СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО АУТОИММУННОГО ПРОЦЕССА ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ Российский патент 2004 года по МПК A61K38/28 A61K39/395 A61P3/08 A61P3/10 

Настоящее изобретение относится к медицине и может найти применение в лечении сахарного диабета.

В настоящее время проблема сахарного диабета, в первую очередь инсулинзависимого сахарного диабета типа 1 (СД-1) переросла сугубо медицинские рамки и может быть причислена к общесоциальным проблемам. По данным ВОЗ число больных ИЗСД в мире превышает 100 млн. человек, причем повсеместно отмечается тенденция к росту заболеваемости ИЗСД и его "омоложению". Серьезной проблемой, особенно для лиц пожилого возраста, является и инсулиннезависимый сахарный диабет типа 2 (СД-2),

В основе патогенеза СД-1 в подавляющем большинстве случаев лежит деструкция инсулинпродуцирующих бета-клеток поджелудочной железы аутоиммунного генеза. При гибели более 70% бета-клеток в организме начинает ощущаться выраженная нехватка собственного инсулина со всеми вытекающими последствиями (гипергликемия, глюкозурия, кетоацидоз, генерализованные нарушения углеводного, липидного, энергетического и белкового обменов) и наблюдается клиническая манифестация СД-1.

При СД-2 деструкции инсулинпродуцирующих клеток в начальные периоды болезни не происходит. Напротив, продукция и секреция инсулина обычно повышаются, однако несмотря на это, как и при СД-1, у больных отмечается резко выраженная гипергликемия, глюкозурия, кетоацидоз, генерализованные нарушения углеводного, липидного, энергетического и белкового обменов. В отличие от СД-1 эти явления при СД-2 связаны не с нехваткой инсулина, а с развитием нечувствительности инсулиновых рецепторов к действию гормона (так называемая патологическая инсулинорезистентность). В небольшой части случаев (менее 10%) в основе такой инсулинорезистентности лежит врожденная генетически обусловленная функциональная неполноценность инсулиновых рецепторов. Однако в большинстве случаев неполноценность рецепторов является приобретенной, причем нередко в ее основе лежат патологические аутоиммунные процессы, либо нарушающие функции рецепторов, либо блокирующие их способность связывать инсулин.

Кардинальным способом решения проблемы лечения многих (возможно большинства) больных, страдающих инсулинзависимым или инсулиннезависимым сахарным диабетом (СД-1 и СД-2), обусловленным аутоиммунной агрессией, может быть способ стойкого и избирательного подавления хронического самоподдерживающегося патологического аутоиммунного процесса, приводящего либо к деструкции инсулинпродуцирующих клеток (при СД-1), либо нарушениям функций инсулиновых рецепторов (при СД-2). В настоящее время имеются теоретические основания, свидетельствующие о реальной возможности создания подобных способов (Weiner H.L. - Immunol. Today, 1997, 18, 7, 335-342).

Известен способ коррекции аутоиммунного процесса при диабете такими иммуносупрессорами, как циклоспорин А или его аналоги (Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Основы патохимии. Л.П.Б. СПб., 2000, с. 316).

Недостатками способа является высокая токсичность указанных иммуносупрессоров и низкая эффективность коррекции, не приводящая к сколько-либо значительному снижению основного медикаментозного лечения.

Задача изобретения - способ коррекции патологического аутоиммунного процесса при диабете, позволяющий снизить побочные эффекты иммуносупрессии и повысить эффективность коррекции.

Поставленная задача решается способом, заключающимся в аппликации на слизистые оболочки или введении ректально или вагинально инсулина, или его антигенов, или антиидиопатических аналогов, получаемых протеолитическим гидролизом соответствующих антигенов, в количестве 0,01-0,1 мг или их смеси.

Инсулин или его антиидиопатические аналоги могут вводиться в чистом виде, или с разбавителями, или с наполнителями.

Замена того или иного антигена, как было показано нами (Полетаев А.Б. и др. Медицинская консультация, 1998, № 4, 1-4) его иммунохимическими (стерическими) аналогами, например антиидиотипическими антителами (Fab и Fab₂ - фрагментами), получаемыми протеолитическим гидролизом, являющимися зеркальным отображением соответствующего антигена, конформационно “мимикрирующими” под его пространственную структуру, позволяет снизить их видовую специфичность и повысить стерическую доступность для лечебных целей.

Основу заявляемого способа коррекции составляет использование микроколичеств (доли миллиграмма специфических антигенов-мишеней аутоиммунных процессов, апплицируемых на слизистые оболочки пациента.

