СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ И ПРОГРЕССИРУЮЩЕЙ ФОРМ ХРОНИЧЕСКОГО ЛИМФОЛЕЙКОЗА Российский патент 2004 года по МПК G01N33/534 

Предлагаемая разработка относится к области медицины, в частности к гематологии, онкологии.

Известен способ диагностики хронического лимфолейкоза (ХЛЛ), включающий клинические данные (лимфоаденопатия, спленомегалия, гепатомегалия), общий анализ крови, исследование миелограммы пунктата грудины, биоптата подвздошной кости и лимфатического узла, а также иммуно-фенотипирование [1].

Недостатком его является невозможность дифференциальной диагностики доброкачественной и прогрессирующей форм хронического лимфолейкоза при установлении диагноза в дебюте заболевания, на ранних стадиях опухолевого процесса.

По классификации ВОЗ с рекомендациями академика А.И. Воробьева выделяют доброкачественную и прогрессирующую формы хронического лимфолейкоза [2]. При установлении диагноза на ранних стадиях заболевания клиническая картина у больных доброкачественной и прогрессирующей форм ХЛЛ в большинстве случаев одинакова. Поэтому разработка новых прогностических факторов у больных со сходной клинической картиной в дебюте заболевания является насущной проблемой терапии ХЛЛ. Выделенные к настоящему времени формы и прогностические группы неудовлетворительно отражают гетерогенность хронического лимфолейкоза и часто не позволяют предсказать течение болезни и ответ на терапию. В последнее время изменилась тактика ведения больных с включением интенсивной полихимиотерапии, разработаны режимы кондиционирования, позволяющие проводить трансплантацию костного мозга при ХЛЛ с приемлемой токсичностью, приводящие к длительным полным ремиссиям. Если ранее тактика лечения ХЛЛ состояла в паллиативной первично-сдерживающей терапии, то сегодня задача лечения состоит в получении полной ремиссии, особенно у молодых больных. Такой подход диктуют новые требования. Если раньше "опоздать" с лечением этой болезни было сложно, то сегодня раннее назначение интенсивной полихимиотерапии приобретает принципиальное значение. Как и любая опухоль, хронический лимфолейкоз характеризуется опухолевой прогрессией, которая состоит в приобретении новых генетических дефектов и постоянном появлении новых субклонов, озлокачествляющих течение опухоли. Чем меньше остается у опухоли времени на приобретение дополнительных субклонов, тем лучшего ответа можно ожидать от терапии. В связи с этим необходимость в новых надежных прогностических факторах очевидна, особенно на ранних стадиях болезни. Доброкачественная форма ХЛЛ отличается стабильным течением и обычно не требует терапии. Главный диагностический критерий этой формы ХЛЛ - отсутствие какой бы то ни было прогрессии в течение 2-х лет, - требует длительного периода наблюдения. Если несколько лет назад уточнение форм ХЛЛ не имело большого значения, то с появлением специфических и достаточно агрессивных терапевтических вмешательств положение изменилось. Ранняя диагностика доброкачественной формы ХЛЛ позволит избежать неоправданной агрессивной химиотерапии. Ранняя диагностика прогрессирующей формы ХЛЛ позволит избежать неоправданного применения неэффективных стандартных программ терапии, которые только снижают возможности последующего интенсивного лечения.

Известен способ диагностики первично-резистентной агрессивной множественной миеломы с помощью определения уровня β₂-микроглобулина в сыворотке крови больных [3]. Данный параметр в момент постановки диагноза позволяет определить форму множественной миеломы и прогноз течения заболевания. Высокий уровень β₂-микроглобулина указывает на плохой прогноз течения множественной миеломы и короткую продолжительность жизни.

Недостатком его является узкий спектр применения, в частности он не применяется для дифференциальной диагностики доброкачественной и прогрессирующей форм хронического лимфолейкоза.

В качестве прототипа может быть использован “Способ диагностики прогрессирующей формы хронического лимфолейкоза”, описанный в SU 1762895, опубл. 23.09.1992 [4]. Способ основан на проведении реакции бласттрансформации лимфоцитов периферической крови в присутствии простагландинов группы Е (E₁ и E₂), которые вводят каждый в концентрации 10^-6 моль. При отсутствии иммуносупрессии диагностируют прогрессирующую форму хронического лимфолейкоза.

Заявителем и авторами предлагается новая разработка, направленная на дифференциальную диагностику доброкачественной и прогрессирующей форм хронического лимфолейкоза. По результатам патентной и отраслевой литературы авторами не обнаружено идентичных способов диагностики.

Исследования по изучению диагностической значимости биохимического опухолевого маркера β₂-микроглобулина у больных ХЛЛ проводились в гематологической клинике Кировского НИИ гематологии и переливания крови в течение 8 лет. Авторами проведено изучение уровня β₂-микроглобулина в сыворотке крови у 35 больных доброкачественной формой ХЛЛ и у 60 больных прогрессирующей формой ХЛЛ в дебюте заболевания, на ранних стадиях опухолевого процесса. По результатам исследования получены данные (при р=0,0001), которые приведены в таблице.

