.

Использование для культивирования жидкой среды обеспечивает более полный контакт микобактерий, адсорбированных на тампоне, с питательным субстратом, что ведет к сокращению сроков роста и повышению выявляемости микобактерий туберкулеза, следовательно, повышает достоверность исследований.

Пример применения способа.

Манипуляцию производят утром натощак. Тампон, смоченный изотоническим раствором хлорида натрия, фиксируют стерильным корнцангом. Открывают рот больному, удерживают язык, помещают тампон позади него и производят круговое движение по исследуемой поверхности (например, задней поверхности носоглотки, гортани), тем самым собирая материал в достаточном для исследования количестве. Тампон помещают в центрифужную пробирку с 5 мл 5% раствора трехзамещенного фосфата натрия.

Доставленные в лабораторию пробирки со смывами инкубируют в термостате в течение 18-24 ч при температуре 37^oС для уничтожения микрофлоры загрязнения.

По окончании инкубации проводят посев материала. Тампон берут стерильным пинцетом, отмывают в пробирке со смачивающим раствором, в которую он был погружен, слегка отжимают о стенки пробирки и засевают в жидкую питательную среду Миддлбрука-Дюбо. Посевы на жидкой среде культивируют в термостате при 37^oС, начиная с 5 дня после посева, производят дважды в неделю просмотр посевов. При появлении видимого роста готовят мазки, для чего пипеткой забирают 0,1 мл верхнего слоя среды, помещают на стекло, высушивают, окрашивают люминофорами или по методу Циль-Нильсена.

С применением предложенного способа проведены исследования у 102 больных туберкулезом легких, страдающих психическими расстройствами. Выделены 2 группы больных: 1 группа - больные очаговым и инфильтративным туберкулезом (86 человек), у которых наблюдались малые деструктивные изменения в легких, и 2 группа - больные диссеминированным, кавернозным и фиброзно-кавернозным туберкулезом с обширными деструктивными изменениями в легких.

Сравнительные данные использования предложенного способа для выявления микобактерий с прототипом представлены в табл. 1.

Из представленных данных табл. 1 видно, что применение предложенного способа для сбора материала у больных туберкулезом легких позволило повысить выявляемость микобактерий туберкулеза в среднем в 2,2 раза. У больных с ограниченными деструктивными изменениями в легких этот показатель повысился в 2,7 раза. Дополнительно выделены микобактерии туберкулеза у 4 больных 2 группы, у которых, несмотря на обширность туберкулезного процесса в легких, не удалось обнаружить возбудитель туберкулеза общепринятым методом. В 1 группе больных микобактерий туберкулеза обнаружены дополнительно у 11 больных. Отмечено, что эти больные практически не выделяют мокроту или выделяют ее в небольшом количестве. Поэтому применение известного способа при их обследовании малоэффективно, особенно у лиц с глубокими дефектами личности, тогда как использование предложенного способа позволяет получить материал в достаточном количестве для выявления микобактерий туберкулеза.

Из представленных данных табл. 2 видно, что при применении предложенного способа выявления микобактерий выход микробной массы увеличился в 2,4 раза, а сроки роста при культивировании в среднем уменьшились в 2,8 раза, что позволило сократить сроки выдачи результатов исследования.

Таким образом, предложенный способ выявления микобактерий повышает достоверность результатов за счет повышения информативности исследований по выявлению микобактерий.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для лабораторных исследований при туберкулезе. Выявление микобактерий ведут путем сбора материала с верхних отделов дыхательных путей тампоном и культивируют адсорбированные микобактерии помещением тампона в жидкую питательную среду. Изобретение направлено на повышение достоверности результатов за счет увеличения информативности исследований по выявлению микобактерий. 2 табл.

Способ выявления микобактерий с поверхности путем сбора смоченным тампоном исследуемого материала, обработка его деконтаминантом, посев и культивирование на питательной среде с последующим учетом результатов выявляемости микобактерий, отличающийся тем, что сбор материала проводят с верхних отделов дыхательных путей, а адсорбированные микобактерии культивируют помещением тампона в жидкую питательную среду.