СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ГИДРОЛИЗАТА ИЗ СВЕЖЕЙ БЕЛОКОЧАННОЙ КАПУСТЫ И ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ НА ЕГО ОСНОВЕ Российский патент 2011 года по МПК C12N1/20 C12R1/225 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты, и питательным средам для культивирования лактобактерий на его основе и может быть использовано при производстве бактериальных препаратов.

Уровень техники

Известна питательная среда для культивирования лактобактерий, включающая глюкозу, магний сернокислый, марганец сернокислый, калий фосфорнокислый двузамещенный, аммоний лимоннокислый, натрий уксуснокислый, дрожжевой автолизат, гидролизат казеина при следующем соотношении компонентов, г/л:

- глюкоза 15-25 - магний сернокислый 0,05-0,15 - марганец сернокислый 0,02-0,03 - калий фосфорнокислый двузамещенный 0,5-1,5 - аммоний лимоннокислый 0,5-1,5 - натрий уксуснокислый 2,0-3,0 - автолизат пекарских дрожжей 15,0-97,5 - панкреатический гидролизат казеина с содержанием аминного азота 350 мг % 10,0-20,0 - вода дистиллированная остальное до 1 л.

Недостатком данной питательной среды является невысокий рост лактобактерий из-за того, что ростовые свойства ее недостаточно высоки.

Известна питательная среда для культивирования бифидо- или лактобактерий, содержащая дрожжевой автолизат, гидролизат казеина и неорганическую соль фосфорной кислоты, при этом она дополнительно содержит молочную сыворотку, содержащую 15% сухих веществ, с гидролизованной от 50 до 70% лактозой и обезжиренное молоко, а в качестве соли фосфорной кислоты содержит натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Дрожжевой автолизат 15-25 Гидролизат казеина 15-25 Молочная сыворотка, содержащая 15% сухих Веществ, с гидролизованной на 50-70% лактозой 35-50 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный 1,0-1,5 Обезжиренное молоко Остальное

(См. пат. RU № 2287572, кл. C12N 1/20, опубл. 20.11.2006 г.).

Недостатком данной питательной среды является то, что среда не обеспечивает достаточно эффективный рост бифидобактерий и лактобактерий из-за того, что ростовые свойства ее недостаточно высоки, и не позволяет нарастить биомассу указанных микроорганизмов в культурной среде выше 1×10⁹ клеток/мл.

Наиболее близкой по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятой авторами за прототип является способ приготовления питательной среды из свежей капусты, в частности белокочанной, и питательная среда на его основе, содержащая отвар свежей капусты 500 г; кислый фосфорнокислый натрий 2,0 г; сернокислая магнезия 1,0 г; пептон 5,0 г; глюкоза 10,0 г; лимоннокислый натрий 10,0 г, при этом приготовление отвара проводят следующим образом: 500,0 свежей капусты кипятят 30 мин в 1,00 л водопроводной воды. В полученный отвар добавляют ингредиенты и стерилизуют. (Дзержинская И.С. Питательные среды для выделения и культивирования микроорганизмов. Учебное пособие. Астрахань. Издательство АГТУ. 2008 г., с. - 236).

Недостатком данной среды является недостаточная питательная продуктивность для лактобактерий.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения ферментативного гидролизата из капусты и питательной среды для культивирования лактобактерий на его основе, обладающей высокими ростовыми свойствами.

Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к повышению качества питательной среды.

Технический результат достигается с помощью способа получения ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты, включающий приготовление белоксодержащей массы, смешивание ее с водопроводной водой, кипячение, при этом в качестве белоксодержащей массы используют измельченную капусту, смешивание с водопроводной водой проводят в соотношении 1:3 с последующим кипячением в течение 9-11 мин, затем смесь охлаждают до 48-50°С, добавляют измельченную поджелудочную железу крупного рогатого скота, устанавливают 20% раствором натрия гидроокиси показатель рН до 8,2-8,3 по фенолфталеину, добавляют 1% хлороформа, проводят гидролиз в термокамере при температуре 38-42°С в течение 4-5 суток, причем в первые 1,5-2 ч смесь перемешивают через каждые 10-15 мин, а затем перемешивание проводят через каждые 5,5-6 ч, при этом ежедневно измеряют уровень аминного азота, который на третьи сутки составляет 0,2±0,05%, затем термокамеру отключают, гидролизат оставляют на сутки, а потом фильтруют.

