ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА (ЖИДКАЯ) ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ Российский патент 2004 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к питательным средам, которые создают оптимальные условия для жизнедеятельности и транспортировки бруцеллезного микроба. Изобретение целесообразно использовать для диагностики бруцеллеза у людей.

Известна питательная среда, основой которой является бульон Мартена, который готовят следующим образом, г/л: мясная вода 0,5 л; пептон Мартена 0,5 л; хлористый натрий 3,0; 20%-ная гидроокись натрия 3,0; рН 7,6±0,1 (Микробиология Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. - М.: Медицина, 1987).

Недостатком данной среды является получение недостаточного количества колоний бруцеллезного микроба, посеянных с бульона Мартена на пластинках агара.

Наиболее близким к предлагаемой питательной среде является заменитель среды Альбими, содержащий 20 г пептона Дифко, 20 см³ дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы, 0,1 г натрия бисульфита, дистиллированную воду 1 л (Сидоров М.А., Скородумова Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. - М.: Колос, 1995, с.183).

Недостатком данной среды является то, что при пересеве с заменителя среды Альбими на пластинки агара вырастает меньшее количество колоний бруцеллезных бактерий.

Целью изобретения является получение питательной среды (жидкой) для культивирования бруцелл.

Сущность изобретения заключается в том, что питательная основа содержит гидролизат говяжьего мяса, его основные характеристики: рН среды 7,2, общий азот 902 мг%, аминный азот 600 мг%, процент расщепления 74, % натрия хлорида 0,086, % пептона 1,2, Са 4,2 мг%, Mg 5,16 мг%, фосфор общий 96,8 мг%, фосфор неорганический 56,4 мг%, сухой остаток 10,0±1,5%, редуцирующие вещества 364 мг%, и стимулирующую добавку, причем в качестве стимулирующей добавки используют липоевую кислоту при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Гидролизат говяжьего мяса 160,0-180,0

Натрий хлористый 4,0-6,0

Глицерин 19,0-21,0

Глюкоза 9,0-11,0

Цитрат натрия 4,0-6,0

Липоевая кислота 0,4-0,6

Дистиллированная вода Остальное

В отличие от заменителя среды Альбими питательная среда для культивирования бруцелл значительно увеличивает количество высеваемых микробов бруцеллеза. По ростовым свойствам предлагаемая среда превосходит аналог.

Использование липоевой кислоты является отличительным признаком предлагаемой питательной среды и позволяет активизировать наличие основного структурного элемента клеток оксидоредуктаз. Повышенное содержание их в мембранах способствует активации процесса переноса водорода Н и молекул различных веществ, являясь дополнительным источником энергии, причем в экономичной форме, в которой организм запасает эту энергию. Липоевая кислота выступает в качестве кофермента систем, осуществляющих окислительное декарбоксилирование а-кетокислот, устраняет токсические продукты обмена или проникающих извне ядов путем окисления. Кислород окисляет липоевую кислоту до сульфоксида, который лучше усваивается.

В новом качестве липоевая кислота проявляет свое действие, находясь в питательной среде для культивирования микробов бруцеллеза, влияя на дыхательную активность клеток бруцеллезного микроба, что приводит к утилизации питательной основы и в целом обеспечивает активацию роста.

Питательную среду готовят следующим образом.

Среду нагревают при непрерывном помешивании до полного растворения ее компонентов, фильтруют через тканевый фильтр, затем устанавливают рН 7,3±0,1 гидроокисью натрия 20% и разливают в стерильные пенициллиновые флаконы по 5 мл, закупоривают стерильными резиновыми пробками, накрывают алюминиевыми колпачками, вальцуют. Стерилизуют при 0,3 атм 20 мин. Готовую среду используют для выращивания бруцелл. Испытуемые культуры - Вr.melitensis 16 M, Br.abortus 544, выращенные на пластинках плотного агара рН 7,2±0,1 при температуре 37°С в течение 24 ч. Из суточных культур готовили 1 млрд взвесь м.т. тест-штаммов, равной 10 ед. по оптическому стандарту мутности по ОСО ГИСК им Л.А.Тарасовича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 100; 500; 1000 м. к. Из данных разведений взвеси культур высевали по 0,1 мл по 3 флакона. Посевы инкубировали в условиях термостата при 37°С. Учет проводили через 48 ч.

Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 160,0; натрий хлористый 4,0; глицерин 15,0; глюкоза 5,0; цитрат натрия 4,0; липоевая кислота 0,4; дистиллированная вода остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара для двух видов бруцелл, высеянных из флаконов, составило соответственно при посевной дозе 10; 50; 100 м.к. - данные представлены в таблице.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 170,0; натрий хлористый 5,0; глицерин 20,0; глюкоза 10,0; цитрат натрия 5,0; липоевая кислота 0,5; дистиллированная вода остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара для двух видов бруцелл, высеянных из флаконов, составило соответственно при посевной дозе 10; 50; 100 м.к. - данные представлены в таблице.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 180,0; натрий хлористый 6,0; глицерин 25,0; глюкоза 15,0; цитрат натрия 6,0; липоевая кислота 0,6; дистиллированная вода остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара для двух видов бруцелл, высеянных из флаконов, составило соответственно при посевной дозе 10; 50; 100 м.к. - данные представлены в таблице.

Таким образом, вариант питательной среды № 2 является оптимальным по количеству подобранных ингредиентов, они в совокупности с липоевой кислотой обеспечивают рост культур Br. melitensis М 16 и Вr. abortus 544 и позволяют получить конечную концентрацию бактерий, значительно превышающую их посевную дозу.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности касается способа получения питательных сред, обеспечивающих оптимальные условия для жизнедеятельности бруцеллезного микроба, и может быть использовано в медицинской микробиологии. Питательная среда (жидкая) для культивирования бруцеллезного микроба содержит в качестве питательной основы гидролизат говяжьего мяса, в качестве стимулирующей рост добавки липоевую кислоту, хлористый натрий, глюкозу, цитрат натрия, глицерин, дистиллированную воду. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства питательной среды. 1 табл.

Питательная среда (жидкая) для культивирования бруцелл, содержащая питательную основу, хлористый натрий, глюкозу, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит цитрат натрия, глицерин, в качестве стимулирующей добавки - липоевую кислоту, а в качестве питательной основы - гидролизат говяжьего мяса при следующем содержании ингредиентов, г/л:

Гидролизат говяжьего мяса 160,0-180,0

Натрий хлористый 4,0-6,0

Глицерин 19,0-21,0

Глюкоза 9,0-11,0

Цитрат натрия 4,0-6,0

Липоевая кислота 0,4-0,6

Дистиллированная вода Остальное