ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ИНГИБИТОР КАРБОКСИПЕПТИДАЗЫ U И ИНГИБИТОР ТРОМБИНА Российский патент 2004 года по МПК A61K38/55 A61K31/95 A61P9/00 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим препаратам ингибитора карбоксипептидазы U (CPU) и ингибитора тромбина в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, а также к набору компонентов, к способу лечения и к применению этих препаратов для лечения состояний, при которых ингибирование CPU и/или ингибирование тромбина требуется или желательно.

Предпосылки изобретения

Коагуляция крови является ключевым процессом, затрагивающим как гемостаз (то есть предупреждение кровопотери из травмированного сосуда), так и тромбоз (то есть патологическую закупорку кровеносного сосуда кровяным сгустком). Коагуляция является результатом сложного ряда ферментативных реакций, одной из конечных стадий которого является превращение профермента протромбина в активный фермент тромбин.

Тромбин играет центральную роль в коагуляции. Он активирует тромбоциты, он превращает фибриноген в фибриновые мономеры, которые самопроизвольно полимеризуются в нитевидные структуры, и он активирует фактор XIII, который в свою очередь сшивает полимер в нерастворимый фибрин. Тромбин также активирует фактор V и фактор VIII в реакциях с положительной обратной связью. Таким образом, предполагается, что ингибиторы тромбина являются эффективными антикоагулянтами посредством ингибирования тромбоцитов, образования фибрина и стабилизации фибрина. Предполагается, что, ингибируя механизм положительной обратной связи, они задействуют ингибирование в начале цепочки событий, ведущих к коагуляции и тромбозу.

Фибринолиз является результатом ряда ферментативных реакций, приводящих к расщеплению фибрина плазмином. Активация плазминогена является центральным процессом в фибринолизе. Расщепление плазминогена с получением плазмина осуществляют активаторы плазминогена, активатор плазминогена тканевого типа (t-PA) или активатор плазминогена урокиназного типа (u-РА). В ходе начального расщепления фибрина плазмином образуются карбокси-концевые остатки лизина, которые служат в качестве высокоаффинных сайтов связывания плазминогена. Так как плазминоген, связанный с фибрином, активируется в плазмин намного легче, чем свободный плазминоген, этот механизм обеспечивает регулирование фибринолиза по типу положительной обратной связи.

Одним из эндогенных ингибиторов фибринолиза является карбоксипептидаза U (CPU). CPU также известна как плазменная карбоксипептидаза В, активный ингибитор тромбин-активируемого фибринолиза (TAFIa), карбоксипептидаза R и индуцируемая карбоксипептидазная активность. CPU образуется во время коагуляции и фибринолиза из своего предшественника npoCPU под действием протеолитических ферментов, например тромбина, тромбин-тромбомодулинового комплекса или плазмина. CPU расщепляет основные аминокислоты на карбоксильном конце фибриновых фрагментов. Потеря карбокси-концевых лизинов и в результате этого лизиновых сайтов связывания плазминогена затем способствует ингибированию фибринолиза.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим препаратам, содержащим ингибитор CPU и ингибитор тромбина в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем и/или носителем, а также к способу лечения и к применению этих препаратов для лечения состояния, при котором ингибирование CPU и/или ингибирование тромбина требуется или желательно.

Данное изобретение также относится к набору компонентов, включающему в себя сосуды, содержащие ингибитор CPU и ингибитор тромбина, и инструкции для введения этих ингибиторов пациенту, нуждающемуся в этом.

Данное изобретение также относится к набору компонентов, включающему в себя препараты, содержащие ингибитор CPU и ингибитор тромбина, каждый в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем и/или носителем.

Подробное описание изобретения

Неожиданно было обнаружено, что по сравнению с раздельным применением ингибиторов CPU и тромбина настоящее изобретение, включающее комбинацию ингибитора CPU и ингибитора тромбина, усиливает антитромботические эффекты, тем самым снижая риск тромбоза и гиперкоагуляции в крови и тканях млекопитающих. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложено введение более низких доз активных ингредиентов, что снижает риск потенциальных побочных эффектов ингибиторов тромбина.

Так, в одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим препаратам, содержащим

1) ингибитор карбоксипептидазы U или его фармацевтически приемлемую соль и

2) ингибитор тромбина или его производное

в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к наборам компонентов, включающим в себя:

1) сосуд, содержащий ингибитор карбоксипептидазы U или его фармацевтически приемлемую соль;

2) сосуд, содержащий ингибитор тромбина или его производное;

и инструкции для последовательного, раздельного или одновременного введения ингибиторов (1) и (2) пациенту, нуждающемуся в этом.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к наборам компонентов, включающим в себя

1) фармацевтический препарат, содержащий ингибитор карбоксипептидазы U или его фармацевтически приемлемую соль в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем; и

2) фармацевтический препарат, содержащий ингибитор тромбина или его производное, в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем;

причем ингибиторы (1) и (2) представлены в формах, которые подходят для введения совместно друг с другом.

Под "введением совместно с" подразумевается, что соответствующие препараты, содержащие ингибитор CPU и ингибитор тромбина, вводят последовательно, раздельно и/или одновременно в течение курса лечения релевантного состояния, которое может быть острым или хроническим. Предпочтительно этот термин означает, что два препарата вводят (возможно неоднократно) достаточно близко по времени, чтобы обеспечить благотворный эффект для пациента, который в течение курса лечения релевантного состояния сильнее, чем если бы эти два препарата вводили (возможно неоднократно) по отдельности в отсутствие другого препарата в течение такого же курса лечения. Установление того, обеспечивает ли комбинация более сильный благотворный эффект в отношении конкретного состояния в течение курса лечения, зависит от состояния, которое нужно лечить или предупреждать, и в обычной практике может быть успешно выполнено специалистом в данной области.

Таким образом, термин "совместно с" означает, что либо тот, либо другой из этих двух препаратов можно вводить (возможно неоднократно) до, после введения другого компонента и/или в одно и то же время с другим компонентом. Используемые в данном контексте термины "вводят одновременно" и "вводят в одно и то же время" означают, что индивидуальные дозы ингибитора CPU и ингибитора тромбина вводят в пределах 48 часов, например 24 часов, друг от друга.

Согласно следующему аспекту изобретения предложен способ изготовления набора компонентов, как он определен здесь, при котором компонент (а), как определено выше, объединяют с компонентом (б), как он определен выше, делая таким образом эти два компонента пригодными для введения совместно друг с другом.

Термин "объединение двух компонентов друг с другом" означает, что компоненты (а) и (б) могут быть

1) представлены как отдельные препараты (то есть независимо один от другого), которые затем берут вместе для применения совместно друг с другом в комбинированной терапии; или

2) упакованы и представлены вместе как отдельные компоненты "комбинированной упаковки" для применения совместно друг с другом в комбинированной терапии.

В еще одном аспекте данное изобретение относится к способам лечения пациента, страдающего состоянием, при котором ингибирование тромбина и/или ингибирование карбоксипептидазы U требуется или желательно, или восприимчивого к такому состоянию, путем введения пациенту терапевтически эффективного общего количества

1) ингибитора карбоксипептидазы U или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем совместно с

2) ингибитором тромбина или его производным в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

В еще одном аспекте данное изобретение относится к способам лечения пациента, страдающего состоянием, при котором ингибирование тромбина и/или ингибирование карбоксипептидазы U требуется или желательно, или подверженного такому состоянию, путем введения пациенту фармацевтического препарата, содержащего:

1) ингибитор карбоксипептидазы U или его фармацевтически приемлемую соль и

2) ингибитор тромбина или его производное

в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

В еще одном аспекте данное изобретение относится к применению фармацевтических препаратов, содержащих

1) ингибитор карбоксипептидазы U или его фармацевтически приемлемую соль и

2) ингибитор тромбина или его производное

в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, в изготовлении лекарства для лечения состояния, при котором ингибирование тромбина и/или ингибирование карбоксипептидазы U требуется или желательно.

