СТАБИЛИЗАТОР ВОДНОГО РАСТВОРА И ВОДОСОДЕРЖАЩЕГО СЫРЬЯ С САМОПРОИЗВОЛЬНО ИЗМЕНЯЮЩИМИСЯ ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫМИ СВОЙСТВАМИ Российский патент 2004 года по МПК A61L2/16 A61K47/16 A61K47/18 A61K47/20 A61K47/42 C02F1/46 A23L2/44 A23C9/152 A23B4/14 A61K7/00 A61K31/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области физической химии, в частности химии растворов, коллоидной химии и электрохимии, а также пищевой химии, и используется для стабилизации самопроизвольно изменяющихся окислительно-восстановительных свойств водных растворов и водосодержащего сырья, характеризующихся самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала по отношению к потенциалу водородного электрода, значение которого принято за нулевое, и может найти применение в пищевой промышленности, медицине, ветеринарии, фармацевтической промышленности, косметической промышленности, бальнеологии, сельском хозяйстве, рыбоводстве и других областях техники.

Уровень техники

Известны водные растворы и водосодержащее сырье природного и искусственного происхождения с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала по отношению к потенциалу водородного электрода, значение которого принято за нулевое.

К природным водным растворам и водосодержащему сырью с указанными окислительно-восстановительными свойствами относятся, такие как, например, слюна, кровь, грудное молоко, сок из свежесорванных томатов и моркови, сероводородные, железистые, азотные, водородные и некоторые другие минеральные воды, сероводородные и иные грязи, илы, торфы.

К искусственным водным растворам и водосодержащему сырью с указанными окислительно-восстановительными свойствами относятся некоторые алкогольные напитки, такие как, например, пиво, некоторые безалкогольные напитки, такие как, например, квас, сероводородные воды и грязи, водные растворы, в которых растворена биологически активная добавка Микрогидрин, вода и водные растворы, приобретающие указанные окислительно-восстановительные свойства в результате электрохимического (катодного) восстановления на электродах электролизера, например, типа СТЭЛ, Изумруд и др., а также вода и водные растворы, приобретающие указанные окислительно-восстановительные свойства любым иным путем (см. Леонов Б.И., Прилуцкий В.И., Бахир В.М. Физико-химические аспекты биологического действия активированной воды. Москва, 1999, с.163 или, например, патент РФ № 2155717 от 01.28. 2000, или, например, Широносов В.Г., Дубровская О.А., Муллахметов Р.Ф. Феномен бесконтактной активации при электролизе от микрогидрина и при химических реакциях. Третий Международный симпозиум "Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности." Москва, 2001 год, с.48).

К искусственным водным растворам и водосодержащему сырью с указанными окислительно-восстановительньми свойствами также относятся смеси любого сырья с водой или водным раствором, имеющих указанные окислительно-восстановительные свойства.

Под электрохимически восстановленной водой, или электрохимически восстановленным водным раствором, или катодно-восстановленной водой, или катодно-восстановленным водным раствором в контексте настоящего изобретения понимаются водные растворы, находящиеся в неравновесном, то есть в метастабильном состоянии под влиянием каких-либо физико-химических воздействий, чаще всего электрического тока. В литературе такие водные растворы описаны под такими терминами, как активированная вода, или электрохимически активированная вода, или католит, или модифицированная вода и т.п. (см., например, Глинка Н.Л. Общая химия. М.: Интеграл-Пресс, 2002 г., с.282-283, а также см. Прилуцкий В.И., Бахир В.М. Электрохимически активированная вода: аномальные свойства, механизм биологического действия. M.: 1997, с.5, а также, например, Фесенко Е.Е. и др. Иммуномодулирующие свойства бидистиллированной модифицированной воды. Биофизика, 2001, том 46, вып.2, с.353).

Под самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала в контексте настоящего изобретения понимается самопроизвольное повышение величины окислительно-восстановительного потенциала, имеющего преимущественно отрицательное значение либо близкое к значению потенциала водородного электрода, потенциал которого принят за нулевой, и зависит от свойств элементов и соединений “отдавать или принимать” электроны, и мерой этих свойств является сродство к электрону (см. Левант Г.Е., Райцын Г.А. Практикум по общей химии. М.: Высшая школа. 1971, с.154-155, Глинка Н.Л. Общая химия. М.: Интеграл-Пресс, 2002, с.82-83, 275).

Под окислительно-восстановительным потенциалом в контексте настоящего изобретения понимается разность потенциалов (э.д.с. - электродвижущая сила) в электрохимической цепи, которая возникает при погружении любого металла в водный раствор его солей и которая составлена, например, из стандартного водородного электрода и, например, хлорсеребряного электрода сравнения (ХСЭ).

Окислительно-восстановительный потенциал в контексте настоящего изобретения является мерой окислительно-восстановительных свойств указанных водных растворов и водосодержащего сырья и обозначается символом Eh.

Окислительно-восстановительный потенциал (Eh) характеризует степень активности электронов в окислительно-восстановительных реакциях в указанных водных растворах и водосодержащем сырье, связанных с присоединением или передачей электронов к окислителю от восстановителя соответственно.

Значение окислительно-восстановительного потенциала выражается в милливольтах (мВ) и может иметь как положительное, так и отрицательное значение относительно потенциала стандартного водородного электрода, значение которого принято за нулевое.

Окислительно-восстановительный потенциал при наличии восстановительных условий выражается отрицательной величиной, что зависит также и от величины водородного показателя (рН) растворов, например, при растворении в воде водорода, в том числе атомарного или сероводорода и т.д. (см., например, Крайнов С.Р., Швец В.М. Гидрогеохимия. М.: Недра, 1992, с.129, а также см., напр., Курортные ресурсы СССР. Медгиз, 1956 г, с.400-401).

Под ХСЭ в контексте настоящего изобретения понимается, что измерение произведено платиновым электродом (водородным) при хлорсеребряном электроде сравнения.

Водный раствор и водосодержащее сырье по настоящему изобретению с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала, имеют преимущественно отрицательный либо близкий к потенциалу водородного электрода, значение которого принято за нулевое, как в области отрицательных, так и положительных значений, окислительно-восстановительный потенциал, обладая при этом рядом полезных качеств, например дезинфицирующими, антисептическими, консервирующими, антиоксидантными, противовоспалительными, антимутагенными, радиопротекторными, иммуностимулирующими, адаптогенными, вирулицидными, противовирусными, регенерирующими, растворяющими, каталитическими и иными полезными качествами.

При этом, если не подвергать указанный водный раствор и водосодержащее сырье окислительным, механическим, радиационным и прочим внешним воздействиям, их биологическая активность и химическая реакционная способность полностью самопроизвольно исчезает в срок от 15 минут до 20 суток в зависимости от степени минерализации исходного водного раствора и водосодержащего сырья при самопроизвольном повышении окислительно-восстановительного потенциала от отрицательного значения указанной величины к положительному ее значению относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое.

Известен стабилизатор водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, а именно хлористый натрий, стабилизирующий указанный водный раствор, характеризующийся самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое.

Указанный стабилизатор приводит к увеличению стабильности окислительно-восстановительных свойств указанного водного раствора в 7-10 раз (см. Лобышев В.И., Петрушанко (Попова) И.Ю., Киселев В.И. Электрохимическая активация воды. В сборнике: Третий Международный симпозиум. Москва, 2001 год, с.76).

Недостатками указанного стабилизатора является то, что он приводит к увеличению минерализации и значительным сдвигам кислотно-щелочного равновесия указанного водного раствора, что неприемлемо для создания продуктов питания, лечебных и других продуктов, а также то, что уже через 10-15 дней окислительно-восстановительные свойства водного раствора возвращаются в исходное состояние, существовавшее до катодной обработки.

Сущность изобретения

Задачей настоящего изобретения является стабилизация окислительно-восстановительных свойств водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, с целью сохранения полезных качеств указанного раствора и сырья.

Поставленная задача достигается тем, что стабилизатор водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, представляет собой аминокислоту, выбранную из группы полярных (гидрофильных) незаряженных аминокислот, включающую глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин, либо их производные, либо пептиды, содержащие указанные аминокислоты и/или их производные, либо их смеси в количестве не менее 0,01 мас.%.

Производные могут быть представлены бетаином, глицинамидом, гомосерином, N-ацетилцистеином.

Пептиды могут быть представлены глицин-бетаином, глутатионом восстановленным, желатином.

Водный раствор и/или водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами со стабилизатором в контексте настоящего изобретения могут представлять собой составную часть продукта питания, включая минеральную и/или питьевую воду, молоко и молочный состав, сок, алкогольный и/или безалкогольный напиток, майонез, кетчуп, соус, мясной, рыбный, овощной и/или фруктовый полуфабрикат, колбасу и/или консервированный состав, кондитерское изделие, хлебобулочное изделие, макаронное изделие, что придает указанным продуктам свойства дезинфектанта, антисептика, консерванта, антиоксиданта, антимутагена, радиопротектора, иммуностимулятора, адаптогена, вирулицидного и противовирусного состава, противовоспалительного состава, стимулятора регенерации тканей и/или митотической активности полезной для человека и/или животных бактериальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

Водный раствор и/или водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами со стабилизатором в контексте настоящего изобретения могут представлять собой составную часть продукта бальнеологического назначения, включая минеральную воду, грязь (пелоид), глину, торф, ил, что придает указанным продуктам свойства дезинфектанта, антисептика, консерванта, антиоксиданта, антимутагена, радиопротектора, иммуностимулятора, адаптогена, вирулицидного и противовирусного состава, противовоспалительного состава, стимулятора регенерации тканей и/или митотической активности полезной для человека и/или животных бактериальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

Водный раствор и/или водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами со стабилизатором в контексте настоящего изобретения могут представлять собой составную часть продукта лечебного и лечебно-профилактического назначения, включая зубной эликсир, пасту, примочку, крем, водный и/или водно-масляный экстракт трав, биогенный препарат, гель, аэрозоль, тампон, лосьон, дезодорант, влажную гигиеническую салфетку, подгузник, перевязочный материал, включая ватно-марлевую повязку, бинт, вату, гидрогельный тампон, коллегановую пленку, альгипоровый гель, сорбент на основе угля, микрокристаллической целлюлозы и/или полисахаридов, пектиновую, полифепамовую, цеолитовую, хитиновую и/или хитозановую пленку, гель, порошок, раствор, питательную маску, шампунь, кондиционер, раствор для коррекции электролитного и/или кислотно-щелочного баланса, раствор для диализа, питательную и/или витаминную смесь, жидкость для хранения контактных линз, капли для глаз, основу для лекарственного препарата, влияющего на различные виды обмена, включая углеводный обмен, фосфорно-кальциевый обмен, гомеостаз, гемопоэз, гемостаз, влияющие на иммунитет, корректирующее противоопухолевую терапию, антибиотикотерапию, лучевую терапию, применяемые в гинекологии, оториноларингологии, стоматологии, офтальмологии, проктологии, урологии, для наружного применения, дерматологии, состав с дезинфицирующим и/или антисептическим действием, состав для лечения дисбактериозов, противовоспалительный состав, противомикробный состав различных групп, вирулицидный и противовирусный состав, противотуберкулезный состав, противогрибковый состав, состав, применяемый в гастроэнтерологии и/или гепатологии, бронхолегочный состав, противоаллергический состав, а также физиологический раствор, парентеральное состав для регидратации и/или дезинтоксикации, препарат для коррекции нарушений электролитного и/или кислотно-щелочного баланса, состав для парентерального питания, поливитаминный препарат с комплексом биогенных адаптогенов, аминокислотный препарат, препарат, применяемый при функциональной астении, корригирующую добавку к питанию, плазмозамещающий и/или искусственный заменитель крови, детоксицирующий состав, лекарственный состав для наружного, внутриполостного, внутривенного, внутримышечного, внутрибрюшинного, подкожного, внутрикожного и/или внутреннего введения, что придает указанным продуктам свойства дезинфектанта, антисептика, консерванта, антиоксиданта, антимутагена, радиопротектора, иммуностимулятора, адаптогена, вирулицидного и противовирусного состава, противовоспалительного состава, стимулятора регенерации тканей и/или митотической активности полезной для человека и/или животных бактериальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

Водный раствор и/или водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами со стабилизатором в контексте настоящего изобретения могут представлять собой составную часть продукта косметического назначения, включая зубную пасту, эликсир, тампон, крем, гель, аэрозоль, духи, одеколон, лосьон, дезодорант, влажную гигиеническую салфетку, шампунь, кондиционер, косметический состав, что придает указанным продуктам свойства дезинфектанта, антисептика, консерванта, антиоксиданта, антимутагена, радиопротектора, иммуностимулятора, адаптогена, вирулицидного и противовирусного состава, противовоспалительного состава, стимулятора регенерации тканей и/или митотической активности полезной для человека и/или животных бактериальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

Водный раствор и/или водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами со стабилизатором в контексте настоящего изобретения могут представлять собой составную часть продукта животноводческого назначения, включая лекарственный препарат, корм и питье, что придает указанным продуктам свойства дезинфектанта, антисептика, консерванта, антиоксиданта, антимутагена, радиопротектора, иммуностимулятора, адаптогена, вирулицидного и противовирусного средства, противовоспалительного средства, стимулятора регенерации тканей и/или митотической активности полезной для животных бактериальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

Водный раствор и/или водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами со стабилизатором в контексте настоящего изобретения могут представлять собой составную часть продукта ветеринарного назначения, включая корм, питье и/или лекарственный препарат, что придает указанным продуктам свойства дезинфектанта, антисептика, консерванта, антиоксиданта, антимутагена, радиопротектора, иммуностимулятора, адаптогена, вирулицидного и противовирусного средства, противовоспалительного средства, стимулятора регенерации тканей и/или митотической активности полезной для животных бактериальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

Водный раствор и/или водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами со стабилизатором в контексте настоящего изобретения могут представлять собой составную часть удобрения для сельского хозяйства, что придает указанному удобрению свойства дезинфектанта, антисептика, консерванта, антиоксиданта, антимутагена, радиопротектора, иммуностимулятора, адаптогена, вирулицидного и противовирусного средства, стимулятора роста растений и/или митотическую активность полезной для растений микробиологической флоры.

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является стабилизация окислительно-восстановительных свойств водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, с целью сохранения полезных качеств указанного раствора и сырья.

Известны полярные (гидрофильные) незаряженные аминокислоты к которым относятся глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин (см., напр., Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. “Биологическая химия” Москва, Медицина, 1990 год, с.29-31).

Поставленная задача достигается тем, что стабилизатор водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, представляет собой аминокислоту, выбранную из группы полярных (гидрофильных) незаряженных аминокислот, включающую глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин, либо их производные, либо пептиды, содержащие указанные аминокислоты и/или их производные, либо их смеси в количестве не менее 0,01 мас.%

Производные могут быть представлены бетаином, глицинамидом, гомосерином, N-ацетилцистеином.

Пептиды могут быть представлены глицин-бетаином, глутатионом восстановленным, желатином.

Указанные по настоящему изобретению аминокислоты, их производные и пептиды являются составной частью белков организма человека, животных, растений и других организмов, не являются токсичными и разрешены к применению в качестве продукта питания, компонента средств лечебного парентерального питания, других лечебных и лечебно-профилактических средств, а также применяются в качестве пищевых добавок (см., напр., Нечаев А.П., Траубенберг С.Е., Кочеткова А.А. и др. “Пищевая химия” Санкт-Петербург, ГИОРД, 2001 год, с.26-37, с.371-373, с.409-410).

В результате добавления указанных аминокислот, или их производных, или пептидов, содержащих указанные аминокислоты и/или их производные, либо их смесей в водный раствор и водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, в количестве не менее 0,01% мас., происходит стабилизация указанных окислительно-восстановительных свойств указанных растворов и сырья.

В результате добавления указанных аминокислот, или их производных, или пептидов, содержащих указанные аминокислоты и/или их производные, либо их смесей в водный раствор и водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, в количестве не менее 0,01% мас., полезные качества раствора и сырья сохраняются, что подтверждено заявителями биологическим тестированием и инструментальными методами.

Водный раствор и/или водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами со стабилизатором в контексте настоящего изобретения могут быть неотъемлемой составной частью продукта питания, бальнеологического продукта, лечебного и лечебно-косметического продукта, продукта ветеринарного и животноводческого назначения, удобрения для сельского хозяйства при условии наличия в продукте водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами по настоящему изобретению. Указанный продукт может быть как известным в настоящее время, так и полученным в будущем.

Стабилизатор в контексте настоящего изобретения стабилизирует окислительно-восстановительные свойства водного раствора и водосодержащего сырья и тем самым приводит:

- к предотвращению окислительной и микробиологической порчи продукта питания, бальнеологического, лечебного и лечебно-косметического продукта, продукта ветеринарного и животноводческого назначения, удобрения для сельского хозяйства, которые основаны на водном растворе и/или водосодержащем сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами;

- к предотвращению окислительной и микробиологической порчи различных поверхностей при их обработке указанным стабилизированным водным раствором и водосодержащим сырьем;

а также:

- обеспечивает защиту человека, животных и растений от вирусов, бактерий, грибков, плесеней и перекисного окисления липидов при потреблении продукции, которая основана на водном растворе и/или водосодержащем сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами;

- обеспечивает поддержание клеток, в том числе семени человека и животных, стволовых клеток, тканей и органов, предназначенных, например, для искусственного осеменения и пересадки, в жизнеспособном состоянии при условии, что они находятся в водном растворе и/или водосодержащем сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами.

Стабилизатор в контексте настоящего изобретения может использоваться в различных отраслях, таких как, например, пищевая промышленность, медицина, бальнеология, косметика, фармацевтика, ветеринария, животноводство, рыбоводство, растениеводство и др.

Стабилизатор в контексте настоящего изобретения, который может использоваться в пищевой промышленности, медицине, бальнеологии, косметике, фармацевтике, ветеринарии, животноводстве, рыбоводстве, растениеводстве и составляющий вследствие этого неотъемлемую составную часть продукта питания, бальнеологического продукта, лечебного и лечебно-косметического продукта, продукта ветеринарного и животноводческого назначения, удобрения для сельского хозяйства, при условии наличия в продукте водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами по настоящему изобретению, придает продуктам дополнительные биологически и химически активные качества, проявляющиеся в:

- бактерицидных, бактериостатических, противогрибковых, противоплесневых, вирулицидных, противовирусных, антиоксидантных, противовоспалительных, антимутагенных, радиопротекторных, иммуностимулирующих, адаптогенных, растворяющих, регенерирующих и активизирующих "дружественную" микрофлору человеческого или животного организма, в частности бифидобактерий и лактобацилл;

- сохранении в жизнеспособном состоянии клеток, таких как, например, стволовых клеток, тканей и органов, предназначенных, например, для их хранения и транспортировки, например, с целью последующей трансплантации;

- проявляющихся и в других полезных качествах, при сохранении их не менее одного года при условии их содержания в герметично закрытой таре.