Технический результат достигается с помощью питательной среды для культивирования лактобактерий, содержащей питательную основу, магнезию сернокислую, цитрат натрия, пептон ферментативный, глюкозу и дистиллированную воду, при этом она дополнительно содержит дрожжевой экстракт, липоевую кислоту, ацетат натрия, печеночную воду, агар микробиологический и стимулятор роста, при этом в качестве основы используют ферментативный гидролизат капусты, а в качестве стимулятора роста - ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба при следующем соотношении компонентов, г/л:

ферментативный гидролизат капусты 650,0-700,0 дрожжевой экстракт 15,0-20,0 магнезия сернокислая 0,1-0,2 липоевая кислота 0,04-0,05 цитрат натрия 1,5-2,0 ацетат натрия 4,0-5,0 печеночная вода 0,05-0,1 пептон ферментативный 9,0-10,0 ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 0,5-1,0 глюкоза 18,0-20,0 агар микробиологический 8,0-8,5 дистиллированная вода остальное до 1 л.

Капуста (см. Капуста белокочанная свежая ГОСТ 51809-2001; 1724-85) является, одним из немногих растений, позволяющих рассчитывать на универсальность продукта ее гидролиза (гидролизата), за счет содержания многочисленных уникальных элементов, необходимых для роста и развития различных бактерий. Капуста содержит огромное количество разнообразных химических веществ. В ее составе обнаружены от 2,6 до 8% сахаров, 0,6% пектиновых веществ, 0,1% крахмала, 1,2-1,7% клетчатки, белков 1,1-2,3%. Кроме витамина С она содержит витамины Р, группы В, РР, один из наименее известных витамин К, витамин D, витамин U, пантотеновую кислоту, тартроновую кислоту, каротин. Богат и минеральный состав капусты: калий, натрий, кальций, магний, железо, фосфор, сера, хлор, а также кобальт, фтор, йод, молибден, медь, цинк, кремний (Путырский И.Н., Прохоров В.Н., Родионов П.А., 2004; Нестерин М.Ф., Скурихин И.М., 1979).

Полученный нами ферментативный гидролизат листьев капусты (ФГК) был использован в качестве основы новой среды.

При этом с учетом специфичности питательных потребностей лактобактерий важнейшее значение мы уделили выбору стимулятора роста. С целью стимулирующего эффекта в питательную среду был добавлен ферментативный гидролизат из колоний тибетского молочного гриба (ТМГ) и его молочного настоя (1:1).

Тибетский молочный гриб является сложной биологической субстанцией - симбионтом, обладающим мощными факторами роста, состоящим из нескольких бактериальных компонентов, молочных и дрожжеподобных микроорганизмов. Установлено, что в настое ТМГ обнаружены: лизин солянокислый, пролин, валин, треонин, фенилаланин и другие неразделенные аминокислоты, которые являются факторами роста молочнокислых бактерий. Не менее важным при определении качества и полезности пищевого продукта является содержание в нем определенных витаминов: тиамин (B₁), рибофлавин (В₂), кобаламин B₁₂ РР или В₅, а также никотиновая кислота (РР или В₅), витамин А и витамин D (Афанасьева О.В., 2007; Романова О.В., 2006). Также в составе кефира обнаружены кальций, железо, йод, цинк, фолиевая кислота, ферменты, кислоты, легко усвояемые белки и полисахариды (Буторина О., Корзунова А., 2005).

Сущность способа получения ферментативного гидролизата из капусты и питательной среды для культивирования лактобактерий заключается в следующем.

Капусту, например, в количестве 1,00 кг, режут на мелкие кусочки, ссыпают в эмалированную кастрюлю, заливают водопроводной водой в количестве 3, 0 л варят в течение 9-10 мин, остужают до 48-50°С. Сливают в 5,00 л стеклянный баллон. Добавляют поджелудочную железу КРС 0,15 кг на объем содержимого баллона, устанавливают 20% раствором натрия гидроокиси в количестве 8 мл рН до 8,2-8,3 по фенолфталеину, добавляют 1% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при температуре 38-40°С в течение 4-5 суток. В первые 1,5-2 ч. смесь перемешивают через каждые 10-15 мин, в последующем смесь перемешивают через каждые 5,5-6 ч. Ежедневно измеряют уровень аминного азота, который на третьи сутки составил 0,2±0,05%.

