ЭКСТРАКТ TANACETUM PARTHENIUM Российский патент 2004 года по МПК A61K35/78 A61P43/00 

Изобретение относится к экстракту Tanacetum parthenium, практически не содержащему α-ненасыщенных γ-лактонов.

Кроме этого, настоящее изобретение относится к способу получения указанного экстракта, а также к фармацевтическим и косметическим композициям, содержащим экстракт Tanacetum parthenium, практически не содержащий партенолида.

Экстракты Tanacetum parthenium, растения, принадлежащего к семейству Asteracee/Composite, известного также под названиями Altamisa, Crisanthemum, Leucanthemum, Pyrethrum parthenium, или под общим названием “пиретрум девичий”, традиционно используются для лечения мигрени, головокружения, артрита, менструальных нарушений, лихорадки, зубной боли, желудочных болей и укусов насекомых. Экстракты Tanacetum parthenium, помимо легколетучих масел различной природы (моно- и сесквитерпеновые компоненты), флавонидов, таннинов, пиретрина, также содержат терпеноиды семейства сесквитерпеновых лактонов, известных под названиями гермакранолиды, гваянолиды и эудеманолиды. Указанные соединения имеют структуру α-ненасыщенных γ-лактонов и, главным образом, включают вещества, известные под названиями партенолид, 3-β-гидроксипартеноид, костунолид, 3-β-гидроксикостунолид, артеморин, 8-α-гидроксиэстафиатин и хризантемонин. Присутствие указанных сесквитерпеновых лактонов считается основным условием, обеспечивающим фармакологическую активность рассматриваемых экстрактов (J. Pharm. Phamrcol. 1992, 44:391-395).

Основное внимание исследователей, главным образом, было сфокусировано, на партенолиде, который считается основным активным ингредиентом экстракта и в то же время главным веществом, ответственным за аллергические реакции, иногда сопровождающие лечение экстрактами Tanacetum parthenium (Arch. Dematol. Forsch. 1975, 251 (3): 235-44; там же, 1976, 255 (2): 111-21; Contact Dermatitis, 1988, 38 (4): 207-8; Am. J. Contact Dermatol. 1998-9 (I): 49-50; Br. J. Dermatol. 1995, 132 (4): 543-7).

Экстракты Tanacetum parthenium, содержащие партенолид, раскрыты в WO 9406800; ЕР 0553658; WO 9211857; GB 2,166,952; ЕР 98041; WO 9839018.

Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что экстракты Tanacetum parthenium, практически свободные от α-ненасыщенных γ-лактонов, особенно, партенолида, обладают интересными фармакологическими свойствами наряду с значительно пониженной опасностью протекания сопутствующих аллергических реакций.

В связи с этим экстракты согласно настоящему изобретению могут успешно использоваться в качестве активных ингредиентов для приготовления фармацевтических или пероральных косметических композиций.

Используемые в тексте термины “практически свободные от α-ненасыщенных γ-лактонов” и “практически свободные от партенолида” относятся к экстракту с весовым содержанием партенолида менее 0,2%, предпочтительно, менее 0,1%, более предпочтительно, менее 0,09% и наиболее предпочтительно, менее 0,07%.

Экстракт согласно настоящему изобретению может быть получен с помощью способа, включающего:

a) экстракцию растения (надземных частей) ацетоном, спиртами или смесями таких растворителей с водой;

b) экстракцию материала, полученного на стадии а) углеводородами;

c) экстракцию неуглеводородной фазы неполярным растворителем;

d) обработку предварительно выпаренного и повторно растворенного в водно-спиртовом растворе экстракта, полученного с использованием неполярного растворителя, сильноосновной ионообменной смолой;

e) элюирование смолы спиртами и удаление элюированного раствора;

f) обработку указанной смолы спиртовыми или водно-спиртовыми растворами кислот, концентрирование раствора и экстракцию полученного в результате остатка неполярным растворителем;

g) выпаривание неполярного растворителя со стадии f) с получением остатка, который добавляют к остатку, полученному выпариванием углеводородного экстракта со стадии b) и к ацетоновой или спиртовой фазе, полученной после экстракции неполярным растворителем на стадии с);

h) выпаривание и сушку.

Партенолид и другие родственные сесквитерпеновые лактоны могут быть удалены за счет того, что сильноосновная смола неожиданно не вызывает раскрытия лактонового кольца, которое, как известно, чувствительно к основному гидролизу: вследствие этого флавоновые компоненты, содержащие кислотные гидрокси группы, удерживаются смолой, а партенолид и родственные соединения могут быть удалены.

Ниже перечислены предпочтительные растворители для различных стадий экстракции:

стадия а): ацетон, метанол, этанол или их смеси с водой;

стадия b): гексан, н-пентан, петролейный эфир, лигроин;

стадия с): хлористый метилен, хлороформ, этилацетат, предпочтительно, хлористый метилен;

стадия f): этилацетат.