Идентификация стабилизатора по настоящему изобретению включает измерение окислительно-восстановительного потенциала, например, рН-метром или иономером, таким как, например, “рН-340”, “ЭВ-74”, водного раствора и водосодержащего сырья со стабилизатором и, при наличии отрицательного окислительно-восстановительного потенциала и/или при наличии изменений окислительно-восстановительного потенциала, имеющего как отрицательное, так и положительное значения, относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, указанный раствор и сырье анализируются на содержание в нем указанных по настоящему изобретению аминокислот, например, анализатором аминокислот, например, путем хроматографического, или спектрофотометрического, либо иного рода анализа на предмет выявления указанных по настоящему изобретению аминокислот, их производных и пептидов, содержащих указанные аминокислоты и/или их производные, либо их смесей.

Известно, что неравновесные окислительно-восстановительные свойства у водных растворов проявляются при отклонении окислительно-восстановительного потенциала после электрохимического восстановления водных растворов и водосодержащего сырья сравнительно с первоначальными значениями окислительно-восстановительного потенциала не менее чем на 50 мВ, ХСЭ, какой бы первоначальный окислительно-восстановительный потенциал указанный водный раствор и водосодержащее сырье ни имели (см., например, патент РФ № 2155717 от 01.28.2000).

При наличии отрицательного окислительно-восстановительного потенциала и/или изменений окислительно-восстановительного потенциала от равновесного состояния как при отрицательном значении окислительно-восстановительного потенциала, так и при его положительном значении, а также при условии наличия в водном растворе и водосодержащем сырье указанных по настоящему изобретению аминокислот, и/или их производных, и/или пептидов, содержащих указанные аминокислоты и/или их производные, либо их смесей в количестве не менее 0,01% мас., указанные водный раствор и водосодержащее сырье стабилизированы в соответствии с настоящим изобретением.

Стабилизатор в контексте настоящего изобретения может быть неотъемлемой составной частью любого продукта животного, растительного, искусственного и синтетического происхождения как известного в настоящее время, так и полученного в будущем, в котором водный раствор и/или водосодержащее сырье имеют самопроизвольно изменяющиеся окислительно-восстановительные свойства, характеризующиеся самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала, имеющим преимущественно отрицательное значение величины потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое. Это могут быть:

- пищевое сырье, из которого в последующем производят фруктовые и овощные концентраты, мясные, рыбные, овощные и фруктовые полуфабрикаты и т.д.;

- готовые продукты питания, например столовая и лечебная минеральные воды, питьевая вода, соки, различные безалкогольные и алкогольные напитки, молоко и молочные составы, майонезы, кетчупы, соусы, мясные, рыбные, овощные, фруктовые составы, кондитерские, хлебобулочные и макаронные изделия, различные консервированные составы и т.д.;

- медицинское сырье, из которого в последующем производят медицинские и лекарственные препараты, в частности различные субстанции животного, растительного, искусственного и синтетического происхождения, например ткань поджелудочной железы животных, из которой производят инсулин; корень солодки, из которой производят глицирам; акрихин, из которого производят лекарственные препараты для лечения малярии, красной волчанки, кожного лейшманиоза;

- готовые медицинские и лекарственные препараты, например растворы для диализа, питательные смеси, физиологические растворы, искусственные заменители крови, жидкости для хранения контактных линз, любые лекарственные составы для наружного и внутреннего применения, например составы, влияющие на различные виды обмена, например углеводный обмен, фосфорно-кальциевый обмен, гомеостаз, гемопоэз, гемостаз и другие виды обмена; составы, влияющие на иммунитет, корригирующие противоопухолевую терапию, антибиотикотерапию, лучевую терапию; составы, применяемые в гинекологии, оториноларингологии, стоматологии, офтальмологии, проктологии, урологии; составы для наружного применения, например, применяемые в дерматологии; составы с дезинфицирующим и антисептическим действием для лечения дисбактериозов, противовоспалительные составы, противомикробные составы разных групп, противовирусные составы, противотуберкулезные составы, противогрибковые составы, составы, применяемые в гастроэнтерологии и гепатологии, бронхо-легочные составы, противоаллергические составы, и т.п., а также физиологические растворы, парентеральные составы для регидратации и дезинтоксикации, препараты для коррекции нарушений электролитного и кислотно-щелочного баланса, составы для парентерального питания, поливитаминные препараты с комплексом биогенных адаптогенов, препараты аминокислот, препараты, применяемые при функциональной астении, корригирующие добавки к питанию, плазмозамещающие и иные искусственные заменители крови и детоксицирующие составы, а также другие лекарственные составы, капли для глаз, ушей, различные аэрозоли, кремы, мази, гели;

- косметическое сырье, из которого в последующем изготавливают косметические составы, в том числе на основе липосом и микрокапсул, перфорированных углеводородов;

- косметические изделия, например зубные пасты, кремы, в том числе на основе липосом, микрокапсул, перфорированных углеводородов, также гели, аэрозоли, духи, одеколоны, лосьоны, дезодоранты, влажные гигиенические салфетки, подгузники, шампуни, кондиционеры;

- бальнеологические составы, например различные минеральные воды, целебные грязи, глины, торфы;

- продукты питания и корма для животноводства, домашних животных и рыбоводства, например полуфабрикаты для приготовления кормов, готовые составы, в том числе консервированные, профилактические и лекарственные препараты для животноводства, домашних животных и рыбоводства, питьевая вода для животных, вода для аквариумов;

- удобрения для проращивания семян, для различных растений, в том числе декоративных.

Этим не исчерпывается перечень применений стабилизатора по настоящему изобретению и возможны другие варианты его использования в качестве составной части пищевого, лечебного, косметического и других видов сырья и готовых продуктов.

Самопроизвольно изменяющиеся окислительно-восстановительные свойства водного раствора и водосодержащего сырья стабилизируются путем растворения в них указанных по настоящему изобретению аминокислот, и/или их производных, и/или пептидов, содержащих указанные аминокислоты, и/или их производные, либо их смесей в количестве не менее 0,01% мас.

Приготовленный настоящим способом стабилизированный водный раствор и водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами обеспечивает на продолжительный срок продукту, в составе которого содержится указанный водный раствор и/или водосодержащее сырье, полезные биологически и химически активные качества.

Способ может включать различные необязательные операции. К ним относятся операции, которые могут быть полезными в данном изобретении, например операции разбавления и сгущения. Операция разбавления может быть фактически произведена и производителем или пользователем сырья. Разбавление может приводить к изменению окислительно-восстановительных свойств, что приводит к повышению окислительно-восстановительного потенциала, являющегося мерой окислительно-восстановительных свойств водных растворов. Настоящий способ не требует специальных ограничений на разбавление и сгущение при условии, если это не приводит к уменьшению сохранности указанных окислительно-восстановительных свойств водного раствора и водосодержащего сырья по настоящему изобретению.

Другие необязательные операции, полезные в данном изобретении, включают операции добавления и/или смешивания любого необязательного подходящего компонента, такого как компоненты, приведенные ниже, в разделе “необязательные ингредиенты”.

Необязательные ингредиенты

К необязательным ингредиентам по настоящему изобретению причисляются:

- все ингредиенты, которые могут присутствовать факультативно, добавляемые производителем продукта с целью придать продукту улучшение товарного вида, запаха, вкуса, цвета, аромата, консистенции или вещества, добавляемые в продукт с целью ускорения или облегчения ведения технологических процессов, а также все вещества, не влияющие на технологию приготовления и/или проявление действия биологически активных, в том числе косметических и лекарственных продуктов, основанных на указанном средстве;

- природные и синтетические красители: например куркумин (турмерик); рибофлавины; кармины; хлорофилл и медные комплексы хлорофилла; сахарные колера 1, 2, 3, 4; каротиноиды, том числе бета-каротин, ликопин и т.д.; экстракты аннато; маслосмолы паприки; лютеин; красный свекольный (бетанин); антоцианы; тартразин; желтый хинолиновый; желтый “солнечный закат” FСF; камуазин (азорубин); понсо 4R (пунцовый 4R); синий патентованный V; индигокармин (индиготин); синий блестящий FCF; черный блестящий BN (бриллиантовый черный) и другие;

- стабилизаторы (фиксаторы) окраски: например соли азотистой и азотной кислот, например нитриты (NaNO₃ или/и KNO₃) или/и нитраты (NaNO₂ или KNO₂);

- ароматизаторы: например натуральные эфирные масла и экстракты (олеорезины), розовое, гераниевое и другие;

- пищевые ароматизаторы: например арованилон (этилванилин), пара-оксифенил-3-бутанон, цитраль, бензальдегид, этил-2-метилбутират, аллилдисульфид, анетол и т.д.;

- усилители вкуса и аромата: например глутамат натрия, лизин гидрохлорид, L-лейцин, мальтол, хлористый натрий, а также протеолитические ферментные препараты, например липазы;

- кислотообразователи: например фруктовые кислоты, в частности лимонная, яблочная, уксусная, янтарная, а также соляная, серная, фосфорная, соли этих кислот и т.д.;

- интенсивные подсластители и сахарозаменители: например ацесульфам (Е 950), аспартам (Е 951), сахарин и его натриевая соль (Е954), цикламовая кислота и ее соли (Е 952), изомальтит (Е 953), ксилит (Е 967), маннит (Е 421), фруктоза, сахароза, мед, глюкоза, галактоза;

- вещества, регулирующие консистенцию: например эфиры полиоксиэтиленсорбитана (Е 432...Е 436), аммонийные соли фосфатидиловой кислоты (Е 442), моно- и диглицериды жирных кислот (Е 471), фосфолипиды, эфиры глицерина и уксусной и жирных кислот (Е 472), эфиры сахарозы и жирных кислот (Е 473), другие эфиры глицерина (Е 474...Е477), лактилат натрия (Е 481(1)) и кальция (Е 482), эфиры сорбитана, SPAN'ы (Е 491...Е 496);

- загустители и гелеобразователи: например кислые полисахариды с остатками уроновой кислоты, кислые полисахариды с остатками серной кислоты, нейтральные полисахариды, кислые гидроколлоиды с остатками уроновой кислоты (например, трагакант Е 413 и гуммиарабик Е 414), а также нейтральные соединения (например, камедь бобов рожкового дерева Е 410 и гуар Е 412, а также агар и каррагинан, альгиновая кислота и ее соли, а также модифицированные крахмалы (Е 1400...1405, Е 1410...1414, Е 1420...1423, Е 1440, Е 1442, Е1443, Е1450), сложные эфиры целлюлозы Е 461...467, в том числе КМЦ (карбоксиметилцеллюлоза), полисахариды микробного происхождения, например ксантан, Е415, геллановая камедь Е 418, альгиновая кислота Е400 и ее соли Е 401...404, пектин Е 440; гиалуроновая кислота и ее соли;

- влагоудерживающие агенты: например глицерин, сорбит, инвертный сахар и другие сахароподобные вещества, агар, альгинаты, пектины;

- пленкообразователи: загустители и гелеобразователи, а также дисперсии полимеров, глицерин, моно- и диглицериды жирных кислот, натуральные и синтетические воски, ланолин, парафин;

- регуляторы кислотности: например кислоты, щелочи, буферные соли;

- эмульгирующие соли: например фосфаты, в частности полифосфаты, цитраты, тартраты, лактаты;

- разрыхлители: например дрожжи, аммоний, двууглекислый натрий;

- вещества, облегчающие фильтрование: например адсорбенты, флокулянты (среди которых, в частности, целлюлоза, кизельгур, перлит);

- осветлители: например агар, активированный уголь, каррагинан, целлюлоза, желатин, рыбий клей, древесный уголь, высушенный белок куриного яйца, каолин, гексацианоферрат калия, кизельгур, фитиновая кислота, поливинилпирролидон, танин, пектат натрия, фурцеллеран;

- составы для капсулирования: например желатин, казеин, гуммиарабик, пектин, карбоксиметилцеллюлоза, жиры и полимеры, а также смеси эмульгаторов и гидроколлоидов, а в качестве пластификаторов глицерин, сорбит, камеди и сахара;

- составы для таблетирования: например наполнители, разделители, влагоудерживающие агенты, адсорбенты, ускорители и ингибиторы растворения, стабилизаторы, красители и вкусоароматические вещества:

а) наполнители - крахмал, амилоза, микрокристаллическая целлюлоза, дикальцийфосфат, лактоза, оксид магния, маннит, полигликоли, сахара и сахарозаменители, сахароза, сорбит, маннит, виноградный сахар или водорастворимые этиленгликоли;

б) разделители (смазки) - ПАВ, порошкообразная целлюлоза, парафин, цетиловый спирт, стеариновая кислота, стеараты, тальк, полиэтиленгликоли;

в) ускорители растворения - модифицированные крахмалы, порошкообразная целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, метил и этилцеллюлоза, кроскарамеллоза, альгиновая кислота, нерастворимый альгинат кальция, пектин, трагакант, агар, альгинат натрия;

г) адсорбенты - крахмалы, молочный сахар, целлюлоза, каолин, бентонит, высокодисперсная пирогенная кремниевая кислота;

д) ингибиторы растворения - твердый парафин, стеарин, какао-масло, большие количества карбоксиметилцеллюлозы, полиэтиленгликоль и поливинилпирролидон;

- диспергирующие агенты (диспергаторы): например солюбилизаторы и инстантизаторы;

- антиокислители и защитные газы: например сорбиновая кислота и ее соли; бензойная кислота и бензоат натрия; метиловый, этиловый, пропиловый эфиры n-оксибензойной кислоты; муравьиная кислота; сернистый ангидрид и сульфиты натрия и калия; о-фенилфенол и о-фенилфенолят натрия; дифенил; диоксид углерода; азот; витамины Е, С, А, Н, группы В; бутил (гидр)оксианизол (БОА, Е 320), бутил (гидр)окситолуол (БОТ, "ионол" Е 321), а также изоаскорбиновая (эриторбовая) кислота (Е 315) и изоаскорбат натрия (Е 316), третбутилгидрохинон (Е 319) и эфиры галловой кислоты (Е 310...Е313); антибиотики, например низин; полифенольные соединения, например эпикатехин, эпигаллокатехин, эпигаллокатехин-галлат, биофлавоноиды - эллаговая, антрофлавоновая, галловая кислоты, а также эпигенин, мирицетин; глюкозинолаты, например изотиоциоцианаты, индол-3-карбинол, синигрин, брассинин, а также сернистые соединения, например диаллилсульфид, аллилдисульфид, аллилметилдисульфид, аллилметилтрисульфид; а также монотерпеновые соединения - d-лимонен, аураптен, карвеол, уротерпенол, сорберол.

Введение необязательных ингредиентов

Предпочтительный продукт, в котором стабилизатор в контексте настоящего изобретения может являться неотъемлемой составной частью, представляет собой водный раствор и водосодержащее сырье с окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися окислительно-восстановительным потенциалом, преимущественно имеющим отрицательное значение относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, в способе получения которого допускается присутствие по крайней мере одной дополнительной необязательной операции смешивания, и/или операции сгущения, и/или операции разбавления, во время которых прибавляется ингредиент, выбранный из группы, состоящей из красителей, стабилизаторов (фиксаторов) окраски, отбеливателей, ароматизаторов, усилителей вкуса и аромата, поваренной соли, сахара, белков, кислот, щелочей, буферов, заменителей соли, заменителей сахаров (подсластителей), эмульгаторов, загустителей и гелеобразователей, консервантов, антиокислителей, уплотнителей, влагоудерживающих агентов, антислеживающих агентов, пленкообразователей, регуляторов кислотности, пеногасителей и антивспенивающих агентов, эмульгирующих солей, разрыхлителей, веществ, облегчающих фильтрование, осветлителей, экстрагентов, носителей, разбавителей, растворителей, разделителей, осушителей, охлаждающих и замораживающих агентов, веществ, способствующих жизнедеятельности полезных микроорганизмов, пропеллентов, ферментов и ферментных препаратов, катализаторов гидролиза и инверсии, диспергирующих агентов и других групп с необязательными ингредиентами, присутствие которых в продукте не является обязательным, но которые обеспечивают продукту ту или иную коммерческую значимость.

Указанный продукт может производиться указанным выше способами, которые, впрочем, не ограничивают его производство данными примерами.

Изобретение иллюстрируется следующими, не ограничивающими его примерами. Приведенные далее примеры являются предпочтительными, предназначены лишь для подтверждения возможности осуществления изобретения и не должны стать основанием для ограничения объема притязаний заявителя. Специалист в данной области техники без труда найдет возможности иных воплощений изобретения, безусловно подпадающих под притязания заявителя, отраженные в формуле изобретения, приводимой ниже.

Пример 1

Этим примером подтверждается известное положение о том, что водный раствор, обладающий самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризуемые самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, сохраняет указанные свойства в течение 1-20 дней. Водопроводная вода с исходными характеристиками Eh=+260 мВ, ХСЭ и рН 6,7 поступает в прибор типа “Изумруд”, производимый в России, и на выходе принимает значения Eh=-150 мВ, ХСЭ и рН 7,8-7,9 при минерализации воды 170-190 мг/литр. Полученную воду переносят в непрозрачный стеклянный флакон, закрывают герметично и ставят в холодильник при температуре t=+4°С без доступа света. Во время нахождения флакона с водой в холодильнике указанный флакон не открывается и не встряхивается и не подвергается иным воздействиям. Через 72 часа флакон открывают и замеряют значение окислительно-восстановительного потенциала. Его значение составляет Eh=+260 мВ, ХСЭ и рН 6,8. Подобные эксперименты производились неоднократно с аналогичными результатами. Аналогичные результаты получены и другими экспериментаторами.

Пример 2

Этим примером доказывается, что полярные (гидрофильные) незаряженные аминокислоты, к которым относятся глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин или их производные, такие как, например, бетаин, глицинамид, гомосерин, N-ацетилцистеин, либо пептиды, такие как, например, глицин-бетаин, глутатион и желатин в различных концентрациях, в пределах растворимости указанных аминокислот в воде, в том числе при превышении 5 мас.%, обладают свойствами стабилизатора по отношению к самопроизвольно изменяющимся окислительно-восстановительным свойствам водного раствора.

Оптимальное количество указанных аминокислот, либо их производных, либо пептидов, либо их смесей, необходимое для стабилизации водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, составляет от 0,01 мас.% до 5,0 мас.%. Тем не менее, и большее их количество, например 10 мас.%, также стабилизирует водный раствор и водосодержащее сырье с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, что однако не является оптимальным ни с точки зрения растворимости, ни с точки зрения рентабельности производства указанных продуктов.