Способ приготовления стимулятора роста для культивирования лактобактерий заключается в следующем: молочный тибетский гриб, в количестве 100 г тщательно промывают в проточной водопроводной воде (предварительно поместив в марлю). Промытый грибок помещают в стеклянную емкость и добавляют 300 мл (1:3) молочного настоя этого гриба, подогретого до температуры (45±1)°С. Смесь подщелачивают Na₂CO₃ до рН 8,2-8,3 по фенолфталеину. К общему объему содержимого добавляют 2% хлороформа и 8 таблеток пищеварительного ферментного средства - панкреатина, запробковывают плотно ватно-марлевым тампоном с пергаментом и помещают в термокамеру при температуре (45±1)°С. Выдерживают в течение 10 суток, встряхивая в течение первых суток через каждые 15 минут по 5 минут, а в последующие дни через каждые два часа по 5 минут. Динамику ферментативного процесса контролируют по нарастанию аминного азота. На 9-10 сутки увеличение данного показателя прекращается, термокамеру отключают, гидролизат оставляют на сутки. Затем фильтруют через фильтровальное полотно. В фильтрат добавляют 2% хлороформа, пробкуют резиновой пробкой. Полученный гидролизат имеет темно-коньячный цвет, показатель аминного азота - 0,5%; сухой остаток - 8,8%.

Питательную среду на основе капустного ферментативного гидролизата для выращивания микроорганизмов готовят следующим способом. Берут ферментативный гидролизат из капусты, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 650,0-700,0 мл; дрожжевой экстракт 15,0-20,0; магнезию сернокислую 0,1-0,2; липоевую кислоту 0,04-0,05; цитрат натрия 1,5-2,0; ацетат натрия 4,0-5,0; печеночную воду 0,05-0,1; пептон ферментативный 9,0-10,0; ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 0,5-1,0; агар микробиологический 8,0-8,5; дистиллированную воду до 1 л. Для осветления полученной среды используют активированный уголь марки «УО-А» в количестве 2% к объему среды, который ссыпают в эмалированную кастрюлю, доливают дистиллированную воду - до 1 л, среду тщательно перемешивают до образования однородной массы. Подогревают до 70°С, затем устанавливают рН до 8,2±0,1 с помощью 20% раствора гидроокиси натрия в количестве 6,0 мл, кипятят в течение 4-5 мин. Фильтруют через полотно и 8-16 слоев фильтровальной бумаги, сбор фильтрата проводят в эмалированную посуду. В готовый фильтрат светло-желтого цвета добавляют агар микробиологический 8,0-8,5 г/л. Смесь доводят до кипения и кипятят до полного расплавления агара в течение 2 мин. рН корректируют раствором соляной кислоты (1:1) до 6,8±0,1, добавляют глюкозу в количестве 18,0-20,0 г/л.

Приготовленную питательную среду разливают в градуированные флаконы по 200±0,5 мл, которые герметично укупоривают ватно-марлевыми пробками и бумагой крафт. Стерилизуют при 1 атм. в течение 15 мин. После расплавления в кипящей водяной бане разливают в стерильные чашки Петри. Просушивают в течение 30 минут и используют для посева.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения способа получения ферментативного гидролизата из капусты и питательной среды для культивирования лактобактерий на его основе.

Пример 1. Капусту, например, в количестве 0,5 кг, режут на мелкие кусочки, ссыпают в эмалированную кастрюлю, заливают водопроводной водой в количестве 2,5 л варят в течение 8 мин, остужают до 45°С. Сливают в 5,00 л стеклянный баллон. Добавляют поджелудочную железу КРС 0,10 кг на объем содержимого баллона, устанавливают 20% раствором натрия гидроокиси в количестве 8 мл рН до 8,2 по фенолфталеину, добавляют 1% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при температуре 35°С в течение трех суток. В первые 1,5 ч смесь перемешивают через каждые 5 мин, в последующем смесь перемешивают через каждые 4 ч. Ежедневно измеряют уровень аминного азота, затем термокамеру отключают, гидролизат оставляют на сутки, а после фильтруют.

