СПОСОБ КОМПЛЕКСНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ Российский патент 2003 года по МПК A61K39/07 A61K39/40 A61P31/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам профилактики и лечения инфекционных болезней, и может быть использовано для экстренной комплексной профилактики сибирской язвы по эпидпоказаниям в эпидочагах.

Известен традиционный способ экстренной профилактики сибирской язвы в эпидочаге антибиотиком доксициклином (в России) и ципрофлоксацином (в США), либо доксициклином (в странах Европы и США). Схема применения каждого из них предусматривает пероральное их использование в заданной курсовой дозе при угрозе заражения (Инструкция и методические указания по лабораторной диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей. М., 1982; Руководство по защите от химического и биологического оружия, Fort Detrick, 3 издание, 1998).

Недостатком существующих схем являются относительно невысокий уровень защиты в ранние (1...5 сутки) сроки развития сибиреязвенной инфекции и отсутствие защиты в отдаленные (6 и более недель) сроки.

Первое обстоятельство обусловлено тем, что превентивное лечение обеспечивает лишь уровень защиты до 70% от сравнительно небольших заражающих доз: 10. . . 30 ЛД50 и не обеспечивает защиты от более высоких доз патогена (свыше 50 ЛД₅₀) в случаях массивного заражения капсульными клетками (более вирулентными, чем споры) при разделке туш или употреблении мяса зараженных животных (Онищенко Г.Г., Маринин Л.И. и др. Микробиологическая диагностика сибирской язвы. М. , 1999), либо аэрогенном заражении спорами работников кожевеннообрабатывающих предприятий, или при возможном диверсионном акте биотеррористов в местах скопления людей (Siegrist D.W. The therent of biological attack: why concern now? // Emerg. Inf. Dis.-1999.-Vol 5, N 4- p. 505-508).

Второе обстоятельство связано с тем, что после прекращения 5-дневного курса экстренной профилактики антибиотиком, т.н. "дремлющие" в лимфосистеме непроросшие споры прорастают и обуславливают развитие инфекции в отдаленные сроки при ослаблении организма, о чем свидетельствовали неоднократные случаи заболевания людей через 6 недель после первичного инфицирования и превентивного лечения антибиотиком (T.V. Inglesby, M.D., D.A. Henderson, M.D., J. G. Barlett et al. Anthrax us a Biological Weapon//American Medical Assotiation, Jama, May, 12, 1999.- Vol. 281, N 18, р. 143).

Известен способ специфической профилактики сибирской язвы, заключающийся в формировании иммунитета посредством вакцинации людей живой, или комбинированной, либо химической сибиреязвенными вакцинами, позволяющий соответственно после двукратной иммунизации через 30 суток (живая вакцина), либо после однократной вакцинации за 7 суток (комбинированная вакцина) или после 3-кратной иммунизации за 2 месяца (химическая вакцина) до возможного заражения сформировать напряженный иммунитет и допустить персонал в очаг заражения (патент РФ 2115433, 1998). Однако указанным схемам известного способа формирования защиты от сибирской язвы присущи также два недостатка. Один из них заключается в "пробое" иммунитета в первые 14 суток (для живой) и в 1... 5 сутки (для комбинированной и химической) вакцин вследствие слабого формирования антибактериального и антитоксического иммунитета. Второй недостаток связан с высокой чувствительностью спорового компонента вакцин к антибиотикам, что в случае сочетанного их применения с антибактериальными препаратами отрицательно сказывается на формировании иммунитета в более поздние сроки. Кроме того, для химической вакцины характерно быстрое угасание антитоксического иммунитета.

Задачей изобретения является создание гарантированной (100%-ной) и длительно сохраняющейся превентивной защиты от заражения высокими дозами патогена (100 ЛД₅₀) с первых суток сочетанного применения комплекса средств специфической и неспецифической профилактики сибирской язвы.

Поставленная задача решается благодаря тому, что экстренная профилактика антибактериальным препаратом дополнительно включает сочетанное применение иммуномодулятора - ликопида или полиоксидония и антибиотикорезистентной комбинированной сибиреязвенной вакцины как в момент заражения, так и через 6 часов после инфицирования.