Водопроводная вода с исходными характеристиками Eh=+260 мВ, ХСЭ и рН 6,7 поступает в прибор типа “Изумруд”, производимый в России, и на выходе принимает значения Eh=-150 мВ, ХСЭ и рН 7,8-7,9 при минерализации воды 170-190 мг/литр. Полученный водный раствор с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами переносят в 56 флаконов по 4 флакона в каждой группе (итого получается 4 группы) и добавляют указанные по изобретению аминокислоты, в частности глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин, а также производные аминокислот, в частности бетаин, глицинамид, гомосерин, N-ацетилцистеин, и пептиды, в частности глицин-бетаин, глутатион восстановленный, желатин в различных концентрациях в каждую группу флаконов, в частности 0,01 мас.%, 0,5 мас.%, 5,0 мас.%, 10,0 мас.% и растворяют. Флаконы герметично закрывают крышками и подвергают стерилизации в автоклаве при температуре свыше 105 градусов по Цельсию в течение 18 часов. После процедуры стерилизации эти флаконы с указанными водными растворами помещают в термостат при температуре плюс 50 градусов по Цельсию. Флаконы с указанным водным раствором по изобретению хранятся при указанной температуре без доступа света в течение 6 месяцев. По истечении 6 месяцев флаконы вскрываются и производится измерение значений окислительно восстановительного потенциала. Результаты сведены в таблицу 1.

С практической точки зрения использование желатины представляет интерес еще и потому, что кроме стабилизирующего свойства она обладает еще и гелеобразующим свойством. Совокупность указанных свойств позволяет производить на основе желатины пищевые продукты с высокой вязкостью за счет дополнительного связывания воды с указанной окислительно-восстановительной способностью стабилизатором. К таким продуктам могут относится желе, зельц, мороженое, различные кулинарные изделия.

Пример 3

Пример, моделирующий поступление в организм водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению с целью демонстрации изменений в скорости повышения отрицательного окислительно-восстановительного потенциала при его разбавлении в водном секторе, характеризующемся положительным окислительно-восстановительными потенциалом.

Водопроводная вода с исходными характеристиками Eh=+250 мВ, ХСЭ и рН 6,7 поступает в систему очистки воды с обратным осмосом, производимой в США, и на выходе имеет значения Eh=+320 мВ, рН 6,3-6,7 с минерализацией до 1-6 мг/литр, а затем полученная вода поступает в прибор типа “Изумруд”, производимый в России, на выходе принимая значения Eh=-35 мВ, ХСЭ и рН 7,2-7,7 при минерализации воды до 5мг/литр. Полученный водный раствор с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами переносят в два 200 мл мерных стакана в объеме по 100 мл в каждом из указанных мерных стаканов. В один из мерных стаканов (опыт) вносят глицин в концентрации 0,5% и растворяют. В другой мерный стакан (контроль) глицин не вносят.

После этого в каждый из мерных стаканов доливают еще по 100 мл воды, очищенной с помощью системы очистки воды с обратным осмосом с окислительно-восстановительными потенциалом Eh=+320 мВ, ХСЭ, и перемешивают получаемые растворы, предварительно тщательно закрыв указанные емкости.

Через 10 минут после указанной операции смешивания измеряют окислительно-восстановительный потенциал Eh смешанных растворов у контрольного и у опытного образцов. Результаты сведены в таблицу 2.

Как следует из результатов, приведенных в таблице 2, при разведении водой, очищенной с помощью системы очистки воды с обратным осмосом в пропорции 50/50 опытного и контрольного водных растворов, значение окислительно-восстановительного потенциала опытного водного раствора осталось в области отрицательного потенциала, т.е. раствор по прежнему проявляет выраженные восстановительные свойства, а у контрольного образца окислительно-восстановительный потенциал перешел в область положительных значений, т.е. вода стала проявлять окислительные свойства.

После измерения Eh контрольного и опытного образцов водные растворы из указанных мерных стаканов переносят в открытые стандартного размера чашки Петри и производят их экспозицию на открытом воздухе в течение двух часов. После этого вновь измеряют окислительно-восстановительный потенциал опытного и контрольного образцов водных растворов. Результаты эксперимента приведены в таблице 3.

Как следует из результатов, приведенных в таблице 3, скорость повышения окислительно-восстановительного потенциала, являющегося мерой стабилизации окислительно-восстановительных свойств водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, составляет Eh=(10-3):2 часа=3,5 мВ/час, в то время как у контрольного образца скорость повышения потенциала составляет Eh=(170-80):2=45 мВ/час.

Пример 4

Данный пример демонстрирует противоокислительные (антиоксидантные) свойства водных растворов со стабилизатором по настоящему изобретению.

Отбираются две пробы воды, одна из которых является контрольной пробой воды под №2. Проба №2, обладающая начальным окислительно-восстановительными потенциалом Eh=-200 мВ, ХСЭ, после стерилизации в течение 60 минут при t=+120°С хранится в герметичной таре в течение 2 месяцев. По истечении указанного срока у пробы №2 замеряется окислительно-восстановительный потенциал Eh и рН, состав или соответственно Eh=+240 мВ, рН 8,22.

Проба №1 приготовлена одновременно с пробой №2. Отличие состоит в том, что сразу после получения в пробу №1 с Eh=-200 мВ, ХСЭ была введена аминокислота глицин в соответствии с настоящим изобретением в концентрации 0,5% мас. и после этого также была подвергнута стерилизации в течение 60 минут с последующим хранением в герметичной таре в течении 2 месяцев. Через два месяца обе пробы подверглись ультрафильтрации для очистки от микробного загрязнения. На основе представленных проб воды были приготовлены пробы молока соответственно 1 и 2. Обе пробы молока выдержали пятнадцать суток при комнатной температуре в темном месте, после чего из проб экстрагировали жиры диэтиловым эфиром. Экстракты жиров высушиваются сульфатом натрия, затем удаляют эфир при температуре 30 градусов по Цельсию. Инфракрасные (ИК) спектры сканировали, поместив экстракт в виде пленки между двух стекол бромистого калия в области 4000-400 см^-1. В аналогичных условиях регистрировали спектры жиров, экстрагированных из: а) свежего коровьего масла; б) составов окисления, выделенных с поверхности сливочного масла, выдержанного в течение 15 дней при комнатной температуре. ИК спектр экстракта жиров из молока (проба №1) совпадает с ИК спектром экстракта жиров, извлеченных из неокисленного коровьего масла. В спектре экстракта жиров молока (проба №2) установили следующее отличие: в области 1170 см^-1 (С - О колебания) изменилась форма полосы поглощения. Аналогичное изменение ИК спектра регистрировали в спектре экстракта жиров, извлеченных из окисленного коровьего масла. Из полученных данных следует, что в молоке, восстановленном с использованием специально подготовленной воды (проба №1), окисление жиров в составе молока за время эксперимента не наблюдается.

Полученные результаты подтверждают, что водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению, растворенный в водосодержащем сырье со сложным набором органических и неорганических соединений, с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, в такой же мере длительно сохраняет противоокислительные (антиоксидантные) свойства указанных водных растворов, как и окислительно-восстановительный потенциал.

Пример 5

Данный пример демонстрирует противоокислительные (антиоксидантные) свойства водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению.

На установке “Изумруд” российского производства были приготовлены две пробы катодно-восстановленной воды, которые были очищены от микробного загрязнения путем ультрафильтрации. В пробах замеряли рН и окислительно-восстановительный потенциал (Eh). Проба №1: рН 7,0, Eh=-200 мВ; проба №2: рН 7,0, Eh=-200 мВ. В пробу №1 была введена аминокислота серин при концентрации 0,1%. На основе указанных проб воды были приготовлены из сухого молока пробы молока соответственно 1 и 2. Обе пробы молока выдержали пятнадцать суток при комнатной температуре. По истечении 15 суток проба молока №1 не окислилась и не створожилась и имела органолептические свойства свежего молока. Проба молока №2 полностью окислилась и створожилась.

Полученные результаты подтверждают, что стабилизатор по настоящему изобретению, растворенный в водосодержащем сырье со сложным набором органических и неорганических соединений, с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, также длительно сохраняет противоокислительные (антиоксидантные) свойства указанных водных растворов.

Пример 6

Этот пример демонстрирует бактерицидные свойства водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению.

На установке “Изумруд” российского производства из водопроводной воды были приготовлены 3 (три) пробы электрохимически (катодно) восстановленной воды. В пробах замеряли рН, окислительно-восстановительный потенциал (Eh) и минерализацию. Проба №1: рН 7,0, Eh=-200 мВ при минерализации воды 170-190 мг/литр; проба №2: рН7,0, Eh=-200 мВ при минерализации воды 170-190 мг/литр и проба №3 с Eh=-200 мВ, рН 7,0. Все пробы воды были стерилизованы в течение 60 минут при t=+120°С.

Проба №1 содержит смесь аминокислот, в частности, такую как, глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, глутамин, аспарагин при общей концентрации 0,5%, а проба №3 содержит аминокислоту глицин в концентрации 0,5%. Все пробы хранятся в течение 30 суток при комнатной температуре в темном месте в герметично закрытых флаконах.

На основе указанных проб воды были приготовлены из сухого молока (производства Новая Зеландия) пробы молока соответственно 1, 2 и 3, причем проба №3 поставлена на длительное хранение в термостат при температуре 37°С на 4 месяца. Через сутки был проведен микробный анализ пробы №1 и пробы №2, который показал, что в пробе №1 в 10000 (десять тысяч) - 100000 (сто тысяч раз) по сравнению с пробой №2 снижено содержание различных бактерий, а именно Streptococcus lactis, Staphylococcus sp., Micrococcus sp., Bacillus sp. и др. При этом также снижено количество не только условно патогенных микроорганизмов, но и микроорганизмов, обладающих гемолитической активностью, в частности B.cereus, S.aureus, E.coli (энтеропатогенных).

После проведения указанного микробного анализа у пробы №1 и пробы №2 были проверены значения окислительно-восстановительного потенциала Eh и рН, которые состав или соответственно у пробы №1: Eh=-200 мВ, рН=7,0, у пробы №2 окислительно-восстановительный потенциал Eh и рН, состав или соответственно Eh=+250мВ, рН 7,9.

Через 2 месяца проба №3 была открыта и у нее были измерены Eh и рН, значение которых соответственно составило -120 мВ и 4,7. При этом измерение указанных величин проводилось в условиях, заведомо благоприятствующих заносу в молоко микроорганизмов. После указанных измерений проба вновь закрывалась, но без соблюдения строгой герметичности и вновь подвергалась нагреву до температуры t=+37°С в термостате в течение 2 месяцев.

Через 4 месяца после начала эксперимента был проведен анализ пробы №3 на наличие микроорганизмов, который показал, что указанная проба содержит полезные для человека лактобациллы в концентрации 10⁵, несмотря на благоприятные для развития микроорганизмов условия (t=+37°С, полноценная питательная среда в виде набора, включающего молочный жир, лактозу, неорганические вещества и т.п.).

Таким образом, стабилизатор по настоящему изобретению стабилизирует самопроизвольно изменяющиеся окислительно-восстановительные свойства приготовленного молочного состава на основе электрохимически (катодно) восстановленного водного раствора. При этом в условиях длительного хранения они оказываются свободными от обсеменения патогенной микрофлорой в отсутствие пастеризации и стерилизации. Известно неблагоприятное воздействие пастеризации и стерилизации на вкусовые и биологически активные качества молока и молочных продуктов.

Пример 7

Этот пример демонстрирует противомикробную и противогрибковую активность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, а также демонстрирует, что указанный водный раствор одновременно с противомикробной и противогрибковой активностью активизирует рост "дружественной" человеку микрофлоры бифидобактерий и лактобацилл.

В эксперименте использовались водопроводная вода с исходными характеристиками от Eh=+260 мВ, ХСЭ и рН 6,7 при минерализации воды 170-190 мг/литр, установка обратного осмоса, снижающая минерализацию водопроводной воды, и прибор типа “Изумруд” российского производства. Указанная водопроводная вода поступает в прибор типа “Изумруд” российского производства и на выходе принимает значения от Eh=-50 мВ, ХСЭ до Eh=-250 мВ, ХСЭ и рН от 5,0 до 8,8 при минерализации воды 80-240 мг/литр. В полученные водные растворы с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами добавлена аминокислота глицин при концентрации 0,1%-0,5% и стерилизованы в течение 30 минут при температуре 120°С. После этого указанные водные растворы хранились в герметично закрытых флаконах в течение 120 дней при t=24°С в темном месте. Указанные образцы были изучены на противомикробную и противогрибковую активность, а также на воздействие на бифидобактерии и лактобациллы через сутки после экспозиции указанных микроорганизмов в указанных водных растворах. В качестве тест-микробов были выбраны следующие:

- лактобациллы, бифидобактерии - облигатные представители нормальной кишечной микрофлоры (Lactobacillus fermentum, Bifidobacterium sp.);

- кишечная - палочка из состава нормальной микрофлоры и условно патогенная (E.coli О 83, E.coli гемолитическая);

- возбудители кишечных инфекций - сальмонеллы, шигеллы, иерсинии (Salmonella enteritidis, Shigella flexneri, Yersinia enterocolitica);

- условно патогенные микроорганизмы - золотистый стафилококк, протей, клебсиелла, синегнойная палочка, листерии, микроскопические грибы рода Кандида, аспергиллы (S.aureus, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Ps.aeruginisa, Listeria monocytogenes, Candida albicans, Aspergillus niger),

- а также бациллы, клостридии и дрожжи (Bacillus subtilis, Clostridium sporogenes, Saccharamyces cerevisiae).

Для культивирования в растворе со стабилизатором по настоящему изобретению готовили 18-24-часовые взвеси микроорганизмов в трех концентрациях 10⁴, 10⁶, 10⁸ КОЕ/мл (КОЕ - колониеобразующая единица микроорганизма на единицу объема). С поверхности питательной среды микроорганизмы смывали буферным раствором, состоящим из 1000 мл дистиллированной воды, калия дигидрофосфата - 0,45 г, динатрия гидрофосфата - 5,34 г.

В качестве контроля обязательно во всех опытах параллельно с раствором со стабилизатором по настоящему изобретению учитывали количество бактерий в исходном растворе (10⁸ КОЕ) через 18-24 термостатирования.

В контрольных растворах получены следующие результаты:

- кишечная палочка, иерсинии, сальмонеллы, клебсиеллы, синегнойная палочка, протей - КОЕ увеличивалось до 10⁹;

- лактобациллы, бифидобактерии - КОЕ снижалось до 10⁵-10⁴;

- количество остальных микроорганизмов (стафилококки, шигеллы, кандиды, аспергиллы, листерии, бациллы, дрожжи) оставалось на прежнем уровне - 10⁸.

В пробирки с герметично закрывающимися пробками с раствором, стабилизируемом по настоящему изобретению, вносили соответствующие количества микроорганизмов. Время термостатирования при 37°С 18-24 часа.

Для количественного учета бактерицидного (бактериостатического) действия указанных растворов на микроорганизмы после термостатирования высевали по 0,1 мл указанного состава на три чашки Петри с соответствующей питательной средой и выращивали исследуемые микроорганизмы в течение 1-х суток (2-3-х суток для анаэробов). В работе использовали питательные среды производства России (г. Оболенск), фирм BioMERIEUX (Франция), HiMedia (Индия), Serva (Германия) - Endo, SS - для кишечной палочки, протея, сальмонелл, шигелл, иерсиний, клебсиелл; MRS - для лактобацилл; PALCAM - для листерии; Staph agar - для золотистого стафилококка; BIGGY - для микроскопических грибов Кандида; Pseudomonas agar - для синегнойной палочки; Тиогликолевая среда - для бифидобактерии; Clostridial agar - для клостридий; 5% кровяной агар - для исследования гемолитических свойств микроорганизмов и культивирования аспергилл, бацилл; Czapek agar - для дрожжей.

Результаты экспериментов приведены в таблицах 4-12. Условные обозначения: рН - водородный показатель, М - минерализация, Eh - окислительно-восстановительный потенциал.

Пример 8

Пример, демонстрирующий лечение дисбактериоза водным раствором со стабилизатором по настоящему изобретению.

Было изучено влияние перорального употребления водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению и имеющего параметры: рН 7,5, Eh=-150 мВ при минерализации 170-190 мг/л на состав кишечной микрофлоры на ограниченном количестве добровольцев. После его приема в количестве 0,6 литра в день в течение четырех недель был отмечен стабильный состав микрофлоры - количество бифидобактерий составляло в среднем 10⁷-10⁹ КОЕ/г, лактобацилл - 10⁶-10⁷, нормальная кишечная палочка достигала 10⁶-10⁷, количество условно патогенных кишечных микроорганизмов не превышало 10¹, отсутствовали золотистые и другие гемолитические виды стафилококков, микроскопические грибы, аспергиллы, условно патогенные неферментирующие бактерии. Показатели иммунной системы у обследованных лиц находились в пределах возрастных норм. У одного из обследованных до приема указанного по настоящему изобретению раствора со стабилизатором были выявлены изменения в составе кишечной микрофлоры следующего характера: снижение количества лактобацилл (10⁴), бифидобактерий (10⁵) и полноценной кишечной палочки (10⁴), увеличение споровых микроорганизмов (10⁸) и фекальных стрептококков (10⁸), в том числе с гемолитическими свойствами 10⁴. Количество условно патогенных энтеробактерий (клебсиелл) доходило до 10⁵. После приема указанного раствора со стабилизатором в течение четырех недель было отмечено увеличение количества лактобацилл, бифидобактерий и полноценной кишечной палочки. Клебсиеллы и гемолитический стрептококк не выделялся, а число споровых микроорганизмов снизилось до 10³.

Кроме того, из кишечного тракта элиминировались псевдомонады и кандиды, определявшиеся у данного пациента в небольшом количестве до приема водного раствора со стабилизатором.

У исследуемого В.Д., принимавшего указанный водный раствор со стабилизатором в течение одного месяца, при исследовании кишечного тракта выявлен стабильный состав микрофлоры, несмотря на то, что до его приема объективно отмечались выраженные клинические признаки дисбактериоза (чередование запоров и диареи, метеоризм, боли по ходу толстого кишечника).

У исследуемого В.П. до приема водного раствора со стабилизатором были понижены количества лактобацилл (10⁴) и кишечной палочки (10⁴), выделены условно патогенные Клебсиеллы - 10⁵ и золотистый стафилококк - 10², клостридии - 10⁸. Через четыре недели на фоне приема водного раствора со стабилизатором отмечены следующие показатели кишечной микрофлоры - количество лактобацилл увеличилось до 10⁸, полноценной кишечной палочки до 10⁷, на два порядка снизилось количество условно патогенных клебсиелл и на четыре порядка клостридии.