Питательную среду на основе капустного ферментативного гидролизата для выращивания микроорганизмов готовят следующим способом. Берут ферментативный гидролизат из капусты, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 500,0 мл; дрожжевой экстракт 16,0; магнезию сернокислую 0,1; липоевую кислоту 0,03; цитрат натрия 1,0; ацетат натрия 3,0; печеночную воду 0,06; пептон ферментативный 6,0; ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 0,6; агар микробиологический 7,5; дистиллированную воду до 1 л. Для осветления полученной среды используют активированный уголь марки «УО-А» в количестве 2% к объему среды, который ссыпают в эмалированную кастрюлю, доливают дистиллированную воду - до 1 л, среду тщательно перемешивают до образования однородной массы. Подогревают до 70°С, затем устанавливают рН до 8,2±0,1 с помощью 20% раствора гидроокиси натрия в количестве 6,0 мл, кипятят в течение 3 мин. Фильтруют через полотно и 8-16 слоев фильтровальной бумаги, сбор фильтрата проводят в эмалированную посуду. В готовый фильтрат светло-желтого цвета добавляют агар микробиологический 7,5 г/л. Смесь доводят до кипения и кипятят до полного расплавления агара в течение 2 мин. рН корректируют раствором соляной кислоты (1:1) до 6,8±0,1, добавляют глюкозу в количестве 16,0 г/л.

Приготовленную питательную среду разливают в градуированные флаконы по 200±0,5 мл, которые герметично укупоривают ватно-марлевыми пробками и бумагой крафт. Стерилизуют при 1 атм. в течение 15 мин. После расплавления в кипящей водяной бане разливают в стерильные чашки Петри. Просушивают в течение 30 минут и используют для посева, при этом полученная питательная среда, используемая для культивирования лактобактерий дала невысокие ростовые качества.

Пример 2. Проводят аналогично примеру 1, но берут следующие количества ингредиентов, г/л:

капусту, например, в количестве 1,0 кг, режут на мелкие кусочки, ссыпают в эмалированную кастрюлю, заливают водопроводной водой в количестве 3,0 л варят в течение 9 мин, остужают до 48°С, добавляют поджелудочную железу КРС 0,15 кг на объем содержимого баллона, устанавливают 20% раствором натрия гидроокиси в количестве 8 мл рН до 8,2 по фенолфталеину, добавляют 1% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при температуре 38°С в течение четырех суток. В первые 1,5 ч смесь перемешивают через каждые 10 мин, в последующем смесь перемешивают через каждые 5,5 ч, ежедневно измеряют уровень аминного азота, который на третьи сутки составляет 0,2±0,05%, затем термокамеру отключают, гидролизат оставляют на сутки, а после фильтруют.

При этом питательную среду получают при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

ферментативный гидролизат капусты 650,0 дрожжевой экстракт 15,0 магнезия сернокислая 0,1 липоевая кислота 0,04 цитрат натрия 1,5 ацетат натрия 4,0 печеночная вода 0,05 пептон ферментативный 9,0 ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 0,5 глюкоза 18,0 агар микробиологический 8,0 дистиллированная вода остальное до 1 л.

Полученная питательная среда, используемая для культивирования лактобактерий показала высокие ростовые качества.

Пример 3. Проводят аналогично примеру 1, но берут следующие количества ингредиентов, г/л:

капусту, например, в количестве 1,0 кг, заливают водопроводной водой - 3,0 л, варят в течение 10-11 мин, остужают до 50°С, добавляют поджелудочную железу КРС 0,15 кг, устанавливают 20% раствором натрия гидроокиси в количестве 8 мл рН до 8,3 по фенолфталеину, добавляют 1% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при температуре 40°С в течение пяти суток. В первые 2,0 ч смесь перемешивают через каждые 15 мин, а затем перемешивание проводят через каждые 6,0 ч, при этом ежедневно измеряют уровень аминного азота, который на третьи сутки составляет 0,2±0,05%, затем термокамеру отключают, гидролизат оставляют на сутки, а после фильтруют.

При этом питательную среду получают при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

ферментативный гидролизат капусты 700,0 дрожжевой экстракт 20,0 магнезия сернокислая 0,2 липоевая кислота 0,05 цитрат натрия 2,0 ацетат натрия 5,0 печеночная вода 0,1 пептон ферментативный 10,0 ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 1,0 глюкоза 20,0 агар микробиологический 8,5 дистиллированная вода остальное до 1 л.

Полученная питательная среда, при таком соотношении ингредиентов, используемая для культивирования лактобактерий показала высокие ростовые качества.

Пример 4. Проводят аналогично примеру 1, но берут следующие количества ингредиентов, г/л:

Капусту - в количестве 1,5 кг, водопроводную воду - 3,5 л, варят в течение 15 мин, остужают до 60°С, добавляют поджелудочную железу КРС 0,2 кг, устанавливают 20% раствором натрия гидроокиси в количестве 8 мл рН до 8,5 по фенолфталеину, добавляют 1% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при температуре 45°С в течение шести суток, причем первые 2,5 ч. смесь перемешивают через каждые 20 мин, а затем перемешивание проводят через каждые 6,5 ч, при этом ежедневно измеряют уровень аминного азота, затем термокамеру отключают, гидролизат оставляют на двое суток, а после фильтруют.

