БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ - МАСЛО МОРОЗНИКА Российский патент 2003 года по МПК A61K35/78 A61P35/00 A61P3/00 

Изобретение относится к области фармакологии и касается биологически активных препаратов из растительного сырья, которые, с одной стороны, могут быть использованы в качестве биологически активной пищевой добавки как неспецифическое средство для повышения устойчивости организма к неблагоприятным воздействиям, профилактики заболеваемости и нормализации жизнедеятельности организма, а с другой стороны, могут быть использованы в качестве основы для получения лекарственных препаратов, в частности для лечения онкологических заболеваний.

Известно использование порошка из растения рода морозник для похудения (газета "Аргументы и факты", 2001 г., 27, с. 16).

Известно также, что в корневищах морозника содержатся гликозиды, используемые в медицине (БСЭ, 1974, т. 16, с. 579). Из корней и корневищ морозника выделяют алколоиды (SU 691065 А), сапогенины (US 3956491 А), аналгезирующие вешества (US 4012505 А) и вещества для лечения неоплазии (WO 8400005 А1), которые выделяют с помощью спирта или смеси воды и спирта.

Однако сердечные гликозиды морозника имеют свойство накапливаться в организме и вызывать токсический эффект (газета "Аргументы и факты", 2001 г. , 27, с. 16).

С другой стороны, было установлено, что в корневищах и корнях морозника содержится до 15% липидов.

Предложенный биологически активный препарат - масло морозника - является новым и не имеет аналогов.

Предложенный препарат содержит экстракт (вытяжку) из корней и корневищ растения рода Морозник (Helleborus), представляющий собой по меньшей мере сумму липидов, содержащуюся в указанных частях растения.

При этом указанный экстракт по меньшей мере содержит, мас.%: свободные жирные кислоты - 50-70, диольные липиды - до 2,5, эфиры стеринов - до 1,2, эфиры жирных кислот - до 3, триацилглицериды - до 7, углеводороды - до 10.

В качестве жирных кислот указанный экстракт содержит по меньшей мере линолевую, олеиновую, пальмитиновую и стеариновую, а в качестве эфиров жирных кислот - по меньшей мере метилпальмитат, этилпальмитат, метиллинолеат и этиллинолеат, в следующем соотношении, мас.%: линолевой кислоты - 30-55, олеиновой кислоты - 3-6, пальмитиновой кислоты - 3-7, стеариновой кислоты - 0,35-1,1, метилпальмитата - 0,002-0,006, этилпальмитата - 0,006-0,012, метиллинолеата - 0,5-0,93, этиллинолеата - 1,2-2,1.

Биологически активный препарат может дополнительно содержать растительное масло, при этом он содержит следующее соотношение компонентов, мас.%: указанного экстракта - 0,05-30, растительного масла - остальное.

Для осуществления литического действия на плазматические мембраны опухолевых клеток он содержит предпочтительно следующее соотношение компонентов, мас.%: указанного экстракта - 0,05-10,0, растительного масла - остальное.

Для наружного применения биологически активный препарат содержит предпочтительно следующее соотношение компонентов, мас.%: указанного экстракта - 3-10, растительного масла - остальное.

Биологически активный препарат в качестве добавки к пище содержит предпочтительно следующее соотношение компонентов, мас.%: указанного экстракта - 0,3-1,5, растительного масла - остальное.

Предложенный биологически активный препарат представляет собой вязкую жидкость желтовато-коричневого цвета, имеющую плотность 0,9-0,965, показатель преломления 1,45-1,48 и кислотное число 120-180.

Он получен из морозника кавказского (Helleborus caucasicus) путем обработки указанных измельченных корней и корневищ органическим растворителем, способным экстрагировать жиры, при постоянном перемешивании, с последующим настаиванием смеси указанных измельченных корней и корневищ с органическим растворителем, отделением и отбрасыванием осадка и получением конечного продукта после отгонки органического растворителя из надосадочной части.

При этом в качестве органического растворителя берут петролейный эфир.

В случае использования в качестве растворителя петролейного эфира, указанные корни и корневища и петролейный эфир берут в массовом соотношении 1: 1-4, обработку петролейным эфиром ведут в течение 1-3 часов, а настаивание - в течение 2-4 часов.

Для проведения качественного химического анализа состава полученного экстракта использовали тонкослойную хроматографию (ТСХ), препаративно-тонкослойную хроматографию, с последующим анализом на газовых хроматографах.

Был установлен следующий химический состав масла морозника.

Общий состав, мас.%:
Cвободные жирные кислоты - 50-70
Диольные липиды - 0,7-1,8
Эфиры стеринов - 0,5-1,0
Эфиры жирных кислот - 2-3
Триацилглицерины - 5-7
Состав фракции свободных жирных кислот, мас.%:
Линолевой - 65-75
Олеиновой - 6-8
Пальмитиновой - 6-9
Стеариновой - 0,7-1,5
Состав фракции эфиров жирных кислот, мас.%:
Метилпальмитат - 1-2
Этилпальмитат - 3-4
Метиллинолеат - 25-31
Этиллинолеат - 60-70
Установлено также, что в предлагаемом препарате содержится 1,2-(2,3-)-диацилглицерид, производные этиленгликоля, бутандиола-2,3, бутандиола-1,2, пропандиола-1,3.