Пример 9

Пример, демонстрирующий повышение чувствительности бактерий к антибиотикам после их культивировании в водном растворе со стабилизатором по настоящему изобретению.

На примере антибиотиков - хлорамфеникола, канамицина, амоксициллина, налидиксовой кислоты, амикацина, гентамицина и ципрофлоксацина проверили антибиотикоустойчивость золотистого стафилококка, сальмонеллы, шигеллы и клебсиеллы. Применили метод диффузии препаратов в питательный агар. Для обработки бактерий были использованы вышеуказанные антибиотики, растворенные в растворе со стабилизатором по настоящему изобретению с рН 7,9 минерализацией 350 мг/л и Eh=-230 мВ, ХСЭ (опыт). В качестве контроля взяли стерилизованную воду с Eh=250 мВ, ХСЭ, рН 7,9 и минерализацией 350 мг/л.

Получены следующие результаты:

Salmonella sp. - штамм изменился от устойчивого к чувствительному к гентамицину и налидиксовой кислоте и от умеренно чувствительного к чувствительному к ампициллину и ципрофлоксацину;

Shigella sp. - штамм изменился от устойчивого к чувствительного к ампициллину, гентамицину и от умеренно чувствительного к чувствительному к ципрофлоксацину, амикацину, канамицину;

S. aureus - усилилась чувствительность к ампициллину;

Klebsiella Pneumoniae - увеличилась чувствительность к амикацину.

В таблице 13 указан % увеличения диаметра зоны подавления роста м/организмов в опытном водном растворе со стабилизатором по сравнению с контрольным.

Указанный пример показывает наличие эффекта повышения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, растворенным в водном растворе со стабилизатором по настоящему изобретению. Таким образом, соприкосновение микроорганизмов с антибиотиками, растворенными в указанном растворе со стабилизатором, ведет к усилению эффективности способов лечения или дезинфекции антибиотиками. Указанные в настоящем примере антибиотики не ограничивают совместное применение водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению с другими, применяющимися в настоящее время или в будущем антибиотиками, дезинфектантами и иными лекарственными препаратами.

Общие выводы к примерам 6-9

Проведенные исследования по применению водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению с минерализацией и водородным показателем, не выходящим за рамки физиологически допустимых границ для человека с рН 5,0-8,8, с минерализацией на уровне до 350 мг/л, при Eh = от -50 мВ до -300 мВ, ХСЭ на жизнедеятельность микроорганизмов различных семейств, выявили следующее:

1. Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению обладает выраженным бактерицидным действием по отношению к сальмонеллам, шигеллам и микроскопическим грибам рода Кандида.

2. Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению значительно стимулирует рост лактобацилл, бифидобактерий, пивных и пекарских дрожжей, причем как в щелочной, так и в кислой средах культивирования.

3. Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению оказывает выраженное бактериостатическое действие в отношении синегнойной палочки, золотистого стафилококка, клебсиелл, протея, аспергилл, листерий, клостридий и бацилл. Это бактериостатическое действие проявляется как в кислой, так и в щелочной среде. Это обстоятельство отличает указанный состав от известных в настоящее время консервантов, которые проявляют эффективность в кислой среде, например бензойная кислота, бензоат натрия, сорбиновая кислота, сорбат калия, которые при этом одновременно подавляют деятельность бифидобактерий и лактобацилл.

4. Физиологический раствор со стабилизатором по настоящему изобретению оказывает бактериостатическое действие, в том числе и в щелочной среде в отношении бактерии Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori), являющейся причиной развития язвенных заболеваний.

5. У исследованных бактерий увеличивается чувствительность к антибиотикам, растворенным в водном растворе со стабилизатором по настоящему изобретению.

6. Применение водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению для разведении сухого молока или контаминированных молочных составов предупреждает размножение условнопатогенных бактерий либо ведет к их исчезновению в том числе и при длительных сроках экспозиции.

7. Отмечено уменьшение зон гемолиза у S. aureus в результате обработки взвеси бактерий водным раствором по настоящему изобретению на 18-20%, что косвенно свидетельствует о снижении вирулентности.

8. Показано, что бактериостатический эффект у водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению начинает проявляться после 1 часа его воздействия на бактерии.

В экспериментах с микроорганизмами, культивируемыми в водном растворе со стабилизатором по настоящему изобретению, показано, что при внесении в указанный раствор взвеси бактерий, дрожжеподобных микроскопических грибов, плесневых грибов и дрожжей в концентрациях от 10⁴ до 10⁸ КОЕ/г происходит следующее:

- увеличение количества полезных бактерий (бифидобактерий и лактобацилл) в среднем в 10-100 раз;

- рост дрожжей увеличивается в 10-100 раз;

- количество микроскопических грибов рода Кандида с 10⁸-10⁴ уменьшается до 0;

- значительно снижается размножение сальмонелл и шигелл при исходных концентрациях 10⁸ в среднем в 100-1000 раз, а при концентрации 10⁴ до 0.

Таким образом, проведенные исследования показали техническую применимость водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению при санации микрофлоры кишечного тракта организма без побочных действий, связанных с включением в известные в настоящее время про- и эубиотики составов жизнедеятельности микроорганизмов и химических наполнителей, в том числе антибиотиков и консервантов.

Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению может применяться в пищевой промышленности для подготовки и растворения различных порошкообразных составов с целью нормализации микрофлоры организма, либо с целью предотвращения контаминации продуктов питания, либо их обеззараживания.

Пример 10

Настоящий пример демонстрирует вирулицидную и антивирусную активность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на примере гепатита С (in vitro) и одновременно с тем подтверждает, что указанный раствор со стабилизатором не проявляет острой токсичности.

В работе использовали цитопатогенный штамм вируса гепатита С (ВГС), относящийся к генотипу 1b. Штамм был выделен из сыворотки крови больной хроническим вирусным гепатитом С, идентифицирован как вирус гепатита С. В работе использовали инфекционные дозы ВГС, равные 10,0 ТЦД 50/20 мкл.

Были использованы высоко чувствительные к цитопатогенному действию ВГС культуры перевиваемых клеток почек зеленой мартышки, клон №6 (Vero-6).

Их использовали в виде однодневного монослоя клеток, выращенного в 24-луночных пластиковых панелях. Культуры клеток Vero-Е6 выращивали на двойной среде Игла с 10% сыворотки эмбриона телят с добавлением глютамина и антибиотиков (100 ЕД/мл).

Для титрования остаточной инфекционности вируса использовали перевиваемую линию клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ), также чувствительные к репродукции ВГС. Их использовали в виде однодневного монослоя клеток, выращенного в 96-лучночных пластиковых панелях для культур клеток. Культуры клеток СПЭВ выращивали на среде 199 с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота, антибиотиков.

В работе также использовали культуры клеток тестикул поросенка (ПТП). Культуры клеток ПТП использовали в виде однодневного монослоя, выращенного на 24- и 48-луночных панелях на минимальной среде Игла (фирма Ну Clone, США) с добавлением 10% сыворотки телят, глютамина и антибиотиков.

В работе использовали аминокислоту глицин в концентрации 0,5% мас. в качестве стабилизатора окислительно-восстановительных свойств водного раствора в виде среды поддержки, питательной среды и вируссодержащей жидкости с Eh=-300 мВ, рН 7,5-8,0 и с минерализацией 170-190 мг/л. Перед началом опыта в указанном водном растворе со стабилизатором по настоящему изобретению растворяли 2 г сухой среды Игла, после полного растворения жидкую среду фильтровали. Затем к фильтрату добавляли 7% сыворотки эмбриона телят, антибиотики. Эта среда, содержащая указанный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению, служила как средой поддержки, так и питательной средой для инфицированных и неинфицированных культур клеток. В качестве контрольного опыта использовали те же культуры клеток и вирус, который выращивали на среде, не содержащей указанного раствора.

Были проведены следующие исследования:

1. Изучение цитотоксических свойств водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. С этой целью культуры клеток Vero-Е6, СПЭВ и ПТП выращивали и выдерживали на указанном растворе со стабилизатором по настоящему изобретению в течение 4 дней. Полученные результаты изучения жизнеспособности клеток сравнивали с таковыми в культурах клеток, выращиваемых на стандартной среде.

2. Изучение вирулицидных свойств водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. Вируссодержащую жидкость и питательную среду, содержащую указанный раствор со стабилизатором, соединяли в соотношении 1:9 соответственно и выдерживали при 4°С в течение 1 часа и 24 часов. Контролем служила вируссодержащая жидкость, соединенная в соотношении 1:9 с обычной питательной средой, не содержащей водного раствора со стабилизатором. Результаты учитывали после титрования остаточной инфекционной активности ВГС в культурах клеток опытных и контрольных образцов.

3. Изучение противовирусной активности водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. Противовирусную активность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению исследовали в культурах клеток ПТП по данным изучения а) жизнеспособности инфицированных клеток, выращиваемых на обычной среде и среде, содержащей указанный раствор со стабилизатором, б) по концентрации инфекционного вируса, продуцируемого клетками, выращиваемых на обычной среде и среде на указанном растворе со стабилизатором по настоящему изобретению.

Были получены следующие результаты.

1. Изучение цитотоксических свойств водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. Получены данные о том, что среда, содержащая указанный раствор со стабилизатором, не обладает токсическими свойствами и не влияет на жизнеспособность, пролиферативную активность неинфицированных культур клеток Vero-Е6, ПТП и СПЭВ. Более того, получены данные, свидетельствующие о том, что культуры клеток, выращиваемые на среде, содержащей указанный раствор со стабилизатором, обладают большей адгезивной способностью монослоя клеток (способность прикрепляться к дну культурального флакона), что может свидетельствовать и о большей жизнеспособности клеток, культивируемых в этих условиях.

2. Изучение вирулицидных свойств водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. Эти данные представлены в таблице 14.

Как видно из данных таблицы 14, экспозиция ВГС-содержащего материала в среде, содержащей водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению в течение 24 часов при +4°С, приводила к снижению инфекционной активности вируса для культур клеток разного происхождения на 2,8-3,0 lg ТЦД50. Несколько ниже активность водного раствора со стабилизатором проявлялась при экспозиции в течение 1 часа (снижение титров ВГС на 2,3 lg ТЦД50). Таким образом, данные, представленные в таблице 14, свидетельствуют о том, что среда Игла, приготовленная на водном растворе со стабилизатором по настоящему изобретению, характеризуется вирулицидной активностью.

3. Антивирусные свойства водного раствора со стабилизатором в отношении инфекции, вызванной ВГС в культурах клеток ПТП.

Данные опыта антивирусных свойств водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению представлены в табл. 15, 16, 17.

Обнаружено, что выращивание ВГС инфицированных культур клеток ПТП на среде, содержащей водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению, добавленный сразу же после заражения клеток, приводит, как правило, к 100% выживаемости клеток. В это время в контрольных опытах к этому дню 50% ВГС инфицированных клеток монослоя погибало. Эти данные свидетельствуют в пользу антивирусных свойств водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению.

Из данных таблицы 16 видно, что выращивание ВГС инфицированных культур клеток ПТП на среде, содержащей водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению, добавленный за 24 часа до заражения клеток, также приводит к 100% выживаемости клеток. В это время в контрольных опытах к этому дню 50% ВГС инфицированных клеток монослоя погибало. Эти данные также свидетельствуют в пользу антивирусных свойств водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению.

3) Для прямой оценки противовирусного действия водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению в культурах клеток ПТП, инфицированных ВГС, на 3-й день после инфекции пробы среды отбирали и титровали на культурах клеток ПТП. Данные таблицы 17 представляют результаты титрования проб культуральной среды.

Показано, что водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению обладает противовирусными свойствами. В частности, обнаружено, что наибольшей противовирусной активностью указанный раствор со стабилизатором обладает в случае обработки клеток в момент заражения. В этих случаях титры вируса в культурах клеток, обработанных сразу же после инфекции указанным раствором, снижались на 3,5-4,4 lg ТЦД50. Обработка клеток указанным раствором со стабилизатором за 24 часа до заражения клеток, как правило, также приводила к существенному антивирусному эффекту (снижение титров ВГС на 2,7-3,7 lg ТЦД50).

4) Изучение вирулицидной и противовирусной активности водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению из флаконов, не полностью наполненных водой, соприкасающейся с воздухом.

В этих опытах, как правило, использовали водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению, оставшийся во флаконах от прежних опытов через 24 часа ее экспозиции с воздухом при сохранении стерильных условий (стерильно закрытые флаконы).

В частности, было показано, что в случае “аэрации” указанного раствора со стабилизатором во флаконах в течение 24 часов он полностью теряет вирулицидные и антивирусные свойства в отношении вируса гепатита С.

Таким образом:

1. водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению не обладает цитотоксическими свойствами для культур клеток Vero-Е6, СПЭВ, ПТП в течение 4 и более дней культивирования;

2. водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению обладает вирулицидной активностью в отношении вируса гепатита С при экспозиции ВГС-содержащей жидкости и среды Игла, приготовленной на указанном составе в течение 1 часа и 24 часов, титры ВГС для культур клеток снижаются на 2,3-3,0 lg ТСД50;

3. водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению обладает противовирусными свойствами и способен снижать продукцию ВГС инфицированными клетками в среднем на 3,0-4,0 lg при добавлении его сразу же после адсорбции ВГС на клетки или за 24 часа до инфекции клеток вирусом гепатита С;

4. вирулицидные и антивирусные свойства водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению полностью утрачивались в случае аэрации указанного раствора со стабилизатором в течение 24 часов.

Пример 11

Настоящий пример демонстрирует вирулицидную и антивирусную активность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на примере гепатита С (in vivo).

В работе использовали цитопатогенный вариант ВГС (вирус гепатита С), выделенный из сыворотки крови хронически инфицированной ВГС больной. По данным генотипирования изолированный вариант ВГС относится к наиболее распространенному в России генотипу 1b ВГС. В исследованиях использовали инфекционные дозы ВГС, равные 10,0 ТЦД50.

Для изучения противовирусной активности указанный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению использовали белых беспородных половозрелых мышей массой 18-20 г. Материал, содержащий ВГС, в дозе 100 ТЦД₅₀ в 0,2 мл вводили животным внутрибрюшинным способом. Часть животных оставляли контрольными. На 9-й день после заражения мышам внутривенно вводили водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению в объеме 0,2 мл. Указанный раствор вводили мышам 1 раз в день в течение 4-х дней. В опыте использовали по 10 животных на каждый вариант опыта. Через 2 дня, а также через 10 дней после последнего введения указанного сырья по 50% животных вскрывали, извлекали печень, головной мозг, забирали кровь. Пробы сывороток крови, надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования при 3000 об/мин в течение 15 мин гомогенатов ткани печени и головного мозга, использовали для определения антигенов ВГС и инфекционной активности вируса гепатита С. С этой целью вируссодержащие пробы титровали в культурах клеток СПЭВ. Антиген ВГС в данных пробах изучали в реакции гемагглютинации (РГА), используя классический метод, описанный Clarke и Casals (1968).

Были использованы высоко чувствительные к цитопатогенному действию ВГС культуры перевиваемых клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ), полученные из фирмы “Нарвак”, Москва. Их использовали в виде однодневного монослоя клеток, выращенного в 24-луночных пластиковых панелях. Культуры клеток СПЭВ выращивали на среде 199 с 10% сыворотки эмбриона телят с добавлением глютамина и антибиотиков (100 ЕД/мл).

Для титрования остаточной инфекционной активности вируса использовали ту же линию клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ).

В работе использовали водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению со следующими параметрами: Eh=-300 мВ, рН 7,5-8,0 и минерализация, равная 170-190 мг/л. В опыте использовали по 0,2 мл указанного раствора, которое вводили животным внутривенно.

Инфекционную активность ВГС, содержащегося в пробах органов и тканей инфицированных мышей, учитывали по результатам титрования, как правило, на 6-7 день после инфекции, когда развивалось максимальное цитопатогенное действие вируса, используя формулу Рида и Менча для подсчета титра вируса гепатита С.

Результаты.

Как видно из данных таблицы 18 А, все пробы сывороток крови, гомогенатов печени и головного мозга, полученных от контрольной группы ВГС инфицированных мышей на 17 день после заражения, содержали антигенную активность ВГС. Причем максимальные проявления показателей антигенной активности вируса обнаружены в печени контрольной группы ВГС инфицированных животных, не получавших указанный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению. У животных, которым вводили водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению, на 3-й день после последнего введения была отмечена заметная тенденция к снижению титров гемагглютинина ВГС. В частности, показано, что концентрация антигена ВГС в сыворотке крови мышей снизилась почти в 3 раза, более чем в 2 раза в головном мозге и в 2 раза ниже составляла концентрация антигена в печени ВГС инфицированных животных.

Представляло интерес изучить влияние водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на инфекционные свойства ВГС в тканях и органах ВГС инфицированных животных. Показано, что через 3 дня после последнего введения указанного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению инфекционные титры ВГС в сыворотке крови падали на 3,3 lg (средние данные).

Близкие результаты, свидетельствующие об эффективности указанного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, были получены при изучении тканей печени (таблица 18 Б). В частности, показано, что инфекционная активность ВГС в тканях печени после 4-кратного введения указанного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению падала на 0,8 lg. Сокращались и размеры печени и селезенки у ВГС инфицированных мышей под влиянием лечебного эффекта указанного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению (таблица 20).

Наибольшие титры ВГС (до 7,01 g ТЦД₅₀/20 мкл) наблюдали в тканях головного мозга ВГС инфицированных мышей (табл.18Б). Однако и в этом случае у мышей, получавших указанный водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению, наблюдали снижение титров инфекционной активности ВГС на 3,3 lg.

Таким образом, данные, полученные при изучении органов и тканей мышей на 17 дней после инфекции ВГС и 3-й день после 4-кратного применения водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, свидетельствуют о его высокой противовирусной активности в отношении инфекции, вызванной ВГС у животных.

В этой связи интересно было выяснить продолжительность положительных изменений в организме ВГС инфицированных мышей после отмены введения водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. Поэтому 2-я группа ВГС инфицированных животных была обследована на 28 день после инфекции и на 11 день после отмены лечения указанным раствором со стабилизатором по настоящему изобретению.

Полученные результаты приведены в таблице 19 А, Б. Исследование антигенной активности ВГС в органах и тканях мышей в этот период времени позволило также установить продолжающийся антивирусный эффект раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. Заметное снижение титров гемагглютинина в сыворотке крови животных, 3-кратное снижение антигена ВГС в печени мышей и более чем 3-кратное снижение в головном мозге животных свидетельствовало о продолжающемся антивирусном эффекте водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению даже через 11 дней после отмены введения водного раствора со стабилизатором.

