ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКИЙ РАСТИТЕЛЬНЫЙ ПРЕПАРАТ МЕЛИЛОТИН И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2004 года по МПК A61K35/78 A61P7/00 A61P9/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к созданию противоишемического препарата с широким спектром действия на основе растительного сырья и к способу его получения, а именно обладающего антикоагулянтным, антигипоксическим, антиоксидантным, актопротекторным, нейропротекторным, анальгетическим, капилляроукрепляющим, антиальтернативным, антиэкссудативным, антипролиферативным, ранозаживляющим, иммуномодулирующим действием на основе экстрактивных веществ (биологически активных веществ) в виде кумаринов и флавоноидов травы донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых - Fabaceae (Leguminosae), используемый для профилактики и лечения ишемических повреждений сердечно-сосудистой системы, вызывающих нарушение кровообращения в сердечно-сосудистой системе, головокружение, гипертонию, диабет, гиперлипедемию, сердечно-сосудистые заболевания, церебральную недостаточность, нейросенсорные нарушения, заболевания периферических сосудов, а так же используемый для поддержания хорошего кровообращения, в том числе в головном мозге, руках, ногах.

Мозг по чувствительности к дефициту кислорода при ишемии стоит на первом месте, актуальность поиска новых нетоксичных веществ растительного происхождения, повышающих устойчивость мозга к ишемии, обусловлена увеличением заболеваний, вызванных нарушением мозгового кровообращения.

Известен отечественный противоишемический растительный препарат с антигипоксическим и ноотропным эффектом на основе экстрактивных веществ княжика сибирского (Atragenae sibirica, L), полученных спиртовой или водной экстракцией измельченных листьев и стеблей с последующей фильтрацией и упариванием под вакуумом. Препарат содержит 9,5-22,74% экстрактивных веществ и используется для профилактики и лечения мозгового кровообращения.

Препарат обладает узким спектром фармакологической активности.

Наиболее близким решением по первому изобретению является противоишемический растительный препарат ТАНАКАН (Франция) - на основе экстрактивных веществ листьев Gingo biloba с антиоксидантным, антигипоксическим эффектом, используемый для лечения нарушения мозгового и периферического кровообращения.

Недостаток - дорогостоящий зарубежный препарат и узкий спектр фармакологической активности.

В проанализированной авторами литературе не найдено наиболее близкого решения из известного источника информации по второму изобретению.

Известно, что трава донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall. , семейства бобовых - Fabaceae (Leguminosae) давно используется в народной медицине в качестве лекарственного средства для профилактики и лечения различных заболеваний, вызванных нарушением кровообращения в сердечно-сосудистой системе. Лекарственным сырьем являются верхушки цветущих побегов вместе с листьями, способные накапливать во время цветения биологически активные вещества - кумарины, флавоноиды, дубильные вещества, оксикоричные и аминокислоты, полисахариды, минеральные элементы.

Задача изобретений - создание нового отечественного противоишемического препарата с широким спектром фармакологической активности на основе экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов травы донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall. , семейства бобовых - Fabaceae (Leguminosae), а так же обеспечение возможности использовния рациональной технологии изготовления препарата, обеспечивающей не только максимальное извлечение биологически активных веществ из растительного сырья, но и сохранение их в течение длительного срока без изменений.

Поставленная задача решается тем, что противоишемический препарат МЕЛИЛОТИН на основе экстрактивных веществ растительного сырья, согласно изобретению, содержит экстрактивные вещества травы донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых -Fabaceae( Leguminosae) - кумарины и флавоноиды, спирт этиловый или воду очищенную при следующем соотношении компонентов, мас%:
Экстрактивные вещества - 0,1-40
20-95%-ный Спирт этиловый или вода очищенная - Остальное
Поставленная задача решается тем, что по способу получения противоишемического препарата МЕЛИЛОТИН, обладающего антикоагулянтным, атигипоксическим, антиоксидантным, актопротекторным, нейропротекторным, анальгетическим, капилляроукрепляющим, антиальтернативным, антиэкссудативным, антипролиферативным, ранозаживляющим, иммуномодулирующим действием, согласно изобретению, в качестве растительного сырья используют свежесобранную или высушенную траву донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых - Fabaceae (Leguminosae), собранную во время цветения, а экстракцию осуществляют методом дробной мацерации очищенной водой при температуре 80-90^oC в течение 1-168 ч при соотношении сырье:экстрагент 1:(5-100), полученное извлечение экстрактивных веществ очищают с последующим выделением суммы экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов. При этом экстрагирование осуществляют методом двухкратной мацерации в течение 2,5 ч при постоянном перемешивании при соотношении сырье - экстрагент 1:20, при этом водные извлечения экстрактивных веществ объединяют.

