СПОСОБ КОМПЛЕКСНОЙ ОЦЕНКИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОПУХОЛИ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ К ХИМИОТЕРАПИИ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/574 

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и может быть использовано для точного предсказания чувствительности или резистентности опухоли к химиотерапии у больных раком молочной железы. В настоящее время известны методы определения эффективности химиотерапии на основании оценки ряда прогностических факторов, таких как маркеры пролиферативной активности клеток опухоли (Ki-67, PCNA), рецепторы фактора роста или регуляторы роста (онкоген HER2/new), опухолесупрессорные гены (р53). Данные методики являются общепризнанными и использовались до настоящего времени как единственный способ в попытках прогнозирования чувствительности опухолевого процесса к химиотерапии (Современное лекарственное лечение местно-распространенного и метастатического рака молочной железы. Моисеенко В.М., Семиглазов В.Ф., Тюляндин С.А. /Издательство "Грифон" Санкт-Петербург, 1997).

Наиболее близким по чувствительности к нашему методу является определение экспрессии онкогена HER2/new в опухолевой ткани, повышенная экспрессия которого свидетельствует о низкой чувствительности опухоли к химиотерапии (Overexpression of HER-2/new proto-oncogen: predictor of local reccurence in patients with ductal carcinoma in situ о the breast. Epstein M. and all. Breast cancer research and treatment. 19^th Annual San Antonio Breast Cancer Symposium 2000).

Анализ предыдущих методик показал, что, несмотря на достаточно глубокие знания о прогностических факторах, оказывающих влияние на отдаленные результаты и выживаемость больных РМЖ, оценить их "предсказывающее" значение с целью оценки эффективности химиотерапии оказалось затруднительным из-за низкой воспроизводимости результатов с вышеуказанными тестами (Ki-67, PCNA, p53, HER-2/new). Основная причина этого заключается в отсутствии специфических маркеров, достоверно предсказывающих чувствительность опухоли к планируемой химиотерапии.

Технический результат заявляемого способа заключается в повышении точности оценки чувствительности опухоли к проводимой химиотерапии и предсказания эффективности как неоадьювантной (предоперационной), так и адъювантной (послеоперационной) химиотерапии у женщин, больных раком молочной железы. Этот результат достигается за счет комплексной оценки пролиферативной активности опухолевых клеток высокочувствительным методом с использованием препарата бромдиоксиуридина (БДУ) и маркера Ki-67, а также знаний о корреляции степени злокачественности и дифференцировки опухоли до и после проводимого химиотерапевтического лечения.

Анализ известного уровня науки и техники показал новизну метода, т.к. до настоящего времени оценка эффективности проводимого лечения осуществлялась лишь при многолетнем динамическом наблюдении больных. Длительная безрецидивная и общая выживаемость свидетельствовала об эффективности проведенного лечения. Соответственно раннее возникновение рецидива заболевания и появление метастазов расценивалось как низкая чувствительность опухоли к проведенному лечению. Используя нашу методику, мы можем не только оценить эффект дооперационного (неоадьювантного) лечения, но и предсказать целесообразность проведения той или иной схемы химиотерапии в адьювантном режиме.

Сущность нашего способа заключается в комплексном подходе к решению поставленной задачи, а именно:
На первом этапе нами было оценена пролиферативная активность опухолевых клеток у больных РМЖ с использованием оригинальной бромдиоксиуридиновой пробы. У 65 пациентов с определяемыми очагами рака молочной железы в/в за 1 час до исследования вводился раствор бромдиоксиуридина (БДУ) из расчета 200 мг/м. кв. в 250 мл изотонического раствора. Затем после выполнения диагностической процедуры (трепанбиопсия) опухоли материал фиксировался в 10% р-ре формалина длительностью от 12 до 24 часов и заливался парафином. После стандартного приготовления препарата мы оценивали пролиферативную активность в препарате иммуногистохимическим методом с помощью моноклональных антител по маркерам: БДУ, Ki-67. Таким образом, на первом этапе нами была оценена пролиферативная активность клеток опухоли высокочувствительным методом с применением БДУ, который характеризует активность клетки в G/S фазу, и Ki-67, который маркирует клетки во всех фазах деления. При исследовании первичных опухолей у больных РМЖ индекс маркера БДУ колебался от 1,9 до 26,9%. Индекс маркера Ki-67 колебался от 2,6 до 65,2% (медиана 24%).

В другом исследовании нами была оценена степень злокачественности опухоли по Ellis и характер изменения этого показателя от проводимой дооперационной (неоадьювантной) химиотерапии. Мы оценили изменение степени злокачественности и дифференцировки опухоли на основании исследования части опухоли, полученной методом трепанбиопсии до и после лечения. Ответ опухоли на проводимое лечение был оценен по стандартным критериям ВОЗ и EORTC (полный ответ, частичный ответ, стабилизация, прогрессирование). Нами была найдена тенденция к изменению дифференцировки опухоли от более низкой к более высокой в группах больных с полным и частичным регрессом опухоли после проведенного неоадьювантного лечения. Соответственно степень злокачественности менялась от высокой к низкой в этих же группах.