Изучение инфекционной активности ВГС в органах и тканях ВГС инфицированных мышей показало, что в отдаленные сроки после завершения лечения антивирусный эффект введенного водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению сохранялся в течение более чем 10 дней. Однако анализ полученных данных позволил обнаружить иные закономерности в параметрах инфекции ВГС в эти сроки. В частности, показано, что титры ВГС, содержащиеся в сыворотке крови и в печени контрольной группы животных, в значительной степени превышали эти значения, выявленные в ранние сроки после заражения мышей (на 1,5 lg - в сыворотке крови, на 2,4 lg - в печени). В то же время, на 28-й день после инфекции в тканях головного мозга титры вируса стали заметно снижаться.

Противовирусный эффект водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, определяемый по инфекционной активности ВГС в сроки после отмены его введения, был несколько снижен. Однако наибольший эффект наблюдался при исследовании сыворотки крови, когда титры вируса снижались в среднем на 4,2 lg, в то же время в печени инфекционные титры ВГС снижались на 0,9 lg, в головном мозге на 1, 8 lg.

Таким образом, показано положительное действие водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на снижение показателей инфекции, вызванной ВГС у мышей, и через 10 дней после отмены его введения.

Заключение

1. Обнаружены антивирусные свойства водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению в отношении инфекции, вызванной вирусом гепатита С в организме белых мышей.

2. Показано, что водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению обладает противовирусными свойствами в случае внутривенного введения в течение 4 дней по 0,2 мл в день.

3. Антивирусные свойства водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению были продемонстрированы с использованием средних данных изучения антигенной и инфекционной активностей ВГС в сыворотке крови, печени и в головном мозге животных, получавших и не получавших указанный состав.

4. Обнаружено, что отмена введения водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению животным в течение 10 дней не приводила к полному восстановлению антигенной или инфекционной активностей ВГС в исследуемых органах и тканях.

Концентрация антигена ВГС и его инфекционная активность в органах и тканях животных продолжала оставаться на более низком уровне, чем в контрольной группе ВГС инфицированных животных.

Пример 12

Настоящий пример демонстрирует противовирусную активность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на примере герпесвирусной инфекции (in vitro).

Цель настоящих исследований: изучение цитотоксичности, противовирусной активности водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению в отношении вируса простого герпеса 1 типа (ВПГ-1) в культуре клеток почек зеленых мартышек VERO.

Вирусы. В качестве тест-вируса использовали вирус простого герпеса (ВПГ), 1-го антигенного типа, штамм "ЕС", полученный из лаборатории музейных штаммов ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН. Вирус пассировали и титровали на монослойной культуры клеток VERO. Для наработки вируса в количестве, достаточном для проведения экспериментов, проведено 3 серийных пассажа. Титр вируса оценивали (в lg ТЦД50/0,1 мл) по стандартной методике (по Риду и Менчу). Титр ВПГ составил 5,0-5,5 lg ТЦД50/0,1 мл. (В зависимости от цели опыта в работе использовали пробы вируса, приготовленного при +22°С, через 1 час после инкубации при +37°С, через 24 часа после инкубации при +4°С).

Культура клеток. В качестве модели для исследования использовали культуру клеток почек зеленых мартышек, полученную из лаборатории культур тканей ГУ НИИ вирусологии РАМН. Клетки культивировали в среде роста, представляющей собой среду ИГЛА с добавлением 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 2 мМ L-глутамина и антибиотиков (100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина). Среда поддержки содержала все указанные выше ингредиенты и 2% ТС. Клетки выращивали в 96-луночных планшетах (фирмы Costar, GB) и инкубировали в термостате в атмосфере 5% СО₂ при +37°С.

Проведено исследование 3-х образцов (№1, №2, №3) водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, представленных во флаконах, наполненных “до краев” емкостью 250 мл в виде стерильного раствора, в котором растворена сухая среда Игла.

Образец №1 - водный раствор со стабилизатором со следующими параметрами: рН 8,4, ОВП=-300 мВ, минерализация 170 мг/л.

Образец №2 - водный раствор со стабилизатором со следующими параметрами: рН 7,8, ОВП=-300 мВ, минерализация 170 мг/л.

Образец №3 - водный раствор со стабилизатором со следующими параметрами: рН 7,6, ОВП=-200 мВ, минерализация 20 мг/л.

Среду роста и поддержки готовили с использованием образцов водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. В эксперименте образцы водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению изучали в сравнении с обычной средой ИГЛА, приготовленной в заводских условиях без использования водного раствора со стабилизатором.

Испытание цитотоксического действия и противовирусной активности образцов водного раствора со стабилизатором проводили на монослойной культуре клеток VERO с использованием 96-луночных планшет (фирмы Costar, GB), которые инкубировали в СО₂ термостате при +37°С и 95% влажности.

Цитотоксическое действие образцов водного раствора со стабилизатором на клетки определяли путем их однократного внесения в состав среды роста или поддержки в интактную культуру клеток VERO 1) формирующую монослой; 2) достигшую монослоя (24 ч), после удаления среды роста. Токсичность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению определяли ежедневно при световом микроскопировании по степени изменения морфологии клеточного монослоя и контролировали в течение 96 часов. Оценку цитотоксического действия водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению проводили по 4-крестовой системе:

1+ -25% деструкция монослоя,

2+ -50% деструкция монослоя,

3+ -75% деструкция монослоя,

4+ -100% деструкция монослоя.

По данной же схеме осуществляли оценку антивирусного действия водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению в отношении инфицированной ВПГ культуры клеток. Учет результатов проводили для ВПГ на 3-4-е сутки от момента инфицирования, когда в лунках с контролем вируса наблюдали 100% цитопатическое действие последнего.

Противовирусную активность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению оценивали по общепринятой методике. Критериями оценки являлись: наличие вирулицидного действия, способность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению предотвращать развитие цитопатического действия вируса и ингибировать репродукцию вируса в культуре клеток.

Исследуемые образцы водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению изучали по профилактической, лечебной и лечебно-профилактической схемам применения.

В отношении ВПГ исследуемого водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению вводили в состав среды поддержки по профилактической схеме: за 24 часа до инфицирования; за 1 час до инфицирования. По лечебной схеме действие водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению изучали непосредственно через 1 час после адсорбции вируса на клетках. При испытании водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению по лечебно-профилактической схеме клетки обрабатывали им дважды: за 24 часа до инфицирования и через 1 час после инфицирования или за 1 час до инфицирования и через 1 час после инфицирования. В последующем проводили титрование проб вируса из каждой серии опытов. Результаты титрования учитывали через 72-96 ч после инфицирования (при наступлении 100% цитопатического эффекта (ЦПЭ) в лунках с контролем вируса). ЦПЭ вируса определяли методом световой микроскопии и оценивали по стандартной методике.

Прямое вирулицидное действие водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на внеклеточные вирионы изучали после их предварительного совместного инкубирования с тест-вирусом при 37°С в течение 1 часа в соотношении 1:1 и последующего титрования в культуре клеток.

1. Результаты изучения цитотоксического действия водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению.

На первом этапе работы было исследовано влияние водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на морфологию неинфицированной культуры клеток VERO. Изучение осуществляли 2-мя способами:

1) при добавлении различных образцов водного раствора со стабилизатором в состав среды роста (среда ИГЛА, содержащая 10% ТС) к суспензии клеток, формирующей монослой, в объемном соотношении 1:1;

2) при добавлении различных образцов водного раствора со стабилизатором в состав среды поддержки к сформировавшемуся однодневному монослою культуры клеток VERO (после предварительного удаления культуральной жидкости).

Исследования показали, что два (№2 и №3) из трех исследуемых образцов водного раствора со стабилизатором при контакте с формирующимся клеточным монослоем не приводили к замедлению клеточного роста и видимым патологическим цитопатическим изменениям в течение 96 часов наблюдения. Необходимо отметить, что через 24 часа после контакта образцов №2 и №3 (в составе среды роста) с взвесью клеток наблюдалось ускорение формирования клеточного монослоя. Аналогичная тенденция в формировании клеточного монослоя была выявлена при контакте клеток с образцом водного раствора со стабилизатором №1, однако, в одном из опытов, через 24 часа после внесения в лунки с формирующимся монослоем клеток, было отмечено появление видимых цитопатогенных изменений у 10% клеток. В последующие дни наблюдения характер цитопатического действия образца №1 на клетки не изменился. В тоже время, использование всех трех образцов в составе среды поддержки не оказывало видимого токсического действия на сформированный монослой в течение всего срока наблюдения (до 5-х суток включительно). По данным теста с трепановым синим процент жизнеспособности клеток, инкубируемых в течение 96 часов в присутствии вышеуказанных образцов водного раствора со стабилизатором, также не отличался от такового в контроле. Полученные результаты позволяют отнести исследуемые образцы водного раствора со стабилизатором к группе нетоксичных веществ.

2. Результаты изучения противовирусной активности различных образцов водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению в отношении вируса простого герпеса (ВПГ) 1-го антигенного типа, штамм ЕС.

2.1. Исследование противовирусной активности образца водного раствора со стабилизатором №1.

2.1.1. Исследование прямого вирулицидного действия водного раствора со стабилизатором №1.

При изучении наличия прямого вирулицидного действия у образца водного раствора со стабилизатором №1 на внеклеточные вирионы ВПГ-1 было установлено, что инкубация вируса в образце №1 в соотношении 1:1 при +37°С в течение 1 часа приводила к достоверному снижению титра последнего в 10 раз по сравнению с аналогичным показателем у контрольного вируса, находившегося в тех же условиях, но обработанного средой ИГЛА (плацебо). Титры вирусов составили соответственно 5,5 и 4,5 lg ТЦИД50/0,02 мл, р>0,05.

2.1.2. Исследование противовирусной активности водного раствора со стабилизатором №1 по лечебной, профилактической и лечебно-профилактической схемам.

Показатель титра контрольного вируса (KB) ВПГ-1, штамм ЕС, в данных условиях опыта составил 5,5 lg ТЦИД50/0,02 мл. В тоже время, титр вируса, приготовленного с использованием водного раствора со стабилизатором №1 (ВПС), был в 5 раз ниже титра обычного вируса и составил 4,75 lg ТЦИД50/0,02 мл. Разница в титрах KB и ВПС была статистически достоверной (р<0,05).

Испытание водного раствора со стабилизатором по лечебной схеме через 1 час после адсорбции вируса и трехкратной отмывки от не связавшихся как обычного вируса (KB), так и ВПС, показало, что титры последних снижались в среднем в 30 раз по сравнению с титрами вирусов (ВО и ВПС), когда клетки заливались средой поддержки без водного раствора со стабилизатором. Титры вирусов составлял соответственно 4,0 lg и 3,25 lg ТЦИД50/0,02 мл. Выявленная тенденция (к снижению титров вирусов) отмечалась уже на первые сутки наблюдения и составляла по сравнению с контролем: на первые сутки 0,5 lg, на 2-е сутки 1,0 lg. Следует отметить, что при высокой множественности инфицирования (1000 и 100 ЦПД) образец №1 задерживал появление вирусобусловленного ЦПД (цитопатическое действие) ВПС на 24 часа, в то время как в лунках с инфицированными KB клетками вирусобусловленное ЦПД охватывало 100% клеток монослоя.

Инкубация KB или ВПС (в виде стандартных десятикратных разведений) в течение 1 часа при +37°С не приводила к снижению инфекционности KB, но вызывало небольшое (в 3 раза) изменение в инфекционности ВПС.

Инкубация KB при температуре +4°С в течение 24 часов приводила более чем к десятикратному статистически достоверному снижению его титра: с 5,5 lg ТЦИД50/0,02 мл до 4,25 lg ТЦИД50/0,02 мл. Титр же ВПС, инкубирующегося в аналогичных условиях, что и KB, не изменился по сравнению с титром исходного ВПС и составил также 4,75 lg ТЦИД50/0,02 мл. На основании полученных данных можно предположить, что образец водного раствора со стабилизатором №1 оказывает на ВПС некоторое стабилизирующее действие, позволяющее вирусу сохранять инфекционные свойства на высоком уровне.

Обработка клеток водного раствора со стабилизатором №1 по профилактической схеме, за 1 час до инфицирования, приводила к достоверному снижению титров как KB, так и ВПС, инкубирующихся при +37°С в течение 1 часа, по сравнению с их исходными параметрами. Титры KB и ВПС составили соответственно 4,5 lg ТЦИД50/0,02 мл и 3,75 lg ТЦИД50/0,02 мл (р<0,05).

Обработка клеток указанным раствором со стабилизатором №1 за 24 часа до инфицирования не приводила к снижению титров как KB, так и ВПС, инкубирующихся в течение 24 часов при +4°С, по сравнению с титрами контрольных вирусов, когда клетки не контактировали с образцом №1. Титр KB в данных условиях опыта составил 4,25 lg ТЦИД50/0,02 мл, титр ВПС 4,75 lg ТЦИД50/0,02 мл (р>0,05).

В тоже время, минимальное статистически достоверное снижение в 5 раз в титре KB (только что приготовленного) отмечено при использовании водного раствора со стабилизатором по профилактической схеме (за 24 часа до инфицирования). Титр снизился с 5,5 до 4,75 lg ТЦИД50/0,02 мл.

Таким образом, образец водного раствора со стабилизатором №1 при использовании по профилактической схеме (за 24 часа до инфицирования) не обладает противовирусной активностью в отношении как KB, так и ВПС, инкубирующихся при +4°С в течение 24 часов.

Обработка клеток в образце №1 дважды по профилактической схеме: за 24 часа и за 1 час до инфицирования, также не приводила к снижению титров как KB, так и ВПС, инкубирующихся при +4°С в течение 24 часов, по сравнению с титрами вирусов, зарегистрированных как при однократном профилактическом воздействии водного раствора со стабилизатором на клетки, так и в случае, когда клетки не подвергались воздействию раствора со стабилизиатором. Титры вирусов составили соответственно 4,25 и 4,75 lg ТЦИД50/0,02 мл.

Использование водного раствора со стабилизатором дважды по лечебно-профилактической схеме (за 24 часа до инфицирования и через 1 час после инфицирования) позволило выявить максимальный эффект его действия. Так, титр KB был в 50 раз ниже титра KB (не подвергавшегося воздействию водного раствора со стабилизатором №1) и в 10 раз ниже титра KB, зарегистрированного при использовании водного раствора со стабилизатором №1 только по профилактической схеме (-24 часа, 4.75 lg ТЦИД50/0,02 мл). Титр вируса составил 3,75 lg ТЦИД50/0,02 мл.

При изучении отсроченного влияния водного раствора со стабилизатором №1 на клетки, при его использовании по профилактической схеме: за 48 часов до инфицирования, затем смены среды роста, содержащей раствор со стабилизатором, на среду поддержки без водного раствора со стабилизатором (-24 часа) и последующего инфицирования KB, было показано, что титр последнего изменился и составил 4,75 lg ТЦИД50/0,02 мл.

Обработка клеток указанным раствором со стабилизатором №1 по вышеуказанной схеме, а также дополнительно через 1 час после инфицирования приводила к снижению титра вируса в 10 раз по сравнению с титром как KB (не подвергавшегося воздействию указанным раствором со стабилизатором), так и титром KB, выявленным при исследовании отсроченного влияния водного раствора со стабилизатором. Титр вируса составил 4,5 lg ТЦИД50/0,02 мл.

Выводы по образцу водного раствора со стабилизатором №1 по настоящему изобретению:

1. Образец водного раствора со стабилизатором №1 обладает прямым вирулицидным действием в отношении внеклеточных вирионов ВПГ-1.

2. Образец водного раствора со стабилизатором №1 обладает противовирусной активностью как в отношении контрольного вируса, так и вируса, приготовленного на среде, при внесении на ранних сроках после инфицирования.

3. Наиболее выраженную противовирусную активность указанный раствор со стабилизатором №1 проявляет при его применении по лечебно-профилактической схеме.

4. При исследовании водного раствора со стабилизатором по профилактической схеме (-24 ч) наблюдалось минимальное пятикратное снижение в титре KB.

5. Образец водного раствора со стабилизатором №1 при использовании по профилактической схеме не снижает инфекционность как KB, так и ВПС, инкубирующихся при +4°С в течение 24 часов.

6. Контакт ВПГ-1 водного раствора со стабилизатором №1 при +4°С в течение суток обеспечивает сохранение инфекционных свойств вируса на стабильно высоком уровне.

7. Образец водного раствора со стабилизатором №1 обладает некоторым пролонгированным противовирусным эффектом при использовании по отсроченной схеме (-24 ч состав, -24 ч среда ИГЛА).

8. На основании представленных данных можно предположить, что эффект водного раствора со стабилизатором №1 обусловлен больше его лечебным воздействием, чем вирулицидным или профилактическим действием (см. табл.21).

2.2. Изучение противовирусной активности образца водного раствора со стабилизатором №2 в отношении ВПГ-1.

2.2.1. Исследование прямого вирулицидного действия водного раствора со стабилизатором №2.

Исследование вирулицидного действия у образца водного раствора со стабилизатором №2 показало, что последний после совместной инкубации с ВПГ-1 при +37°С в течение 1 часа в соотношении 1:1 приводил к статистически достоверному снижению титра вируса в 100 раз по сравнению с титром контрольного вируса, находившегося в тех же условиях, но обработанного средой ИГЛА (плацебо). Титр вируса составил 3,0 lg ТЦИД50/0,1 мл, р<0,05.

Таким образом, образец водного раствора со стабилизатором №2 влияет на внеклеточные вирионы ВПГ-1 и обладает прямым вирулицидным действием.

2.2.2. Исследование противовирусной активности водного раствора со стабилизатором №2 по лечебной, профилактической и лечебно-профилактической схемам.

Данные изучения противовирусной активности образца водного раствора со стабилизатором №2 в отношении ВПГ-1 представлены в таблице 22. Как видно из данных таблицы №22, титр контрольного вируса ВПГ-1, штамм ЕС, в данных условиях опыта составил 5,0 lg ТЦИД50/0,02 мл. Использование водного раствора со стабилизатором №2 для приготовления стандартных десятикратных разведений вируса приводило к статистически достоверному снижению титра последнего в 5 раз по сравнению с титром контрольного вируса. Титр ВПС составил 4,25 lg ТЦИД50/0,02 мл, (р<0,05). Появление специфических вирусобусловленных изменений наблюдалось в случае ВПС с задержкой в 24 часа.