Гликозиды не обнаружены.

Сущность изобретения поясняется следующим примером.

Брали воздушно сухие, измельченные корни и корневища морозника кавказского (Helleborus caucasicus), помещали их в экстрактор и заливали петролейным эфиром в массовом соотношении растительное сырье:эфир - 1:2. Проводили экстракцию конечного продукта при перемешивании измельченного сырья с петролейным эфиром в течение 2 часов. Затем смесь настаивали в течение 3 часов, после чего надосадочную жидкость фильтровали и собирали. Осадок отбрасывали. Затем петролейный эфир отгоняли из надосадочной жидкости полностью. Отгонку производили с помощью ротационного испарителя, представляющего собой колбу, соединенную с холодильником и снабженную нагревателем. После отгонки петролейного эфира полученный экстракт выдерживали сутки без перемешивания. Весь процесс получения масла вели при комнатной температуре.

Полученный экстракт представлял собой вязкую жидкость желтовато-коричневого цвета, имеющую плотность 0,96, показатель преломления 1,46 и кислотное число 160.

Для проведения качественного химического анализа состава полученного экстракта использовали тонкослойную хроматографию (ТСХ), препаративно-тонкослойную хроматографию, с последующим анализом на газовых хроматографах.

Был установлен следующий химический состав масла морозника.

Общий состав, мас.%:
Свободные жирные кислоты - 65
Диольные липиды - 1,6
Эфиры стеринов - 1,0
Эфиры жирных кислот - 3
Триацилглицерины - 6
Неидентифицированный остаток - Остальное
Состав фракции свободных жирных кислот, мас.%:
Линолевой - 72
Олеиновой - 8
Пальмитиновой - 9
Стеариновой - 1,0
Неидентифицированные свободные жирные кислоты - Остальное
Состав фракции эфиров жирных кислот, мас.%:
Метилпальмитат - 1,8
Этилпальмитат - 3,2
Метиллинолеат - 27
Этиллинолеат - 68
Исследовали литическое действие на плазматические мембраны опухолевых клеток предлагаемого препарата, содержащего 20 мас.% указанного экстракта и 80 мас.% растительного (оливкового) масла. Брали антисептические клетки следующих штаммов: опухоли яичника крысы (ОЯ), асцитного рака Эрлиха (АРЭ) и "саркомы - 37" мышей, к которым добавляли смесь 20% экстракта с 80% оливкового масла.

Характерные явления лизиса плазматической мембраны обнаруживали уже после 5-минутной инкубации опухолевых клеток с 20%-ным маслом морозника. Эти явления представляли собой образование микропузырьков и вздутий на периферии клеток, набухание и разреженность цитоплазмы, увеличение подвижности цитоплазматических включений. В дальнейшем наблюдали генерализованный отек опухолевых клеток и появление голых ядер, что свидетельствует о лизисе плазматической мембраны.

При добавлении к опухолевым клеткам указанных штаммов препарата, содержащего 0,05% масла морозника и 99,95% оливкового масла, существенно нарушалась транспортная функция плазматической мембраны, что подтверждается тем, что после снятия воздействия 0,05%-ным препаратом внутриклеточное содержание ионов K⁺ восстанавливалось в течение 60 минут только до 1/2 исходного уровня, после воздействия 0,1%-ным препаратом внутриклеточное содержание ионов K⁺ восстанавливалось в течение 60 минут только до 1/4 исходного уровня, а после воздействия 0,2%-ным препаратом внутриклеточное содержание ионов К⁺ не восстанавливалось. При этом было установлено, что нормальные (не опухолевые, а здоровые) клетки остаются неповрежденными. Таким образом, предлагаемый препарат действует избирательно.

Исследовали влияние масла морозника на чувствительность опухолевых клеток к обработке рентгеновским облучением.

К клеткам асцитной опухоли С-37 добавляли масло морозника концентрации 0,5% и облучали их рентгеновским излучением в дозе 3000Р. Контролем служили клетки, не обработанные маслом морозника и облученные рентгеновским излучением в такой же дозе. Затем опытные и контрольные клетки вводили экспериментальным животным (лабораторные мыши, крысы) и подсчитывали количество привитых опухолей в опыте и контроле.

В том случае, когда прививали опухолевые клетки, обработанные маслом морозника и рентгеновским облучением, опухоли развились только у 20% животных, в то время как в контроле опухоли развились у 80% привитых животных.

В аналогичном опыте с клетками асцитного рака Эрлиха и в контроле, и в опыте опухоли развились у одного и того же количества животных. Однако наблюдение за последующим развитием (нарастанием объема жидкости и массы осцитных клеток) опухолей, полученных из клеток, обработанных маслом морозника и рентгеновским облучением (опыт), и опухолей, полученных из клеток, обработанных только рентгеновским облучением (контроль), показало, что развитие опытных опухолей оказалось достоверно замедленным по сравнению с контрольными опухолями. Таким образом, масло морозника достоверно повышает чувствительность опухолевых клеток к рентгеновскому облучению.