При этом питательную среду получают при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

ферментативный гидролизат капусты 800,0 дрожжевой экстракт 22,0 магнезия сернокислая 0,25 липоевая кислота 0,06 цитрат натрия 2,5 ацетат натрия 6,0 печеночная вода 0,11 пептон ферментативный 12,0 ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 1,5 глюкоза 22,0 агар микробиологический 9,0 дистиллированная вода остальное до 1 л.

Полученная питательная среда, при таком соотношении ингредиентов, используемая для культивирования лактобактерий, по сравнению с примерами 2 и 3 показала снижение ростовых качеств.

Эффективность исследуемых сред оценивали в соответствии с методическими рекомендациями «К контролю питательных сред по биологическим показателям», М., 1980, с использованием в качестве тест-штаммов лактобактерий L.plantarum 8P-A3, L. acidophilus EP 317-402.

Испытуемые культуры выращивали на пластинках плотного агара рН 7,2±0,1 при температуре 37°С 48 ч. Из двухсуточных культур готовили 1 млрд. взвесь м.т. тест-штаммов, равной 10 ед. по оптическому стандарту мутности ОСО ГИСК им. Л.А.Тарасевича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 100 м.к. Из данных разведении взвесей культур высевали по 0,1 мл на 3 чашки Петри разлитого подсушенного агара, Посевы инкубировали при 37°С в течение 5 суток при ежедневном просмотре. Через 72-120 ч учитывали результаты подсчетов выросших колоний.

Пример 1. Тест-штаммы L.plantarum 8P-A3, L.acidophilus EP 317-402 выращивали на питательной среде содержащей, г/л: ферментативный гидролизат капусты 500,0; дрожжевой экстракт 16,0; магнезия сернокислая 0.1; липоевая кислота 0,03; цитрат натрия 1,0; ацетат натрия 3,0; печеночная вода 0,6; пептон ферментативный 6,0; ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 0,6; глюкоза 16,0; агар микробиологический 7,5; дистиллированная вода до 1,00 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для лактобактерий при посевной дозе 10 м.к. составило 13.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде содержащей, г/л: ферментативный гидролизат капусты 650,0; дрожжевой экстракт 15,0; магнезия сернокислая 0,1; липоевая кислота 0,04; цитрат натрия 1,5; ацетат натрия 4,0; печеночная вода 0,5; пептон ферментативный 9,0; ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 0,5; глюкоза 18,0; агар микробиологический 8,0; дистиллированная вода до 1,00 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для лактобактерий при посевной дозе 10 м.к. составило 34.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде содержащей, г/л: ферментативный гидролизат капусты 700,0; дрожжевой экстракт 20,0; магнезия сернокислая 0,2; липоевая кислота 0,05; цитрат натрия 2,0; ацетат натрия 5,0; печеночная вода 0,1; пептон ферментативный 10,0; ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 1,0; глюкоза 20,0; агар микробиологический 8,5; дистиллированная вода до 1,00 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для лактобактерий при посевной дозе 10 м.к. составило 35.

Пример 4. Тест-штаммы выращивали на питательной среде содержащей, г/л: ферментативный гидролизат капусты 800,0; дрожжевой экстракт 22,0; магнезия сернокислая 0,25; липоевая кислота 0,06; цитрат натрия 2,5; ацетат натрия 6,0; печеночная вода 0,11; пептон ферментативный 12,0; ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 1,5; глюкоза 22,0; агар микробиологический 9,0; дистиллированная вода до 1,00 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для лактобактерий при посевной дозе 10 м.к. составило 29.

Пример 5. Тест-штаммы выращивали на питательной среде содержащей, г/л: ферментативный гидролизат капусты 900,0; дрожжевой экстракт 24,0; магнезия сернокислая 0,3; липоевая кислота 0,07; цитрат натрия 3,5; ацетат натрия 7,0; печеночная вода 0,12; пептон ферментативный 14,0; ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 2;0 глюкоза 24,0; агар микробиологический 9,5; дистиллированная вода до 1,00 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для лактобактерий при посевной дозе 10 м.к. составило 15.