Во избежание сомнений используемый здесь термин "лечение" включает в себя терапевтическое и/или профилактическое лечение.

Ингибиторы CPU

Ингибиторы CPU, упоминаемые в этой заявке, включают низкомолекулярные ингибиторы карбоксипептидазы с молекулярной массой ниже 1000, предпочтительно ниже 700.

В настоящей заявке ингибитор CPU представляет собой предпочтительно

1) соединение общей формулы I

(I)

или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват, или сольват такой соли, где

R₁ представляет собой

C₁-С₆алкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

циклоалкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один атом азота;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из S или О, и замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

или арил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

R₂ представляет собой Н, ацил, ациламино, алкил, алкилкарбамоил, алкилтио, алкокси, ароил, ароиламино, арилокси, арилтио, амидино, амино, арил, карбамоил, карбокси, циано, циклоалкил, формил, гуанидино, галоген, гетероциклил, гидрокси, оксо, нитро, тиол, группу Z₂N-CO-O-, ZO-CO-NZ или Z₂N-CO-NZ-;

R₃ представляет собой COOR₅, SO(OR₅), SO₃R₅. P=O(OR₅)₂, B(OR₅)₂, P=OR₅(OR₅), или тетразол, или любой изостер карбоновой кислоты;

R₄ представляет собой SH, S-СО-С₁-C₆алкил или S-CO-арил;

R₅ представляет собой Н, C₁-С₆алкил или арил;

R₆ представляет собой Н или C₁-С₆алкил;

Х представляет собой О, S, SO, SO₂, C(Z)₂, N(Z), NR₇SO₂, SO₂NR₇, NR₇CO или CONR₇;

Y представляет собой C(Z)₂;

Z независимо представляет собой Н, C₁-С₆алкил, арил, циклоалкил или гетероциклил;

или

2) соединение общей формулы II

или его фармацевтически приемлемые соль или сольват, или сольват такой соли, где

R₇ представляет собой

C₁-С₆алкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

циклоалкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один атом азота;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из S или О, и замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

или арил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

R₈ представляет собой Н, ацил, ациламино, алкил, алкилкарбамоил, алкилтио, алкокси, ароил, ароиламино, арилокси, арилтио, амидино, амино, арил, карбамоил, карбокси, циано, циклоалкил, формил, гуанидино, галоген, гетероциклил, гидрокси, оксо, нитро, тиол, группу Z₂N-CO-O-, ZO-CO-NZ или Z₂N-CO-NZ-;

R₉ представляет собой COOR₁₁, SO(OR₁₁), SO₃R₁₁, P=O(OR₁₁)₂, B(OR₁₁)₂, P=OR₁₁(OR₁₁), или тетразол, или любой изостер карбоновой кислоты;

R₁₀ представляет собой группу

R₁₁ представляет собой Н, C₁-С₆алкил или арил;

R₁₂ представляет собой C₁-С₆алкил, арил, циклоалкил, гетероциклил или возможно N-замещенную группу H₂N-C(Z)-CONH-C(Z)или H₂N-C(Z)-;

R₁₃ представляет собой Н или C₁-С₆алкил;

Х представляет собой О, S, SO, SO₂, C(Z)₂, N(Z), NR₁₃SO₂, SO₂NR₁₃, NR₁₃CO или CONR₁₃;

Y представляет собой О, N(Z), S, C(Z)₂ или одинарную связь;

Z независимо представляет собой Н, C₁-С₆ алкил, арил, циклоалкил или гетероциклил;

при условии, что когда Х представляет собой О, S, SO, SO₂, N(Z), NR₇SO₂, SO₂NR₇ или NR₇CO, тогда Y представляет собой C(Z)₂ или одинарную связь.

Более предпочтительные ингибиторы CPU включают соединения общей формулы I, или их фармацевтически приемлемые соль или сольват, или сольват такой соли, где

R₁ представляет собой

циклоалкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один атом азота;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из S или О, и замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

или арил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

R₂ представляет собой Н, ацил, ациламино, алкил, алкилкарбамоил, алкилтио, алкокси, ароил, ароиламино, арилокси, арилтио, амидино, амино, арил, карбамоил, карбокси, циано, циклоалкил, формил, гуанидино, галоген, гетероциклил, гидрокси, оксо, нитро, тиол, группу Z₂N-CO-O-, ZO-CO-NZ или Z₂N-CO-NZ-;

R₃ представляет собой COOR₅;

R₄ представляет собой SH, S-CO-C₁-С₆алкил или S-CO-арил;

R₅ представляет собой Н, C₁-С₆алкил или арил;

R₆ представляет собой Н или C₁-С₆алкил;

Х представляет собой О, S, SO, SO₂, C(Z)₂, N(Z), NR₆SO₂, SO₂NR₆ или CONR₆;

Y представляет собой C(Z)₂;

Z представляет собой независимо Н, C₁-С₆алкил, арил, циклоалкил или гетероциклил.

Еще более предпочтительные ингибиторы CPU включают соединения общей формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, где

R₁ представляет собой циклоалкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один атом азота;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из S или О, и замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

R₂ представляет собой Н, C₁-С₃алкил, амино, галоген или гидрокси;

R₃ представляет собой COOR₅;

R₄ представляет собой SH, S-CO-C₁-С₆алкил или S-CO-арил;

R₅ представляет собой Н, С₁-С₆алкил или арил;

Х представляет собой C(Z)₂;

Y представляет собой C(Z)₂;

Z независимо представляет собой Н или С₁-С₆алкил.

Более предпочтительные ингибиторы CPU включают соединения общей формулы II, или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, или сольваты таких солей, где

R₇ представляет собой

C₁-С₆алкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

циклоалкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один атом азота;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из S или О, и замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

или арил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

R₈ представляет собой Н, ацил, ациламино, алкил, алкилкарбамоил, алкилтио, алкокси, ароил, ароиламино, арилокси, арилтио, амидино, амино, арил, карбамоил, карбокси, циано, циклоалкил, формил, гуанидино, галоген, гетероциклил, гидрокси, оксо, нитро, тиол, группу Z₂N-CO-O-, ZO-CO-NZ или Z₂N-CO-NZ-;

R₉ представляет собой COOR₁₁;

R₁₀ представляет собой группу

R₁₁ представляет собой Н, C₁-С₆алкил или арил;

R₁₂ представляет собой С₁-С₆алкил, арил, циклоалкил, гетероциклил или возможно N-замещенную группу H₂N-C(Z)-CONH-C(Z)или H₂N-C(Z)-;

R₁₃ представляет собой Н или C₁-С₆алкил;

Х представляет собой C(Z)₂;

Y представляет собой О, N(Z), S, C(Z)₂ или одинарную связь;

Z представляет собой независимо Н, С₁-С₆алкил, арил, циклоалкил или гетероциклил.

Еще более предпочтительные ингибиторы CPU включают соединения общей формулы II или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, или сольваты таких солей, где

R₇ представляет собой циклоалкил, замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один атом азота;

гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из S или О, и замещенный одной или более чем одной основной группой, такой как амино, амидино и/или гуанидино;

R₈ представляет собой Н, C₁-С₆алкил, амино, галоген, гидрокси;

R₉ представляет собой COOR₁₁;

R₁₀ представляет собой группу

;

R₁₁ представляет собой Н, C₁-С₆алкил или арил;

R₁₂ представляет собой С₁-С₆алкил, арил, циклоалкил, гетероциклил или возможно N-замещенную группу H₂N-C(Z)-CONH-C(Z) или H₂N-C(Z)-;

Х представляет собой C(Z)₂;

Y представляет собой О или C(Z)₂;

Z представляет собой независимо Н или C₁-С₆алкил.