В случае СД-1 используются аппликации инсулина или его иммунохимических аналогов (фрагментов соответствующих антиидиотипических антител).

В литературе описаны попытки использования аппликаций инсулина больными сахарным диабетом для получения гормонзамещающего эффекта. Однако с учетом того, что всасывается в организм лишь небольшая порция апплицируемого гормона, при таком способе его введения требуется нанесение очень больших доз препарата.

Отметим, что в наших экспериментах при аппликациях препаратов инсулина на слизистые пациентов в микродозах, составляющих менее 1 ед. активности, собственно гормональные эффекты препарата практически не проявляются (оказываются исчезающи малы) или же вовсе отсутствуют при использовании вместо инсулина его иммунохимических аналогов (фрагментов антиидиотипов), не имеющих гормональной активности. Поэтому вызываемое нами улучшение состояния больных сахарным диабетом не имеет отношения к гормональному действию препаратов, а объясняется их антигенным иммуномодулирующим действием, в результате чего удается затормозить деструктивный антипанкреатический аутоиммунный процесс.

Подчеркнем, что использование именно микродоз антигена (инсулина или его аналогов), наносимого на слизистые оболочки, является принципиально важным моментом, необходимым для достижения желаемого лечебного эффекта. Это связано с тем, что ассоциированные со слизистыми оболочками супрессорные иммунорегуляторные клетки, от активности которых зависит возможность подавления аутоиммунного процесса антипанкреатической направленности (Harrison L.C., и др. Aerosol insulin induces regulatory CDS gamma delta Т cells that prevent murine insulindependent deabetes. J.Exp. Med., 1996, 184, 2167-2174), функционально активируются именно малыми дозами специфического антигена. В то же время лимфоциты-хелперы, т.е. клетки, ответственные за индукцию и поддержание аутоиммунного процесса, способны активироваться лишь под действием 100-1000-кратно более высоких доз антигена.

Таким образом, предлагаемый нами способ подавления антипанкреатической аутоиммунной агрессии у больных сахарным диабетом базируется на использовании разницы в дозах антигена, способных активировать супрессорные лимфоциты, не затрагивая при этом лимфоциты-хелперы. Причем этот иммуномодулирующий (иммунонаправляющий) феномен не зависит от наличия гормональной или иной биологической активности у используемого для подавления аутоиммунной агрессии антигена.

Получение препаратов для коррекции патологического аутоиммуного процесса при сахарном диабете типа 1 (СД-1)

Ниже описан способ получения Fab- и Fаb₂-фрагментов антиидиотипических антител (против антител к инсулину), являющихся структурными аналогами инсулина.

На колонках с иммобилизованным на инертном носителе препаратом инсулина человека, например на колонках инсулин-сефарозы, проводят выделение антиинсулиновых антител (АТ-1-Инс), используя в качестве исходного сырья пулированную сыворотку крови пациентов, больных СД-1.

Далее получают очищенные препараты Fab- или Fаb₂-фрагментов молекул АТ-1-Инс, например, подвергая очищенный препарат АТ-1-Инс гидролизу папаином, пепсином или трипсином, с последующей хроматографической доочисткой.

Очищенные препараты Fab- или Fаb₂-фрагментов молекул АТ-1-Инс используют для иммунизации кроликов по общепринятым схемам.

Из сыворотки иммунизированных кроликов с помощью иммуноаффинной хроматографии на колонках с иммобилизованным на инертном носителе препаратом АТ-1-Инс человека, например на колонках АТ-1-Инс-сефарозы, проводят выделение антиидиотипических антител (АИАТ-2-Инс). Для устранения "неспецифических" антиидиотипов, взаимодействующих с эпитопами, располагающимися вне пределов антигенсвязывающих сайтов АТ-1-Инс, проводят доочистку АИАТ-2-Инс, пропуская их через иммобилизованные на инертном носителе препараты "неиммунных" иммуноглобулинов.

Из очищенных АИАТ-2-Инс получают препараты Fab- или Fаb₂-фрагментов молекул АИАТ-2-Инс, которые и используют для специфического подавления патологических аутоиммунных процессов с направленностью к ткани поджелудочной железы.

Для специфического подавления патологических аутоиммунных процессов с направленностью к ткани поджелудочной железы используют также растворы коммерческих препаратов инсулина либо препараты полимеризованного (например, глутаровым альдегидом) инсулина.

Получение препаратов для коррекции патологического аутоиммуного процесса при сахарном диабете типа 2 (СД-2)

Ниже описан способ получения Fab-фрагментов и Fаb₂-фрагментов идиотипических антител, являющихся структурными аналогами гормонсвязывающих сайтов рецепторов инсулина.

На колонках с иммобилизованным на инертном носителе препаратом инсулином человека, например на колонках инсулин-сефарозы, проводят выделение антиинсулиновых антител (АТ-1-Инс), используя в качестве исходного сырья пулированную сыворотку крови пациентов, больных СД-1, либо сыворотки животных (например, кроликов, иммунизированных инсулином).

Далее получают очищенные препараты Fab или Fаb₂-фрагментов молекул АТ-1-Инс, например, подвергая очищенный препарат АТ-1-Инс гидролизу папаином, пепсином или трипсином, с последующей хроматографической доочисткой.

Полученные препараты используют для специфического подавления патологических аутоиммунных процессов, направленных к рецепторам инсулина (для лечении инсулиннезависимого сахарного диабета типа 2).

Нижеследующие примеры иллюстрируют коррекцию в соответствии с заявляемым способом.

Пример 1. Больная Е., возраст 52 года, диагноз СД-1, длительность заболевания 11 лет. До начала коррекции ежедневно получала по 35-40 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 7,5-10 мМ.

Проводилась десенсибилизирующая терапия в виде аппликаций на слизистую носа препарата нативного (немодифицированного) инсулина на ватных тампонах ежедневно по 0,1 мг в течение 15 недель.

Спустя 4 мес после завершения иммунокоррекции коррекции стала получать 15 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 5,5 мМ. Иммунологические показатели, отражающие активность антипанкреатических аутоиммунных процессов, резко измененные до начала лечения, возвратились в пределы нормы спустя 4,5 мес от начала лечения.

Пример 2. Больная М., возраст 31 год, диагноз СД-1, длительность заболевания 10 лет. До начала коррекции ежедневно получала по 40 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 8,5-12,5 мМ.

Проводилась десенсибилизирующая терапия в виде аппликаций на слизистую носа препарата полимерного инсулина на ватных тампонах ежедневно по 0,1 мг в течение 15 недель.

Спустя 4 мес после завершения иммунокоррекции коррекции стала получать 10 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 5,0 мМ. Иммунологические показатели, отражающие активность антипанкреатических аутоиммунных процессов, резко измененные до начала лечения, возвратились в пределы нормы спустя 4 мес от начала лечения.

Примечание: Предыдущая беременность (до проведения иммунокоррекции) закончилась антенатальной гибелью плода в результате развития тяжелой диабетической фетопатии. Спустя 2 мес после окончания корригирующей терапии наступила беременность, развивалась нормально и завершилась в 39 недель рождением практически здорового новорожденного (рост 52 см; вес 3850; Абгар 8-9).

Пример 3. Больная К., возраст 16 лет, диагноз СД-1, длительность заболевания 2 года. До начала коррекции ежедневно получала по 15 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 9-12 мМ.

Проводилась десенсибилизирующая терапия в виде аппликаций на слизистую носа по 0,1 мг препарата нативного инсулина. Спустя 2 недели появились жалобы на раздражение слизистых (сухость, зуд, покраснение). Препарат был заменен на структурные аналоги инсулина - Fab-фрагменты антиидиотипических антител (ежедневно по 0,1 мг в течение 15 недель). Жалобы прекратились.

Спустя 4 мес после завершения иммунокоррекции коррекции стала получать 3 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 4,5 мМ. Иммунологические показатели, отражающие активность антипанкреатических аутоиммунных процессов, резко измененные до начала, возвратились в пределы нормы спустя 3 мес от начала лечения.

Пример 4. Больной 3., возраст 26 лет, диагноз СД-1, длительность заболевания 21 год. До начала коррекции ежедневно получал по 45 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 9-11 мМ.

Имел осложнения в виде диабетической нейропатии; жаловался на постоянные боли в ногах, отсутствие эрекции.

Проводилась десенсибилизирующая терапия в составе ректальных свечей препаратов нативного (немодифицированного) инсулина по 0,1 мг в сочетании с 0,05 мг Fab₂-фрагментами антиидиотипических антител (ежедневно в течение 25 недель).

Спустя 4 мес после завершения иммунокоррекции коррекции стал получать 10 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 5,2 мМ. Иммунологические показатели, отражающие активность антипанкреатических аутоиммунных процессов, резко измененные до начала лечения, возвратились в пределы нормы спустя 3-4 мес от начала лечения.

Боли в ногах прекратились через 4-5 мес от начала лечения. Эрекция восстановилась через 3-4 мес.

Пример 5. Больной С., возраст 48 лет, диагноз СД-1, длительность заболевания 8 лет. До начала коррекции ежедневно получал по 45 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 9-11 мМ. Имел осложнения в виде диабетической нейропатии; жаловался на радикулитоподобные боли в спине. По данным иммунологического обследования выявлены высокие титры антипанкреатических антител в сочетании с повышенными титрами антител к инсулиновым рецепторам, т.е. сочетанные признаки СД-1 и СД-2.

Проводилась десенсибилизирующая терапия в составе ректальных свечей препаратов нативного (немодифицированного) инсулина по 0,1 мг в сочетании с 0,05 мг Fab₂-фрагментами идиотипических антител на слизистую носа (ежедневно в течение 20 недель).

Спустя 4 мес после завершения иммунокоррекции коррекции стал получать 10 ЕД инсулина в инъекциях. Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 5,2 мМ. Иммунологические показатели, отражающие активность антипанкреатических аутоиммунных процессов, и антител к инсулиновым рецепторам, измененные до начала лечения, возвратились в пределы нормы спустя 3,5 мес от начала лечения.

Радикулитоподобные приступы болей в спине прекратились, стали беспокоить значительно реже.

ПРИМЕР 6. Больная К., возраст 62 года, диагноз СД-2, длительность заболевания 6 лет. Лечение - диетотерапия в сочетании с сахаропонижающими пероральными препаратами. До начала коррекции ежедневно получала манинил в таблетках (0,01×4). Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 9-16 мМ (нестабильный сахар крови).

Проводилась десенсибилизирующая терапия в виде аппликаций на слизистую носа препарата структурных аналогов инсулиновых рецепторов - Fab-фрагментов антиидиотипических антител на ватных тампонах ежедневно по 0,1 мг в течение 20 недель.

Спустя 4 мес после завершения иммунокоррекции стала получать манинил в таблетках (0,005×4). Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 5,0 мМ (показатели стабилизировались). Уровень антител к рецепторам инсулина, резко повышенный до начала лечения, возвратился в пределы нормы спустя 4 мес от начала лечения.

Пример 7. Больная Е.. возраст 47 лет, диагноз СД-2, длительность заболевания 4 года. Лечение - диетотерапия в сочетании с сахаропонижающими пероральными препаратами, До начала коррекции ежедневно получала глюкофаг в таблетках (0,5×6). Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 13-15 мМ.

Проводилась десенсибилизирующая терапия в виде аппликаций на слизистую носа препарата структурных аналогов инсулиновых рецепторов - Fab- фрагментов антиидиотипических антител на ватных тампонах ежедневно по 0,1 мг в течение 15 недель.

Спустя 4 мес после завершения иммунокоррекции коррекции стала получать глюкофаг в таблетках (0,25×4). Среднесуточные показатели глюкозы крови (данные ежедневной глюкометрии) 6,0 мМ. Уровень антител к рецепторам инсулина, резко повышенный до начала лечения, возвратился в пределы нормы спустя 3 мес от начала лечения.

Нами была произведена оценка эффективности десенсибилизирующей терапии. Всего было проведено 46 наблюдений с пациентами, страдающими СД-1, и 16 наблюдений с пациентами, страдающими СД-2. Результаты соответствующих наблюдений представлены в табл. 1 и 2.

Длительность наблюдений составляла от 4 до 12 мес (от начала терапии).

Сколько-нибудь выраженных осложнений и побочных явлений проводимой в соответствии с заявленным изобретением десенсибилизирующей терапии по данным клинических наблюдений и лабораторных исследований не было отмечено. В трех случаях наблюдались незначительные местные реакции (жалобы на сухость слизистых; зуд) при аппликации препаратов на слизистую носа.

Изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии и иммунологии, и касается коррекции патологического аутоиммунного процесса при сахарном диабете. Для этого в качестве иммуносупрессоров используют инсулин или его антиидиотипические антитела или их смесь, которые апплицируют на слизистые оболочки в количестве 0,01-0,1 мг. Способ обеспечивает такую иммуномодуляцию, вследствие которой уменьшается деструктивный антипанкреатический аутоиммунный процесс. 2 табл.

Способ коррекции патологического аутоиммунного процесса при сахарном диабете с использованием иммуносупрессоров, отличающийся тем, что в качестве иммуносупрессоров используют инсулин, или его антиидиотипические антитела, или их смеси, которые апплицируют на слизистые оболочки в количестве 0,01-0,1 мг.