Сопоставляя уровень защищенности при подкожном и аэрогенном заражении вирулентными культурами сибиреязвенного микроба с динамикой клеточных и гуморальных показателей специфической резистентности на фоне антибиотикопрофилактики, можно экстраполировать, что лечебно-профилактический комплекс: антибиотик + иммуномодулятор + антибиотикоустойчивая комбинированная вакцина купирует развитие сибиреязвенной инфекции как в первые 6 суток за счет повышения лечебно-профилактической эффективности антибиотика и ускорения формирования вакциной специфической резистентности, так и в последующие сроки (более чем на 6 недель) за счет формирования и сохранения долговременного напряженного противосибиреязвенного антибактериального и антитоксического иммунитета.

Способ комплексной профилактики поражений сибирской язвой осуществляется следующим образом. В течение первых 6 часов после заражения находившемуся в эпидочаге контингенту вводится однократно подкожно 1 человеко-доза антибиотикоустойчивой комбинированной вакцины, содержащей (50±10)•10⁶ живых спор вакцинного штамма СТИ-ПР-4 и 35±5 ИД₅₀ протективного антигена (по ФС 42-32-98-96). Одновременно осуществляется прием доксициклина или пефлоксацина внутрь 2 раза в сутки в течение 5 дней и применение ликопида или полиоксидония по 1 суточной дозе ежедневно в течение 5 дней.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.

Пример 1. Влияние средств экстренной профилактики на напряженность поствакцинального иммунитета
Антибиотикорезистентную комбинированную вакцину получали по регламенту производства сухой комбинированной, живой и химической вакцин НИИМ МО РФ 862-99 с включением в ее состав в качестве спорового компонента штамма СТИ-ПР-4 (патент РФ 2173342). Для определения напряженности поствакцинального иммунитета животных (кроликов) иммунизировали однократно подкожно комбинированной вакциной в дозе 100±20 млн. живых спор и 35±5 ИД₅₀ протективного антигена и прототипными вакцинами: комбинированной (СТИ-1 в дозе 100±20 млн. живых спор и 35±5 ИД₅₀), живой (СТИ-1) в дозе 100 млн. живых спор и химической (в дозе 80 ИД₅₀). Антибиотикопрофилактику пефлоксацином мезилатом осуществляли 2 раза в день в течение 5 суток в дозе, эквивалентной для человека дозе.

Заражение животных проводили вирулентным тест-штаммом 4-7 подкожно через 21 сутки в дозе 100 ЛД₅₀ согласно требования ФС на комбинированную вакцину (ФС 42-3298-96). Напряженность иммунитета определяли по проценту выживших животных и показателю превентивных свойств сыворотки крови (Бургасов П.Р. и др.//Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол.-1972.- 6, -с.142-147). Результаты приведены в таблице 1. Анализ данных, представленных в таблице 1, показывает, что на фоне применения средств экстренной профилактики живая вакцина формирует недостаточно напряженный иммунитет в течение всех 3-х месяцев наблюдения: уровень зашиты составил 0...30%. Защитный эффект от химической вакцины в отдаленные сроки (3 месяца) угасает и снижается в 7-9 раз. Высокая эффективность комбинированной вакцины (75...100% по показателю выживших животных) сохраняется как в ранние (на 7...21 сутки), так и в отдаленные (90-е сутки) сроки, причем антибиотикорезистентная комбинированная вакцина по сравнению с аналогичной вакциной, содержащей чувствительный к антибиотикам споровый компонент, обеспечивает более высокий уровень защиты. Повышение степени защиты составляло: 30% по косвенному показателю превентивных свойств сыворотки (ПСС) и 20% по показателю выживаемости животных.

Пример 2. Эффект синергизма сочетанного применения ликопида (или полиоксидония) и комбинированной вакцины в отношении фагоцитарной активности нейтрофилов у кроликов.

Для выявления синергизма в ранние (1...5 сутки) сроки сочетанного применения иммуностимулятора - ликопида или полиоксидония (ГНЦ - институт иммунологии МЗ РФ, Москва) (в дозе, эквивалентной дозе для человека) и комбинированной вакцины (в человеко-дозе) в пробах крови, взятой у кроликов на 1, 2, 3, 5 и 21 сутки, определяли содержание активных нейтрофилов и их поглотительную (в отношении латекса) способность (индекс фагоцитоза) (Иммунологические методы/Под ред. Г. Фримеля. - М., 1987). Как следует из полученных данных, значения показателя фагоцитарной активности нейтрофилов в 1. . .5 сутки оказались выше у варианта с сочетанным однократным применением комбинированной вакцины и ликопида. Так, на 3 сутки абсолютное содержание активных нейтрофилов повысилось с 68 до 76%, а индекс фагоцитоза уже на вторые сутки наблюдения увеличился с 10 усл. ед. до 19,2 усл. ед. соответственно.