Поставленная задача решается так же тем, что по способу получения противоишемического препарата МЕЛИЛОТИН, обладающего антикоагулянтным, атигипоксическим, антиоксидантным, актопротекторным, нейропротекторным, анальгетическим, капилляроукрепляющим, антиальтернативным, антиэкссудативным, антипролиферативным, ранозаживляющим, иммуномодулирующим действием, согласно изобретению, в качестве растительного сырья используют свежесобранную или высушенную траву донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых - Fabaceae (Leguminosae), собранную во время цветения, а экстракцию осуществляют методом перколяции 20-95% спиртом этиловым в течение 1-168 ч при соотношении сырье:экстрагент 1:(5-100), полученное извлечение экстрактивных веществ очищают с последующим выделением суммы экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов.

При этом очистку извлечений экстрактивных веществ осуществляют фильтрацией, очищенное извлечение экстрактивных веществ сгущают при температуре 90^oC до 5-30% воздушно-сухих веществ, при этом выделение суммы экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов осуществляют из сгущенного извлечения экстрактивных веществ сушкой при температуре 60^oС до получения сухого экстракта.

Предложена группа изобретений, объединенная единым изобретательским замыслом, второе и третье изобретения предназначены для получения первого. Все изобретения решают одну и ту же задачу с достижением единого технического результата.

Эксперементально установлено, что именно в результате этой заявляемой в качестве изобретения технологии удается добиться максимальной степени извлечения экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов из травы донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых - Fabaceae(Leguminosae).

Экспериментальные исследования показали, что противоишемический препарат МЕЛИЛОТИН обладает антикоагулянтным, антигипоксическим, антиоксидантным, актопротекторным, нейропротекторным, анальгетическим, капилляроукрепляющим, антиальтернативным, антиэкссудативным, антипролиферативным, ранозаживляющим, иммуномодулирующим действием и может быть использован для профилактики и лечения нарушения кровообращения в сердечно-сосудистой системе, головокружения, гипертонии, диабета, гиперлипедемии, сердечно-сосудистых заболеваний для лечения церебральной недостаточности, нейросенсорных нарушений, заболеваний периферических сосудов, а так же для поддержания хорошего кровообращения, в том числе в головном мозге, руках, ногах. (Результаты фармакологической характеристики препарата МЕЛИЛОТИН представлены в описании препарата и в таблицах 1-2).

Как следует из приведенного выше обзора уровня техники, заявляемый противоишемический препарат МЕЛИЛОТИН на основе экстрактивных веществ - кумаринов и флавоноидов травы донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых - Fabaceae (Leguminosae) с широким спектром фармакологической активности и способ его получения являются новыми, они не известны из общедоступных источников информации, не вытекают явным образом из известного современного уровня техники, т.е. предложенные решения неочевидны для специалиста и обладают изобретательским уровнем.

Сущность изобретения поясняется нижеприведенными примерами реализации изобретений в Санкт-Петербургской химикофармацевтической академии.

Пример 1
Обмолоченную траву донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых в количестве 50 г загружают в экстрактор с водопаровой рубашкой и заливают 600 мл очищенной кипящей воды, перемешивают в течение 1,5 ч, поддерживая температуру 80 или 90^oС. По истечении времени водное извлечение экстрактивных веществ сливают, сырье отжимают и заливают 400 мл кипящей воды и перемешивают в тех же условиях в течение 1 ч. После двухкратной мацерации сырья полученные водные извлечения объединяют, фильтруют. Полученное водное извлечение представляет собой жидкость коричневого цвета, горького вкуса с пряным кумариновым запахом, с содержанием 40% экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов в очищенной воде. Водный экстракт упаковывают в стеклянные стерилизованные факоны из оранжевого стекла, укупоренные пробками полиэтиленовыми, каждый флакон помещают в пачку из картона коробочного вместе с инструкцией по применению, пачки укладывают в коробки и наклеиваются этикетки.

Пример 2
Спиртовой экстрагент различной концентрации готовят в реакторе с мешалкой. В реактор подают 96% спирт этиловый и туда же подают в необходимом количестве воду очищенную. Обмолоченную траву донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых в количестве 100 г загружают в экстрактор, заливают спирт этиловый соответствующей концентрации до зеркала, настаивают в течение 24 ч, затем перколируют преимущественно 20% этиловым спиртом в течение 48 ч до полного истощения растительного сырья, при соотношении сырье:экстрагент 1:5. Затем полученное спиртовое извлечение очищают от балластных веществ фильтрованием и сливают в отстойник. Полученное спиртовое извлечение экстрактивных веществ представляет собой жидкость коричневого цвета, горького вкуса с пряным (кумариновым) запахом. Противоишемический препарат Мелилотин - настойка, содержащая 40% экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов в 20% этиловом спирте, которую упаковывают в стеклянные флаконы из оранжевого стекла, укупоренные пробками полиэтиленовыми, флакон помещают в пачку вместе с инструкцией по применению, пачки укладываются в коробки и наклеиваютя этикетки.