В данном описании изобретения и в прилагаемой формуле изобретения использованы следующие определения.

Термин "основная группа" означает основную группу, причем сопряженная кислота указанной основной группы имеет рКа от приблизительно -5 до приблизительно 25, предпочтительно от 1 до 15.

Термин "изостер карбоновой кислоты" означает кислотную группу, имеющую рКа от приблизительно -5 до приблизительно 25, предпочтительно от 1 до 15.

Термин "С₁-С₆алкил" означает прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, замещенную или незамещенную алкильную группу, имеющую от 1 до 6 углеродных атомов в цепи, причем эта алкильная группа может быть возможно прервана одним или более чем одним гетероатомом, выбранным из О, N или S. Примеры указанного алкила включают в себя, без ограничений, метил, этил, этенил, этинил, н-пропил, изопропил, пропенил, изопропенил, пропинил, н-бутил, изобутил, втop-бутил, трет-бутил, бутенил, изобутенил, бутинил и пентил и гексил с прямой или разветвленной цепью.

Термин "C₁-С₃алкил" означает прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, замещенную или незамещенную алкильную группу, имеющую от 1 до 3 углеродных атомов в цепи, причем алкильная группа может быть возможно прервана одним или более чем одним гетероатомом, выбранным из О, N или S. Примеры указанного алкила включают в себя, без ограничений, метил, этил, этенил, этинил, н-пропил, изопропил, пропенил, изопропенил, пропинил.

Термин "С₁алкил" означает замещенную или незамещенную алкильную группу, имеющую 1 углеродный атом. Пример указанного алкила включает в себя, без ограничений, метил.

Термин "C₁-С₆алкокси" означает алкил-O-группу, где C₁-С₆алкил такой, как определено выше.

Термин "C₁-С₃алкокси" означает алкил-O-группу, где C₁-С₃алкил такой, как определено выше.

Термин "гетероциклил" означает замещенную или незамещенную, 4-10-членную моноциклическую или многоциклическую кольцевую систему, в которой один или более чем один атом в кольце или в кольцах является элементом, отличным от углерода, например азотом, кислородом или серой, в частности 4-, 5- или 6-членные ароматические или алифатические гетероциклические группы, и включает, без ограничений, азетидиновую, фурановую, тиофеновую, пиррольную, пирролиновую, пирролидиновую, диоксолановую, оксатиолановую, оксазолановую, оксазольную, тиазольную, имидазольную, имидазолиновую, имидазолидиновую, пиразольную, пиразолиновую, пиразолидиновую, изоксазольную, изотиазольную, оксадиазольную, фуразановую, триазольную, тиадиазольную, пирановую, пиридиновую, пиперидиновую, диоксановую, морфолиновую, дитиановую, оксатиановую, тиоморфолиновую, пиридазиновую, пиримидиновую, пиразиновую, пиперазиновую, триазиновую, тиадиазиновую, дитиазиновую, азаиндольную, азаиндолиновую, индольную, индолиновую, нафтиридиновую группы и, что очевидно, включают все изомеры вышеназванных групп. Очевидно, что, например, термин "азетидинил" включает в себя 2- и 3-изомеры, а термины "пиридил" и "пиперидинил" включают в себя 2-, 3- и 4-изомеры.

Термин "циклоалкил" означает насыщенное или ненасыщенное, замещенное или незамещенное, неароматическое кольцо, состоящее из 3, 4, 5, 6 или 7 углеродных атомов, и включает в себя, без ограничений, группы циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил, циклопентадиенил, циклогексадиенил или циклогептадиенил.

Термин "галоген" включает в себя группы фторо, хлоро, бромо и йодо.

Термин "арил" означает замещенный или незамещенный С₆-С₁₄ ароматический углеводород и включает в себя, без ограничений, фенил, нафтил, инденил, антраценил, фенантренил и флуоренил.

Термин "арилокси" означает арил-O-группу, где арил такой, как определено выше.

Термин "ацил" означает алкил-СО-группу, где алкил такой, как определено выше.

Термин "ароил" означает арил-СО-группу, где арил такой, как определено выше.

Термин "алкилтио" означает алкил-S-группу, где алкил такой, как определено выше.

Термин "арилтио" означает арил-S-группу, где арил такой, как определено выше.

Термин "ароиламино" означает ароил-N(Z)-группу, где ароил и Z такие, как определено выше.

Термин "ациламино" означает ацил-N(Z)-группу, где ацил и Z такие, как определено выше.

Термин "карбамоил" означает H₂N-CO-группу.

Термин "алкилкарбамоил" означает Z₂N-CO-группу, где Z такой, как определено выше.

Термин "замещенный" означает группу "С₁алкил", "С₁-С₃алкил", "С₁-С₆алкил", "циклоалкил", "гетероциклил" или "арил", как определено выше, которая замещена одной или более чем одной ацильной, ациламино, алкильной, алкилкарбамоильной, алкилтио, алкокси, ароильной, ароиламино, арилокси, арилтио, амидино, амино, арильной, карбамоильной, карбокси, циано, циклоалкильной, формильной, гуанидино, галогено, гетероциклильной, гидрокси, оксо, нитро, тиольной, тио, Z₂N-CO-O-, ZO-CO-NZ или Z₂N-CO-NZ-группой.

Кроме того, соединения формулы I, где R₄ представляет собой меркапто, могут находиться в форме димера, соединенного через -S-S-связь, который также включен в данное изобретение.

Как чистые энантиомеры, так и рацемические смеси и неравные смеси двух энантиомеров входят в объем настоящего изобретения. Очевидно, что все возможные диастереомерные формы входят в объем настоящего изобретения.

В зависимости от условий способа получения соединения формулы I получают либо в нейтральной, либо в солевой форме или в виде сольвата, например гидрата, и все они входят в объем настоящего изобретения.

Также включены в данное изобретение все производные соединений формулы I и II, которые имеют биологическую функцию соединений формулы I и II соответственно. Например, некоторые защищенные производные соединений формулы I и II могут быть получены до последней стадии удаления защиты с образованием соединений формулы I и II соответственно.

Использование защитных групп описано в "Protective Groups in Organic Synthesis", 2nd edition, T.W.Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1991). Защитной группой может быть также полимерная смола, такая как смола Ванга или 2-хлортритилхлоридная смола.

Для специалистов в данной области также очевидно, что хотя такие защищенные производные соединений формулы I и II сами по себе могут и не обладать фармакологической активностью, они могут быть введены парентерально или перорально вместе с ингибитором тромбина, и после этого метаболизироваться в организме с образованием соединений формулы I и II, которые фармакологически активны. Такие производные могут быть, следовательно, охарактеризованы как "пролекарства". Все пролекарства соединений формулы I и II включены в объем данного изобретения.

В настоящей заявке ингибиторы CPU включают химические модификации, такие как сложные эфиры, пролекарства и метаболиты, как активные, так и не активные, и фармацевтически приемлемые соли любого из перечисленного.

Получение ингибиторов CPU обшей формулы I

Ингибиторы CPU общей формулы I могут быть получены следующими способами А-В.

Способ А

Способ А получения соединений общей формулы I, где R₁, R₃, R₄ и Y такие, как определено выше, R₂ представляет собой Н, и Х представляет собой C(Z)₂, включает в себя следующие стадии:

а) Соединения общей формулы III

где R₁ такой, как определено для формулы I, a X представляет собой C(Z)₂, которые либо имеются в продаже, либо их можно получить с использованием известных методик, могут быть превращены в соединение общей формулы IV

где L является подходящей уходящей группой, такой как хлоро, бромо, иодо, трифлат или тозил, в стандартных условиях с использованием подходящего реагента, такого как РРh₃/СВr₄, TosCl/пиридин или (СF₃SО₂)₂О/ТЕА.