Инкубация KB или ВПС в течение 1 часа при +37°С не приводила к достоверному изменению инфекционности обоих видов вируса по сравнению с исходными показателями (см. таблицу 22). Титры KB и ВПС составили соответственно 5,0 и 4,25 lg ТЦИД50/0,02 мл. Однако при данной схеме мы наблюдали задержку появления вирусобусловленного цитопатического действия в среднем на 24 часа. При раститровке проб вируса, взятого в эти сроки, было выяснено, что титр ВПС (приготовленного ех temporo) составлял -2,5 lg ТЦИД50/0,02 мл, а титр ВПС (инкубирующегося при +37°С) -0,75 lg ТЦИД50/0,02 мл. В последующие дни разница в титрах нивелировалась.

Инкубация KB или ВПС при +4°С в течение 24 часов приводила к статистически достоверному снижению как титра KB (в 50 раз), так и ВПС (в среднем в 10 раз) по сравнению с исходными показателями. Титры KB и ВПС составили соответственно 3,25 lg ТЦИД50/0,02 мл и 3,0 lg ТЦИД50/мл. Однако в случае ВПС данное снижение было менее выраженным. Полученные результаты позволяют предположить, что с увеличением времени контакта водного раствора со стабилизатором №2 с внеклеточными вирионами ВПГ №2 (до 24 часов), последние приобретают способность к сохранению инфекционных свойств на высоком уровне.

В следующей серии опытов изучали влияние водного раствора со стабилизатором №2 на KB и ВПС при ее использовании по лечебной, профилактической и лечебно-профилактической схемам.

Испытание водного раствора со стабилизатором по лечебной схеме через 1 час после адсорбции как KB, так и вируса, приготовленного с использованием водного раствора со стабилизатором (ВПС), показало, что титр последних снижался в среднем в 100 раз по сравнению с титрами контрольных вирусов (когда клетки заливались средой поддержки без водного раствора со стабилизатором и составляли соответственно 3,0 lg и 2,25 lg ТЦИД50/0,02 мл. Следует отметить, что контакт клеток с указанным раствором со стабилизатором замедлял появление ЦПД вируса в течение 48 часов. Однако к концу срока наблюдения вирусобусловленное цитопатическое действие охватывало уже 100% монослоя. Полученные данные свидетельствуют о том, что указанный раствор со стабилизатором №2 по настоящему изобретению приостанавливает развитие вирусного ЦПД на ранних этапах после инфицирования, но полностью не ингибирует репродукцию вируса, что выражается в дальнейшем развитии его цитопатического действия.

Испытание водного раствора со стабилизатором №2 по профилактической схеме за 1 час до инфицирования как KB, так и ВПС, инкубирующимися при +37°С в течение 1 часа, показало, что указанный раствор со стабилизатором статистически достоверно снижает титры обоих вирусов по сравнению с их исходными параметрами. Титры KB и ВПС составили соответственно 4,25 lg ТЦИД50/0.02 мл и 3,25 lg ТЦИД50/0,02 мл (р<0,05).

Исследование эффективности водного раствора со стабилизатором также по профилактической схеме за 1 час до инфицирования в отношении KB и ВПС, инкубирующихся при +4°С в течение 24 часов, показало, что указанный раствор со стабилизатором не снижает титры исследуемых вирусов, но замедляет развитие вирусобусловленного цитопатического действия ВПС у 100% клеток в среднем в течение 48 часов.

Исследование водного раствора со стабилизатором №2 по профилактической схеме показало, что предварительная обработка клеток указанным раствором со стабилизатором в течение 24 часов до инфицирования приводила к снижению титра KB (приготовленного ex temporo) в 10 раз по сравнению с его исходным уровнем. Титр KB в данных условиях составил 4,0 lg ТЦИД50/0,02 мл.

В тоже время, обработка клеток указанным раствором со стабилизатором №2 по лечебно-профилактической схеме дважды: за 24 часа до инфицирования и через 1 час после инфицирования KB, приводила к более значительному снижению титра, последнего по сравнению с титром вируса при однократном использовании водного раствора со стабилизатором по профилактической схеме (-24 ч). Титр KB составил 3,0 lg ТЦИД50/0,02 мл. Данный показатель был (в 100 раз) статистически достоверно ниже титра контрольного тест-вируса.

Обработка клеток указанным раствором со стабилизатором №2 по лечебно-профилактической схеме: за 1 час до-/ и через 1 час после инфицирования, приводила к ослаблению инфекционности как KB, так и ВПС в среднем в 10 раз по сравнению с их исходными титрами, полученными при отборе проб вируссодержащей жидкости из лунок с клетками, не подвергавшимися воздействию водного раствора со стабилизатором. Титр KB составил 4,0 lg ТЦИД50/мл, титр ВПС - 3,25 lg ТЦИД50/мл (р<0,05). При обработке клеток указанным раствором со стабилизатором №2 вирусобусловленное, цитопатическое действие ВПС запаздывало в среднем на 2 суток.

Кроме того, было проведено исследование возможного пролонгированного противовирусного воздействия у образца водного раствора со стабилизатором №2. Для этого клетки выращивали в течение 24 часов в ростовой среде, содержащей состав №2, затем клетки трижды отмывали от ростовой среды и заливали средой поддержки, не содержащей указанный раствор со стабилизатором. Клетки инкубировали еще в течение 24 часов при +37°С в CO₂ инкубаторе, затем трижды отмывали от среды поддержки и инфицировали KB (приготовленным ex temporо). После часовой инкубации при +37°С клетки трижды отмывали от несвязавшегося вируса и заливали средой поддержки, не содержащей водного раствора со стабилизатором. Результаты показали значительное статистически достоверное снижение в титре KB до 2,25 lg ТЦИД50/0,02 мл (или более чем в 100 раз).

Обработка клеток по вышеуказанной схеме, а также дополнительно через 1 час после инфицирования приводила к дальнейшей ингибиции вирусного действия. Титр KB составил не более 1,0 lg ТЦИД50/0,02 мл.

ВЫВОДЫ по образцу водного раствора со стабилизатором №2.

1. Образец водного раствора со стабилизатором №2 обладает прямым вирулицидным действием в отношении внеклеточных вирионов ВПГ.

2. Использование водного раствора со стабилизатором №2 для приготовления стандартных десятикратных разведений вируса приводило к статистически достоверному снижению титра последнего в 5 раз по сравнению с титром контрольного вируса.

3. Температура, равная +37°С, не повышает противовирусную активность водного раствора со стабилизатором №2.

4. При температуре, равной +4°С, регистрируется статистически достоверное снижение титров как KB, так и ВПС. Однако состав №2 при +4°С оказывает некоторое стабилизирующее влияние на вирус, позволяющее последнему проявлять свои инфицирующие свойства на достаточно высоком уровне.

5. Образец водного раствора со стабилизатором №2 обладает противовирусной активностью в отношении как контрольного вируса простого герпеса, так и вируса, приготовленного с использованием водного раствора со стабилизатором (ВПС), разной степени выраженности.

6. Образец водного раствора со стабилизатором №2 обладает противовирусной активностью в отношении как KB, так и ВПС при его применении по лечебной схеме.

7. При использовании по профилактической схеме за 1 час до заражения образец водного раствора со стабилизатором №2 обладал противовирусной активностью как в отношении KB, так и ВПС, инкубирующихся в течение 1 часа при + 37°С.

8. Образец водного раствора со стабилизатором №2 при использовании по профилактической схеме за 1 час до заражения не обладал противовирусной активностью в отношении KB и ВПС, инкубируемых в течение 24 часов при +4°С.

9. Образец водного раствора со стабилизатором №2 эффективен в отношении KB при использовании по профилактической схеме (за 24 часа до инфицирования) по лечебной (через 1 час после инфицирования) и лечебно-профилактической схемам.

10. Образец водного раствора со стабилизатором №2 обладает некоторым пролонгированным противовирусным воздействием на клетки, если последние выращиваются в ростовой среде, содержащей указанный раствор со стабилизатором, не менее 24 часов.

11. Обработка клеток указанным раствором со стабилизатором №2 дважды: по пролонгированной схеме исследования и через 1 час после заражения, приводила к значительной ингибиции вирусного действия КВ.

12. Эффективность водного раствора со стабилизатором №2 при использовании по лечебно-профилактической схеме превышает его эффективность при однократном использовании по лечебной или профилактической схемам.

2.3. Изучение противовирусной активности образца водного раствора со стабилизатором №3 в отношении ВПГ-1.

2.3.1. Исследование прямого вирулицидного действия водного раствора со стабилизатором №3.

Изучение наличия прямого вирулицидного действия у образца №3 показало, что последний после совместной инкубации с ВПГ в соотношении 1:1 при +37°С в течение 1 часа оказывает влияние на внеклеточные вирионы вируса и тем самым достоверно снижает его титры в 5 раз по сравнению с аналогичным показателем у контрольного вируса, находившихся в тех же условиях совместно со средой ИГЛА (плацебо). Титры вирусов составили соответственно 5,0 и 4,25 lg ТЦИД50/мл (р<0,05).

Таким образом, образец водного раствора со стабилизатором №3 обладает выраженным прямым вирулицидным действием в отношении внеклеточных вирионов ВПГ при их совместной инкубации в соотношении как 1:1.

2.3.2. Исследование противовирусной активности образца водного раствора со стабилизатором №3 по лечебной, профилактической и лечебно-профилактической схемам.

Титр контрольного вируса ВПГ-1, штамм ЕС, в данных условиях опыта составил 5,0 lg ТЦИД50/0,02 мл. Использование образца водного раствора со стабилизатором №3 для приготовления стандартных десятикратных разведении вируса приводило к недостоверному снижению титра вируса до 4,5 lg ТЦИД50/0,02 мл (р>0,05).

Инкубация KB или ВПС в течение 1 часа при +37°С приводила к недостоверному снижению инфекционности обоих видов вирусов на 0,5 lg (р>0,05). Титр KB составил 4,5 lg ТЦИД50/мл, а ВПС 4,0 lg ТЦИД50/мл.

При инкубации KB или ВПС при +4°С в течение 24 часов были получены следующие результаты. Как видно из данных, представленных в таблице №3, инкубация KB в данных условиях привела к достоверному десятикратному снижению его титров (с 5,0 lg ТЦИД50/0,02 мл до 4,0 lg ТЦИД50/0,02 мл). Титр ВПС, инкубирующегося в вышеуказанных условиях, практически не изменился и составил 4,25 lg ТЦИД50/0,02 мл. Выявленное при этом незначительное снижение в титрах ВПС на 0,25 lg не является статистически достоверным (р>0,05).

Полученные результаты позволяют предположить, что указанный раствор со стабилизатором №3 при совместной инкубации с ВПС в течение 24 часов при +4°С (также как и указанный раствор со стабилизатором №1) оказывает на вирус стабилизирующее воздействие, позволяющее сохранять вирусу инфекционные свойства на достаточно высоком уровне, сравнимом с показателями титра исходного ВПС, приготовленного ex temporo.

Испытание водного раствора со стабилизатором №3 по лечебной схеме через 1 час после адсорбции вирусов показало, что указанный раствор со стабилизатором №3 обладает противовирусной активностью как в отношении контрольного вируса, так и вируса, приготовленного с использованием водного раствора со стабилизатором. Использование водного раствора со стабилизатором №3 в составе среды поддержки приводило к достоверному снижению титров обоих вирусов в 30-300 раз по сравнению с титрами вирусов (когда клетки заливались средой поддержки без водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению). Титр KB составил 3,5 lg ТЦИД50/0,02 мл, титр ВПС - 2,0 lg ТЦИД50/0,02 мл.

Кроме того, использование водного раствора со стабилизатором через 1 час после заражения вирусом приводило к задержке появления вирусобусловленного цитопатического действия в случае KB на 24 часа, а в случае ВПС на 48 часов. В лунках с инфицированными клетками, не подвергавшимися воздействию водного раствора со стабилизатором вирусобусловленное ЦПД, охватывало на данных сроках от 75 до 100% клеток монослоя. При раститровке проб, взятых на первые или вторые сутки после инфицирования, нами также было выявлено снижение титров KB и ВПС по сравнению с титрами вирусов (когда после адсорбции вирусов клетки заливались средой поддержки, не содержащей водного раствора со стабилизатором). Например, титр KB, когда клетки заливались средой, в состав которой входил указанный раствор со стабилизатором, на 2-е сутки после заражения составил 1,5 ТЦИД50/0,02 мл, а контрольного вируса 3,25 ТЦИД50/0,02 мл. В дальнейшем данная тенденция сохранилась.

Испытание водного раствора со стабилизатором №3 по профилактической схеме за 1 час до инфицирования как KB, так и ВПС, инкубирующимися при +37°С в течение 1 часа, показало, что указанный раствор со стабилизатором №3 незначительно снижает титры вирусов в среднем на 0,5 lg. Титры KB и ВПС состав или соответственно 4,0 lg ТЦИД50/0,02 мл и 3,5 lg ТЦИД50/0,02 мл. В данных условиях эксперимента образец водного раствора со стабилизатором №3 приводил к трехкратному снижению титров вирусов по сравнению как с исходными титрами KB и ВПС, находящимися в аналогичных условиях (при +37°С в течение 1 часа), так и с титрами KB и ВПС, приготовленными ех temporo, при комнатной температуре.

Испытание эффективности водного раствора со стабилизатором №3 по профилактической схеме за 24 часа до инфицирования в отношении KB, инкубирующегося при +4°С в течение 24 часов, показало, что указанный раствор со стабилизатором достоверно снижает титр последнего с 4,0 lg ТЦИД50/0,02 мл (титр KB, находившегося в тех же условиях, но на не обработанных указанным раствором со стабилизатором клетках) до 2,25 lg ТЦИД50/0,02 мл (более чем в 30 раз) и замедляет развитие вирусобусловленного цитопатического действия KB в среднем на 48 часов по сравнению с выраженным ЦПД вируса в контрольной культуре клеток. В тоже время, указанный раствор со стабилизатором №3 не влияет на титр ВПС, находящегося в аналогичных условиях, что и KB, по сравнению с титром ВПС (отмеченном при инфицировании необработанных клетках). Титры обоих видов ВПС составили 4,25 lg ТЦИД50/0,02 мл.

Испытание эффективности водного раствора со стабилизатором №3 по профилактической схеме за 24 часа до инфицирования в отношении KB, приготовленного ex tempero, показало, что указанный раствор со стабилизатором №3 снижает титр последнего по сравнению с титром KB, инфицирующим необработанные водные растворы со стабилизатором клетки, и замедляет появление вирусобусловленных цитопатических изменений в клеточном монослое в течение 24 часов. Титр KB в данных условиях составил 4,0 lg ТЦИД50/0,02 мл (р>0,05).

Обработка клеток указанным раствором со стабилизатором №3 дважды по лечебно-профилактической схеме: за 24 часа до-/ и через 1 час после инфицирования, приводила к статистически достоверному снижению титра KB, приготовленного ex temporo, более чем в 300 раз по сравнению с титрами вируса, полученными при испытании водного раствора со стабилизатором №3 по вышеописанным схемам. Титр KB составил не более 2,5 lg ТЦИД50/0,02 мл (р<0,05). Кроме того, использование водного раствора со стабилизатором №3 по данной схеме задерживало появление вирусного ЦПД в течение 48 часов, в то время как в лунках с контрольными инфицированными клетками, так и с инфицированными клетками, обработанными водным раствором со стабилизатором однократно по профилактической схеме (-24 ч), вирусобусловленное ЦПД охватывало 50-100% клеток.

Таким образом, максимальная активность образца водного раствора со стабилизатором №3 проявилась в отношении KB при использовании по лечебно-профилактической схеме.

Применение водного раствора со стабилизатором №3 по лечебно-профилактической схеме дважды (за 24 часа до-/ и через 1 час после инфицирования) в отношении клеток, инфицируемых KB, инкубируемым при +4°С в течение 24 часов, привело к достоверному снижению титра последнего до 2,0 lg ТЦИД50/0,02 мл (или в 100 раз), как по сравнению с исходными титрами вирусов, находившихся в аналогичных условиях и заражающих не обработанные указанным раствором со стабилизатором клетки или заражающих клетки, обработанные однократно по профилактической схеме. Следует отметить, что через 72 часа после контакта инфицированных клеток с вышеуказанным образцом водного раствора со стабилизатором №3 вирусобусловленное цитопатическое действие охватывало не более 10% монослоя, при 100% поражении инфицированных клеток, не обработанных указанным раствором со стабилизатором. В то же время, при использовании водного раствора со стабилизатором №3 только по профилактической схеме таких изменений в динамике вирусного ЦПД (по сравнению с необработанной инфицированной культурой клеток) отмечено не было.

Пролонгированным противовирусным воздействием образец водного раствора со стабилизатором №3 не обладал (см. таблицу 23).

Выводы по образцу водного раствора со стабилизатором №3.

1. Образец водного раствора со стабилизатором №3 обладает выраженным прямым вирулицидным действием в отношении внеклеточных вирионов ВПГ-1 при их совместной инкубации в соотношении 1:1 при +37°С в течение 1 часа.

2. Образец водного раствора со стабилизатором №3 при контакте с ВПС в течение 24 часов при +4°С (также как и указанный раствор со стабилизатором №1) оказывает на вирус стабилизирующее воздействие, позволяющее сохранять вирусу инфекционные свойства на достаточно высоком уровне, сравнимом с показателями титра исходного ВПС, приготовленного ex temporo.

3. При внесении на ранних этапах после заражения (через 1 час после адсорбции вируса) указанный раствор со стабилизатором №3 (также как и указанный раствор со стабилизатором №2) достоверно снижал инфекционность как KB, так и ВПС.

4. При использовании по профилактической схеме за 1 час до заражения образец водного раствора со стабилизатором №3 обладает минимальной противовирусной активностью как в отношении KB, так и ВПС, инкубирующихся в течение 1 часа при + 37°С.

5. Активность водного раствора со стабилизатором №3 определяется временем ее внесения до и после заражения.

6. Наиболее оптимальным вариантом воздействия на KB, приготовленный ex temporo или инкубирующийся при +4°С в течение 24 часов, можно считать использование водного раствора со стабилизатором по лечебно-профилактической схеме (за 24 часа до инфицирования и через 1 час после инфицирования).

Общие выводы по трем образцам водного раствора со стабилизатором.

1. Bce исследуемые образцы водного раствора со стабилизатором относятся к группе нетоксичных веществ.

2. Образцы водного раствора со стабилизатором №1, №2 и №3 обладают прямым вирулицидным действием в отношении внеклеточных вирионов вируса простого герпеса, после их совместной инкубации с ВПГ в соотношении 1:1 при +37°С в течение 1 часа.

3. Использование всех образцов водного раствора со стабилизатором в качестве среды для приготовления стандартных десятикратных разведений ВПГ-1 приводило к снижению титра последнего в 3-5 раз по сравнению с титром контрольного вируса.