Препарат МЕЛИЛОТИН - настойка, содержащая 10% экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов в 95% этиловом спирте, которую упаковывают в стеклянные флаконы из оранжевого стекла, укупоренные пробками полиэтиленовыми, флакон помещают в пачку вместе с инструкцией по применению, пачки укладываются в коробки и наклеиваютя этикетки.

Пример 3
Обмолоченную траву донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых в количестве 100 г загружают в экстрактор, заливают спирт этиловый соответствующей концентрации до зеркала, настаивают в течение 24 ч, затем перколируют преимущественно 20% этиловым спиртом в течение 168 ч до полного истощения растительного сырья, при соотношении сырье: экстрагент 1:100. Затем полученное спиртовое извлечение очищают от балластных веществ фильтрованием и сливают в отстойник. Полученное спиртовое извлечение экстрактивных веществ представляет собой жидкость коричневого цвета, слабого горького вкуса с пряным (кумариновым) запахом. Противоишемический препарат Мелилотин - настойка матричная гомеопатическая, содержит 0,1% экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов в 20% этиловом спирте, которую упаковывают в стеклянные флаконы из оранжевого стекла, укупоренные пробками полиэтиленовыми, флакон помещают в пачку вместе с инструкцией, пачки укладываются в коробки и наклеиваются этикетки.

Пример 4
Выделение суммы экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов из спиртового извлечения различной концентрации или водного извлечения осуществляют концентрацией извлечения при температуре 90^oС в вакуум-роторном испарителе до 5-30% воздушно-сухих веществ, получают густой экстракт, представляющий собой вязкую жидкость, коричневого цвета, горького вкуса с пряным (кумариновым) запахом. Затем сушкой густого экстракта в вакуум-выпарном аппарате при температуре 60^oС получают сухой экстракт, представляющий собой порошок светло-коричневого цвета, пряного (кумаринового) запаха, горьковатого вкуса. Сухой и густой экстракты можно использовать для изготовления различных лекарственных форм: таблеток, капсул, гранул и т.д. (9).

Пример 5
Количество экстрактивных веществ в препарате МЕЛИЛОТИН определяют следующим образом: 5 мл препарата помещают во взвешенный бокс, выпаривают на водяной бане и сушат 3 ч при температуре 105^oС, затем охлаждают в эксикаторе 30 мин и взвешивают.

Пример 6
Полученный препарат МЕЛИЛОТИН идентифицируют следующим образом. Одну часть спиртового извлечения различной концентрации или водного извлечения экстрактивных веществ помещают в колбу, прибавляют порошок цинка и концентрированную хлористоводородную кислоту, нагревают на кипящей водяной бане до розового окрашивания (флавоноиды), при добавлении к другой части спиртового извлечения различной концентрации или водного извлечения экстрактивных веществ раствора гидроокиси натрия и диазотированной сульфониловой кислоты при нагревании на водяной бане появляется оранжевый цвет (кумарины).