б) Соединения общей формулы IV затем может быть подвергнуто взаимодействию с соединениями общей формулы V

где R₂ и R₃ такие, как определено для формулы I, которые либо имеются в продаже, либо их можно получить с использованием известных методик, в присутствии подходящего основания, такого как К₂СО_з или NaH, в стандартных условиях, с получением соединений общей формулы VI

в) Соединения общей формулы VI, где R₁ и R₃ такие, как определено для формулы I, Х представляет собой C(Z)₂, и R₂ представляет собой Н, затем могут быть превращены в соединения общей формулы VII

путем обработки формальдегидом в присутствии подходящего основания, такого как Et₂NH, в стандартных условиях.

г) Соединения общей формулы VII могут быть получены также путем обработки соединений общей формулы VIII

где R₃ и R₅ такие, как определено для формулы I, алкилирующим агентом общей формулы IV в присутствии подходящего основания, такого как LDA или NaH, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы IX

д) Соединения общей формулы IX затем могут быть подвергнуты взаимодействию с соответствующим альдегидом или кетоном OC(Z)₂ в присутствии подходящего основания, такого как KOtBu, LDA или NaH, в стандартных условиях с получением соединения общей формулы VII

е) Соединения общей формулы VII далее могут быть подвергнуты взаимодействию с соединениями общей формулы X,

где R₅ является подходящей защитной группой, такой как Ac, Bz, РМВ или Вn, одни или в присутствии подходящего основания, такого как NaOMe, NaH или триэтиламин, или, альтернативно, в присутствии свободно-радикального инициатора, такого как AIBN, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы I, где R₁, R₃, R₄ и Y такие, как определено для формулы I, R₂ представляет собой Н, и Х представляет собой C(Z)₂.

Способ Б

Способ Б получения соединений общей формулы I, где R₁, R₂, R₃ и R₄ такие, как определено в формуле I, Y представляет собой СН₂, и Х представляет собой О, S, SO, SO₂, C(Z)₂ или N(Z), включает следующие стадии:

а) Соединение общей формулы XI

где R₁ такой, как определено для формулы I, а Х представляет собой О, S или N(Z), с алкилирующим агентом общей формулы XII

где R₂ и R₃ такие, как определено для формулы I, a L является подходящей уходящей группой, такой как хлоро, бромо, иодо, трифлатная или тозилатная группа, в стандартных условиях с использованием подходящих реагентов, таких как NaH, Аg₂СО₃ или Bu₄NHSO₄/NaOH, с получением соединений общей формулы XIII

б) Соединения общей формулы XIII затем могут быть подвергнуты взаимодействию с диоксидом углерода в присутствии подходящего основания, такого как LDA или KHMDS, в стандартных условиях с получением соединения общей формулы XIV

в) Соединения общей формулы XIV затем могут быть подвергнуты взаимодействию с алкилхлорформиатом, таким как CICOOMe, в присутствии основания, такого как триэтиламин, после чего образовавшийся смешанный ангидрид восстанавливают подходящим восстанавливающим агентом, таким как NaBH₄, в стандартных условиях с получением соединения общей формулы XV

г) Соединения общей формулы XV затем могут быть подвергнуты взаимодействию с соединением общей формулы X

где R₅ является подходящей защитной группой, такой как Ас или Bz, в присутствии подходящего реагента, такого как РРh₃/DIAD, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы I, где R₁, R₂, R₃ и R₄ такие, как определено выше, Y представляет собой СН₂, и Х представляет собой О, S, C(Z)₂ или N(Z).

д) Соединения общей формулы I, где R₁, R₂, R₃, R₄ и Y такие, как определено выше, а Х представляет собой S, затем могут быть подвергнуты взаимодействию с подходящим окисляющим реагентом, таким как МСРВА, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы I, где R₁, R₂, R₃, R₄ и Y такие, как определено выше, а Х представляет собой SO или SO₂.

Способ В

Способ В получения соединений общей формулы I, где R₁, R₂, R₃, R₄ и Y такие, как определено выше, а Х представляет собой NR₆CO, CONR₆, SO₂NR₆ или NR₆SO₂, включает следующие стадии:

а) Соединение общей формулы XVI

где R₂, R₃, R₆ и Y такие, как определено для формулы I, a R₅ является подходящей защитной группой, такой как Ac, Bz, PMB или Вn, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы XVII

где R₁ такой, как определено для формулы I, а Х представляет собой СООН или SO₂Cl, в присутствии подходящих связывающих реагентов, таких как PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDC/TEA/DMAP или пиридин, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы I, где R₁, R₂, R₃, R₄ и Y такие, как определено выше, а Х представляет собой NR₆CO или NR₆SO₂.

б) Соединение общей формулы XVIII

где R₂, R₃ и Y такие, как определено для формулы I, X представляет собой СООН или SO₂Cl, и R₅ является подходящей защитной группой, такой как Ас, Bz, PMB или Вn, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы XIX

где R₆ такой, как определено для формулы I, в присутствии подходящих связывающих реагентов, таких как PyBOP/DIPEA, DCC/HOBt, EDCIEADMAP или пиридин, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы I, где R₁, R₂, R₃, R₄ и Y такие, как определено выше, а Х представляет собой CONR₆ или SO₂NR₆.

Получение ингибиторов CPU обшей формулы II

Ингибиторы CPU общей формулы II могут быть получены следующими способами Г-Ж.

Способ Г

Способ Г получения соединений общей формулы II, где R₇, R₁₁, R₁₂ и Z такие, как определено выше, R₈ представляет собой Н, R₉ представляет собой COOR₁₁,

R₁₀ представляет собой группу

Х представляет собой C(Z)₂, и Y представляет собой C(Z)₂, включает следующие стадии:

а) Соединения общей формулы XX

где R₇ и Z такие, как определено для формулы II, а Х представляет собой C(Z)₂, которые либо имеются в продаже, либо могут быть получены с использованием известных методик, могут быть превращены в соединение общей формулы XXI

где L является подходящей уходящей группой, такой как хлоро, бромо, иодо, трифлат или тозил, в стандартных условиях с использованием подходящего реагента, такого как РРh₃/СВr₄, TosCl/пиридин или (СF₃SO₂)₂O/ТЕА.

б) Соединения общей формулы XXI затем могут быть подвергнуты взаимодействию с соединениями общей формулы XXII

которые либо имеются в продаже, либо могут быть получены с использованием известных методик, в присутствии подходящего основания, такого как К₂СО_з или NaH, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы

в) Соединения общей формулы XXIII затем могут быть превращены в соединения общей формулы XXIV

путем обработки формальдегидом в присутствии подходящего основания, такого как Et₂NH, в стандартных условиях.

Однако если Y представляет собой CH(Z), то соединения общей формулы XXIV могут быть получены путем обработки соединений общей формулы XXV

алкилирующим агентом общей формулы XXI,

где R₇ такой, как определено для формулы II, a L является подходящей уходящей группой, такой как хлоро, бромо, иодо, трифлатная или тозильная группа, в присутствии подходящего основания, такого как LDA или NaH в стандартных условиях с получением соединений общей формулы XXVI

Соединения общей формулы XXVI затем могут быть подвергнуты взаимодействию с подходящим альдегидом CHO(Z), где Z такой, как определено для формулы II, в присутствии подходящего основания, такого как KOtBu, LDA или NaH, в стандартных условиях с получением соединения общей формулы XXIV.

г) Соединения общей формулы XXIV далее могут быть подвергнуты взаимодействию с соединениями общей формулы XXVII

где R₁₂ такой, как определено для формулы II, в присутствии подходящего реагента, такого как BSA или HMDS, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы II, где R₇, R₁₁, R₁₂ и Z такие, как определено выше, R₈ представляет собой Н, R₉ представляет собой COOR₁₁, R₁₀ представляет собой группу

Х представляет собой C(Z)₂, и Y представляет собой C(Z)₂.