Было изучено действие различных разведений масла морозника в растительном масле сначала на организм экспериментальных животных (беспородные лабораторные мыши и крысы), затем на организм человека различных возрастных групп. Было установлено, что для общего оздоровления организма наиболее оптимальной является 1%-ная концентрация в дозе по меньшей мере 1 г в сутки.

После приема масла морозника в течение 1 месяца качественное улучшение самочувствия отметили 70% принимавших его пациентов. Было отмечено общее улучшение тонуса организма, снижение лишнего веса, нормализация функций желудочно-кишечного тракта, артериального давления. Отмечено также замедление развития некоторых воспалительных процессов.

Предлагаемый препарат, содержащий 0,3-1,5% экстракта, остальное до 100 растительное масло, например оливковое или подсолнечное, может быть использован как добавка к пище, предназначенная для профилактики заболеваний, связанных с нарушением обмена веществ, и в комплексной терапии опухолевых заболеваний.

5%-ный масляный раствор масла морозника может быть использован для наружного применения, в том числе и при лечении онкологических заболеваний.

Отрицательных последствий, связанных с накоплением в организме сердечных гликозидов, не отмечено в связи с полным отсутствием последних в предлагаемом биологически активном препарате.

Биологически активный препарат содержит экстракт из корней и корневищ растения рода Морозник (Helleborus), представляет собой по меньшей мере сумму липидов из указанных частей растения и по меньшей мере содержит, мас.%: свободные жирные кислоты 50-70, диольные липиды до 2,5, эфиры стеаринов до 1,2, эфиры жирных кислот до 3, триацилглицериды до 7, углеводороды до 10. Изобретение позволяет получить средство, обладающее в т.ч. противоопухолевым действием. 12 з.п.ф-лы.

1. Биологически активный препарат, содержащий экстракт из корней и корневищ растения рода Морозник (Helleborus), отличающийся тем, что экстракт по меньшей мере содержит, мас.%: свободные жирные кислоты - 50-70, диольные липиды - до 2,5, эфиры стеринов - до 1,2, эфиры жирных кислот - до 3, триацилглицериды - до 7, углеводороды - до 10. 2. Биологически активный препарат по п.1, отличающийся тем, что указанный экстракт содержит в качестве жирных кислот по меньшей мере линолевую, олеиновую, пальмитиновую и стеариновую, а в качестве эфиров жирных кислот - по меньшей мере метиллальмитат, этилпальмитат, метиллинолеат и этиллинолеат. 3. Биологически активный препарат по п.2, отличающийся тем, что указанный экстракт содержит, мас %: линолевой кислоты 30-55, олеиновой кислоты 3-6, пальмитиновой кислоты 3-7, стеариновой кислоты 0,35-1,1, метилпальмитата 0,002-0,006, этилпальмитата 0,006-0,012, метиллинолеата 0,5-0,93, этиллинолеата 1,2-2,1. 4. Биологически активный препарат по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит растительное масло. 5. Биологически активный препарат по п.4, отличающийся тем, что он содержит следующее соотношение компонентов, мас.%: указанного экстракта 0,3-30, растительного масла - остальное. 6. Биологически активный препарат по п.5, отличающийся тем, что для осуществления литического действия на плазматические мембраны опухолевых клеток он содержит предпочтительно следующее соотношение компонентов, мас.%: указанного экстракта 15-30, растительного масла - остальное. 7. Биологически активный препарат по п.5, отличающийся тем, что для наружного применения он содержит предпочтительно следующее соотношение компонентов, мас.%: указанного экстракта 3-10, растительного масла - остальное. 8. Биологически активный препарат по п.5, отличающийся тем, что для добавки к пище он содержит предпочтительно следующее соотношение компонентов, мас.%: указанного экстракта 0,3-1,5, растительного масла - остальное. 9. Биологически активный препарат по п. 1, отличающийся тем, что он представляет собой вязкую жидкость желтовато-коричневого цвета, имеющую плотность 0,9-0,965, показатель преломления 1,45-1,48 и кислотное число 120-180. 10. Биологически активный препарат по п.1, отличающийся тем, что он получен из Морозника кавказского (Helleborus caucasicus). 11. Биологически активный препарат по п.1, отличающийся тем, что он получен путем обработки указанных корней и корневищ, взятых в измельченном виде, органическим растворителем при постоянном перемешивании, с последующим настаиванием, отделением и отбрасыванием осадка и отгонкой органического растворителя. 12. Биологически активный препарат по п.11, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя берут, например, хлороформ, или петролейный эфир, или четыреххлористый углерод. 13. Биологически активный препарат по п.11, отличающийся тем, что указанные корни и корневища и петролейный эфир берут в массовом соотношении 1 : 1 - 4, обработку петролейным эфиром ведут в течение 1-3 ч, а настаивание в течение 2-4 ч.