Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).
Изобретение относится к генной инженерии растений. Трансформация клеток организмов ДНК, кодирующей дикамба-разрушающую оксигеназу, приводит к экспрессии в них фермента, разрушающего дикамбу. Это может быть использовано для борьбы с сорняками на плантациях дикамба-разрушающих растений. 9 с. и 14 з.п. ф-лы, 1 ил.
1. Выделенная молекула ДНК, включающая последовательность ДНК, кодирующую дикамба-разрушающую оксигеназу, выбранную из группы, состоящей из: а) дикамба-разрушающей оксигеназы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO : 4; b) фрагмента SEQ ID NO : 4, обладающего активностью дикамба-разрушающей оксигеназы; и с) дикамба-разрушающей оксигеназы, имеющей аминокислотную последовательность, которая, по крайней мере, на 65% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID N : 4 и которая обладает активностью дикамба-разрушающей оксигеназы.2. Молекула ДНК по п.1, отличающаяся тем, что кодируемая ею дикамба-разрушающая оксигеназа имеет аминокислотную последовательность, которая, по крайней мере, на 85% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO : 4 и которая обладает активностью дикамба-разрушающей оксигеназы.3. Молекула ДНК по п.1, включающая последовательность ДНК, кодирующую дикамба-разрушающую оксигеназу, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO : 4.4. Молекула ДНК по п.3, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO : 3.5. ДНК-конструкция, включающая последовательность ДНК, кодирующую дикамба-разрушающую оксигеназу, функционально присоединенную к регулирующим экспрессию последовательностям, при том, что указанная дикамба-разрушающая оксигеназа выбрана из группы, состоящей из: а) дикамба-разрушающей оксигеназы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO : 4; b) фрагмента SEQ ID NO : 4, обладающего активностью дикамба-разрушающей оксигеназы; и с) дикамба-разрушающей оксигеназы, имеющей аминокислотную последовательность, которая, по крайней мере, на 65% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO : 4 и которая обладает активностью дикамба-разрушающей оксигеназы.6. ДНК-конструкция по п.5, отличающаяся тем, что указанная дикамба-разрушающая оксигеназа имеет аминокислотную последовательность, которая, по крайней мере, на 85% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO : 4 и которая обладает активностью дикамба-разрушающей оксигеназы.7. ДНК-конструкция по п.5, включающая последовательность ДНК, кодирующую дикамба-разрушающую оксигеназу, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO : 4.8. ДНК-конструкция по п.7, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO : 3.9. ДНК-конструкция по п.5, являющаяся вектором.10. ДНК-конструкция по любому из пп.5-9, отличающаяся тем, что она предназначена для встраивания в трансгенную клетку-хозяин.11. ДНК-конструкция по любому из пп.5-9, отличающаяся тем, что она предназначена для встраивания в клетку растения.12. ДНК-конструкция по любому из пп.5-9, отличающаяся тем, что она предназначена для встраивания в микроорганизм.13. ДНК-конструкция по любому из пп.5-9, отличающаяся тем, что она предназначена для встраивания в трансгенное растение или часть растения.14. ДНК-конструкция по любому из пп.5-9, отличающаяся тем, что она предназначена для встраивания в широколистное растение, которое толерантно к дикамбе, как следствие экспрессии дикамба-разрушающей оксигеназы, или в часть широколистного растения, которое толерантно к дикамбе вследствие экспрессии дикамба-разрушающей оксигеназы.15. Выделенная дикамба-разрушающая оксигеназа, выбранная из группы, состоящей из: а) дикамба-разрушающей оксигеназы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO : 4; b) фрагмента SEQ ID NO : 4, обладающего активностью дикамба-разрушающей оксигеназы; и с) дикамба-разрушающей оксигеназы, имеющей аминокислотную последовательность, которая, по крайней мере, на 65% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO : 4 и которая обладает активностью дикамба-разрушающей оксигеназы.16. Дикамба-разрушающая оксигеназа по п.15, отличающаяся тем, что указанная дикамба-разрушающая оксигеназа выделена и, по крайней мере, частично очищена из дикамба-разрушающих бактерий, включает кластер атомов “железо-сера” и катализирует окисление дикамбы с образованием 3,6-дихлорсалициловой кислоты (3,6-DCSA).17. Дикамба-разрушающая оксигеназа по п.15 или 16, имеющая аминокислотную последовательность SEQ ID NO : 4.18. Способ борьбы с сорняками на плантации трансгенного растения, включающего ДНК-конструкцию по любому из пп.5-9, включающий нанесение на плантацию количества дикамбы, эффективного в борьбе с сорняками на плантации.19. Способ очистки материала, содержащего дикамбу, включающий контактирование трансгенного микроорганизма, включающего ДНК-конструкцию по любому из пп.5-9, с материалом в количестве, эффективном для разрушения, по крайней мере, части дикамбы, содержащейся в материале.20. Способ очистки материала, содержащего дикамбу, включающий нанесение дикамба-разрушающей оксигеназы по любому из пп.15-17 на материал в количестве, эффективном для разрушения, по крайней мере, части дикамбы, содержащейся в материале.21. Способ отбора трансформированных растительных клеток, включающих ДНК-конструкцию по любому из пп.5-9, включающий: а) трансформацию, по крайней мере, части растительных клеток в популяции растительных клеток ДНК-конструкцией по любому из пп.5-9 и b) выращивание полученной в результате популяции растительных клеток в культуральной среде, содержащей дикамбу в концентрации, выбранной таким образом, что трансформированные растительные клетки будут расти, а нетрансформированные растительные клетки не будут расти.22. Способ отбора трансформированных растений, включающих ДНК-конструкцию по любому из пп.5-9, включающий: а) получение популяции растений, у которых предполагается присутствие указанной ДНК-конструкции; и b) нанесение количества дикамбы на растения, выбранного таким образом, что она подавляет рост нетрансформированных растений.23. Способ отбора или скрининга трансформированных клеток-хозяев, целых организмов и частей организмов, включающих ДНК-конструкцию по любому из пп.5-9, включающий: а) получение популяции клеток-хозяев, целых организмов или частей организмов, у которых предполагается присутствие указанной ДНК-конструкции; b) контактирование клеток-хозяев, целых организмов или частей организмов с дикамбой и с) оценка наличия или уровня флуоресценции, обусловливаемой 3,6-дихлорсалициловой кислотой, которая образуется в трансформированных клетках-хозяевах, целых организмах или частях организмов в результате разрушения дикамбы.