Способ Д

Способ Д получения соединений общей формулы II, где R₇, R₈, R₁₁, R₁₂ и Z такие, как определено выше, R₉ представляет собой COOR₁₁, X представляет собой C(Z)₂, Y представляет собой О, и R₁₀ представляет собой группу

включает следующие стадии:

а) Соединение общей формулы XXVIII

где R₇, R₈ и Z такие, как определено для формулы II, а Х представляет собой C(Z)₂, подвергают реакции в присутствии подходящих реагентов, таких как TMSCN/ZnI₂ или КСМ/НОАс, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы XXIX,

где R₇ и R₈ такие, как определено для формулы II, а Х представляет собой C(Z)₂.

б) Соединения общей формулы XXIX затем могут быть обработаны подходящими реагентами, такими как НСl или HCl/MeOH, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы XXX

где R₇ и R₈ такие, как определено в формуле II, и Х представляет собой C(Z)₂.

в) Соединения общей формулы XXX после этого могут быть подвергнуты взаимодействию с соединениями общей формулы XXXI

где R₁₂ такой, как определено для общей формулы II, которые либо имеются в продаже, хорошо известны в литературе, либо могут быть получены с использованием известных методик, в присутствии подходящих связывающих реагентов, таких как DCC/DMAP, PyBOP/DIPEA, или SOCl₂, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы II, где R₇, R₈, R₁₁, R₁₂ и Z такие, как определено выше, R₉ представляет собой COOR₁₁, R₁₀ представляет собой группу

Х представляет собой C(Z)₂, и Y является О.

Способ Е

Способ Е получения соединений общей формулы II, где R₇ и R₈ такие, как определено выше, а Х и Y представляют собой C(Z)₂ или одинарную связь, и R₉ и R₁₀ представляют собой COOR₁₁, включает следующие стадии:

а) Соединение общей формулы XXXII

где R₈ и R₁₁ такие, как определено для формулы II, а Y представляет собой C(Z)₂ или одинарную связь, которое либо имеется в продаже, хорошо известно в литературе, либо может быть получено с использованием известных методик, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы XXI

где R₇ такой, как определено для формулы II, Х представляет собой C(Z)₂, и L является подходящей уходящей группой, такой как Cl, Вr, I или тозил, в присутствии подходящего основания, такого как LDA или NaH, в стандартных условиях, с получением соединения общей формулы XXXIII

б) Соединение общей формулы XXXIII гидролизуют, например обработкой водным NaOH или водной TFA в стандартных условиях с получением соединения общей формулы II, где R₇ и R₈ такие, как определено выше, Х и Y представляют собой C(Z)₂ или простую связь, и R₉ и R₁₀ представляют собой СООН.

Способ Ж

Способ Ж получения соединений общей формулы II, где R₇, R₈, R₁₁, R₁₃, X, Y и Z такие, как определено выше, R₉ представляет собой COOR₁₁, и R₁₀ представляет собой группу

включает следующие стадии:

а) Соединения общей формулы XXXIII,

могут быть подвергнуты взаимодействию с соединениями общей формулы XXXIV

где R₁₃ такой, как определено для формулы II, в присутствии подходящих реагентов, таких как DCC/DMAP, в стандартных условиях с получением соединений общей формулы II, где R₇, R₈, R₁₁, R₁₃, X, Y и Z такие, как определено выше, R₉ представляет собой COOR₁₁, и R₁₀ представляет собой группу

Ингибиторы тромбина

Ингибиторы тромбина, упоминаемые в данной заявке, включают, без ограничений, низкомолекулярные ингибиторы тромбина. Термин "низкомолекулярный ингибитор тромбина" понятен специалистам в данной области техники. Следует также иметь в виду, что этот термин охватывает любую композицию вещества (например, химического соединения), которая ингибирует тромбин до экспериментально определяемой степени в in vivo и/или in vitro тестах и которая имеет молекулярную массу ниже приблизительно 2000, предпочтительно ниже приблизительно 1000.

Предпочтительные низкомолекулярные ингибиторы тромбина включают низкомолекулярные ингибиторы тромбина на основе пептидов, на основе аминокислот и/или на основе аналогов пептидов.

Для специалистов в данной области очевидно, что термин "низкомолекулярные ингибиторы тромбина на основе пептидов, на основе аминокислот и/или на основе аналогов пептидов" охватывает низкомолекулярные ингибиторы тромбина с одной-четырьмя пептидными связями и охватывает ингибиторы, описанные в обзоре Claesson в Blood Coagul. Fibrin. (1994) 5, 411, а также описанные в патенте США №4346078, Международных патентных заявках WO 93/11152, WO 93/18060, WO 93/05069, WO 94/20467, WO 94/29336, WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/03374, WO 96/06832, WO 96/06849, WO 96/25426, WO 96/32110, WO 97/01338, WO 97/02284, WO 97/15190, WO 97/30708, WO 97/40024, WO 97/46577, WO 98/06740, WO 97/49404, WO 97/11693, WO 97/24135, WO 97/47299, WO 98/01422, WO 98/57932, WO 99/29664, WO 98/06741, WO 99/37668, WO 99/37611, WO 98/37075, WO 99/00371, WO 99/28297, WO 99/29670, WO 99/40072, WO 99/54313, WO 96/31504, WO 00/01704 и WO 00/08014; и в Европейских патентных заявках 648780, 468231, 559046, 641779, 185390, 526877, 542525, 195212, 362002, 364344, 530167, 293881, 686642, 669317, 601459 и 623596. Содержание всех этих документов включено в данное описание изобретения ссылкой.

В настоящей заявке производные ингибиторов тромбина включают химические модификации, такие как сложные эфиры, пролекарства и метаболиты, как активные, так и не активные, и фармацевтически приемлемые соли и сольваты, например гидраты любого из них и сольваты любой такой соли.

Предпочтительные низкомолекулярные ингибиторы тромбина на основе пептидов включают ингибиторы, известные под общим названием "гатраны". Конкретные гатраны, которые можно упомянуть, включают HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Nag-H (известный как иногатран) и HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H (известный как мелагатран) (Международная патентная заявка WO 93/11152 и WO 94/29336 соответственно и список сокращений, приведенный здесь).

В Международной патентной заявке WO 97/234499 раскрыт целый ряд соединений, которые, как было обнаружено, полезны в качестве пролекарств ингибиторов тромбина. Указанные пролекарства имеют общую формулу

R^aOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-R^b

где R^a представляет собой Н, бензил или C₁-С₁₀алкил, R^b (который замещает один из атомов водорода в амидиновой единице Pab-H) представляет собой ОН, ОС(O)R^c или OC(O)R^d, R^c представляет собой С₁-С₁₇алкил, фенил или 2-нафтил, и R^d представляет собой С₁-С₁₂алкил, фенил, С₁-С₃алкилфенил или 2-нафтил. Предпочтительные соединения включают R^aOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-ОН, где R^a представляет собой бензил или C₁-С₁₀алкил, например этил или изопропил, в частности EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH. Сами активные ингибиторы тромбина раскрыты в WO 94/29336.

Фармацевтические препараты

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим ингибитор CPU и ингибитор тромбина или их фармацевтически приемлемые соли в качестве активных ингредиентов.

Предпочтительными комбинациями ингибитора CPU и ингибитора тромбина являются комбинации, где ингибитор CPU представляет собой соединение общей формулы I или II, а ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H, его производные или пролекарства, в частности EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.

Подходящие препараты для использования с HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Н, его производными или пролекарствами описаны в литературе, например, как описано, среди прочих, в Международных патентных заявках WO 94/29336, WO 96/14084, WO 96/16671, WO 97/23499, WO 97/39770, WO 97/45138, WO 98/16252, WO 99/27912 и WO 99/27913, содержание которых включено в данное описание изобретения ссылкой.

