Питательная среда для производственного культивирования лактобактерий штамма @ @ 8- @ -3 Советский патент 1984 года по МПК C12N1/20 C12R1/25 

Изобретение относится к микробиологической промьштенности и может быть использовано для производства лактобактерина.

Известно несколько питательных сред для производственного культивирования лактобактерий штамма Lactobacterium plantarum 8-РА-З.

Наиболее близкой к предлагаемой является содовая питательная среда для производственного культивирования лактобактерий штамма Lactobacte rium plabtarum 8-РА-З, содержащая Б качестве источников углерода и азота гидролизат молока, дрожжевой автолизат, экстракт ржаного солода, печеночный экстракт, пептон, глюкоз цистеин солянокислый, цитрат аммони минеральные соли: марганец сернокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый двузамещенный, а также фолиевую кислоту, твин-80 и воду пр следующем соотношении компонентов, г/л:

Гидролизат молока 250 мл Дрожжевой автолизат 75 мл Экстракт солода

ржаного500 мл

Печеночный экстракт . 50 мл Пептон5

Цистеин солянокислый 0,1 Марганец сернокислый 0,025 Магний сернокислый О,1 Калий фосфорнокислый двухзамещенный1

Цитрат амнония1

Ацетат натрия2,5

Фолиевая кислота 0,001 Глюкоза10

Твин-800,5

Желатина15

Вода дистиллрфовапная Остальное

Содержание аминного азота в сред составляет 100-130 мг% 1.

Недостатком среды является то, что для приготовления ее используют дефицитное пищевое сырье: молоко натуральное, печень говяжью, дрожжи пищевые, солод ржаной.

Эта среда не всегда обеспечивает необходимую концентрацию лшвых лактбактерий (выживаемость лактобактерий) в 1 мл среды для выпуска препарата с максимальным сроком годности (12 мес). Концентрация живых лактобактерий (выживаемость лактобактерий) штамма LacLobacterium plantarum на солодовой среде после

10 ч культивирования в реакторе достигает 8 ,0-1 ,-0-млрд ,кл/мл,. После лиофильной сушки количество живых лактобактерий в готовом препарате составляет 3,5-1,0 млрд в 1 дозе. Срок годности препарата зависит от количества живых лактобактерий в 1 дозе. При содержании 4,0 млрд и выше устанавливается максимальный выше у стая, вливается максимат ьный срок годности - 1 год, средний срок го цности сухого препарата лактобактерий 7,8 - 0,9 мес.

Цель изобретения - увеличение срока годности сухого препарата лактобактер1- Й, а также удешевление среды.

Поставленная цель достигается тем, что-питательная среда для производст е11ного культивирования лактобактерий штамма Lactoljacterium plantarum 8-РА-З, содержа1Л,ая в 1сачестве источников углерода и азота глюкозу, цистеин солянокислый, ацетат натрия и цитрат аммония, минеральные соли: марганец сернокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый двузамещенный, а также тв1ш-80 и воду, в качестве источника азота дополнител1)Но содержит гидролизат соевого шрота с содержанием амииного азота 120150 Mi-% при следующем соотношении компонентов, г/л:

10,0-25,0

Глюкоза Цистеин солянокислый 0,1-0,25

Цитрат аммония Ацетат натрия Магний сернокислый Марганец сернокислый

Калий фосфорнокислый двузамещенный Твин-80

Вода дистиллированная

Гидролизат соевого шрота

Пример 1. 1кг соевого шрота заливают 10 л дистиллированной воды. Тщательно переь е1яивают 1520 мин и выдерживают при в течение 18-25 ч. Полученный экстракт декантируют и подогревают до 45°С. Добавляют панкреатин из расчета 8 г на 1 л и устанавливают рН 8,2-8,4 с помощью 20%-ного раствора едкото натра. Затем добавляют хлороформ 20 мл на 1 л экстракта. Гидролиз ведут при 45с,в течение 24 ч. Затем гидролизах декантируют, подкисляютледяной уксусной кислотой до рН 4,7-4,9, кипятят 5-10 мин. Гидролизат фильтруют через полотно миткаль Готовый гидролизат используют для приготовления среды. В готовом гидролизате содержится, мг%: Аминный азот150 Общий азот500 Для приготовления 1 л среды в 200 мл дистиллированнойводы последовательно растворяют,г Марганец сернокислый0,05 Цистеин солянокислыйО, 2 Магний сернокислый0,2 Калий фосфорнокислый двузамещенный2 Цитрат аммония2 Ацетат натрия5 Глюкоза20 Вносят 0,5 мл твина-80. Тщательно перемешивают полученный раствор. Доводят жидкости гидролизатом из соевого шрота до 1000 мл. В гидро лизате предварительно устанавливают рН 7,0-7,2 с помощью 20%-ного раство ра едкого натра. Затем добавляют жел тозу в количестве 1,5-2%, полученную посредством aвтoклaвиpoвat ия желативы при 2 атм в течение 2 ч. Среду ст рилизуют текучим паром 30 мин и под давлением 0,5 атм 20 мин при 110 С. Содержание аминного азота в ереде 100 мг%. При производственной проверке пр лагаемой среды получены следующие результаты (табл. 1). Пример 2. 7,5 кг перемолотого до порошкообразного состояния соевого шрота заливают 100 л дистил лированной воды. Тщательно перемеши вают 15-20 мин и подогревают до 45С, Добавляют панкреатин (из расчета 10 г на 1 л), устанавливают рН 8,2-8,4 с помощью 20%-ного раствора NaOH. Гидролиз ведут при 45°С в течение 6 ч, при коррекции рН и периодическом перемешивании в течение первых .2 ч. Затем гидролизат декантируют, подкисляют уксусной кислотой до рН 4,7-4,9 и кипятят 5-10 мин. Гидролизат фильтруют через миткаль. Готовый гидролизат содержит, мг%: Аминный азот120 . Общий азот350 Для приготовления 1 л среды в 100 мл дистиллированнойводы-последовательно растворяют, г; Марганец сернокислый0,025 Цистеин солянокислыйО,1 Магний сернокислыйО,1 Калий фосфорнокислый двузамещенный1,0 Цитрат аммония1,0 Ацетат натрия2,5 Глюкоза10,0 Вносят 0,5 мл твина-80. Тщательно перемешивают раствор. Доводят объем жидкости гидролизатом соевого шрота с содержанием аминного азота 150 мг% до 1000 мл. В гидролизате предварительно устанавливают рМ 7,0-7,2 с помощью 20%-ного раствора NaOH. Добавляют желатозу в количестве 1,5%. Среду стерилизуют текучим паром 30 мин и под давлением 0,5 атм 20 мин при , Содержание ам 11но1-о азота в среде составляет 130 мг%. Таким образом, реализация изобретения позволяет увеличить срок годнос,ти сухого препарата лактобактерий и удешевить среду. Концентрация живых лактобактерий лиофильной сушки в зависимости от Концентрация Среда 1 в среде после 10 ч культивирования в реакторе, млрд.кл/мл Предлагаемая 11,0-2,0 Известная 8,0-1,0 ПрепаратСрок годности пр 12345 Соевая 12 12 12 12 12 Солодовая 121212 6 6 среды Таблица 1 до и после применяемой живых лактобактерийСрок -годности в 1 дозе препаратапрепарата, после лиофильной год сушки, млрд.кл/доза 5,0-1,01 3,5-1,00,5-1 Таблица 2 епарата,, мес 678910 Гсредний 12 12 12 12 12 12,0-0,0 6 6 6 6 6 7,8-0,9

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ ШТАММА LACTOBAKTERIUM PLANTARUM 8-РА-З, содержащая в качестве источников углерода и азота глюкозу, цистеин солянокислый, ацетат натрия и цитрат аммония, минеральные соли: марганец сернокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый двузамещенный, а также твин-80 и воду, отличающаяся тем, что, с целью увеличения среднего срока годности сухого препарата лактобактерий, а также удешевления среды, в качестве источника азота среда дополнительно содержит гидролизат соевого шрота с содержанием аминного. азота 120-150 мг% при следующем соотношении компонентов, г/л: 10-25 Глюкоза 1,0-2,5 Цистеин солянокислый 1,0-2,5 Цитрат аммония 2,5-6,25 Ацетат натрия 0,10-0,25 Магний сернокислый 0,025-0,075 Марганец сернокислый Калий фосфорнокислый (Л 1,0-2,5 двузамещенный 0,5-1,0 мл Твин-80 100,0-200,0 Вода Гидрат соевого шрота с содержанием аминно% Остальное го азота 120-150 мг