Пример 3. Эффект синергизма сочетанного действия ликопида или полиоксидония и антибиотика в отношении сибиреязвенной инфекции у кроликов.

В экспериментах на кроликах продемонстрирован положительный эффект сочетанного применения ликопида или полиоксидония в дозе, эквивалентной суточной дозе для человека, с пефлоксацином в дозе, эквивалентной суточной дозе для человека, при проведении курса экстренной профилактики.

Результаты исследований представлены в таблице 2. Как следует из приведенных в таблице 2 данных, ликопид или полиоксидоний, используемые самостоятельно не повышали защиту от сибирской язвы, пефлоксацин защищал 60% животных, леченных через 3 часа, и 50%, леченных через 24 часа после заражения массивной дозой возбудителя сибирской язвы (100 ЛД₅₀). В то же время при профилактике и лечении сибиреязвенной инфекции сочетанным применением пефлоксацина с ликопидом или полиоксидонием получен 90%-ный и 80%-ный защитный эффект. Таким образом, эффективность антибиотика благодаря ликопиду повысилась на 30%. Механизм повышения связан с повышением активности клеток ретикуло-эндотелиальной системы (РЭС), которые локализуют инфекцию в первичные комплексы, что создает условия для эффективного лечения.

Пример 4. Эффективность заявляемого способа превентивной защиты в сравнении с традиционным способом в ранние сроки (1...5 сутки).

Сравнительные данные, иллюстрирующие уровень защитного эффекта при применении заявляемого способа и традиционного в ранние (1...5 сутки) сроки после начала экстренной профилактики, представлены в таблице 3.

Как видно из приведенных результатов, проведение экстренной профилактики (традиционный способ превентивной защиты) в заданных условиях обеспечивает на 1. . . 5 сутки уровень защиты, равный 50...70%. В то же время заявляемый способ, включающий сочетанное применение антибиотикорезистентной комбинированной вакцины, антибиотика и ликопида (полиоксидония), позволяет получить в те же сроки 100%-ный уровень защиты при заражении высокой дозой патогена (100 ЛД₅₀).

Пример 5. Сохраняемость защитного эффекта у заявляемого способа превентивной защиты по сравнению с традиционным в отдаленные сроки после окончания курса профилактики.

Преимущества в эффективности заявляемого способа превентивной защиты в сравнении с традиционным в отдаленные сроки после окончания курса экстренной профилактики демонстрируются результатами, приведенными в таблице 4. Через 2 недели и 1,5 месяца после завершения курса антибиотикопрофилактики традиционным способом (в том числе и антибиотиком пролонгированного действия) повторное заражение животных (кроликов и обезьян) дозой микробов, равной 100 ЛД₅₀, привело к 100%-ной гибели животных. В данный отрезок времени остаточные концентрации антибиактериального средства практически неэффективны и не сформировался постинфекционный иммунитет, и объекты исследования подвержены риску повторного заболевания. В то же время в группе инфицированных животных, для превентивного лечения которых применяли заявляемый способ, выживаемость животных в эти сроки составила 90...100%. Следовательно, объекты этой группы защищены в достаточно высокой степени от реинфицирования возбудителем сибирской язвы благодаря формированию напряженного иммунитета, индуцированного специфическим компонентом заявляемого комплекса средств превентивной защиты.

Изобретение относится к медицине, к инфекционным болезням и может быть использовано для комплексной профилактики сибирской язвы. Профилактику осуществляют по следующей схеме: в первые 6 часов после заражения вводят однократно подкожно в одной человеко-дозе антибиотикорезистентную комбинированную сибиреязвенную вакцину, в течение 5 дней вводят иммуномодулятор и антибиотик широкого спектра действия. Данное изобретение позволяет создать длительно сохраняющуюся превентивную защиту от заражения высокими дозами патогена (100 ЛД₅₀) с первых суток сочетанного применения комплекса средств специфической и неспецифической профилактики сибирской язвы. 4 табл.

Способ комплексной профилактики сибирской язвы, включающий подкожное введение антибиотико-резистентной комбинированной сибиреязвенной вакцины в сочетании с антибиотиком и иммуномодулятором, причем профилактику осуществляют по следующей схеме: в первые 6 часов после заражения вводят однократно подкожно в одной человеко-дозе антибиотико-резистентную комбинированную сибиреязвенную вакцину, в течение 5 дней вводят иммуномодулятор и антибиотик широкого спектра действия.