В настоящем изобретении препарат и/или набор компонентов может содержать два или более чем два ингибитора CPU в комбинации с ингибитором тромбина, два или более чем два ингибитора тромбина в комбинации с ингибитором CPU или любую их комбинацию. Термин "два или более чем два ингибитора" охватывает комбинации активного ингредиента и одного из его пролекарств.

Для клинического применения ингибитор CPU и ингибитор тромбина вводят в состав фармацевтического препарата для перорального, внутривенного, подкожного, трахеального, бронхиального, интраназального, легочного, чрескожного, трансбуккального, ректального, парентерального или некоторых других способов введения. Фармацевтический препарат содержит ингибиторы в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем и/или носителем.

Надлежащее общее количество активных ингредиентов находится в пределах от приблизительно 0,1% (мас./мас.) до приблизительно 95% (мас./мас.) от массы препарата, подходяще от 0,5% до 50% (мас./мас.) и предпочтительно от 1% до 25% (мас./мас.).

Молярное соотношение между ингибитором CPU и ингибитором тромбина может быть в пределах от приблизительно 1000:1 до приблизительно 1:1000. Подходящее молярное соотношение между ингибитором CPU и ингибитором тромбина лежит в пределах от 300:1 до 1:300 и предпочтительно от 50:1 до 1:50.

При изготовлении фармацевтических препаратов по настоящему изобретению активные ингредиенты можно смешивать с твердыми, порошкообразными ингредиентами, такими как лактоза, сахароза, сорбит, маннит, крахмал, амилопектин, производные целлюлозы, желатин или другой подходящий ингредиент, а также с разрыхляющими агентами и смазывающими агентами, такими как стеарат магния, стеарат кальция, стеарилфумарат натрия и полиэтиленгликолевые воски. Эту смесь затем можно переработать в гранулы или спрессовать в таблетки.

Активные ингредиенты можно предварительно смешивать по отдельности с другими неактивными ингредиентами, а затем смешивать для образования препарата. Активные ингредиенты также можно смешивать друг с другом перед смешением с неактивными ингредиентами для образования препарата.

Мягкие желатиновые капсулы могут быть получены с использованием капсул, содержащих смесь активных ингредиентов по изобретению, растительного масла, жира или другого подходящего наполнителя для мягких желатиновых капсул. Твердые желатиновые капсулы могут содержать гранулы активных ингредиентов. Твердые желатиновые капсулы могут также содержать активные ингредиенты в комбинации с твердыми порошкообразными ингредиентами, такими как лактоза, сахароза, сорбит, маннит, картофельный крахмал, кукурузный крахмал, амилопектин, производные целлюлозы или желатин.

Лекарственные единицы для ректального введения могут быть приготовлены (1) в форме суппозиториев, которые содержат активное вещество, смешанное с нейтральной жировой основой; (2) в форме желатиновых ректальных капсул, которые содержат активное вещество в смеси с растительным маслом, парафиновым маслом или другим подходящим наполнителем для желатиновых ректальных капсул; (3) в форме готовой микроклизмы; или (4) в форме сухого препарата для микроклизмы, предназначенного для разведения в подходящем растворителе непосредственно перед введением.

Жидкие препараты могут быть приготовлены в форме сиропов или суспензий, например растворов или суспензий, содержащих активные ингредиенты и остаток, состоящий например, из сахара или сахарных спиртов и смеси этанола, воды, глицерина, пропиленгликоля и полиэтиленгликоля. Если желательно, такие жидкие препараты могут содержать красящие агенты, корригенты, консерванты, сахарин и карбоксиметилцеллюлозу или другие загущающие агенты. Жидкие препараты могут быть также приготовлены в форме сухого порошка, предназначенного для разведения в подходящем растворителе перед применением.

Растворы для парентерального введения могут быть приготовлены в виде раствора препарата по изобретению в фармацевтически приемлемом растворителе. Эти растворы могут также содержать стабилизирующие ингредиенты, консерванты и/или буферные ингредиенты. Растворы для парентерального введения могут быть приготовлены также в виде сухого препарата, предназначенного для разведения в подходящем растворителе перед применением.

Доза соединения для введения зависит от релевантного показания, возраста, массы и пола пациента и может быть определена лечащим врачом. Дозировка предпочтительно находится в пределах от 0,01 мг/кг до 10 мг/кг.

Обычная суточная доза активных ингредиентов варьирует в широких пределах и зависит от различных факторов, таких как релевантное показание, путь введения, возраст, масса и пол пациента, и может быть определена лечащим врачом. Как правило, пероральные и парентеральные дозировки находятся в пределах от 0,1 до 1000 мг в сутки активных ингредиентов в сумме.

Согласно настоящему изобретению "терапевтически эффективное общее количество" относится к общему количеству ингибитора CPU и ингибитора тромбина, которое при введении в комбинации оказывает терапевтическое действие, даже если каждое количество, вводимое по отдельности, может быть меньше терапевтически эффективного количества.

Медицинское и фармацевтическое применение

Согласно настоящему изобретению предложены также препараты и наборы компонентов для использования в лекарственной терапии; применение препаратов по настоящему изобретению для изготовления лекарств для использования для лечения состояния, при котором ингибирование тромбина и/или ингибирование CPU требуется или желательно; и способы терапевтического лечения путем введения пациенту, страдающему состоянием, при котором ингибирование тромбина и/или ингибирование CPU требуется или желательно, или подверженному такому состоянию, терапевтически эффективного общего количества ингибитора CPU и ингибитора тромбина по настоящему изобретению.

Ингибитор CPU и ингибитор тромбина можно вводить последовательно, раздельно и/или одновременно. Кроме того, ингибитор CPU можно вводить до введения ингибитора тромбина или наоборот.

Используемый здесь термин "лекарственная терапия" охватывает профилактические, диагностические и терапевтические курсы лечения, выполняемые in vivo или ex vivo на людях или других млекопитающих.

Препараты по изобретению содержат ингибитор CPU и ингибитор тромбина либо сами по себе, либо, в случае пролекарств, после введения. Таким образом, предполагается, что препараты по изобретению полезны при тех состояниях, при которых ингибирование CPU и/или ингибирование тромбина благотворно, таких как лечение тромбоза и гиперкоагуляции в крови и тканях млекопитающих, включая человека.

Специалисту в данной области ясно, что термин "состояние, при котором ингибирование тромбина требуется или желательно" охватывает следующее.

Лечение и/или профилактика тромбоза и гиперкоагуляции в крови и тканях животных, включая человека. Известно, что гиперкоагуляция может привести к тромбоэмболическим заболеваниям. Состояния, связанные с гиперкоагуляцией и тромбоэмболические заболевания, которые можно упомянуть, включают унаследованную или приобретенную активированную резистентность к протеину С, такую как мутация фактора V (фактор V Лейдена), и унаследованные или приобретенные дефициты антитромбина III, протеина С, протеина S, гепаринового кофактора II. Другие состояния, о которых известно, что они связаны с гиперкоагуляцией и тромбоэмболическим заболеванием, включают циркулирующие антифосфолипидные антитела (антикоагулянт Люпуса), гомоцистеинемию, гепарин-индуцируемую тромбоцитопению и дефекты фибринолиза.

Лечение состояний, при которых имеет место нежелательный избыток тромбина без признаков гиперкоагуляции, например при нейродегенеративных заболеваниях, таких как болезнь Альцгеймера.

Терапевтическое и/или профилактическое лечение конкретных болезненных состояний, которое включает терапевтическое и/или профилактическое лечение венозного тромбоза (например, DVT (тромбоза глубоких вен)) и легочной эмболии, артериального тромбоза (например, при инфаркте миокарда, неустойчивой стенокардии, ударе в результате тромбоза и периферическом артериальном тромбозе) и системной эмболии, обычно из предсердия во время артериальной фибрилляции или из левого желудочка после трансмурального инфаркта миокарда или вызванной застойной сердечной недостаточностью; профилактику реокклюзии (то есть тромбоза) после тромболиза, чрескожной транслюминальной ангиопластики (РТА) и операций коронарного шунтирования; предупреждение повторного тромбоза после микрохирургического вмешательства и сосудистой хирургии в целом.