4. Все исследуемые образцы водного раствора со стабилизатором обладают противовирусной активностью в отношении как контрольного вируса простого герпеса, так и вируса, приготовленного с использованием водного раствора со стабилизатором, разной степени выраженности. Активность указанных образцов водного раствора со стабилизатором зависит от схемы их использования.

5. Наиболее выраженную противовирусную активность как в отношении KB, так и ВПС все исследуемые образцы проявляют при их применении по лечебной и лечебно-профилактической схемам.

6. Образцы водного раствора со стабилизатором №1 и №2 обладают некоторым пролонгированным противовирусным воздействием на клетки, если последние выращиваются в ростовой среде, содержащей указанный раствор со стабилизатором не менее 24 часов.

7. Противовирусная активность образцов водного раствора со стабилизатором обусловлена больше их лечебным воздействием, чем вирулицидным или профилактическим действием.

Пример 13

Этим примером была доказана возможность стабилизации окислительно-восстановительных свойств пива.

На пивоваренном предприятии были произведены измерения свежего нефильтрованного и непастеризованного светлого и темного пива верхового брожения после завершения его брожения (то есть на 22-й день после того, как пиво было сварено) по параметру Eh. Измерения показали:

- Пиво светлое Eh=+50 мВ, ХСЭ;

- Пиво темное Eh=+30 мВ, ХСЭ.

Светлое и темное пиво было разлито во флаконы и в него внесено в соответствии с настоящим изобретением аминокислота глицин в концентрации 0,5% мас. и после этого было герметично закрыто (опытное пиво). В качестве контроля было взято светлое и темное пиво, которое было также укупорено герметично во флаконах (контрольное пиво). Через 15 дней были произведены замеры опытного и контрольного светлого и темного пива. Измерения показали:

- Опытное светлое пиво: Eh=+60 мВ, ХСЭ;

- Опытное темное пиво: Eh=+40 мВ, ХСЭ;

- Контрольное светлое пиво: Eh=+100 мВ, ХСЭ;

- Контрольное темное пиво: Eh=+90 мВ, ХСЭ.

Пример 14

Пример, демонстрирующий стабилизацию окислительно-восстановительных свойств сероводородной воды и сероводородной грязи.

В примерах используется искусственно получаемый сероводород Н₂S путем взаимодействия сернистого железа с разбавленным раствором соляной кислоты FeS+2HCl→FeCl₂+H₂S, адлерский ил и водопроводная вода с минерализацией 0,17 г/литр с Eh=+290-(+330) мВ, ХСЭ и рН 7,2.

Производят изготовление 10 литров насыщенной сероводородом воды с Eh=-170 мВ, ХСЭ и рН 6,6. При этом количество H₂S в 100 мл раствора составляет 340-370 мг. Из полученных 10 литров производят забор 2 литров на предмет разбавления с целью уменьшения концентрации H₂S в 30 раз. Получают раствор с Eh=-20 мВ, ХСЭ и рН 8,7. Часть растворов как и с Eh=-170 мВ, ХСЭ и рН 6,6, так и с Eh=-20 мВ, ХСЭ и рН 8, 7 забираются для создания контрольной группы образцов сероводородной воды. Им присваивается №1 - вода с Eh=-170 мВ, ХСЭ и рН 6,6; №2 - вода с Eh=-20 мВ, ХСЭ и рН 8,7.

Часть растворов забирается для создания контрольных образцов с адлерским илом. Для натурального адлерского ила характерным является кислая реакция среды (рН 5,7) и положительный Eh=+438 мВ, ХСЭ. После смешивания ила с сероводородной водой, имеющей характеристики, указанные выше, резко изменились окислительно-восстановительные свойства водосодержащего водного раствора со стабилизатором, в частности илов, а именно водосодержащее сырье приобрело окислительно-восстановительные свойства, характеризующиеся окислительно-восстановительным потенциалом Eh=-114 мВ, ХСЭ и рН 6,6; Eh=-15 мВ, ХСЭ и рН 7,8. Соответственно контрольным образцам присваивается соответственно №3 и №4.

Таким образом, №1 и №2 - контрольные образцы сероводородных вод, а №3 и №4 - контрольные образцы адлерской грязи /пелоида/ с сероводородом, причем в №2 и №4 концентрация сероводорода приблизительно от 12 до 20 мг на 100 мл раствора, а в №1 и №3 - 350 мг на 100 мл раствора.

Образцы запечатываются и ставятся на хранение и испытания сравнительно с опытными образцами, которым присваиваются очередные, следующие по порядку номера, а именно:

№5х - глицин в концентрации 0,01% мас.

№5 - глицин в концентрации 0,5% мас.

№5f - глицин в концентрации 5% мас.

№6х - серии в концентрации 0,01% мас.

№6 - серин в концентрации 0,5% мас.

№6f - серин в концентрации 5% мас.

№7х - треонин в концентрации 0,01% мас.

№7 - треонин в концентрации 0,5% мас.

№7f - треонин в концентрации 5% мас.

№8х - цистеин в концентрации 0,01% мас.

№8 - цистеин в концентрации 0,5% мас.

№8f - цистеин в концентрации 5% мас.

№9х - тирозин в концентрации 0,01% мас.

№9 - тирозин в концентрации 0,5% мас.

№9f - тирозин в концентрации 5% мас.

№10х - аспарагин в концентрации 0,01% мас.

№10 - аспарагин в концентрации 0,5% мас.

№10f - аспарагин в концентрации 5% мас.

№11х - глутамин в концентрации 0,01% мас.

№11 - глутамин в концентрации 0,5% мас.

№11f - глутамин в концентрации 5% мас.

№12х - глицин + цистеин при общей концентрации реагентов 0,01% мас.

№12 - глицин + цистеин при общей концентрации реагентов 0,5% мас.

№12f - глицин + цистеин при общей концентрации реагентов 5% мас.

№13х - тирозин + глутамин при общей концентрации реагентов 0,01% мас.

№13 - тирозин + глутамин при общей концентрации реагентов 0,5% мас.

№13f - тирозин + глутамин при общей концентрации реагентов 5% мас.

№14х - серин + аспарагин при общей концентрации реагентов 0,01% мас.

№14 - серин + аспарагин при общей концентрации реагентов 0,5% мас.

№14f - серин + аспарагин при общей концентрации реагентов 5% мас.

№15х - треонин + серин + глутамин + глицин при общей концентрации реагентов 0,01% мас.

№15 - треонин + серин + глутамин + глицин при общей концентрации реагентов 0,5 мас.%

№15f - треонин + серин + глутамин + глицин при общей концентрации реагентов 5% мас.

Получение водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению может быть осуществлено в широком диапазоне концентраций ингредиентов от 0,01% мас. до более высоких, например 5% мас. и более. Диапазон лимитируется растворимостью аминокислот, применяемых по настоящему изобретению в водном, например сероводородном, растворе. Оптимальные концентрации устанавливаются такими, чтобы стабилизатор по настоящему изобретению обеспечивал технологически необходимую сохранность водных растворов и водосодержащего водного раствора со стабилизатором и в тоже время был коммерчески доступен.

Выявлено, что концентрация ингредиентов 0,01% мас., применяемая по настоящему изобретению, является минимально необходимой для обеспечения стабильности водных растворов и водосодержащего водного раствора со стабилизатором с указанными окислительно-восстановительными свойствами.

Биологическая активность водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению определяется по степени воздействия указанного водного раствора со стабилизатором на кожные покровы через различные промежутки времени, что выражается в гиперемии кожных покровов при наличии активной формы сероводорода в средстве по настоящему изобретению.

Испытания производятся следующим образом.

На кожу бедра посредством губки наносится сероводородная вода образца №1 немедленно после его изготовления. В течении 3-5 минут кожный покров, подвергаемый воздействию раствора сероводорода в концентрации от 340-370 мг/100 мл раствора, приобретает красноватую окраску, что означает гиперемию кожного покрова. Через 12 часов на кожу бедра на другой участок кожи этому же испытуемому посредством губки вновь наносится сероводородная вода образца №1. При этом ни через 5 минут, ни через 120 минут характерной реакции покраснения кожных покровов не наблюдается. Для получения данных, характеризующих окислительно-восстановительные свойства образца №1, используют рн-метр-милливольтметр И-120, работа которого основана на измерении электродвижущей силы пары, состоящей из платинового электрода и вспомогательного полуэлемента, в частности хлорсеребряного электрода сравнения, находящимся в контакте с водным раствором или пелоидом. В этих условиях потенциал платинового электрода зависит от степени окисления или восстановления обратимых окислительно-восстановительного систем, например H₂S←→HS-+Н+. Величина Eh определяется как алгебраическая сумма между измеряемым потенциалом и потенциалом хлорсеребряного электрода сравнения (полуэлемента). Обычно величина Eh выражается в милливольтах или условных единицах rН₂, где /при температуре 18°С/. При наличии восстановительных свойств окислительно-восстановительный потенциал Eh обычно выражается отрицательной величиной. Чем выше биологическая активность раствора сероводорода или пелоида, тем ниже значение окислительно-восстановительного потенциала. Измерение раствора образца №1 дает значение, равное +200 мВ, ХСЭ, при начальном (исходном) значении Eh=-170 мВ, ХСЭ и рН 6,6. Специфического запаха сероводорода также не фиксируется. Таким образом, через 12 часов у №1 (контроль) отсутствует бальнеологическая реакция и произошло изменение окислительно-восстановительного потенциала от отрицательного к положительному значению относительно первоначального уровня. Проверка бальнеологической реакции у образца №2 (опыт) через 10 минут после его изготовления показала наличие такой реакции. В то же время в группе образцов №5-15 водного раствора и водосодержащего водного сырья со стабилизатором, насыщенных сероводородом с дополнительно введенными в состав аминокислотами с незаряженными полярными заместителями в структуре аминокислот, к которым относятся глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин и их смеси. При проверке Eh и реакции кожи на раствор через 12 часов и 720 часов установлено повышение Eh с -170 мВ, ХСЭ до -160(-110) мВ, ХСЭ, а также наличие реакции кожи на раствор как через 12 часов, так и через 720 часов.

Одновременно с созданием опытной партии растворов с сероводородом происходит и создание опытной партии водосодержащего водного раствора со стабилизатором, включающего адлерскую грязь, насыщенную сероводородом с Eh=-114 мВ и рН 6,6 с дополнительным введением в это состав аминокислот по настоящему изобретению, в частности глицина, треонина, цистеина, тирозина, аспарагина, глутамина и их смесей. Образцы соответственно обозначают №5а-15а. Концентрация аминокислот создается в каждом из образцов по 0,5% мас. как оптимальная для сохранения указанного водосодержащего водного раствора со стабилизатором. Испытание указанных образцов происходит аналогично испытанию образцов №5, 5х, 5f №15, 15х, 15f. Сравнение производится с контролем под №3 с характеристиками Eh=-114 мВ, ХСЭ и рН 6,6.

В контрольном образце через 12 часов отсутствует бальнеологическая реакция покраснения кожи при нанесении пелоида на кожу бедра испытуемых (образец №3). Отсутствует также запах сероводорода. При измерении регистрируется окислительно-восстановительный потенциал Eh=+270 мВ, ХСЭ. Это дает основание предположить, что в образце №3 весь растворенный сероводород окислился до SO, S⁰, SO₂, и HS-, оказывающие слабое физиологическое действие на организм человека. В опытных образцах через 720 часов (один месяц) установлено повышение вплоть до Eh=-80 мВ, ХСЭ при рН 6,6. Имеет место также бальнеологическая реакция покраснения кожного покрова при нанесении пелоидов из партии №5а-15а аналогично реакции организма при нанесении растворов воды из опытной партии №5, 5х, 5f- №15, 15х, 15f. Результаты сведены в таблицы 24 и 25.

Пример 15

Пример стабилизации стабилизатором по настоящему изобретению водного раствора, полученного бесконтактным методом путем растворения биологически активной добавки Микрогидрин.

Опыт 1.

а) контроль

В связи с тем, что широко распространенная в настоящее время известная своими антиоксидантными свойствами пищевая добавка “Микрогидрин”, также как и электрохимически (катодно) восстановленная вода, обладают самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, проведены опыты по получению водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на основе биологически активной добавки Микрогидрин. Герметичный тонкостенный полиэтиленовый пакет (толщина пленки ~25 мкм), наполненные дистиллированной водой (50 мл), поместили в сосуд большего объема (500 мл), также наполненного дистиллированной водой. Затем в сосуд с дистиллированной водой объемом 500 мл добавили порошок Микрогидрина и растворили. Полученный водный раствор Микрогидрина быстро принял восстановительные свойства, то есть окислительно-восстановительный потенциал полученного раствора снизился вплоть до Eh=-500 мВ, ХСЭ при водородном показателе рН 8,7 и приобрел способность к бесконтактному взаимодействию с водой, находящейся в пакете объемом 50 мл. После максимального снижения окислительно-восстановительного потенциала в большом сосуде пакет объемом 50 мл вынули из большого сосуда. Дистиллированная вода в пакете объемом 50 мл приобрела восстановительные свойства с Eh=-370 мВ, ХСЭ, то есть окислительно-восстановительный потенциал воды в пакете объемом 50 мл снизился. Eh воды пакета объемом 50 мл вернулся к исходному значению в течение 5 часов, при этом проводимость воды в течение опыта не менялась. Изменения в растворе Микрогидрина длились намного дольше и не совсем обычно. Большой сосуд был закрыт герметично. В течение первых 7 дней Eh постепенно и плавно повышался и достиг значения -140 мВ. В течение последующих 20-и дней среднее значение Eh также продолжало расти и достигло +60 мВ. В течение дальнейших 10-и Eh повысилось до +240 мВ, ХСЭ и больше не изменилось. Таким образом, время полного возврата раствора Микрогидрина к состоянию воды (по параметру окислительно-восстановительного потенциала) до внесения в нее Микрогидрина составило 37 дней.

б) опыт:

В дистиллированную воду, которая предназначена для наполнения тонкостенного полиэтиленового пакета объемом 50 мл и толщиной пленки ~25 мкм, был внесен в концентрации 0,5% мас. глицин, что не исключает применение и других аминокислот по настоящему изобретению.

Герметичный тонкостенный полиэтиленовый пакет (толщина пленки ~25 мкм) с раствором глицина на дистиллированной воде (50 мл) поместили в сосуд большего объема (500 мл), наполненный дистиллированной водой. Затем в этот сосуд добавили порошок Микрогидрина в том же количестве, что и в контроле, и перемешали. Водный раствор Микрогидрина быстро принял самопроизвольно изменяющиеся окислительно-восстановительные свойства, характеризующиеся самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, с начальным параметром Eh=-500 мВ, ХСЭ и приобрел способность к бесконтактному взаимодействию с водой, находящейся в пакете объемом 50 мл. После прекращения снижения Eh в сосуде пакет был вынут из раствора Микрогидрина. Eh водного раствора глицина в пакете 50 мл снизился до Eh=-370 мВ, ХСЭ, т.е. приобрел восстановительную способность. Eh воды пакета не вернулась к исходному значению за период времени, равный 6 месяцам. В частности, за указанный период времени окислительно-восстановительный потенциал оказался повышенным на 20%, а рН от 8,7 стремился к рН 7,05 (см. табл.26).

Опыт 2.

а) контроль:

Герметические тонкостенные (не более 0,1 мм) закрытые емкости из диэлектрика (ампулы или капсулы) либо трубка из полихлорвинила с физиологическим раствором, представляющих емкости, выполненные из химически инертных, непористых и неэлектропроводных материалов, помещаются в раствор катодно-восстановленной воды, приготовленной непосредственно перед погружением емкостей с физиологическим раствором. После экспозиции не менее чем в течение 2 часов герметизированных ампул или трубок с физиологическим раствором в катодно (электрохимически) восстановленной воде показатели рН и Eh физиологического раствора в ампулах и трубках существенно изменяются, что может рассматриваться как приобретение водным раствором в ампулах и трубках указанных окислительно-восстановительных свойств путем бесконтактного взаимодействия физиологического раствора через поверхность этих емкостей (ампул, трубок), выполненных из химически инертного, непористого и неэлектропроводного материала с электрохимически (катодно) восстановленным водным раствором, имеющим самопроизвольно изменяющиеся окислительно-восстановительные свойств. Через 2 часа показатели рН и Eh, измененные в результате бесконтактного взаимодействия, подвергаются преобразованию, в частности рН имеет тенденцию снижения к показателю рН~7,0, a Eh достигает первоначального уровня Eh в течение 5 часов.

б) опыт

Герметические тонкостенные (не более 0,1 мм) закрытые емкости из диэлектрика (ампулы или капсулы) либо трубка из полихлорвинила с физиологическим раствором, представляющих емкости, выполненные из химически инертных, непористых и неэлектропроводных материалов, помещаются в раствор электрохимически (катодно) восстановленной воды, в которую добавляется глицин в концентрации 0,5%, приготовленный непосредственно перед погружением емкостей с физиологическим раствором. После экспозиции не менее чем в течение 2 часов герметизированных ампул или трубок с физиологическим раствором в катодно (электрохимически) восстановленной воде, показатели рН и Eh физиологического раствора в ампулах и трубках существенно изменяются, что может рассматриваться как приобретение водным раствором в ампулах и трубках указанных окислительно-восстановительных свойств путем бесконтактного взаимодействия физиологического раствора через поверхность этих емкостей (ампул, трубок), выполненных из химически инертного, непористого и неэлектропроводного материала с электрохимически (катодно) восстановленным водным раствором, имеющим самопроизвольно изменяющиеся окислительно-восстановительные свойства. В отличие от контроля, даже через 6 месяцев показатели рН и Eh, измененные в результате бесконтактного взаимодействия, не подвергаются преобразованию, столь существенному, как в контроле. В частности, рН имеет тенденцию снижения к показателю рН~7,0, a Eh только к концу 5 месяца повышается не более 15% (см. табл.27).

Пример 16

Пример, демонстрирующий влияние водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на систему свертывания крови.

Целью данного опыта явилась оценка возможного влияния водного раствора со стабилизатором, имеющего окислительно-восстановительный потенциал Eh=-300 мВ, ХСЭ на систему гемостаза.

Для выполнения данной задачи было изучено влияние водного раствора со стабилизатором на некоторые интегральные параметры системы свертывания крови. Эксперименты проводили на кроликах обоего пола массой 3,0-4,0 кг. Все животные (n=12) были разделены на две равные группы. Кроликам первой группы вводили подкожно водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению в дозе 7,0 мл исходной субстанции на 1 кг веса животного в течение 14 суток. Кроликам второй (контрольной) группы вводили обычную прокипяченную и охлажденную воду в той же дозе. Кровь у кроликов забирали из краевой вены уха методом свободного падения капель до начала эксперимента, а также через 1 час, 7 суток и 14 суток после первого введения указанного водного раствора со стабилизатором.