Определение “спиртовые или водно-спиртовые растворители”, предпочтительно, относится к метанолу или его смесям с водой, содержащим 10-80% об. метанола.

Основные смолы, подходящие для использования в настоящем изобретении представляют собой коммерчески доступные вещества, например продукты с зарегистрированными названиями Relite 2A, Relite 3A2, Dowex 2.

С другой стороны, экстракт согласно настоящему изобретению может быть получен из традиционных коммерчески доступных экстрактов, в результате обработки сильноосновными смолами, с необязательной предварительной экстракцией углеводородными растворителями липофильных компонентов, которые могут отрицательно влиять на свойства смолы.

Содержание α-ненасыщенных γ-лактонов или пертенолида в конечном экстракте определяют методом ВЭЖХ.

На прилагаемой чертеже представлен типичный ВЭЖХ профиль экстракта, полученного описанным выше способом.

Экстракт настоящего изобретения обладает полезными фармакологическими свойствами наряду со значительно уменьшенным риском индуцирования аллергических реакций. Сохранение фармакологических свойств, характерных для традиционных экстрактов Tanacetum parthenium, несмотря на почти полное удаление сесквитерпеновых лактонов, оказалось достаточно неожиданным в свете документальных отчетов, касающихся взаимосвязи между биологической активностью и составом известных экстрактов (J. Pharm. Pharmacol. 1992, 44:391-395).

Следует отметить, что экстракты согласно настоящему изобретению практически свободные от партенолида, проявляют антитромбоцитарную, противовоспалительную, обезболивающую и противомигреневую активности.

В связи с этим настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим, в качестве активного ингредиента, эффективное количество экстракта Tanacetum parthenium согласно настоящему изобретению в смеси с подходящими носителями.

Композиции настоящего изобретения могут содержать 10-500 мг экстракта и применяются 3-4 раза в день в зависимости от предписаний терапевта. Предпочтительным способом применения является пероральный, однако, могут использоваться и другие способы, например, местное и парентеральное применение.

Композиции настоящего изобретения особенно полезны для терапии и профилактики приступов мигрени.

Экстракты настоящего изобретения также могут использоваться в качестве активных ингредиентов для пероральных косметических рецептур.

Настоящее изобретение описывается более подробно в следующих примерах.

Пример 1 - приготовление экстракта

Два килограмма Tanacetum parthenium экстрагировали при 50-60°С 20 л 70% водного раствора метанола. Полученный экстракт концентрировали в вакууме до объема, примерно, 1 л и разбавляли равным объемом метанола. Полученный раствор экстрагировали 3×2 л н-гексана. Гексановый экстракт выпаривали в вакууме до суха с получением 30 г остатка (экстракт Н). Затем водно-метанольный раствор экстрагировали 2×0,5 л хлористого метилена. Органическую фазу досуха выпаривали в вакууме с получением 70 г остатка (экстракт DCM). Водно-метанольную фазу (экстракт НМ) помещали отдельно. Экстракт DCM растворяли в 0,6 л 90% метанола и, при перемешивании, в течение трех-четырех часов обрабатывали 0,6 л сильноосновной смолы (Relite 2A). Полученную суспензию фильтровали в вакууме и смолу промывали 2 л 90% метанола. Метанольный раствор, содержащий партенолид и родственные соединения, отбрасывали. Затем основную смолу, при перемешивании, в течение 1 часа обрабатывали 0,6 л метанола, содержащего 65 мл концентрированной хлористо-водородной кислоты. Далее смолу фильтровали в вакууме и дополнительно промывали 2,5 л метанола. Фильтрат и промывные жидкости объединяли, концентрировали в вакууме, примерно, до объема в 200 мл и экстрагировали 3×200 мл этилацетата. Полученный в результате экстракт (Е.А.), содержащий танетиновые компоненты флавона и родственные вещества, досуха выпаривали в вакууме с получением 4 г остатка. Остатки экстрактов Н и Е.А. объединяли с экстрактом НМ. Полученный в результате раствор досуха выпаривали в вакууме и твердый остаток сушили в вакууме при 50°С до постоянного веса. Получали 490 г экстракта департенолидированного Т. parthenium, который, согласно данным ВЭЖХ анализа (колонка Zorbax SB C18; элюент Н₂О+0,01% TFA; B:MeCN+0,01% TFA; градиент А:В:90%-10%: 10%-90%; расход 1мл/мин), содержал менее 0,07% партенолида.

Пример 2 - фармакологическая активность

Использовали экспериментальную модель нейронной стимуляции крыс, индуцированной нитроглицерином, описанную в журнале Brain Research 1995, 682:167-181; там же 1995, 695:37-44 и в Neuropharmacol. 1997, 36(10); 1417-1424.