Полученные результаты позволяют определить оптимальный вариант питательной среды на основе ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты, которыми являются примеры 2-3. Таким образом, на основании вышеизложенного можно сказать о явных преимуществах предлагаемой среды, состоящей из ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты 650,0-700,0; дрожжевого экстракта 15,0-20,0; магнезии сернокислой 0,1-0,2; липоевая кислота 0,04-0,05; цитрат натрия 1,5-2,0; ацетат натрия 4,0-5,0; печеночная вода 0,05-0,1; пептон ферментативный 9,0-10,0; ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 0,5-1,0; глюкоза 20,0; агар микробиологический 8,0-8,5; дистиллированная вода до 1,00 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для лактобактерий при посевной дозе 10 м.к. составило 34-35. Предлагаемая среда качественная, в основу берется ферментативный гидролизат из свежей белокочанной капусты, а в качестве стимулятора роста используется ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- повышение качества питательной среды;

- возможность использования для культивирования широкого спектра микроорганизмов;

- может заменить сухие питательные среды для культивирования лактобактерий.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве бактериальных препаратов. Свежую белокочанную капусту в количестве 1,00 кг измельчают и заливают водопроводной водой (1:3). Кипятят 9-11 мин и остужают до 48-50°С. Добавляют измельченную поджелудочную железу крупного рогатого скота. Устанавливают рН (8,2-8,3) 20% раствором гидроокиси натрия (8 мл). Добавляют 1% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при 38-42°С в течение 4-5 суток. В первые 1,5-2 ч смесь перемешивают через каждые 10-15 мин, затем через каждые 5,5-6,0 ч. Ежедневно измеряют уровень аминного азота, который на 3 сутки составил 0,2±0,05%. Термокамеру отключают. Полученный гидролизат оставляют на сутки, фильтруют. Готовят питательную среду - к разбавленному дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% гидролизату из капусты (650,0-700,0 мл) добавляют, г/л: дрожжевой экстракт 15,0-20,0, магнезию сернокислую 0,1-0,2, липоевую кислоту 0,04-0,05, цитрат натрия 1,5-2,0, ацетат натрия 4,0-5,0, печеночную воду 0,05-0,1, пептон ферментативный 9,0-10,0, стимулятор роста - ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба 0,5-1,0, глюкозу 18,0-20,0, агар микробиологический 8,0-8,5 и дистиллированную воду до 1 л. 2 н.п. ф-лы.

1. Способ получения ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты, включающий приготовление белоксодержащей массы, смешивание ее с водопроводной водой, кипячение, отличающийся тем, что в качестве белоксодержащей массы используют измельченную капусту, смешивание с водопроводной водой проводят в соотношении 1:3 с последующим кипячением в течение 9-11 мин, затем смесь охлаждают до 48-50°С, добавляют измельченную поджелудочную железу крупного рогатого скота, устанавливают 20%-ным раствором гидроокиси натрия рН до 8,2-8,3 по фенолфталеину, добавляют 1% хлороформа, проводят гидролиз в термокамере при температуре 38-42°С в течение 4-5 сут, причем в первые 1,5-2 ч смесь перемешивают через каждые 10-15 мин, а затем перемешивание проводят через каждые 5,5-6,0 ч, при этом ежедневно измеряют уровень аминного азота, который на третьи сутки составляет 0,2±0,05%, затем термокамеру отключают, гидролизат оставляют на сутки, а потом фильтруют.

2. Питательная среда для культивирования лактобактерий, содержащая питательную основу, магнезию сернокислую, цитрат натрия, пептон ферментативный, глюкозу и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит дрожжевой экстракт, липоевую кислоту, ацетат натрия, печеночную воду, агар микробиологический и стимулятор роста, при этом в качестве питательной основы используют ферментативный гидролизат из свежей белокочанной капусты, полученный способом по п.1, а в качестве стимулятора роста - ферментативный гидролизат тибетского молочного гриба при следующем соотношении компонентов, г/л:
ферментативный гидролизат капусты 650,0-700,0 дрожжевой экстракт 15,0-20,0 магнезия сернокислая 0,1-0,2 липоевая кислота 0,04-0,05 цитрат натрия 1,5-2,0 ацетат натрия 4,0-5,0 печеночная вода 0,05-0,1 пептон ферментативный 9,0-10,0 ферментативный гидролизат   тибетского молочного гриба 0,5-1,0 глюкоза 18,0-20,0 агар микробиологический 8,0-8,5 дистиллированная вода остальное до 1 л