ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ Российский патент 2003 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/225 

Описание патента на изобретение RU2216587C2

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической, медицинской и ветеринарной промышленности, в частности при производстве лечебных биопрепаратов.

Наиболее близкой к заявляемой по технической сущности и достигаемому результату, выбранной в качестве прототипа, является питательная среда МРС-1 (среда Rogosa) (ФС 42-252 ВС-89 "Лактобактерин сухой"). Среда содержит глюкозу, автолизат пекарских дрожжей, фосфат калия двузамещенный, цистеин солянокислый, сульфат марганца, сульфат магния, раствор пептона с твином-80, гидролизованное молоко по Богданову и воду дистиллированную.

Недостатком известной среды являются: высокая стоимость из-за наличия дорогостоящего импортного вещества - цистеина солянокислого, нестандартность из-за наличия в составе среды в качестве источника азота гидролизованного молока по Богданову, сложность технологии приготовления среды из-за операции суспендирования в горячей воде пептона перед внесением в среду.

Задача, решаемая предлагаемым изобретением - совершенствование питательной среды.

Технический результат от использования изобретения заключается в повышении стандартности и технологичности среды и снижении ее стоимости.

Указанный результат достигается тем, что питательная среда для выращивания лактобактерий, содержащая источник азота, глюкозу, автолизат пекарских дрожжей, фосфат калия двузамещенный, сульфат марганца, сулфат магния, воду дистиллированную, дополнительно содержит ацетат натрия и цитрат аммония, а в качестве источника азота - панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% при следующем соотношении компонентов, г/л:
Глюкоза - 15,0-25,0
Панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% - 10,0-20,0
Сульфат марганца - 0,02-0,03
Сульфат магния - 0,05-0,15
Автолизат пекарских дрожжей - 15,0-97,5
Фосфат калия двузамещенный - 0,5-1,5
Ацетат натрия - 2,0-3,0
Цитрат аммония - 0,5-1,5
Вода дистиллированная - до 1 л
Питательную среду готовят следующим образом.

Для приготовления используют сульфат марганца по ГОСТ 435-77, сульфат магния по ГОСТ 4523-77, фосфат калия двузамещенный по ГОСТ 2493-75, ацетат натрия по ГОСТ 199-78, цитрат аммония по ТУ 6-09-01766-90. Очищенную воду готовят по ФС 42-2619-97.

Для приготовления панкреатического гидролизата казеина замороженную поджелудочную железу крупного рогатого скота оттаивают, измельчают в мясорубке и помещают в металлические бачки. Казеин, соответствующий ГОСТ 17626-81, взвешивают на весах и загружают в реактор, заливают питьевой водой при температуре (42±1)oС. Смесь оставляют на 2 ч для набухания. Затем при включенной мешалке дробно вносят раствор натрия гидроокиси 20%-ный до рН (7,8-8,0).

В реактор с подготовленным казеином добавляют промолотую поджелудочную железу, включают мешалку, перемешивают, 20%-ным раствором натрия гидроокиси коррегируют рН до (7,8-8,0), добавляют хлороформ. Реактор закрывают и проводят гидролиз при температуре (42±1)oС в течении 5-7 суток с периодическим перемешиванием автоматической мешалкой (каждые 2 ч по 3-5 мин), поддерживая в гидролизате первоначально установленное значение рН.

Процесс гидролиза контролируют по нарастанию аминного азота в первые, третьи, пятые сутки. Об окончании процесса гидролиза судят по прекращению нарастания аминного азота. В готовом гидролизате содержание аминного азота - (0,48-0,60)%, пептидов - (1,8-2,4)%, триптофана - (110-120) мг%, хлоридов - (0,18-0,24)%. Определение всех показателей проводят по "Методическим указаниям по физико-химическому контролю питательных сред" и ФС 42-3874-99 "Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов".

Для приготовления автолизата пекарских дрожжей дрожжи пекарские измельчают на куски, заливают теплой питьевой водой, выдерживают при температуре 46±2oС в течении 22±2 ч. Затем смесь кипятят и отделяют осадок от раствора. Содержание аминного азота 140 мг%.

Панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% в количестве 0,1-0,2 л соединяют с автолизатом пекарских дрожжей (0,1-0,65 л), перемешивают и добавляют остальные компоненты: глюкозу в количестве 0,015-0,025 кг; сульфат марганца - 0,02-0,03 г; сульфат магния - 0,05-0,15 г; фосфат калия двузамещенный - 0,5-1,5 г; ацетат натрия - 2,0-3,0 г; цитрат аммония - 0,5-1,5 г и доводят объем раствора до 1 л очищенной водой. рН раствора коррегируют 20% раствором натрия гидроокиси до 7,1±0,1. Смесь перемешивают.

Выращивают лактобактерии в предлагаемой питательной среде следующим образом.

В начале выращивают штамм L. plantarum (8P-A3) на среде Мозэра-Рогоза-Шарпа в течение 16±2 ч при 37±1oС. Полученный инокулят засевают в предлагаемую среду в количестве 10% от объема среды. Выращивают лактобактерии в течение 16±2 ч в термостате при 37±1oС.

Показатели среды определяли по ФС 42-3874-99 "Физико-химические, химические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов".

Рост культуры лактобактерии определяли по показателям оптической плотности и содержанию живых микробных клеток.

Пример 1.

0,1 л панкреатическогo гидролизата казеина с аминным азотом 350 мг% соединяют с 0,65 л автолизата пекарских дрожжей, перемешивают и добавляют глюкозу 0,015 кг, сульфат марганца 0,02 г, сульфат магния 0,15 г, фосфат калия двузамещенный 0,5 г, ацетат натрия 2,0 г, цитрат аммония 0,5 г и доводят объем раствора до 1 л очищенной водой. рН раствора коррегируют 20% раствором натрия гидроксида до 7,1 ±0,1. Смесь перемешивают.

Пример 2 проведен аналогично примеру 1. Данные сведены в таблицу.

Уменьшение количеств глюкозы менее 0,015 кг/л, так же как и увеличение более 0,025 кг/л, приводит к снижению роста культуры.

Уменьшение количеств панкреатического гидролизата казеина менее 0,1/л и автолизата пекарских дрожжей менее 0,10 л/л снижает ростовые свойства среды, а увеличение их количеств более 0,40 л/л и 0,65 л/л соответственно технологически нецелесообразно.

Уменьшение количеств всех солей, кроме ацетата натрия, входящих в состав питательной среды, ниже их нижних пределов приводит к снижению ростовых свойств среды, а увеличение выше верхних пределов технологически нецелесообразно.

Уменьшение количества ацетата натрия менее 2,0 г/л, так же как и увеличение более 3,0 г/л, приводит к нарушению буферных свойств среды.

Предлагаемая питательная среда для выращивания лактобактерий имеет следующие преимущества по сравнению с прототипом:
- улучшаются ростовые свойства среды;
- при сохранении достаточно высокого количества живых микробных клеток снижается стоимость среды за счет исключения импортного химического реактива.

