Способ дифференциальной диагностики хронического лимфолейкоза и злокачественной неходжкинской лимфомы Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

1

Изобретение относится к медицине,, в частности к дифференциальной диагностике двух гематологических заболеваний - хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) и злокачественной лимфоцитар- но пролимфоцитарной и полимфоцитарно- лимфобластной неходжкинской лимфомы (ЗНЛ) в стадии лейкемизации (IV ст.).

Пелью изобретения является ускорение и упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом, Лимфоциты выделяют из де- .фибричиррвантй крови больного путем центрифугкровачил ее на градиенте

плотности 1,077, В-лимфоциты выделяли получением розеток Т-лимфоцитов с бараньими эритроцитами и последующим удалением их с помощью градие «тного центрифугирования.

В каждую лунку микроплакшеты Та- расаки с заранее раскапанными по 1 мкл сыворотками-реактивами добавляют по 1 мкл взвеси В-лимфоцитов больных с концентрацией 2x1О6 мл в физиологическом растворе, растворе Хзнкса, среде 199.

Содержимое лунок перемешивают и помещают в холодильник при + 4 С

Јь -4 4

О СЮ

сь

на 1 ч. Далее в лунки добавляют по 5 мкл комплемента и оставляют на 1 ч 45 мин при комнатной температуре, В качестве комплемента используют смесь сыпороток 8-10 кроликов, неток- сичных в отношении лимфоцитов челове- ка. Далее содержимое планшет встряхивают и добавляют по 1-2 мкл 3-2%-но-° го трипанового синего.

Результаты оценивают положитель но при количестве мертвых клеток от 25% и выше, исходя из 4+ системы более чем с одной сывороткой, В качестве контроля одновременно с испы™ туемым образцом В-лимфоцитов больно° го реакцию проводят с В-лимфоцитами здоровых лиц. Реакция с В-лимфоцита- ми здоровых лиц должна показывать по- ложительный результат. При трактовке результатов неббходимо учитыватьi что лимфоциты больных Ироническим лейкозом, как правило, не реагировали с аутолимфоцитотоксинами, в то время как лимфоциты больных злокачествен- ной неходжкинской лимфомой показыва ют положительный результат, Выполнение исследования занимает 4-5 ч.

Пример 1. Больной В.К.Ф. Дефибринированную .кровь больного развели в 2 раза средой 199, наслоили на градиент плотности и центрифугировали 25 мин при 1500 об/мин Слой лимфоцитов, располагающийся на границе градиента и плазмы (интерфазу), собрали .и один раз отмыли средой 199. Клетки ресуспендировали в среде 199 с концентрацией 5000 в 1 мм3. Один объем приготовленной взвеси лимфоцитов соединили с равным объе- . мом 0,5%-ной взвеси эритроцитов барана, обработанных раствором нейрами- нидазы9 и смесь клеток инкубировали в течение 10 мин при температуре 37°Сs после чего центрифугировали в течение 5 мин при 1000 об/мин и поме щалк в холодильник при 4°С на 3 ч. Затем осадок осторожно ресуспендиро-1 вали путем покачивания пробирки. просчета Е-роэеткообразующих клеток под микроскопом взвесь клеток наслоили на градиент плотности и центрифугировали при 2500 об/мин в течение 30 мин. Лимфоциты & находя - в интерфазе, собирали, один раз отмывали и использовали в про1- лонгнрованном варианте лимфоцитоток сической пробы.

Q

5 0 5

п ,. с

0

5

В-лимфоциты больного реагировали с 7 из 8 тестовых сывороток следующим образом:

с одной сывороткой - на 25% мертвых клеток ;

с тремя сыворотками - на 60% мертвых клеток ;

с тремя сыворотками - на 100% мертвых клеток,

Проведенное иммунологическое исследование свидетельствовало в ноль зу диагноза злокачественной неходжкинской лимфомы.

Клинически отмечался очень быстрый темп развития заболевания, В течение двух лет резко увеличились размеры лимфоузлов во всех периферических группах (до 5-7 см в диаметре),появи- лись большие конгломераты мезенте- .-. риальных и бронхопульмональных лимфоузлов, увеличились печень и селезенка, В периферической крови - тромбо- цитопения (130,0 109/л), лейкоциты 97,030 /л, лимфобласты 1%, пролим- фоциты 4%, лимфоциты 92%. В пунктате костного мозга 52,6% лимфоидных зле- ментов (лимфобласты 0,6%, пролимфо циты 1,6%, лимфоциты 50.,4%). .Bjrpena- нобиоптате: трехростковый состав кроветворных элементов На этом фоне большое количество диффузно-узлова™ тых разрастаний лимфоидных элементов в основном типа малых лимфоцитов с примесью пролимфоцитов и лимфоблас- тов. В пунктате лимфоузла - лимфоид1 на-я гиперплазия с преобладанием пролимфоцитов и лимфобластов.