Из таблицы видно, что при уровне β₂-микроглобулина в сыворотке крови (при нормальном креатинине) <5 мг/л - в 100% случаев наблюдалась доброкачественная форма ХЛЛ, а при уровне β₂-микроглобулина (при нормальном креатинине) >5 мг/л - в 100% случаев отмечалась прогрессирующая форма заболевания.

Количественное определение β₂-микроглобулина (β₂-мг) в сыворотке крови проводили радиоиммунологическим методом (РИА), в основе своей являющимся конкурентным методом анализа. Для определения использовали стандартные тест-наборы "β₂-MICROGLOBULIN RIA KIT" фирмы "IMMUNOTECH", Чехия. Наборы сертифицированы по европейскому стандарту, гос. регистр № 2000/327. Для измерения радиоактивности применяли гамма-счетчик "Гамма-НТ", производства АО ВНИИМП-Вита, г. Москва, гос. регистр. № 89/413-50.

Анализ проводили согласно инструкции к тест-набору.

В аналитические пробирки, покрытые антителами к β₂-мг, вносили по 50 мкл исследуемого образца сыворотки крови больного (параллельно с калибровочными пробами), добавляли по 500 мкл β₂-мг, меченного йод-125, и инкубировали смесь при комнатной температуре в течение 90 минут при постоянном встряхивании (не менее 350 осц./мин). По окончании инкубации содержимое пробирки (не связанный с антителами β₂-мг) удаляли водоструйным насосом.

Количество связанного с антителами меченного йод-125 β₂-мг находилось в обратной зависимости от концентрации эндогенного β₂-мг в исследуемой сыворотке крови.

Пробирки со связанным с антителами, меченным β₂-мг, помещали в гамма-счетчик и измеряли их активность по йод-125 в течение 1 минуты. Концентрацию β₂-мг (нмоль/л) определяли автоматически в координатах logit-log по калибровочной кривой зависимости В/Т (%) от концентрации β₂-мг.

У всех больных с доброкачественной формой ХЛЛ отсутствовало прогрессирование заболевания в течение не менее 3-х лет без лечения. У больных с прогрессирующей формой заболевания прогрессирование отмечалось в ближайшие 2 года от момента постановки диагноза. Срок наблюдения составил 8 лет. На момент оценки результатов исследования все больные с доброкачественной формой ХЛЛ живы. Диагностирование прогрессирующей формы ХЛЛ в дебюте заболевания, на ранних стадиях опухолевого процесса позволило назначить больным раннюю интенсивную полихимиотерапию (n=30), в результате которой удалось получить клинически значимый лечебный общий эффект у 94% больных, из них у 60% - полную ремиссию, у 34% - частичную ремиссию. Медиана выживаемости у больных с прогрессирующей формой ХЛЛ, не получавших интенсивную полихимиотерапию (n=30), составила 3,4 года. У больных с прогрессирующей формой ХЛЛ, получивших раннюю интенсивную полихимиотерапию (n=30), медиана выживаемости не достигнута (больные наблюдаются по настоящее время). Таким образом важность дифференциальной диагностики доброкачественной и прогрессирующей форм ХЛЛ в дебюте заболевания, на ранних стадиях опухолевого процесса, заключается в возможности прогнозирования дальнейшего течения болезни и в различной тактике ведения больных, что позволит увеличить количество пациентов с достигнутой ремиссией и продлить продолжительность их жизни.

Источники информации

1. Руководство по гематологии под ред. А.И. Воробьева. М.: Медицина, 1985, - 448 с.

2. Воробьев А.И., Кременецкая А.М., Харазишвили Д.В. Опухоли лимфатической системы. Гематология и трансфузиология, 2000; 45(3): 3-14.

3. Клиническая онкогематология под ред. А.М. Волковой. М.: Медицина, 2001, с.437.

4. SU 1762895 А1, опубл. 23.09.1992.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и онкологии. Сущность способа: в сыворотке крови больного с помощью радиоиммунологического метода с I¹²⁵ определяют уровень β₂-микроглобулина, и при уровне β₂-микроглобулина в сыворотке крови <5 мг/л при нормальном значении креатинина определяют доброкачественную форму хронического лимфолейкоза, при уровне β₂-микроглобулина >5 мг/л - прогрессирующую форму ХЛЛ. Способ позволяет осуществлять дифференциальную диагностику в дебюте заболевания, что дает возможность своевременно определить тактику лечения. 1 табл.

Способ дифференциальной диагностики доброкачественной и прогрессирующей форм хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) на ранних стадиях опухолевого процесса, включающий исследование крови больного, отличающийся тем, что в сыворотке крови больного с помощью радиоиммунологического метода с I¹²⁵ определяют уровень β₂-микроглобулина, и при уровне β₂-микроглобулина в сыворотке крови < 5 мг/л при нормальном значении креатинина определяют доброкачественную форму хронического лимфолейкоза, при уровне β₂-микроглобулина > 5 мг/л - прогрессирующую форму ХЛЛ.