Дополнительные показания включают терапевтическое и/или профилактическое лечение диссеминированной внутрисосудистой коагуляции, вызванной бактериями, множественной травмой, интоксикацией или любым другим механизмом; антикоагулянтное лечение, когда кровь находится в контакте с чужеродными поверхностями в организме, такими как сосудистые трансплантаты, сосудистые стенты, сосудистые катетеры, механические и биологические протезные клапаны или любое другое медицинское приспособление; и антикоагулянтное лечение, когда кровь находится в контакте с медицинскими приспособлениями вне организма, такими как во время сердечно-сосудистой хирургической операции с использованием аппарата "сердце-легкие" или при гемодиализе; терапевтическое и/или профилактическое лечение идиопатического или взрослого респираторного дистресс-синдрома, легочного фиброза после лечения облучением или химиотерапии, септического шока, септицемии, воспалительных реакций, которые включают в себя, без ограничений, отек, острый или хронический атеросклероз, такой как коронарное артериальное заболевание, церебральное артериальное заболевание, периферическое артериальное заболевание, реперфузионное повреждение и рестеноз после чрескожной транслюминальной ангиопластики (РТА).

ПРИМЕРЫ

Следующие примеры предназначены для иллюстрации и никоим образом не ограничивают объем данного изобретения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалы

Батроксобин №520 CRY (American Diagnostica Inc., Greenwich, CT, USA) держали при 8°С как во время лиофилизации, так и при растворении в физиологическом растворе в концентрации 10 BU/мл. В экспериментах его использовали в течение 5 суток. Оставшееся лекарственное средство замораживали и хранили при -20°С в течение максимум 30 суток.

Эндотоксин L-3129 (Sigma, St. Louis, МО, USA) растворяли в физиологическом растворе в концентрации 50 мкг/мл. Для каждого эксперимента готовили свежий раствор.

 ¹²⁵I-меченый человеческий фибриноген (Amersham, Little Chalfont, Buck., UK) хранили при 8°С во время лиофилизации. После растворения в смеси физиологический раствор/дистиллированная вода (80/20 об./об.) с получением исходного раствора приблизительно 0,8 МБк/мл (20 мкКи/мл) его разделяли на аликвоты (по одной для каждого эксперимента), быстро замораживали и хранили при -20°С. Его использовали в экспериментах в течение периода времени в пределах 14 суток после даты изготовления.

Инактин, натриевую соль тиобутабарбитала (Research Biochemicals International, Natick, USA) растворяли в смеси физиологический раствор/дистиллированная вода (50/50 об./об.) в концентрации 50 мг/мл.

Ингибитор тромбина иногатран растворяли в 40%-ном (мас./мас.) циклодекстрине (HPβCD) в концентрации 5 мг/мл и хранили при -20°С. Перед использованием в разных экспериментах его дополнительно разбавляли 40% циклодекстрином. В исследованиях это лекарственное средство вводили подкожно.

Ингибитор тромбина мелагатран растворяли в физиологическом растворе.

Ингибиторы CPU MERGETRA и Соединение А растворяли в дезоксигенированном физиологическом растворе. Физиологический раствор дезоксигенировали обработкой ультразвуком в течение 20 минут и последующим пропусканием азота в течение еще 20 минут. Растворы всегда были свежеприготовленными для каждого эксперимента. Ингибитор CPU вводили крысам внутривенной инфузией в течение 5 минут.

Животные

Самцов крыс линии Sprague Dawley (Charles River, Sweden) с массой тела 325 425 г использовали для этих экспериментов. Животных оставляли для аккомодации в AstraZeneca R&D, , Sweden, в течение 1 недели перед использованием.

Подготовка животных

Анестезию вызывали и поддерживали инактином 100 мг/кг внутрибрюшинно.

Два катетера вставляли в левую яремную вену - один для введения ¹²⁵I фибриногена и батроксобина, а другой для введения эндотоксина и ингибитора CPU или их соответствующих растворителей. Третий катетер вставляли в сонную артерию для отбора проб и измерения среднего кровяного артериального давления и частоты сердечных сокращений. Чтобы избежать кровяных сгустков в артериальном катетере, во время эксперимента поддерживали медленную инфузию физиологического раствора (приблизительно 1,0 мл/кгч). Крысам делали трахеотомию, чтобы облегчить самостоятельное дыхание. Температуру тела контролировали и поддерживали при 38°С путем внешнего подогрева.

Последовательность эксперимента

Животным делали внутривенную инъекцию эндотоксина (50 мкг/кг) в начале эксперимента. Два часа спустя ингибитор тромбина или его растворитель вводили путем подкожной инъекции и спустя еще 15 минут вводили ¹²⁵I-фибриноген (0,04 МБк) внутривенной инъекцией. Через 5 минут начинали инфузию CPU-ингибитора или его растворителя, длящуюся 5 минут. Через 5 минут вводили батроксобин (10 BU/кг) внутривенной инъекцией ударной дозы вещества за одну минуту.

Образцы крови для определения содержания ¹²⁵I отбирали во всех экспериментах непосредственно перед 5, 20 и 30 минутами после введения батроксобина. В конце эксперимента легкое вырезали, ткань аккуратно промывали в физиологическом растворе и после этого промокали и взвешивали. Содержание ¹²⁵I в образцах ткани и крови определяли, используя счетчик Wallac 1282 Compugamma. Содержание ¹²⁵I в плазме и в легких выражали в виде процентного отношения радиоактивности в образце артериальной крови, взятом для сравнения непосредственно перед инъекцией батроксобина.

Пример 1

Ингибитор CPU MERGETPA (DL-2-меркаптометил-3-гуанидиноэтилтио-пропионовая кислота), известный из, например, Biochimica & Biophysica Acta 1034 (1990) 86-92, использовали в комбинации с ингибитором тромбина иногатраном.

Результаты экспериментов приведены в таблице 1. Результаты выражены в виде остаточного фибрина в легком после обработки, то есть 100% равнозначно отсутствию действия, n означает количество экспериментов (крыс).

Из таблицы 1 явствует, что введение комбинации ингибитора CPU и ингибитора тромбина дает лучшие peзультаты в отношении оставшегося после обработки фибрина, чем введение каждого ингибитора.

Пример 2

Ингибитор CPU (3-(6-амино-пиридин-3-ил)-2-меркаптометил-пропионовую кислоту) (Соединение А) использовали в комбинации с ингибитором тромбина мелагатраном.

Результаты экспериментов приведены в таблице 2. Результаты выражены в виде остаточного фибрина в легких после обработки, то есть 100% равнозначно отсутствию действия, n означает количество экспериментов (крыс).

Из таблицы 2 явствует, что введение комбинации ингибитора CPU и ингибитора тромбина дает лучшие результаты в отношении оставшегося после обработки фибрина, чем введение любого ингибитора.

Пример 3

Ингибитор CPU (3-(6-амино-пиридин-3-ил)-2-меркаптометил-пропионовую кислоту (Соединение А) использовали в комбинации с ингибитором тромбина мелагатраном.

Результаты экспериментов приведены в таблице 3. Результаты выражены в виде остаточного фибрина в легких после обработки, то есть 100% равнозначно отсутствию действия, n означает количество экспериментов (крыс).

Для каждой из четырех разных комбинаций доз, только ингибитора CPU, только ингибитора тромбина, ингибитора тромбина вместе с ингибитором CPU в количестве 0,2 и 0,28 мкмоль/кг соответственно, были подобраны отдельные модели Е-mах. Модели были подобраны по логарифмической шкале, дающей оценки средней эффективной дозы, то есть дозы, при которой половина группы имеет 50% эффект. На чертеже представлен график, на который нанесены доверительные интервалы значений ED₅₀.