Для лучшего понимания сущности приводим примеры конкретной реализации способа. У больной Б. после проведенного стандартного обследования (трепанбиопсия, определение индекса БДУ, Ki-67, дифференцировки и степени злокачественности опухоли) была выявлена низкодифференцированная опухоль высокой степени злокачественности с показателями БДУ 4% и Ki-67 18%. Было назначено лечение - химиотерапия по схеме CMF. После проведенных 2-х курсов отмечен частичный регресс опухоли по стандартным критериям. После операции и выполнения окончательного гистологического исследования высокая степень злокачественности изменилась на низкую, а дифференцировка опухоли с низкой приобрела высокую. Данные изменения в совокупности с "благоприятными" показателями БДУ и Ki-67, а также объективным ответом опухоли на предоперационное лечение являлись основанием для продолжения химиотерапии в прежнем режиме. При обследовании через 5 лет и 7 месяцев больная жива без признаков рецидива заболевания.

У больной А. после проведенного стандартного обследования (трепанбиопсия, определение индекса БДУ, Ki-67, дифференцировки и степени злокачественности опухоли) была выявлена низкодифференцированная опухоль высокой степени злокачественности с показатели БДУ 7% и Ki-67 20%. Было назначено лечение - химиотерапия по схеме CMF. После проведенных 2-х курсов не отмечалось изменение размеров опухоли. Была констатирована стабилизация процесса. После операции и выполнения окончательного гистологического исследования не было выявлено изменений степени злокачественности и дифференцировки опухоли. Данный ответ опухоли на проведенное лечение в совокупности с показателями БДУ и Ki-67 вынудил нас изменить схему лечения и назначить химиотерапию по схеме FAC в адьювантном, т.е. послеоперационном, режиме в количестве 6 курсов с интервалом в три недели. При обследовании через 5 лет и 2 месяца больная жива, без признаков рецидива заболевания.

Примеры эффективности комплексной оценки проводимого лечения могут быть дополнены более объемным и многолетним наблюдением. В условиях проспективного изучения и длительного наблюдения за больными оказалось, что прогноз и показатели выживаемости оказались благоприятнее у больных РМЖ с более низкими индексами БДУ (ниже 8%) и Кi-67 (ниже 24%) по сравнению с высокими уровнями БДУ и Ki-67 (т.е. выше уровней медиан). 5-летняя общая выживаемость соответственно равнялась 92% против 68%, а безрецидивная выживаемость 90% против 61% (р=0.01).

Изучение эффективности адьювантной химиотерапии в зависимости от величины маркера БДУ и Ki-67 показало, что при уровнях метки БДУ ниже медианы (<8%) и метки Ki-67 (ниже 24%) отдаленные результаты лечения высокие (5-летняя общая выживаемость до 87-90%) безотносительно того, получали больные адьювантную (послеоперационную) химиотерапию или нет. В группах же больных с высокими индексами метки (БДУ выше 8%, Ki-67 выше 24%) проведение адьювантной химиотерапии по схеме FAC повышало показатели 5-летней общей выживаемости на 18% по сравнению с больными, не получавшими химиотерапии (5-летние показатели общей выживаемости равнялись соответственно 68% и 50% - Р<0.05).

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и может быть использовано для точного предсказания чувствительности или резистентности опухоли к химиотерапии у больных раком молочной железы. Сущностью способа является внутривенное введение раствора бромдиоксиуридина за 1 ч до исследования, получение участка опухоли для исследования, фиксирование в растворе формалина и оценка пролиферативной активности в препарате после проведения химиотерапии в неоадъювантном режиме. При показателях индекса БДУ ниже 8%, Ki-67 ниже 24%, изменениях дифференцировки опухоли от низкой к более высокой, степени злокачественности от высокой к низкой целесообразно проведение химиотерапии по той же схеме, более высокие показатели БДУ и Ki-67, отсутствие вышеуказанной тенденции к изменению дифференцировки и степени злокачественности опухоли позволяют изменить схему химиотерапии, назначаемую в адъювантном режиме. Техническим результатом является повышение точности оценки чувствительности опухоли к проводимой химиотерапии и предсказание эффективности проводимого лечения.

Способ комплексной оценки чувствительности опухоли при раке молочной железы к химиотерапии путем оценки реакции опухоли на проводимое лечение на основании исследования показателей маркера Ki-67, отличающийся тем, что за один час до исследования в/в вводят раствор бромдиоксиуридина из расчета 200 мг/м² в 250 мл изотонического раствора, методом трепанобиопсии получают участок опухоли для исследования, фиксируют в растворе формалина в течение 12-24 ч, заливают парафином, после чего оценивают пролиферативную активность в препарате и после проведения химиотерапии в неоадъювантном режиме оценивают изменение дифференцировки и степени злокачественности опухоли, при показателях индекса БДУ ниже 8%, Ki-67 ниже 24%, изменениях дифференцировки опухоли от низкой к более высокой, степени злокачественности от высокой к низкой, а также оценки объективного ответа опухоли на проведенное лечение свидетельствуют о целесообразности проведения химиотерапии по той же схеме, соответственно более высокие показатели БДУ и Ki-67, отсутствие вышеуказанной тенденции к изменению диффернцировки и степени злокачественности опухоли, а также отсутствие объективного ответа опухоли на лечение позволяет изменить схему химиотерапии, назначаемую в адъювантном режиме.