Для приготовления богатой тромбоцитами плазмы кровь центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин, после чего верхний слой плазмы переносили в другую пробирку, а остаток повторно центрифугировали в течение 20 мин при 3000 об/мин для получения плазмы, бедной тромбоцитами.

Были изучены АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, определены число тромбоцитов и активированное частичное время свертывания (АЧТВ), измерены количество фибриногена и уровень составов деградации фибрина и фибриногена (ПДФ), а также активность активатора плазминогена плазменного типа (t-PA).

Агрегацию тромбоцитов исследовали по методу G.G.V. Воrn (1962) на агрегометре фирмы “Chrono-Long Corporation” (США). В качестве проагрегантов использовали АДФ в конечной концентрации 1×10^-5 М. С этой целью в кювету прибора помещали 450 мкл богатой тромбоцитами плазмы, используя в качестве оптического контроля такой же объем плазмы, не содержащей тромбоцитов. О степени агрегации судили по максимальной величине падения оптической плотности после окончания реакции (А_max) по сравнению с исходной величиной. В качестве проагреганта использовали АДФ в конечной концентрации 1×10^-5 М.

Число тромбоцитов определяли оптическим методом. Исходное число тромбоцитов принято за 100%. Определяли также количество фибриногена на коагулометре, определяли составы деградации фибрина и фибриногена с использованием наборов “Fibro-Тес”. Метод основан на свойство клеточных мембран образовывать преципитат, видимый без использования специальных приборов.

При оценке влияния 2-недельного введения водного раствора со стабилизатором, имеющего Eh=300 мВ, ХСЭ, на коагулологический потенциал крови было выявлено, что в течение всего периода эксперимента не отмечалось изменения АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов, протромбинового времени, активированного частичного тромбопластинового времени и содержания плазминогена в кроличьей плазме. Количество составов деградации фибрина и фибриногена как до эксперимента, так и на протяжении всего периода исследования, не превышало физиологической нормы (табл.28-34).

Сравнительное изучение влияния водного раствора со стабилизатором и обычной воды на число тромбоцитов показало, что если водный раствор со стабилизатором не вызывал изменения данного показателя, то подкожное введение обычной воды в изучаемой дозе приводило к повышению числа тромбоцитов уже через 1 час после начала экспериментов, причем этот эффект сохранялся до конца опыта.

Определение активности активатора плазминогена тканевого типа в контрольной и опытной группах показало, что если введение обычной воды сопровождалось достоверным повышением активности t-PA через 7 и 14 суток после начала экспериментов, то подкожное введение водного раствора со стабилизатором вызывало повышение данного показателя через 1 час после начала эксперимент, а через 7 и 14 суток активность t-PA не превышала исходного уровня.

Анализ полученных результатов позволил заключить, что водный раствор со стабилизатором, имеющий окислительно-восстановительный потенциал Eh=-300 мВ, ХСЭ, при подкожном введении кроликам в дозе 7,0 мл/кг веса животного не вызывал существенных изменений коагулологического потенциала крови. Так, показано отсутствие влияния водного раствора со стабилизатором на функциональное состояние как внутреннего пути активации гемостаза (нет изменений величины АЧТВ), так и внешнего пути, о чем свидетельствует постоянная величина протромбинового времени в течение всего опыта. Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению также не вызывает инициации диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, доказательством чего может служить отсутствие изменений в ходе опыта при определении содержания фибриногена, ПДФ и числа тромбоцитов. Тромбоцитоз, развившийся в ответ на введение обычной воды, вероятно обусловлен выходом клеток из депо в ответ на увеличение объема циркулирующей крови. Указанный водный раствор со стабилизатором не вызывает подобных изменений, что может быть одной из причин известного благоприятного действия так называемой “ионизированной воды” при некоторых состояниях, связанных с нарушение сосудистого тонуса.

Таким образом, под влиянием водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению имеет место повышение активности активатора плазминогена тканевого типа (t-PA) после первого его введения, а затем наступает адаптация к водной нагрузке. При подкожном введении обычной воды (контроль) увеличение активности t-PA имело место на протяжении всего эксперимента, что свидетельствует об отсутствии возникновения защитной реакции на резкое изменение объема циркулирующей жидкости.

Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению с Eh=-300 мВ, ХСЭ, не обладает нежелательным действием на систему гемостаза.

Пример 17

Пример, демонстрирующий действие водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на процесс ранозаживления.

В опыте на 20 белых крысах было изучено влияние водного раствора со стабилизатором на процессы заживления ран. Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению имеет характеристики рН 9±0,4; Eh=-300±60 мВ и минерализацию до 0,2 г/литр. Плоскостные кожные раны крысам наносили на спине специальным пробойником без соблюдения стерильных условий. Формировалось два кожных дефекта диаметром 10 мм. Обезболивание осуществлялось внутрибрюшинным введением 0,1% раствора гексенала. Дефекты кожи оставались открытыми в течение всего периода наблюдений (10 суток). В опытной серии раны орошались дважды в день указанным раствором со стабилизатором, в контрольной серии дистиллированной водой. Клинически состояние раны оценивалось каждые два дня, определялись ее размеры, проводились бактериологические исследования. После выведения животных из опыта на 10 сутки производился забор тканей в области раны с прилегающими участками неповрежденной кожи для гистологического изучения. У контрольных животных в течение первых 5 суток рана была закрыта влажным струпом с отделяемым светло-желтого цвета без запаха. Вокруг раны образовывался яркий грануляционный вал, указывающий на выраженный процесс травматического воспаления, в результате диаметр ран превышал исходный 11,6±-0,4 мм. В последующие 5 суток поверхность ран уменьшалась на 50-60% за счет контракции и краевой эпителизации. У 2 крыс из 10 развились выраженные гнойные осложнения. Бактериологические исследования показали, что в течение первых 5 суток обсемененность ран составляет 770-840 колоний золотистого стафилококка. В последующие сутки после формирования прочного струпа и начала краевой эпителизации обсемененность ран снижается до 360-300 колоний микроорганизмов. Через 10 суток полное заживление произошло у одного животного, у остальных размеры ран составили 5-6 мм в диаметре с признаками воспалительной реакции.

У животных, раны которых обрабатывались указанным раствором со стабилизатором, в первые 2-3 суток процесс заживления протекал иначе, чем в контрольной серии. Размеры ран уменьшились на 15-20%, воспалительный процесс был менее выражен, чем в контрольной серии, обсемененность ран составила 300-370 колоний золотистого стафилококка. К 5 и особенно к 7 суткам отмечалось резкое ускорение заживления ран. Через 10 суток у 4 крыс отмечено полное заживление ран, у остальных сохранялись небольшие дефекты (до 2-3 мм в диаметре), покрытые сухой корочкой.

Применение водного раствора со стабилизатором оказывается эффективным как в первой, так и во второй и третьей фазах раневого процесса, на этапах пролиферации фибробластов и роста сосудов, фибриллогенеза коллагена, созревания и фиброзного превращения грануляционной ткани, реорганизации рубца.

Пример 18

Пример по включению водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению в состав липосом с целью применения в косметологии.

Липосомы в эксперименте создаются путем смешивания с последующей обработкой ультразвуком смеси фосфолипидов яичного желтка и указанного по настоящему изобретению водного раствора, содержащего глицин, с указанными окислительно-восстановительными свойствами. Приготовленные таким образом липосомы представляют собой молочно-белую суспензию. Водный объем липосом варьирует от 1 до 4 литров на моль смеси фосфолипидов и зависит как от условий приготовления (температура, время, интенсивность перемешивания, природы фосфолипидов), так и от окислительно-восстановительного потенциала (Eh) и водородного показателя водной фазы. Оказалось, что липосомы с включенным в состав липосом водным раствором, содержащим глицин в концентрации 0,5% мас. с указанными окислительно-восстановительными свойствами, сохраняются не менее 6 месяцев при Еh~(-150мВ (-300 мВ,) ХСЭ, при минерализации не более 0,2 грамма на литр и рН от 5,5 до 7,5. Ранее было установлено, что катодно восстановленная вода или католит, включенная в микрокапсулы (липосомы), является универсальным стимулятором клеточного метаболизма, стабилизирует клеточные мембраны, замедляет старение кожи и используется в составе косметического водного раствора со стабилизатором при том, что применяемый в указанном креме католит характеризуется минерализацией около 9 граммов на литр, Eh<-500 мВ, ХСЭ, и рН>9, что является границей физиологических значений (см., напр., В.И.Прилуцкий, В.М.Бахир. Электрохимическая активированная вода: аномальные свойства, механизм биологического действия. Москва, 1997, ВНИИИМТ, с.152).

Была также установлена степень окисления фосфолипидов по содержанию малонового диальдегида (МДА).

В таблице 35 приведены результаты определения МДА (нмоль/мл) в различных липосомальных дисперсиях.

Вывод: предложенный водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению более чем в 4 раза тормозит степень окисления фосфолипидов в липосомах, что недостижимо для применяющихся известных составов, учитывая отсутствие антиоксидантов, препятствующих окислению и в тоже время не приводящих к расслаиванию дисперсии липосом.

Пример 19

Данный пример демонстрирует влияние водного водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению при длительном применении на сон в тесте гексеналовой пробы в опытах на мышах. Параметры водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению рН 7,2, минерализация 170-190 мг/л, окислительно-восстановительный потенциал (-250)-(-300) мВ, аминокислота глицин 0,4% массы. Параметры контрольного раствора минерализация 170-190 мг/л, окислительно-восстановительный потенциал (+270)-(+300) мВ, аминокислота глицин 0,4% массы.

Опыты проводили на белых беспородных мышах-самцах массой 18-29 г. Мыши содержались в условиях вивария при свободном доступе к пище и воде.

Метод исследования. Интактные животные при переворачивании их в неудобную позу на спину немедленно возвращаются в нормальное положение, то есть осуществляют рефлекс переворачивания. Под влиянием вещества, вызывающего снотворный эффект, в частности гексенала, животные через некоторое время после введения остаются в неудобной позе на спине или на боку, которая обозначается как наличие бокового положения.

На первом этапе исследования определялась доза гексенала, при которой боковое положение наблюдалось у 100% животных.

Схема эксперимента. Введение растворов осуществлялось длительно в течение 6-и дней следующим группам животных:

1-я группа - контроль 16 мышей (контрольный раствор в эквивалентном объеме), внутрибрюшинно, один раз в день / 6 дней;

2-я группа - опыт (один объем водного раствора со стабилизатором по весу животного) внутрибрюшинно, один раз в день / 6 дней;

3-я группа - опыт (двойной объем водного раствора со стабилизатором по весу животного) внутрибрюшинно, один раз в день / 6 дней.

На 6-й день опыта через 40 минут после введения исследуемых растворов внутрибрюшинно вводили гексенал (гексобарбитал) в дозе 80 мг/кг (доза, при которой наличие бокового положения наблюдалось у 100% животных).

Регистрировали латентное время утраты животными рефлекса переворачивания (наличие бокового положения), а также продолжительность гексеналового сна.

Статистическую обработку данных проводили с вычислением средних арифметических и их доверительных интервалов при Р<0,05. Для оценки достоверности результатов использовали параметрический критерий статистической обработки данных по методу Стьюдента, по программе "Биостатистика".

Результаты исследования.

Установлено, что опытный водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению достоверно снижает общее время обездвиживания животных в тесте гексеналовой пробы по сравнению с контрольной группой (таблица 36).

В то же время, водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению в тесте гексеналовой пробы не влияет на латентное время наступления бокового положения у мышей по сравнению с контролем как в группе, получавшей один объем водного раствора, так и в группе, получавшей двойной объем того же раствора (табл.36).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что длительное введение водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, имеющего отрицательный окислительно-восстановительный потенциал, достоверно снижает общее время обездвиживания животных в тесте гексеналовой пробы, но не влияет на латентное время наступления гексеналового сна в сравнении с контрольным раствором, имеющим положительный окислительно-восстановительный потенциал при одинаковой концентрации глицина в указанных растворах.

Пример 20

Данный пример демонстрирует вирулицидное действие на вирус гриппа А водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению.

Материалы и методы. В эксперименте использовался водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению. Параметры указанного водного раствора составляют: Eh от -250 до -300 мВ, рН 7,3-7,8, минерализация 170-190 мг/л и аминокислота глицин в концентрации 0,4% мас.

Контрольный раствор представляет собой воду того же состава, но без отрицательного окислительно-восстановительного потенциала (неактивированный раствор). Изучение вирулицидной активности водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению и контрольного раствора проведено в опытах in vitro при непосредственном контакте испытуемых растворов с вируссодержащим материалом.

При изучени вирулицидного действия водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению и контрольного раствора были использованы два разведения: 9:1 (девять частей водного раствора со стабилизатором и одна часть вируссодержащего материала) и 1:1 (одна часть водного раствора со стабилизатором и одна часть вируссодержащего материала).

Для изучения вирулицидного действия испытуемых растворов использовали вирус гриппа A/Aichi (H₃N₂), пассируемый в клетках хорионаллантоисной оболочки 9-дневных развивающихся куриных эмбрионов. В эксперименте использовали одну стопроцентную летальную дозу (1,0 LD₁₀₀), вызывающую 100% гибель животных от гриппозной пневмонии.

Контакты испытуемых растворов с вируссодержащим материалом (аллантоисная жидкость зараженных вирусом гриппа куриных эмбрионов) составили один час и 24 часа при комнатной температуре (t=18-20°C).

После контакта инфекционность смеси проверяли на мышах путем интраназального введения исследуемого материала в объеме 0,05 мл под легким эфирным наркозом. В экспериментах использовали белых неинбредных мышей с массой тела 14,0-16,0 г в количестве 160 штук по 10 мышей в каждой исследуемой группе. За животными наблюдали в течение 14 дней. Погибших вскрывали, регистрируя специфические для вируса гриппа паталогоанатомические изменения в легких.

Активность изучаемых растворов оценивали по снижению летальности в опытных группах сравнительно с контрольными группами животных.

Результаты исследований

В таблице 37 представлены результаты изучения вирулицидного действия на вирус гриппа водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, взятого в соотношении 9:1.

В результате проведенного исследования установлено, что водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению, взятый в соотношении 9 частей раствора и 1 часть вируссодержащего материала при контакте в течение 24 ч (t=18-20°С), оказывает вирулицидное действие в отношении вируса гриппа, снижая его вирулицидные свойства на 50% в сравнении с контролем. В тех же условиях опыта неактивированный раствор вирулицидного действия на вирус гриппа не оказывал. При снижении времени контакта до одного часа вирулицидное действие водного раствора со стабилизатором в отношении вируса гриппа было менее выражено - 30% по сравнению с контролем. Неактивированный раствор не оказывал вирулицидного действия на вирус гриппа и при этой экспозиции с вируссодержащим материалом. В таблице 38 представлены результаты изучения вирулицидного действия на вирус гриппа водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению, взятого в соотношении 1:1.

В результате проведенного исследования установлено, что водный раствор со стабилизатором, взятый в соотношении 1 часть раствора и 1 часть вируссодержащего материала при контакте в течение 1 часа, оказывает вирулицидное действие в отношении вируса гриппа, снижая его инфекционные свойства на 30% по сравнению с контролем вируса. Неактивированный раствор был не активен. Увеличение времени контакта до 24 часов не привело к усилению вирулицидного действия водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению. Вирулицидное действие его составило также 30% снижения инфекционности смеси по сравнению с контролем вируса. Неактивированный раствор при контакте с вируссодержащим материалом в течение 24 часов был не активен.

Заключение

Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению обладает вирулицидной активностью в отношении вируса гриппа. Вирулицидное действие указанного раствора - 50%, снижение летальности животных наиболее выражено при соотношении 9:1 (9 частей раствора и 1 часть вируссодержащего материала) и контакте в течение 24 часов при комнатной (t=18-20°С).

При уменьшении времени контакта до 1 часа, а также при уменьшении концентрации водного раствора со стабилизатором до 1 части (1 часть раствора и 1 часть вируссодержащего материала) вирулицидное действие его снижается до 30% (30% снижение летальности животных при 100% гибели в контроле).

Пример 21

Данный пример демонстрирует влияние водного водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению на повышение вынословости организма на модели истощающей физической нагрузки. Опыт проводился на мышах с помощью стандартной методики плавания животных в бассейне. Водный раствор со стабилизатором по настоящему изобретению с параметрами: Eh=-300 мВ, рН 7,2 и минерализация 170 мг/литр вводили опытной группе мышей в течение 5 дней перорально. Контрольной группе мышей в течение этого же периода времени вводили воду с параметрами: Eh=+240 мВ, рН 7,2 и минерализация 170 мг/литр. Для уменьшения вариабельности результатов к каждой мыши подвесили груз весом 5% от массы тела, не затрудняющий движения животного, и поместили опытную и контрольную группу мышей в бассейн с температурой воды 20±0,5°С. Продолжительность плавания контрольной группы мышей составила в среднем 4 минуты. Продолжительность плавания опытной группы мышей составила в среднем 17 минут. Таким образом настоящим примером было доказано, что употребление водного раствора со стабилизатором по настоящему изобретению повышает выносливость организма к истощающей физической нагрузке.

Промышленная применимость

Предложенный стабилизатор водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, представляет собой аминокислоту, выбранную из группы полярных (гидрофильных) незаряженных аминокислот, включающую глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин, либо их производные, либо пептиды, содержащие указанные аминокислоты и/или их производные, либо их смеси в количестве не менее 0,01 мас.%

Предложенный стабилизатор может найти применение в пищевой промышленности, медицине, ветеринарии, фармацевтической промышленности, косметической промышленности, бальнеологии, сельском хозяйстве, рыбоводстве и других областях техники.

Изобретение может найти применение в пищевой промышленности, медицине, ветеринарии, фармацевтической промышленности, косметической промышленности, бальнеологии, сельском хозяйстве, рыбоводстве и других областях техники. Стабилизатор представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин, или их производные, или пептиды, содержащие указанные аминокислоты и/или их производные, или их смеси в количестве не менее 0,01 мас.%. Стабилизатор обеспечивает сохранение полезных качеств раствора и сырья, предотвращает окислительную и микробиологическую порчу продуктов и различных поверхностей. 1 з.п.ф-лы, 38 табл.

1. Стабилизатор водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами, характеризующимися самопроизвольным повышением окислительно-восстановительного потенциала относительно потенциала водородного электрода, значение которого принято за нулевое, представляющий собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин или их производные, или пептиды, содержащие указанные аминокислоты и/или их производные, или их смеси в количестве не менее 0,01 мас.%.2. Стабилизатор по п.1, отличающийся тем, что содержит указанные аминокислоты или их производные, или пептиды, содержащие указанные аминокислоты и/или их производные или их смеси в любом сочетании в количестве 0,01-5,0 мас.%.