Быстрый темп развития заболевания в сочетании с выраженным омоложением лимфоидных клеток в лимфоузлах и с узловатым-ростом лимфоидных элементов в костном мозге позволил пред- пололснть наличие лимфосаркомы, что и было подтверждено иммунологическими исследованиями, приведенными выше.

П р и м е р 2, Больной Д.Г.Н. Де фибринированную кровь больного развели р аз а средой 399, наслоили на гра«- диент плотности и центрифугировали 25 мин при 1500 об/мин. Слой лимфоцитов s располагающийся на границе градиента и плазмы (интерфазу), соб рали и один раз отмыли средой 199, Клетки ресуспендировали в среде 199 с концентрацией 5000 в 1 мм . Один1 объем приготовленной взвеси лимфоцитов соединили с равным объемом 0,5%ной -взвеси эритроцитов барана, обработанных раствором ненраминидазы, и смесь клеток инкубировали в течение 10 мин при температуре 37°С, после чего центрифугировали в течение 5 мин при 1000 об/мин и поместили в холодильник при 4° С на 1 ч. За- тем осадок осторожно ресуспендировали путем покачивания пробирки. После ю подсчета Е-розеткооЗразующих клеток под микроскопом взвесь клеток наслоили на градиент плотности и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин. Лимфоциты, находящиеся4в 15 интерфазе, собрали, один раз отмыли и использовали в пролонгированном варианте лимфоцитотоксической пробы.

В-лимфоциты больного не реагиро вали с сыворотками, содержащими ауто- 20 лимфоцитотоксические антитела. Иммунологический диагноз - ХЛЛ,

Клинически у больного наблюдали микрополиаденню, умеренные гепато- и спленомегалию. В периферической 25 крови - лейкоцитоз 40,0х109/л, лимфоцита 90%. В пунктате костного мозга 38,8% лимфоидных элементов (лимфо- бласты 1,2%, пролимфоциты 0,3%, лимсическими антителами подтвердило диагноз.

Предлагаемый иммунологический спо соб позволяет осуществить экспресс- дифференциальную диагностику за 4- 5 ч. Он прост в выполнении, дополняе существующий диагностический метод. вменение предлагаемого экспресс- метода дифференциальной диагностики оказывает существенное влилние на выбор характера ерапии и своевременность ее качала.

Способ показывает высокое совпадение с результатами клинического и гистологического диагноза (таблица).

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагности ки хронического лимфолейкоэа и злока чественной неходжкннской лимфомы в стадии лейкемизации, включающий исследование лимфоцитов больных, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, к лимфоцитам больного добазлчют воротку от пациентов с системной

фоциты 37%). В трепанобиоптате: интер-30 красной волчанкой, содержащую аутосическими антителами подтвердило диагноз.

Предлагаемый иммунологический способ позволяет осуществить экспресс- дифференциальную диагностику за 4- 5 ч. Он прост в выполнении, дополняет существующий диагностический метод. вменение предлагаемого экспресс- метода дифференциальной диагностики оказывает существенное влилние на выбор характера ерапии и своевременность ее качала.

Способ показывает высокое совпадение с результатами клинического и гистологического диагноза (таблица).

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики хронического лимфолейкоэа и злокачественной неходжкннской лимфомы в стадии лейкемизации, включающий исследование лимфоцитов больных, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, к лимфоцитам больного добазлчют воротку от пациентов с системной

Изобретение относится к медицине, в частности онкологии и иммунологии и может быть использовано для дифференциальной диагностики хронического лимфолечкоэа (ХЛЛ) и злокачественной неходжкинской лимфомы (ЗИЛ). Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Выделяют лимфоциты больного, добавляют к ним сыворотку от пациентов с системной красной волчанкой, содержащую ауто-лим- фоцитотоксические антитела, проводят лнмф1 дитотоксический тест и при наличии положительной реакции диагностируют злокачественную неходжкинс- кую лимфому в стадии лейкемизации, а при отрицательной - хронический лимфолейкоз. Способ отличается от известного способа, основанного на применении гистологического метода исследования (трепанобиоптата костного мозга), меньшей трудоемкостью и укорочением времени проведения исследования с трех суток до 5 ч. Предлагаемый способ по данным 53 гистологических и иммунологических исследований показал в 94,4% совпадение результатов с диагнозом ЗНЛ и в 88,6% - с ХЛЛ. 1 табл. i

стициальная инфильтрация лимфоидными элементами типа малых лимфоцитов. Клинический диагноз: хронический лим- фолейкоз II стадии, медленный темп развития„ Иммунологическое исследование - отсутствие реагирования лим- 5 {щтов больного с аутолимфоцитотокРедактор Л.Павлова

Составитель И.Баппсаев

Техред М.Дидык Корректор С.Шекмар

Заказ 4333

Тираж 510

ВКИИПИ Государственного комитета по -изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

лимфоцитотоксические антитела, проводят лимфоцитотоксический тест и при наличии положительной, реакции диагностируют злокачественную не- ходжкинскую лимфому в стадии лейкемизации, а при отрицательной - хронический лимфолейкоз.

Подписное