ТРАНСПОРТНАЯ ЖИДКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ СБОРА, КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ, ПОДОЗРЕВАЕМЫХ НА ЗАБОЛЕВАНИЕ БРУЦЕЛЛЕЗОМ Российский патент 2005 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к транспортным жидким питательным средам для сбора материала, содержащего возбудитель бруцеллеза, культивирования и транспортировки бруцеллезного микроба. Изобретение целесообразно использовать для диагностики бруцеллеза у людей.

Известен способ сбора материала от больного для диагностики бруцеллеза: при отсутствии питательной среды проводят забор крови из вены больного в количестве 5-10 мл в стерильную бактериологическую пробирку, помещают в бикс и отправляют на исследование в бак. лабораторию (Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология. 1986, стр. 346).

Недостатком данного способа является то, что кровь быстро свертывается - это затрудняет дальнейшую работу с ней.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является питательная среда для культивирования бруцелл - заменитель среды Альбими, состоящая, г/л: 20 г пептона Дифко, 20 мм дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы, 0,1 г натрия бисульфита, дистиллированную воду (М.А.Сидоров, Д.И.Скородумов, В.Б.Федотов. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. М.: Колос, 1985, с.183).

Недостатком данного способа является то, что при пересеве с бульона Альбими на пластинки агара вырастает малое количество колоний бруцеллезных бактерий.

Целью предлагаемого изобретения является создание транспортной жидкой питательной среды для сбора, культивирования и транспортировки крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что посев крови от больного осуществляют в транспортную жидкую питательную среду, завальцованную в пенициллиновые флаконы (v 15 мл) по 5 мл, стерильную, которые можно транспортировать на любые расстояния.

Питательная основа содержит гидролизат говяжьего мяса - его основные характеристики: рН среды 7,2; общий азот 902 мг%, аминный азот 600 мг%, процент расщепления 74, натрия хлорида 0,086%, пептона 1,2 мг%; Са 4,2 мг%:, Мg 516 мг%; фосфор общий 96,8 мг%; фосфор неорганический 56,4 мг%; сухой остаток 10+1,5%; редуцирующие вещества 364 мг%; и стимулирующую добавку, причем в качестве стимулирующей добавки используют САГ-1 (смесь аминокислот гидролизная, сухая - необогащенная, ТУ 10 16 УССР 40-88. Партия 020389. Опытное производство института биоорганической химии АН УССР), содержащая воды не менее 8%, М. Д. азота общего не менее 13%, М. Д. азота аминного не менее 10,5%, М. Д. золы не менее 5,0% при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Гидролизат говяжьего мяса 160,0-180,0

Натрий хлористый 4,0-6,0

Глицерин 19,0-21,0

Глюкоза 9,0-11,0

Цитрат натрия 4,0-6,0

САГ-1 0,5-0,7

20% гидроокись натрия 0,0001-0,0003

Дистиллированная вода до 1 л

Использованние в качестве стимулирующей добавки САГ-1, содержащей дополнительно азот, позволяет активизировать наличие основного структурного элемента клеток оксидоредуктаз, являясь дополнительным источником энергии, и является отличительным признаком.

В новом качестве САГ-1 проявляет свое действие, находясь в питательной среде для культивирования микробов бруцелл, так как аминокислоты являются источником белка, который, в свою очередь, необходим для построения клеток микроорганизмов и в целом обеспечивает активацию роста. В отличие от прототипа предлагаемая среда обеспечивает высокую конечную концентрацию засеваемых микробов бруцелл.

Питательную среду готовят следующим образом.

Среду нагревают при непрерывном помешивании до полного растворения ее компонентов, фильтруют через тканевой фильтр, затем устанавливают рН 7,2±0,1 гидроокисью натрия 20% и разливают во флаконы по 5,0 мл. Стерилизуют при 0,3 атм 20 мин. Готовую среду используют для выращивания бруцелл. Испытуемые культуры - Br.melitensis 16 М, Br.abortus 544, выращенные на пластинках плотного агара рН 7,2±0,1 при температуре 37°С в течение 24 ч. Из суточных культур готовили взвесь м.т. тест-штаммов в физиологическом растворе с концентрацией, соответствующей 10 единицам ОСО мутности ГИСК им. Л.А.Тараcевича, эквивалентного 1,0·10 м.к./мл бруцелл. Затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 100; 500; 1000 м.к. Из данных разведений взвеси культур высевали по 0,1 мл в 3 флакона. Посевы инкубировали в условиях термостата при 37°С в течение 48 ч. Оценку ростовых свойств питательной среды проводили путем подсчета количества выросших колоний бруцелл при посеве содержимого флаконов на пластинки с плотной питательной средой.

Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат из говяжьего мяса 160,0; натрий хлористый 4,0; глицерин 19,0; глюкозу 9,0; цитрат натрия 4,0; САГ-0,5; 20% гидроокись натрия 0,0001; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцелл двух видов, высеянных из флаконов при посевной дозе 10 и 50 м.к., составило соответственно 150 и 500 м.к. При посевной дозе 100 м.к. был получен сплошной рост бактерий на пластинках агара.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 170,0; натрий хлористый 5,0; глицерин 18,0; глюкозу 10,0; цитрат натрия 5,0; САГ-1 0,6; 20% гидроокись натрия 0,0002; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцелл двух видов, высеянных из флаконов при посевной дозе 10 и 50 м.к., составило соответственно 160 и 555 м.к. При посевной дозе 100 м.к. на пластинках агара был получен сплошной рост бактерий.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 180,0; натрий хлористый 6,0; глицерин 21,0; глюкозу 11,0; цитрат натрия 6,0; САГ-1 0,7; 20% гидроокись натрия 0,0003; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцелл двух видов, высеянных из флаконов при посевной дозе 10 и 50 м.к., составило соответственно 139 и 425 м.к. При посевной дозе 100 м.к. на пластинках агара был получен сплошной рост бактерий.

Таким образом, вариант питательной среды N 2 является оптимальным по количеству подобранных ингредиентов, они в совокупности с САГ-1 обеспечивают рост культур Br.melitensis 16 М и Br.abortus 544 и позволяют получить конечную концентрацию бактерий, значительно превышающую их посевную дозу.

Питательную среду N 2 в количестве 5 мл помещают в пенициллиновые флаконы v 15 мл, вальцуют, стерилизуют, затем используют для введения крови у постели больных, подозреваемых на бруцеллез, и транспортируют на любые расстояния.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности касается получения питательной среды для сбора, культивирования и транспортировки крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом. Питательная среда содержит в качестве питательной основы гидролизат говяжьего мяса, в качестве стимулятора роста бруцелл - САГ-1, а также хлористый натрий, глюкозу, цитрат натрия, глицерин, гидроокись натрия, дистиллированную воду. Изобретение позволяет повысить накопительные свойства питательной среды, облегчить транспортировку питательной среды.

Транспортная жидкая питательная среда для сбора, культивирования и транспортировки крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом, содержащая питательную основу, стимулятор роста бруцелл, хлористый натрий, глюкозу, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит цитрат натрия, глицерин, 20%-ную гидроокись натрия, в качестве стимулятора роста содержит САГ-1, а в качестве питательной основы - гидролизат говяжьего мяса при следующем содержании ингредиентов, г/л:

Гидролизат говяжьего мяса 160,0-180,0

Натрий хлористый 4,0-6,0

Глицерин 19,0-21,0

Глюкоза 9,0-11,0

Цитрат натрия 4,0-6,0

САГ-1 0,5-0,7

20%-ная Гидроокись натрия 0,0001-0,0003

Дистиллированная вода До 1 л