Нитроглицерин, (широко используемое сосудорасширяющее средство, применяемое для лечения некоторых сердечно-сосудистых нарушений) может применяться в качестве диагностического средства для исследования мигреневых головных болей, поскольку его применение вызывает спонтанноподобный приступ мигрени. Индуцированный нитроглицерином приступ не является кратковременным и длится в течение нескольких часов и обычно сопровождается такими симптомами, как тошнота и фотофобия. Сосудорасширяющая активность органических нитратов, включая нитроглицерин, связана с метаболизмом оксида азота, который, как сообщается, играет определенную роль в качестве нейромедиатора в SNC. Стимуляция нейронов быстро активирует транскрипцию определенных протоонкогеназ, которые из-за своей способности к быстрому и транзиторному возбуждению могут квалифицироваться как предранние гены. Среди таких генов, наиболее широко изучен c-fos, а закодированный белком Fos транслоцируется с ядром, где он находится в течение нескольких часов и может определяться иммуногисто-химическими методами.

Методика эксперимента

Использовали двадцать пять самцов крыс разновидности Sprague-Dawley, распределенных по пяти группам животных. Двум группам животных (контрольной и обработанной нитроглицерином) делали инъекции одного носителя (0,5% карбоксиметилцеллюлозы, 1-мл/кг), тогда как 3 другим группам, в течение 3 дней, вводили перорально экстракт Tanacetum parthenium, практически свободный от партенолида (TPPDE), используя дозировки 100 и 200 мг/кг и регулярный экстракт Tanacetum parthenium (TPRE) в тех же дозировках, соответственно.

Через час после последнего применения всем животным, за исключением контрольной группы, делали подкожные инъекции нитроглицерина с дозировкой 10 мг/кг.

Через четыре часа после применения нитроглицерина крыс анестезировали пентобарбиталом натрия и делали перфузию фиксатора через восходящую аорту. Быстро удаляли мозг и проводили повторную фиксацию в том же фиксаторе в течение ночи. Гистологические срезы всего мозга с интервалом в 50 мкм осуществляли на замораживающем санном микротоме. Срезы серийно собирали в шести лунках, содержащих холодный забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS) и обрабатывали для иммуногистохимического анализа, как свободно всплывающие срезы.

Полученные результаты представлены в следующей ниже таблице.

Экстракт Tanacetum parthenium практически свободный от α-ненасыщенных γ-лактонов. Его получают проводя: а) экстракцию растения (надземных частей) ацетоном, спиртами или смесями таких растворителей с водой; b) экстракцию материала, полученного на стадии а) углеводородами; с) экстракцию неуглеводородной фазы неполярным растворителем; d) обработку, предварительно испаренного и повторно растворенного в водно-спиртовом растворе экстракта, полученного с использованием неполярного растворителя, сильноосновной ионообменной смолой; e) элюирование смолы спиртами и удаление элюированного раствора; f) обработку указанной смолы спиртовыми или водно-спиртовыми растворами кислот, концентрирование раствора и экстракцию полученного в результате остатка неполярным растворителем; g) выпаривание неполярного растворителя со стадии f) с получением остатка, который добавляют к остатку, полученному выпариванием углеводородного экстракта со стадии b) и к ацетоновой или спиртовой фазе, полученной после экстракции неполярным растворителем на стадии с); h) выпаривание и сушку. Фармацевтическая композиция, обладающая противомигреневой активностью, содержит указанный экстракт. Изобретение позволяет снизить аллергентность экстракта. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 ил.

1. Экстракт Tanacetum parthenium практически свободный от α-ненасыщенных-γ-лактонов, получаемый с помощью способа, который включает a) экстракцию растения (надземных частей) ацетоном, спиртами или смесями таких растворителей с водой; b) экстракцию материала, полученного на стадии а) углеводородами; c) экстракцию не углеводородной фазы неполярным растворителем; d) обработку предварительно выпаренного и повторно растворенного в водно-спиртовом растворе экстракта, полученного с использованием неполярного растворителя, сильноосновной ионообменной смолой; e) элюирование смолы спиртами и удаление элюированного раствора; f) обработку указанной смолы спиртовыми или водно-спиртовыми растворами кислот, концентрирование раствора и экстракцию полученного в результате остатка неполярным растворителем; g) выпаривание неполярного растворителя со стадии f) с получением остатка, который добавляют к остатку, полученному выпариванием углеводородного экстракта со стадии b), и к ацетоновой или спиртовой фазе, полученной после экстракции неполярным растворителем на стадии с); h) выпаривание и сушку.2. Экстракт по п.1 практически свободный от партенолида.3. Экстракт по п.1 или 2, содержащий менее 0,2% α-ненасыщенных-γ-лактонов.4. Экстракт по п.1 или 2, содержащий менее 0,1% α-ненасыщенных-γ-лактонов.5. Фармацевтическая композиция, обладающая противомигреневой активностью, содержащая экстракт по пп.1-4 совместно с подходящими носителями.