СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА В МОЧЕ Российский патент 2004 года по МПК C12Q1/04 G01N33/48 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для лабораторной диагностики внелегочных форм туберкулеза.

При диагностике внелегочных форм туберкулеза для анализа, как правило, собирается утренняя порция мочи, которую в дальнейшем освобождают от микрофлоры загрязнения и культивируют на питательной среде для выявления микобактерий туберкулеза (в дальнейшем МБТ) [1].

Однако даже при наличии у больного внелегочной формы туберкулеза выявить МБТ в одной только первой утренней порции удается не всегда.

В способе выявления МБТ при внелегочных формах для повышения точности выявления предлагается собирать мочу в течение дня и проводить освобождение от загрязнения посторонней микрофлорой и культивирование на питательной среде всего объема мочи, собранного за сутки [2].

Но и при осуществлении этого способа лабораторная диагностика не всегда бывает достоверной, т.к. повышается загрязнение мочи посторонней микрофлорой, что приводит к угнетению ростовых свойств МБТ.

Наиболее близким к заявляемому является способ выявления МБТ, преимущественно в моче, включающий сбор материала (утренней порции), его гомогенизацию 10%-ным раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия с последующей инкубацией в термостате при температуре 37°С в течение 24 часов, далее осуществляют центрифугирование и посев исследуемого материала на 2-3 пробирки с питательной средой Левенштейна–Иенсена [3].

Недостатком этого способа является недостоверность выявления МБТ в первой утренней порции.

Кроме того, обработка мочи, осуществляемая в этом способе выявления МБТ, не позволяет полностью освободить ее от посторонней микрофлоры, что в дальнейшем, при посеве, приводит к увеличению проростов последней и тем самым снижает точность выявления МБТ.

В основу изобретения положена задача повышения точности выявления МБТ путем последовательной щадящей обработки каждой порции мочи растворами минеральной кислоты и щелочи, что повышает количество жизнеспособных микобактерий в единице объема порции мочи.

Поставленная задача решается тем, что в способе выявления микобактерий туберкулеза в моче путем сбора материала, обработки его раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия от микрофлоры загрязнения и последующего культивирования на питательной среде, сбор, обработку и культивирование осуществляют по мере выделения каждой порции материала, перед обработкой раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия мочу обрабатывают раствором минеральной кислоты, а после осуществляют нейтрализацию раствором слабой органической кислоты.

При этом в качестве раствора минеральной кислоты берут 2%-ный раствор серной кислоты; раствор трехзамещенного фосфорнокислого натрия берут 5%-ным; в качестве раствора органической кислоты используют 1%-ный раствор лимонной кислоты и посев производят на питательную среду “Новая”.

В заявляемом способе каждую порцию мочи обрабатывают двукратно, при этом первоначальную обработку от микрофлоры загрязнения осуществляют 2%-ным раствором серной кислоты, а затем - 5%-ным раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия, за счет меньшей, щадящей, концентрации последнего сохраняя ростовые свойства микобактерий туберкулеза и в совокупности с последующей нейтрализацией повышая точность и достоверность выявления МБТ.

Способ осуществляют следующим образом: по мере получения каждой порции мочи ее заливают 2%-ным раствором серной кислоты на 15 минут, затем центрифугируют при 1,5 тыс.об/мин и осадок заливают 5%-ным раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия. Далее после центрифугирования осадок нейтрализуют 1%-ным раствором лимонной кислоты и делают посев по общепринятой методике на питательную среду “Новая”.

Сопоставительный анализ данных по выявляемости МБТ из мочи больных урогенитальным туберкулезом при сборе материала по мере выделения и утренней порции представлен в табл.1 и 2.

Данные табл.1 и 2 иллюстрируют преимущество заявляемого способа выявления МБТ перед способом, в котором обработке подвергается утренняя порция. В заявляемом способе удалось снизить количество проростов посторонней микрофлоры и повысить точность лабораторной диагностики урогенитального туберкулеза по сравнению со способом, взятым за прототип, в 1,5-2 раза.

Источники информации

1. Приказ Министерства Здравоохранения № 558 от 08 июня 1978 г. "Об унификации микробиологических методов исследования при туберкулезе". М., 1978.

2. Василев В.Н. Микобактериозы и микозы легких “Медицина и физкультура, София, 1971.

3. Современные методы лабораторной диагностики. Методические рекомендации. М., 1992.

Изобретение относится к биотехнологии. Сбор материала осуществляют по мере выделения свежей порции мочи. Каждую порцию мочи обрабатывают 2%-ным раствором серной кислоты, затем – 5%-ным раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия. После чего мочу центрифугируют, а осадок нейтрализуют 1%-ным раствором лимонной кислоты. Содержащиеся в осадке микобактерии культивируют на питательной среде “Новая”. Способ позволяет повысить точность лабораторной диагностики путем снижения количественных потерь за счет щадящей обработки. 2 табл.

Способ выявления микобактерий туберкулеза в моче, включающий сбор материала, обработку его раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия, центрифугирование, нейтрализацию осадка с последующим культивированием содержащихся в нем микобактерий на питательной среде, отличающийся тем, что сбор материала осуществляют по мере выделения свежей порции мочи, каждую из которых обрабатывают 2%-ным раствором серной кислоты, а затем – 5%-ным раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия, при этом нейтрализацию осадка осуществляют 1%-ным раствором лимонной кислоты.