Похожие патенты RU2216587C2

название год авторы номер документа
СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СТАФИЛОКОККОВОГО БАКТЕРИОФАГА 2001
  • Конькова Н.К.
  • Горлова И.С.
  • Аникина Т.А.
  • Рязанова С.Х.
  • Солдатова М.В.
RU2183673C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МЯСНЫХ ПРОДУКТОВ 2004
  • Костенко Юрий Григорьевич
  • Минаев Михаил Юрьевич
  • Солодовникова Галина Ивановна
  • Самойленко Владимир Александрович
RU2275423C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ГИДРОЛИЗАТА ИЗ СВЕЖЕЙ БЕЛОКОЧАННОЙ КАПУСТЫ И ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ НА ЕГО ОСНОВЕ 2009
  • Тимченко Людмила Дмитриевна
  • Пенькова Надежда Ивановна
  • Катунина Людмила Семеновна
  • Вакулин Валерий Николаевич
  • Таран Татьяна Викторовна
RU2415923C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИКОВ 2002
  • Бедрин А.К.
  • Калачиков В.А.
  • Кульчицкая М.А.
  • Николаев В.А.
  • Потемкина Е.В.
RU2205650C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИФИДО- ИЛИ ЛАКТОБАКТЕРИЙ 2004
  • Марьин Виктор Анатольевич
  • Райдна Евгений Иво-Свенович
RU2287572C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИБРИНОГЕНА 1999
  • Крайнова Т.А.
  • Пискарева Ю.К.
  • Анастасиев В.В.
RU2158130C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ 2001
  • Балаклеец В.С.
  • Алиева Х.М.
RU2213779C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ ОСНОВЫ И ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА YERSINIA И VIBRIO 2007
  • Кузьмиченко Инна Александровна
  • Громова Ольга Викторовна
  • Киреев Михаил Николаевич
  • Плотников Олег Петрович
  • Грачева Ирина Васильевна
  • Виноградова Наталья Александровна
  • Солодовников Николай Сергеевич
  • Червякова Надежда Сергеевна
  • Нижегородцев Сергей Анатольевич
  • Антонычева Марина Владимировна
RU2360962C2
СПОСОБ СЕЛЕКТИВНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ АУТОШТАММОВ LACTOBACILLUS SPP. ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА 2018
  • Мавзютов Айрат Радикович
  • Цветкова Анжела Владимировна
  • Маркушева Татьяна Вячеславовна
  • Денисов Дмитрий Евгеньевич
  • Баймиев Андрей Ханифович
  • Хлопова Ксения Валерьевна
  • Динова Регина Камилевна
RU2675315C1
Питательная среда для производственного культивирования лактобактерий штамма @ @ 8- @ -3 1982
  • Ефимова Нина Павловна
  • Красик Лия Львовна
  • Несчисляев Валерий Александрович
SU1102810A1

Иллюстрации к изобретению RU 2 216 587 C2

Реферат патента 2003 года ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической, медицинской и ветеринарной промышленности, в частности при производстве лечебных бакпрепаратов. Питательная среда для выращивания лактобактерий содержит следующие компоненты, г/л: глюкоза 15,0-25,0; панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% 10,0-20,0, сульфат марганца 0,02-0,03, сульфат магния 0,05-0,15, автолизат пекарских дрожжей 15,0-97,5, фосфат калия двузамещенный 0,5-1,5, ацетат натрия 2,0-3,0, цитрат аммония 0,5-1,5, вода дистиллированная до 1 л. Изобретение обеспечивает повышение стандартности и технологичности среды и снижение ее стоимости. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 216 587 C2

Питательная среда для выращивания лактобактерий, содержащая источник азота, глюкозу, автолизат пекарских дрожжей, сульфаты марганца и магния, фосфат калия двузамещенный, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит ацетат натрия и цитрат аммония, а в качестве источника азота - панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% при следующем соотношении компонентов, г/л:
Глюкоза - 15,0-25,0
Панкреатический гидролизат казеина с аминным азотом 350 мг% - 10,0-20,0
Сульфат марганца - 0,02-0,03
Сульфат магния - 0,05-0,15
Автолизат пекарских дрожжей - 15,0-97,5
Фосфат калия двузамещенный - 0,5-1,5
Ацетат натрия - 2,0-3,0
Цитрат аммония - 0,5-1,5
Вода дистиллированная - До 1 л

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2003 года RU2216587C2

Устройство для усиления микрофонного тока с применением самоиндукции 1920
  • Шенфер К.И.
SU42A1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПАНКРЕАТИЧЕСКОГО ГИДРОЛИЗАТА КАЗЕИНА 1991
  • Вашурин О.А.
  • Якшина Т.В.
  • Краснова С.П.
  • Самойленко В.А.
  • Сигаева Н.Н.
  • Рахимов А.А.
  • Артюхин В.И.
RU2027754C1
Питательная среда для выделения лактобацилл 1987
  • Тюрин Михаил Владимирович
  • Шендеров Борис Аркадьевич
SU1479517A1
ТЕЛЯШЕВСКАЯ Л.Я
Белковые гидролизаты
- М., 2000, с.170-171.

RU 2 216 587 C2

Авторы

Конькова Н.К.

Горлова И.С.

Голубева Н.А.

Даты

2003-11-20Публикация

2001-07-25Подача