Фармакологическое изучение препарата МЕЛИЛОТИН
(представленны в таблицах 1-2)
На первом этапе фармакологических исследований были выполнены эксперименты по оценке острой токсичности препарата МЕЛИЛОТИН. Установлено, что для мышей при внутрибрюшном введении исследуемого препарата LD₅₀ составила 4300 мг/кг. Максимальная доза при пероральном приеме составила не более 6000 мг/кг препарата. При этом гибели животных не наблюдали. При исследовании спектра антигипоксической активности установлено, что препарат обладает выраженным эффектом в широком диапазоне доз на моделях при однократном внутрибрюшинном введении. По активности препарат МЕЛИЛОТИН не уступает, а в ряде случаев превосходит препарат сравнения ГУТИМИН и близок к препарату ТАНАКАН. Препарат Гутимин - антигипоксант. Препарат ТАНАКАН широко используется при недостаточности мозгового кровотока (дисциркуляторной энцефалопатии), нарушениях периферического кровообращения, является антиоксидантом и антигипоксантом. Препарат МЕЛИТОТИН в дозах 60-120 мг/кг по своей активности не уступал при профилактическом пероральном введении препарату ТАНАКАН. Результаты биохимических исследований были подтверждены при гистологическом изучении идентичных областей гиппокама и новой коры головного мозга крыс. Результаты наших экспериментов свидетельствуют о том, что препарат МЕЛИЛОТИН способен шунтировать дыхательную цепь у низкоустойчивых животных на субстратном участке путем прямого включения полифенолов. Наличие антигипоксической и антиоксидантной активности у препарата МЕЛИЛОТИН позволило предположить у него широкий спектр лечебных эффектов. Препарат малотоксичен при однократном введении. При длительном введении препарата в терапевтических и токсических дозах лабораторным животным не оказывал токсического действия на основные системы организма животных. Для установления антикоагулянтных свойств препарата МЕЛИЛОТИН определяли время свертывания крови животных после курсового введения препаратов. Опыты проведены на крысах-самцах массой тела 170-230 г. Животных содержали на стандартном рационе. Каждая группа состояла из 10 животных. Предварительно определяли исходное время свертывания крови животных. Препараты вводили перорально. Из сухих экстрактов готовили раствор на воде очищенной, а спиртовое извлечение предварительно деалкогилизировали и разводили водой очищенной. Сухой экстракт вводили в дозе 40 мг/кг, спиртовое извлечение - 10 мл/кг. Объем вводимых растворов составлял 10 мл/кг. Препаратами сравнения: фенилин (таблетки) и кумарин (стандартный образец) также вводили перорально. Из препаратов сравнения готовили тонкие суспензии с использованием эмульгатора твин-80. Объем вводимого раствора составлял 10 мл/кг. Контрольная группа получала воду очищенную. Аналогично проводили исследования при одновременном пероральном введении исследуемых препаратов и внутрибрюшинном введении препарата викасол в дозе 5 мг/кг. Время свертывания крови определяли по показаниям секундомера немедленно после взятия крови у крыс из нижней десны по 1 мл. Окончание свертывания крови оценивали визуально. Полученные данные свидетельствуют об антикоагулянтных свойствах препарата МЕЛИЛОТИН. Сочетание антикоагулянтного, антигипоксического, антиоксидантного, актопротекторного, нейропротекторного, анальгетического, капилляроукрепляющего, антиальтернативного, антиэкссудативного, антипролиферативного, ранозаживляющего, иммуномодулирующего эффектов позволяет говорить о перспективности противоишемического препарата МЕЛИЛОТИН. Изложенные выше подробные описания примеров практической реализации группы изобретений не оставляют никаких сомнений в их осуществимости - составные части и все элементы технологических приемов изготовления препарата из растений давно известны и хорошо освоены современной фармакологией. Проведенные фармакологические исследования и освоение технологии подтвердили уверенное достижение поставленных задач, созданный противоишемический препарат МЕЛИЛОТИН обладает антикоагулянтным антигипоксическим, антиоксидантным, нейропротекторным, анальгетическим, капилляроукрепляющим,противовоспалительным, иммуномодулирующим действием и может быть использован для профилактики и лечения нарушения кровообращения в сердечно-сосудистой системе, головокружения, гипертонии, диабета, гиперлипедемии, сердечно-сосудистых заболеваний, церебральной недостаточности, нейросенсорных нарушений, заболеваний периферических сосудов, а так же для поддержания хорошего кровообращения, в том числе в головном мозге, руках, ногах.

Изобретение относится к медицине. Препарат обладает антикоагулянтным, антиоксидантным, актопротекторным, нейропротекторным, анальгетическим, капилляроукрепляющим, антиальтеративным, антиэкссудативным, анипролиферативным, ранозаживляющим, иммуномодулирующим действием на основе экстрактивных веществ травы донника лекарственного при следующем соотношении компонентов, экстрактивные вещества - 0,1-40 мас. %; 20-95%-ный спирт этиловый или вода очищенная - остальное. Проводят экстрагирование растительного сырья методом дробной мацерации очищенной водой при 80-90^oС или перколяцией этиловым спиртом различной концентрации в течение 1-168 ч при соотношении сырье: экстрагент 1: (5-100) с последующим сгущением спиртового или водного извлечения экстрактивных веществ в виде кумаринов и флавоноидов и их сушкой до получения сухого экстракта. Изобретение обеспечивает максимальное извлечение экстрактивных веществ, а также сохранение их в течение длительного срока. 3 с. и 1 з.п.ф-лы, 2 табл.

1. Противоишемический препарат на основе экстрактивных веществ растительного сырья, отличающийся тем, что он содержит экстрактивные вещества травы донника лекарственного Herba Melilotus officinalis (L) Pall., семейства бобовых – Fabaceae(Leguminosae) – кумарины и флавоноиды, спирт этиловый или воду очищенную при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Экстрактивные вещества 0,1 - 40

20-95%-ный Спирт этиловый или вода очищенная Остальное