При отсутствии синергетического эффекта ED₅₀ для комбинации ингибитора CPU и ингибитора тромбина должно лежать на линии, соединяющей значения ED₅₀ для каждого лекарственного средства, вводимого по отдельности (см. чертеже). Для того чтобы оценить синергетический эффект, все четыре комбинации доз подгоняли к модели Е-mах, где ED₅₀ для ингибитора тромбина вместе с ингибитором CPU при 0,2 и 0,28 мкмоль/кг соответственно моделировали, используя параметр Δ, как указано на чертеже. Было рассчитано, что параметр Δ равен 0,52 с 95% доверительным интервалом [0,116, 0,934] и является статистически значимым от 0, р<0,001.

Сокращения

Ac=ацетат

AIBN=α,α’-азоизобутиронитрил

Aze=(S)-азетидин-2-карбоновая кислота

Вn=бензил

Вu=бутил

BU=батроксобиновая единица (по определению American Diagnostica Inc., USA)

Bz=бензоил

Cha=β-циклогексилаланин

Cgl=(S)-циклогексилглицин

DCC=дициклогексилкарбодиимид

DIAD=диизопропилазодикарбоксилат

DIPEA=диизопропилэтиламин

DMAP=N,N-диметиламинопиридин

EDC=1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид

EtOH=этанол

HMDS=гексаметилдисилазан

HOAc=уксусная кислота

HOBt=1-гидроксибензотриазол

HPβCD=гидроксипропил-β-циклодекстрин

i.p.=внутрибрюшинно

i.v.=внутривенно

KHMDS=бис(триметилсилил)амид калия

LDA=диизопропиламид лития

Me=метил

МеОН=метанол

МСРВА=3-хлорпербензойная кислота

Nag-H=норагматин

Раb-Н=1-амидино-4-аминометилбензол

Ph=фенил

Pic=пипеколиновая кислота

РМВ=4-метоксибензил

РуВОР=(бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфат

SD=стандартное отклонение

TEA=триэтиламин

TFA=трифторуксусная кислота

THF=тетрагидрофуран

TMSCN=триметилсилилцианид

Tos(yl)=толуол-4-сульфонил

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим препаратам ингибитора карбоксипептидазы U (CPU) и ингибитора тромбина в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, а также к набору компонентов, к способу лечения и к применению этих препаратов для лечения состояний, при которых ингибирование CPU и/или ингибирование тромбина требуется или желательно. Изобретение обеспечивает повышение эффективности препарата 3 н. и 27 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.

1. Комбинация, содержащая ингибитор карбоксипептидазы U и ингибитор тромбина в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.2. Комбинация по п.1, где ингибитор карбоксипептидазы U представляет собой DL-2-меркаптометил-3-гуанидиноэтилтиопропионовую кислоту (MERGETPA) или 3-(6-амино-пиридин-3-ил)-2-меркаптометил-пропионовую кислоту.3. Комбинация по п.1 или 2, где ингибитор тромбина представляет собой низкомолекулярный ингибитор тромбина на основе пептидов с одной-четырьмя пептидными связями.4. Комбинация по п.3, где низкомолекулярный ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H или его пролекарство.5. Комбинация по п.4, где пролекарство представляет собой ЕtOOС-СН₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.6. Комбинация по п.3, где низкомолекулярный ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Nag-H (иногатран).7. Комбинация по любому из пп.1-6, где молярное соотношение ингибитора карбоксипептидазы U и ингибитора тромбина находится в пределах от приблизительно 1000:1 до приблизительно 1:1000, предпочтительно от 50:1 до 1:50.8. Набор компонентов, включающий в себя 1) сосуд, содержащий ингибитор карбоксипептидазы U или его фармацевтически приемлемую соль; 2) сосуд, содержащий ингибитор тромбина или его производное; и инструкции для последовательного, раздельного или одновременного введения ингибиторов (1) и (2) пациенту, нуждающемуся в этом.9. Набор компонентов по п.8, где ингибитор карбоксипептидазы U представляет собой DL-2-меркаптометил-3-гуанидиноэтилтиопропионовую кислоту (MERGETPA) или 3-(6-амино-пиридин-3-ил)-2-меркаптометил-пропионовую кислоту.10. Набор компонентов по п.8 или 9, где ингибитор тромбина представляет собой низкомолекулярный ингибитор тромбина на основе пептидов с одной-четырьмя пептидными связями.11. Набор компонентов по п.10, где низкомолекулярный ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H или его пролекарство.12. Набор компонентов по п.11, где пролекарство представляет собой EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.13. Набор компонентов по п.10, где низкомолекулярный ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Nag-H (иногатран).14. Набор компонентов по любому из пп.8-13, где молярное соотношение ингибитора карбоксипептидазы U и ингибитора тромбина находится в пределах от приблизительно 1000:1 до приблизительно 1:1000, предпочтительно от 50:1 до 1:50.15. Набор компонентов, включающий в себя 1) фармацевтический препарат, содержащий ингибитор карбоксипептидазы U или его фармацевтически приемлемую соль в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем; и 2) фармацевтический препарат, содержащий ингибитор тромбина или его производное в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем; причем каждый ингибитор (1) и (2) представлен в форме, которая подходит для введения совместно друг с другом.16. Набор компонентов по п.15, где ингибиторы (1) и (2) пригодны для последовательного, раздельного или одновременного введения.17. Набор компонентов по п.15 или 16, где ингибитор карбоксипептидазы U представляет собой DL-2-меркаптометил-3-гуанидиноэтилтиопропионовую кислоту (MERGETPA) или 3-(6-амино-пиридин-3-ил)-2-меркаптометил-пропионовую кислоту.18. Набор компонентов по любому из пп.15-17, где ингибитор тромбина представляет собой низкомолекулярный ингибитор тромбина на основе пептидов с одной-четырьмя пептидными связями.19. Набор компонентов по п.18, где низкомолекулярный ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H или его пролекарство.20. Набор компонентов по п.19, где пролекарство представляет собой EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.21. Набор компонентов по п.18, где низкомолекулярный ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Nag-H (иногатран).22. Набор компонентов по любому из пп.15-21, где молярное соотношение ингибитора карбоксипептидазы U и ингибитора тромбина находится в пределах от приблизительно 1000:1 до приблизительно 1:1000, предпочтительно от 50:1 до 1:50.23. Комбинация по любому из пп.1-7 или набор компонентов по любому из пп.8-22 для применения в лекарственной терапии.24. Комбинация по любому из пп.1-7 для применения в изготовлении лекарства для лечения состояния, при котором ингибирование тромбина и/или ингибирование карбоксипептидазы U требуется или желательно.25. Комбинация по п.24, где ингибитор карбоксипептидазы U представляет собой DL-2-меркаптометил-3-гуанидиноэтилтиопропионовую кислоту (MERGETPA) или 3-(6-амино-пиридин-3-ил)-2-меркаптометил-пропионовую кислоту.26. Комбинация по п.24 или 25, где ингибитор тромбина представляет собой низкомолекулярный ингибитор тромбина на основе пептидов с одной-четырьмя пептидными связями.27. Комбинация по п.26, где низкомолекулярный ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H или его пролекарство.28. Комбинация по п.27, где пролекарство представляет собой EtOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.29. Комбинация по п.26, где низкомолекулярный ингибитор тромбина представляет собой HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Nag-H (иногатран).30. Комбинация по любому из пп.24-29, где молярное соотношение ингибитора карбоксипептидазы U и ингибитора тромбина находится в пределах от приблизительно 1000:1 до приблизительно 1:1000, предпочтительно от 50:1 до 1:50.

Приоритеты по пунктам и признакам: