Данное изобретение относится к подходящему составу стабильной, порошкообразной, насколько возможно свободной от пыли и, следовательно, хорошо сыпучей твердой форме введения фибринового тканевого адгезива для применения в гемостазе, лечении раны (заживлении раны), тканевом адгезиве и закрепляющих швах для наружных и внутренних хирургических операций на людях, причем этот состав может быть приготовлен посредством способа сушки в псевдоожиженном слое, или сушки распылением, или путем подходящей комбинации обоих способов сушки.
Свертывание крови в здоровом организме животных (млекопитающих) и человека протекает естественным образом в форме ко-фермент/фермент регулируемой каскадной реакции. Основная стадия состоит в превращении растворимого (в воде, физиологическом растворе, а также в крови) фибриногена в нерастворимый фибрин. Для этого необходим протеолитический фермент тромбин, и он образуется с помощью активатора протромбина, смеси фактора Стюарта Прауэра (Stuart Prower) (фактор X) и проакцелерина (фактор V) в присутствии ионов кальция из неактивного протромбина (фактор II). Тромбин расщепляет фибриноген, обычно присутствующий в виде мономера (75%), имеющего молярную массу 340000 Дальтон, в виде димера (15%) и в виде полимера (10%), в фибрин и таким образом образует длинные молекулярные цепи. Последние связаны с помощью фибринстабилизирующего фактора XIII (и в присутствии ионов кальция) с образованием стабильного поперечно-связанного полимера фибрина. Слаженное взаимодействие серии факторов (факторов свертывания крови) необходимо для этой биохимической реакции. В здоровом организме необходимые факторы свертывания присутствуют в адекватном количестве в подвижном равновесии.
Нарушения этого равновесия могут представлять опасность для жизни. Нарушения этого равновесия могут быть вызваны, за исключением наследственного отсутствия фактора свертывания (например, гемофилия), во время тяжелого тканевого кровотечения, большой площадью поверхности, диффузными кровотечениями (кровотечениями мягких тканей), которые не могут быть остановлены с помощью механического закрытия раны артериальных или венозных сосудов или терапевтическим введением лекарственных средств, действующих как антикоагулянт, для профилактики тромбоэмболии. Эти нарушения можно компенсировать с помощью так называемых фибриновых тканевых адгезивов, смеси фибриногена, фактора XIII, тромбина и человеческого альбумина, а также хлорида кальция, приводящих к местному гомеостазу. Фибриновые тканевые адгезивы, таким образом, используют в многочисленных различных случаях применения.
При хирургических вмешательствах на опухолях, особенно в челюстно-лицевой хирургии, а также во всей области “ухо-горло-носа” (ЛОР) (например, резекция карциномы языка) часто имеют место диффузные кровотечения, которые трудно контролировать. Электрохирургический гомеостаз с помощью электрокоагуляции, которую часто используют, обычно оставляет обширные термические шрамы ткани после коагуляции, которые очень нежелательны, особенно в данных областях.
В пластико-косметической хирургии лица и шеи (“фейс-лифтинг”) гомеостаз с использованием фибринового тканевого адгезива является незаменимым, так как электрокоагуляция представляет собой опасность для лицевого нерва из-за анатомической близости обрабатываемого места к проводящему пути лицевого нерва и может повредить последний.
Более того, обработка с помощью фибринового тканевого адгезива показана при неостанавливающихся кровотечениях в неотложной терапии при стоматологических хирургических вмешательствах. Она также применяется к пациентам, которых лечат антикоагулянтными лекарственными средствами из-за определенного основного заболевания (например, лечение с помощью гепаринов с целью профилактики эмболии) и которые должны быть прооперированы несмотря на сопутствующий риск замедленного свертывания крови (длительное свертывание крови, ингибирование функции тромбоцитов). В этом случае, следовательно, посредством местного применения фибринового тканевого адгезива должны быть приняты меры, которые гарантируют гомеостаз и позволяют избежать постоперативных кровотечений. Это может стать необходимо, например, даже при операциях на внутренних органах (например, печени, селезенке). Тканевой адгезив может, таким образом, быть доставлен снаружи с помощью эндоскопа через двойной катетер.
Более того, применение фибринового тканевого адгезива показано при неотложной медицинской помощи при ранах с большой площадью поверхности в результате ожогов третьей степени, а также экскориации больших площадей поверхности.
При введении и использовании фибринового тканевого адгезива необходимо позаботиться о том, чтобы гарантировать, что фибриноген и тромбин соединены вместе только непосредственно на месте кровотечения (то есть, "в ране"), поскольку начало свертывания начинается спонтанно в присутствии жидкости раны. Соседние участки должны быть, следовательно, хорошо закрыты. Предварительным условием для свертывания является свобода передвижения отдельных участвующих молекул, например в воде. На практике это реализуется в том, например, что четыре различных компонента (концентрат фибриногена-фактора XIII, раствор для фибриногена, концентрат тромбина, раствор хлорида кальция для тромбина) хранят отдельно перед применением и приводят во взаимный контакт только непосредственно на ране. Эти компоненты должны быть в любом случае упакованы стерильным образом и храниться в подходящей форме и при определенных условиях, так чтобы активность отдельных белков или ферментов не повреждалась при хранении. Это обычно достигается тем, что белковые концентраты представлены в лиофилизированной форме в маленьких контейнерах. Они стабильны при хранении в этой форме в условиях холодильника (4-8°С) в течение определенного времени и в течение более короткого времени даже при комнатных температурах (20°С). Однако лиофилизированный концентрат присутствует в твердой, прессованной и, таким образом, неподвижной форме, но в виде растворимого твердого вещества. Следовательно, белковые концентраты должны быть полностью растворены вновь перед применением, чтобы быть способными начать требуемую биохимическую реакцию (Фиг.1). Однако это можно осуществить только непосредственно на ране, так что каждый из растворов должен быть приготовлен заранее отдельно от других. Перед применением фибринового тканевого адгезива рана должна быть, следовательно, настолько сухой, насколько возможно, что в некоторых случаях можно достичь только с большим трудом для больших площадей поверхности, при диффузных кровотечениях, чтобы облегчить хорошую фиксацию тканевого адгезива тотчас же. Два раствора можно добавить в каждом случае посредством шприцов для инъекций, например, в одинаковом объемном соотношении. Следовательно, раствор фибриногена должен быть нанесен первоначально на рану и покрыт, как только возможно быстрее, раствором тромбина. Части, которые должны быть соединены, должны быть, следовательно, зафиксированы до тех пор, пока предварительное отвердение не будет иметь место. Альтернативно, существуют механические вспомогательные средства, например, в форме двухкамерного шприца для инъекций, посредством которого оба раствора могут быть нанесены на рану в одно и то же время. Дополнительными техническими вспомогательными средствами являются, например, системы с распылительным наконечником для ран с большой площадью поверхности, двухбаллонные катетеры в урологии или двойные катетеры для эндоскопического применения. Концентрация белков в обоих растворах должна быть отрегулирована таким образом, чтобы фибриноген присутствовал в значительном избытке по отношению к тромбину. Подходящие соотношения известны из уровня техники (например, 100:1).
Это делает ясным то, что применение требует, с одной стороны, квалифицированного и сосредоточенного приготовления, которое не всегда можно гарантировать в некоторых чрезвычайных ситуациях. С другой стороны, применение путем грубого и ручного обращения с 2-шприцевой системой подобным образом ограничено.
Из международной заявки 97/44015 известен состав фибринового тканевого адгезива, представленный в виде смеси микрочастиц тромбина и микрочастиц фибриногена с фактором XIII, причем эти микрочастицы имеют сферическую поверхность и имеют размер зерна максимум 20 мкм и получены путем сушки распылением белковых растворов. Указанный состав и способ его приготовления путем сушки распылением растворов тромбина и фибриногена с фактором XIII с последующим смешиванием полученных микрочастиц являются наиболее близкими к заявленным составу фибринового тканевого адгезива и способу его приготовления.
Однако известный продукт не является сыпучим и труден для измерения. Было показано, что этот продукт не только образует пыль при нанесении, но также обладает плохой растворимостью.
Задача настоящего изобретения заключается, таким образом, в том, чтобы предложить состав фибринового тканевого адгезива, который прост для обращения, измерения и нанесения и который можно хранить без проблем в течение длительного периода времени, так что возможности применения такого состава фибринового тканевого адгезива значительно расширены по сравнению с уровнем техники.
Задача настоящего изобретения заключается также в том, чтобы предложить соответствующий способ приготовления такого состава фибринового тканевого адгезива.
Поставленная задача решается тем, что предложен состав фибринового тканевого адгезива, содержащий тромбин, фибриноген с фактором XIII, представленный в виде смеси в форме сыпучих твердых гранул, причем эти гранулы получены путем сушки белковых растворов или суспензий в аппарате с псевдоожиженным слоем, и эти гранулы имеют размер частиц от 20 до 1000 мкм.
Согласно одному из воплощений данная смесь состоит из отдельно высушенных гранул тромбина и фибриногена.
Предпочтительно гранулы тромбина и/или фибриногена имеют в качестве носителя ядро, при этом наиболее предпочтительно, чтобы носитель был выбран из водорастворимых сахаров, и/или заменителей сахаров, и/или биологических транспортных веществ.
Согласно еще одному из воплощений данная смесь представляет собой смешанные гранулы, в которых тромбин образует наружный слой, а фибриноген образует внутреннее ядро, предпочтительно такие смешанные гранулы состоят из ядра в качестве носителя для слоя фибриногена, расположенного на нем, и наружного слоя тромбина, и наиболее предпочтительно между слоем фибриногена и наружным слоем тромбина присутствует слой носителя.
Целесообразно, когда барьерный слой получен из растворов низкомолекулярного поливинилпирролидона, или производных целлюлозы, или растворов углеводов путем сушки этих растворов.
Предпочтительным является состав фибринового тканевого адгезива, как он определен выше, в котором соотношение тромбина к фибриногену с фактором XIII лежит в диапазоне от 1:10 до 1:1000, предпочтительно от 1:50 до 1:200.
Также предпочтительным является состав фибринового тканевого адгезива, как он определен выше, в котором диаметр зерен гранул лежит в диапазоне от 30 до 500 мкм, предпочтительно от 40 до 200 мкм.
Целесообразно, когда в составе фибринового тканевого адгезива по изобретению гранулы тромбина, и/или гранулы фибриногена, и/или смешанные гранулы имеют наружный барьерный слой.
Предпочтительным является состав фибринового тканевого адгезива, как он определен выше, в котором белки тромбин и фибриноген получены рекомбинантно посредством генной инженерии или биотехнологических способов, а также состав фибринового тканевого адгезива по изобретению, содержащий соль кальция.
Поставленная задача решается также тем, что предложен способ приготовления состава фибринового тканевого адгезива, как он определен выше, при котором белковые растворы или суспензии фибриногена с фактором XIII, тромбина распыляют в камеру с псевдоожиженным слоем и сушат с помощью псевдоожижающего газа, причем максимальная температура продукта не превышает 50°С.
Согласно одному из воплощений заявленного способа на первой стадии концентрат фибриногена с фактором XIII распыляют в камеру с псевдоожиженным слоем из водного раствора, сушат и выделяют, и на второй стадии концентрат тромбина распыляют в камеру с псевдоожиженным слоем из водного раствора, сушат и выделяют, а затем и те и другие полученные гранулы смешивают.
Согласно другому воплощению заявленного способа на первой стадии концентрат фибриногена распыляют в камеру с псевдоожиженным слоем из водного раствора и сушат, а затем тромбин распыляют на эти высушенные гранулы из органической суспензии.
Предпочтительно белковые растворы распыляют на имеющийся материал носителя.
В соответствии с изобретением, таким образом, предложено, что состав фибринового тканевого адгезива представлен в твердой сыпучей форме в виде смеси различных белковых концентратов, причем размер гранул лежит в диапазоне между 20 и 1000 мкм и, следовательно, обращение и нанесение не вызывает проблем. Таким образом, для данного изобретения существенно, что гранулы, присутствующие в составе, получены путем сушки белкового раствора в псевдоожиженном слое, поскольку было показано, к удивлению, что с использованием этого способа возможна такая мягкая сушка белковых растворов или суспензий, что их функциональные свойства не изменяются.
Дополнительное преимущество можно видеть в том, что гранулы присутствуют в сыпучей форме, так что возможно точное измерение.
Состав фибринового тканевого адгезива по изобретению, таким образом, имеет далеко идущие преимущества по отношению к уровню техники. Данное изобретение характеризуется более конкретно тем, что:
- смесь (=фибриновый тканевой адгезив) не взаимодействует (что запускает свертывание), пока она присутствует в этой твердой форме;
- смесь (=фибриновый тканевой адгезив) представлена в твердой и, тем не менее, в то же время порошкообразной или гранулированной, следовательно, сыпучей и свободной от пыли форме, что приводит к тому, что данную смесь возможно наносить непосредственно на рану, которую обрабатывают, без необходимости растворения белковых компонентов (концентрат фибриногена-фактора XIII и концентрат тромбина) перед применением;
- смесь (=фибриновый тканевой адгезив) растворяется хорошо, полностью и быстро в жидкости раны;
- смесь (=фибриновый тканевой адгезив), после того как она растворилась или пока она растворяется в жидкости раны, запускает биохимическую реакцию свертывания крови и образует самофиксирующийся твердый слой и, следовательно, представляет собой хорошую защиту раны;
- результатом возможности сравнительно просто варьировать размер частиц являются новые возможности применения. Примером является такая форма, что возможно либо строго локализовать контакт раны путем варьирования размера частиц во время измерения (для гомогенно распространенных, более крупных частиц), либо также облегчить контакт большой площади поверхности в тонком порошкообразном слое (например, с помощью распылительных систем для мелких гранул);
- различные соотношения смешивания обоих компонентов, смешанных в виде смеси гранул, можно легко отрегулировать и, следовательно, свойства фибринового тканевого адгезива (растворимость, начало свертывания) можно отрегулировать специфически;
- вследствие того факта, что порошок может быть перемешан очень гомогенно, “однородность содержимого” можно гарантировать с определенностью, даже если существует широкий спектр размера частиц (это значит, что требуемое соотношение смешивания всегда существует независимо от свойств частиц, таких как размер зерна, плотность и другие).
Состав фибринового тканевого адгезива по изобретению предпочтительно также содержит соль кальция, например CaCl2, и может, таким образом, быть приготовлен так, что либо отдельные белковые растворы или суспензии, которые представляют собой раствор или суспензию фибриногена-фактора XIII и раствор или суспензию тромбина/СаСl2, сушат отдельно, а затем высушенные гранулы смешивают, либо во время сушки белкового раствора первоначально сушат фибриноген, а затем тромбин наносят на эти гранулы, полученные таким образом. Возможна также структура, в которой тромбин образует ядро.
Для состава фибринового тканевого адгезива по изобретению также следует отметить, что он может быть отрегулирован в зависимости от применения. Следовательно, в составе тканевого адгезива, во-первых, соотношение смешивания фибриногена и тромбина может быть выбрано специфически в зависимости от применения, во-вторых, также возможно регулирование размера частиц.
Для состава фибринового тканевого адгезива, в котором в каждом случае первоначально получают отдельные гранулы конкретных белков, а затем смешивают, также возможно, чтобы гранулы состояли из ядра, материала носителя и белкового слоя, нанесенного на него. Материал носителя может состоять, например, из водорастворимых сахаров, и/или заменителей сахара, и/или биологических транспортных веществ. Примерами являются маннит или сывороточный альбумин.
Состав предпочтительно готовят так, что размер частиц гранул лежит в диапазоне от 30 до 500 мкм, предпочтительно от 40 до 200 мкм.
Составы фибринового тканевого адгезива, имеющие ядро, которое имеет материал носителя, также предпочтительны для смешанных гранул. В этом случае гранулы, следовательно, состоят из ядра, например снова из маннита, на которое затем нанесен слой фибриногена, поверх которого затем расположен слой тромбина. Соответственно, эти смешанные гранулы имеют трехслойную структуру. Естественно, также возможно в соответствии с настоящим изобретением, что эти смешанные гранулы получают с ядром. В воплощении со смешанными гранулами также предпочтительно, если между слоем фибриногена и слоем тромбина расположен барьерный слой. Этот барьерный слой должен, во-первых, отделять слой фибриногена от слоя тромбина, и должен, во-вторых, также быть хорошо растворимым в воде. Материалы для этого барьерного слоя должны, следовательно, удовлетворять этим двум вышеупомянутым критериям. Их примерами являются низкомолекулярные поливинилпирролидоны, или также производные целлюлозы, или также углеводы, например производные декстрозы.
Данное изобретение также относится к способу получения состава фибринового тканевого адгезива, описанного выше.
В соответствии с изобретением предложено, что встречающиеся обычно в фибриновом тканевом адгезиве белки фибриноген, тромбин, фактор XIII и соль кальция должны быть мягко высушены в аппарате с псевдоожиженным слоем, так что, таким образом, получается сыпучее, гранулярное твердое вещество. Подходящее для этого устройство описано в немецком патенте 4441167. Ссылка, следовательно, сделана на содержание этого описания.
Способ предпочтительно осуществляют так, что псевдоожижающий газ проходит через камеру с псевдоожиженным слоем от дна к верху, а жидкость (раствор или суспензия), которая должна быть высушена, распыляется внутрь сверху (верхнее распыление), снизу (нижнее распыление) или также со стороны (роторный псевдоожиженный слой) посредством распыляющей системы. Псевдоожижающий газ имеет в одно и то же время задачу псевдоожижения продукта, присутствующего в псевдоожижающей камере, подводке необходимого тепла для выпаривания распыляемой жидкости (вода или органический растворитель) к распыляющему соплу или влажному продукту, и в то же время поглощения выпаренного количества жидкости и удаления его. Выгрузка высушенного продукта предотвращается, с одной стороны, путем выбора подходящей скорости псевдооожижения (менее чем так называемая скорость выгрузки для данного продукта, которую можно определить путем вычисления и экспериментально), с другой стороны, также с помощью удерживающего продукт фильтра, присутствующего в верхней части псевдоожижающей камеры, и который можно очищать регулярно, или также с помощью дополнительного сепаратора продукта, известного из уровня техники (такого как, например, циклонный сепаратор).
Таким образом, возможно, например, что материал носителя помещают в псевдоожижающую камеру, затем на него распыляют раствор/суспензию, например, из водного раствора или суспензии белка. Капли жидкости, тонко измельченные в распыливающем конусе, таким образом, встречают псевдоожиженный порошкообразный материал носителя и высушиваются там благодаря условиям переноса тепла и массы, которые идеальны для способов с псевдоожиженным слоем и по существу являются результатом очень большой площади поверхности отдельных частиц псевдоожиженного продукта. Белки, присутствующие в распыляемой жидкости, затем осаждаются на носителе в виде твердого вещества благодаря силам адсорбции. Носитель идеально предложен так, что, с одной стороны, он инертен в отношении белков (это значит, что здесь не может быть взаимодействия с белковыми структурами, что могло бы необратимо изменить функциональные свойства) и что, в то же самое время, растворимость белков в воде, жидкости раны или физиологическом растворе ограничена или предотвращена. Следовательно, подходящими веществами являются, например, сахара (например, маннит), которые обладают хорошей растворимостью в воде, или также другие вещества, известные из уровня техники в качестве материалов носителей, которые обладают хорошей растворимостью в воде. Однако вследствие очень специфических свойств белков их пригодность должна быть оценена индивидуально. Вещества, которые уже функционируют как транспортные системы в биологической системе и которые могут, таким образом, быть использованы в то же самое время, являются также подходящими в качестве носителей, поскольку они присутствуют в природных, биологических системах в дополнение к необходимым белкам фибринового тканевого адгезива. В качестве такого примера можно упомянуть сывороточный альбумин человеческого происхождения или его рекомбинантную форму.
Во время распыления агломераты или гранулы образуются вследствие того, что влажность продукта медленно увеличивается в частице и, следовательно, существует увеличение размера частицы. Для того чтобы получить хорошую растворимость в воде, может быть преимущественным получить аморфные гранулярные структуры, имеющие вследствие этого большие удельные площади поверхности. Подходящие условия способа (варьирование давления распыления, скорости распыления, температуры продукта и температуры подаваемого воздуха, концентрации твердого вещества в используемом распыляемом растворе) для получения этих структур определенным и воспроизводимым образом известны из уровня техники способов псевдоожиженного слоя. Путем добавления водорастворимых связующих веществ, известных из уровня техники (например, производных целлюлозы), возможно варьировать размер частиц в отношении размера и распределения размера зерна (
Т.; Worts, О.; Control of fluidized bed granulation. V. Factors affecting granule growth. Arch. Pharm. Chemie. Sci. Ed.6, 1978, 69-82).
Используя точное регулирование определенного размера частиц, требования “сыпучести” (и, следовательно, также измеряемости), “растворимости”, “свободы от пыли” и “смешиваемости” могут быть отрегулированы удовлетворительно, а также ими можно варьировать специфически. Следовательно, преимущественным является способствовать большой площади поверхности, тонко диспергированному нанесению фибринового тканевого адгезива с насколько возможно тонким и мелким размером частиц. В то же время вследствие более крупных частиц с более узким распределением размера частиц локально жестко ограниченное, специфическое измерение фибринового тканевого адгезива может стать возможным. Например, растворимость гранул может представлять собой дополнительную степень свободы для применения твердого, сыпучего фибринового тканевого адгезива. Следовательно, например, максимально быстрая растворимость или замедленная растворимость и, таким образом, также замедленное или более медленное начало свертывания может быть отрегулировано. Это медленное или замедленное свертывание может обеспечить дополнительные возможности для дополнительной манипуляции или изменения при оперативных вмешательствах, например в пластико-косметических операциях на лице. На растворимость можно влиять как через размер частиц, структуру частиц, так и через дополнительные вещества, которые увеличивают или снижают силы внутреннего связывания.
При выборе условий способа необходимо также в первую очередь позаботиться о том, чтобы гарантировать, что соответствующие белки не будут повреждены (например, высокими температурами). Подходящие температуры подаваемого воздуха лежат, например, между 15 и 100°С; однако для продукта предпочтительна температура менее чем 50 или 37°С. В данном способе необходимо принимать во внимание, что возможная инактивация должна всегда рассматриваться в связи с определенной влажностью, что значит, что тепловая стабильность увеличивается с уменьшением влаги продукта в твердом веществе, так что более высокие температуры могут также быть приемлемы к концу сушки.
Сушка должна проходить до остаточной влажности, которая так мала, что не наблюдается никаких потерь активности, в зависимости от выбранных условий хранения или того, что свертывание уже происходит автоматически. Подходящими условиями хранения являются: холодное хранение при 4-8°С или при комнатных температурах (20°С). Гранулы могут быть дополнительно заключены в защитную атмосферу (например, азот или диоксид углерода) и, например, с исключением света. Возможные значения остаточные влажности, следовательно, могут лежать, например, между содержанием воды 0,1-5%.
Изобретение иллюстрируется более детально ниже с помощью примеров и Фиг.1 и 2.
На Фиг.1 схематически показана 2-шприцевая модель,
На Фиг.2 показана установка с псевдоожиженным слоем для осуществления данного способа.
Общие указания для получения гранул.
(1) Концентрат фибриногена (вместе с фактором XIII) распыляют на имеющийся маннит (имеющий размер частиц 50-100 мкм) из водного раствора. Соотношение материала носителя и количества белка может варьировать, например, в диапазоне от 1:1 до 100:1 и предпочтительно лежит в диапазоне от 1:1 до 10:1. Сушку осуществляют до подходящей остаточной влажности, при этом температура продукта не превышает температуру 35°С во время распыления и последующего высушивания.
(2) Затем распыляют концентрат тромбина тем же самым способом на подобным образом имеющийся маннит (имеющий размер частиц 50-100 мкм) из водного раствора, имеющего определенное количество хлорида кальция. Поскольку доля тромбина значительно ниже в количественном выражении в фибриновом тканевом адгезиве, соотношение материала носителя и количества белка для тромбина лежит, например, в диапазоне от 50:1 до 1000:1, предпочтительно в диапазоне от 50:1 до 200:1. После распыления сушка подобным образом имеет место до подходящей остаточной влажности, при этом поддерживается максимальная температура продукта 35°С. Полученные гранулы обоих типов затем смешивают, и затем их могут наносить непосредственно на рану в виде смеси. Соотношение смешивания зависит от соотношения фибриногена и тромбина, установленного из уровня техники, как это также установлено для известных до настоящего времени жидких форм введения. Более того, другие соотношения смешивания гранул фибриногена и гранул тромбина могут, однако, также быть отрегулированы удовлетворительно и легко (по контрасту с растворами, где объемное соотношение должно соответствовать растворимости). Следовательно, на действие фибринового тканевого адгезива в отношении начала свертывания, начала невосстанавливаемого отвердения или даже твердости полностью коагулировавшего адгезива можно влиять просто и специфически с помощью определенных гомогенных смесей.
Альтернативно, фибриновый тканевой адгезив может также быть получен в соответствии со следующим циклом способа.
(3) Осуществление сушки фибриногена, как описано в (1) (на материале носителя).
(4) Тромбин распыляют на высушенные гранулы из органической суспензии (подходит, например, изопропанол) вместе с хлоридом кальция. Тромбин (а также фибриноген) стабилен в изопропаноле, не изменяется химически в способе, но не может быть растворен в изопропаноле. Тромбин, таким образом, осаждается на гранулах, наполненных фибриногеном. Как результат отсутствия воды здесь нет преждевременного свертывания, например даже на гранулах во время грануляции распылением. Смешанные гранулы, состоящие из носителя, фибриногена-фактора XIII и тромбина, можно наносить непосредственно на рану. Пропорции фибриногена к тромбину вновь соответствуют соотношению, известному из уровня техники. Растворимость, а также связанное с ней свертывание, увеличены в этих смешанных гранулах, особенно также из-за отсутствия значимого количества материала носителя, который не нужно растворять первым при применении.
(5) Для того, чтобы облегчить прямое распыление тромбинсодержащего водного раствора (+СаСl2) на имеющиеся гранулы фибриногена (полученные в соответствии с (1)), легко растворимый в воде барьерный слой может быть нанесен на гранулы фибриногена в качестве внутреннего барьера для пространственного разделения фибриногена и тромбина. К этому барьерному слою относится следующее: что, во-первых, оба активных ингредиента не могут быть химически изменены в этом способе, барьерный слой легко растворяется в воде, и что это представляет собой эффективное разделение фибриногена и тромбина во время распыления и грануляции, и также, наконец, стабильную при хранении, твердую высушенную форму. Низкомолекулярный поливинилпирролидон, или также растворы производных целлюлозы. или также углеводы (например, производные декстрозы) являются подходящими примерами этого. Те же самые характеристики в отношении растворимости и свертывания можно ожидать для продукта, полученного таким образом, как для гранул, полученных в соответствии с (4).
В дополнение, также возможны варианты способа без дополнительно имеющегося материала носителя.
(6) Затравки гранул или тонко измельченные частицы, которые могут служить в качестве исходных ядер для дальнейшей грануляции, получают in situ путем распыления из водного раствора фибриногена или из изопропаноловой (или органической) суспензии в пустую установку. Установка, используемая для этого, может представлять собой, например, колонну с распылителем или также установку с псевдоожиженным слоем, имеющую воздуховод адекватной длины пробега для распыляемых капель жидкости. Если придерживаться подходящих условий способа, распыляемые капли жидкости могут быть высушены в установке с псевдоожиженным слоем в соответствии с условиями распылительной сушилки (но при пониженных температурах сушки) перед тем, как они войдут в контакт со стенками контейнера, например, во все еще влажном состоянии, и задержатся там. Эти мелкие частицы, полученные таким образом, приводятся в движение с помощью псевдоожижающего газа и поддерживаются суспендированными и, таким образом, приводятся в контакт с распыляемым облаком дополнительно распыляемой жидкости и затем начинают образовывать гранулы. Рост определенных гранул может быть вызван данным образом, особенно с помощью очень осторожного проведения способа в начале, в первоначально пустой установке. Росту можно способствовать, например, путем добавления известных связующих веществ. Путем комбинирования с классифицирующей гранулы разгрузкой (например, посредством зигзагового просеивателя или классифицирующего потока воздуха) существует возможность получения гранул, имеющих определенный размер частиц, в данной установке и даже осуществление способа непрерывным или квазинепрерывным способом.
(7) Тромбин с дополнительным барьерным (или покрывающим) слоем или без него может быть нанесен непосредственно, как описано в (4) или (5), на гранулы концентрата фибриногена, полученные в соответствии с (6).
В соответствии с уровнем техники варианты получения (1)-(7) для фибринового тканевого адгезива могут или должны быть объединены с подходящими способами для инактивации вирусов. Это может быть осуществлено либо тем, что белковые концентраты обрабатывают перед сушкой, используя известные способы инактивации (например, пастеризацию или способы растворителя/детергента), либо тем, что высушенные гранулы, как известно из немецкого патента 4441167, проходят тепловую обработку непосредственно в псевдоожиженном слое ближе к концу или после действительной грануляции распылением или сушки, так что вирусы соответственно инактивируются. Однако эта стадия обработки должна быть осуществлена так, чтобы функциональные свойства белков сохранялись.
На Фиг.1 показано схематическое изображение необходимого получения различных компонентов фибринового тканевого адгезива перед применением и возможности введения в соответствии с уровнем техники.
1. Концентрат фибриногена-фактора XIII.
2. Раствор (например, физиологический раствор).
3. Концентрат тромбина.
4. Раствор хлорида кальция.
Компоненты 1-4 имеют стерильную упаковку. Растворы компонентов 2 и 4 обычно вводят в бутылки 1 и 3 с помощью вакуума. После того как в контейнерах 1 и 3 достигается полное растворение (без мути), этот раствор может быть отобран в стерильные шприцы (5) и (6) и введен на или в рану. Используемые количества лежат обычно в мл диапазоне.
На Фиг.2 показано одно возможное воплощение установки с псевдоожиженным слоем для получения гранул.
1. Установка с псевдоожиженным слоем.
2. Нижняя часть.
3. Устройство для подачи давления (например, гидравлический цилиндр).
4. Канал для подачи воздуха (воздухопровод).
5. Контейнер для материала.
6. Впускное дно (газораспределитель).
7. Полость с фильтром (зона высвобождения).
8. Воздухосбросный канал.
9. Распылительный канал с распылительной насадкой (положение верхнего распыления или нижнего распыления).
10. Удерживающий продукт фильтр.
11. Распыляющий насос.
Продукт, порошок или гранулы, псевдоожижают в установке с псевдоожиженным слоем 1 посредством псевдоожижающего газа. Псевдоожижающий газ, таким образом, проходит через установку с псевдоожиженным слоем 1 от дна к верху, например, с помощью вентилятора, который не показан. Цель псевдоожижающего газа, таким образом, заключается в псевдоожижении материалов, которые должны быть обработаны, конвективной теплопередаче к продукту или к распыленному продукту и удалении выпаренного количества жидкости во время сушки. Псевдоожижающий газ входит через канал для подачи воздуха 4, введенный в нижнюю часть 2. Однородное распределение газа по поперечному сечению реакционной камеры происходит через впускное дно 6, которое в то же самое время отделяет контейнер для материала 5 от нижней части 2. Технические вспомогательные средства (например, удерживающий продукт фильтр) для удержания мелкозернистого продукта вводят в полость с фильтром 7 в верхнюю часть, и они гарантируют, что разгрузка продукта не может происходить в воздухосбросный канал 8, подобным образом введенный в верхнюю часть установки с псевдоожиженным слоем. Жидкий продукт (раствор или суспензию) можно распылять через распылительный канал с распылительной насадкой 9 и посредством распыляющего насоса 11 из сосуда, который не показан, в установку с псевдоожиженным слоем 1 либо сверху (положение верхнего распыления, показано непрерывной линией), либо снизу (положение нижнего распыления, показано прерывистой линией). Распыливающий конус, полученный таким образом, либо встречается с продуктом, уже помещенным в контейнер для материала 5, и высыхает здесь на поверхности частиц, полученных в результате, либо высыхает непосредственно в реакционной камере аналогично условиям сушки распылением, и, таким образом, образует порошок или тонко измельченные гранулы. Сушку, которая является мягкой по отношению к продукту, можно обеспечить как результат измерения температуры продукта во время способа с псевдоожиженным слоем, и на этом основан контроль способа. Температура псевдоожижающего газа, таким образом, конечно, выбирается в соответствии с материалами, которые нужно обработать, и может лежать, например, в диапазоне от 15 до 100°С. Температура получающегося продукта ниже и может предпочтительно поддерживаться ниже 50°С или лучше ниже 37°С во время сушки или грануляции распылением.
Настоящее изобретение относится к составу фибринового тканевого адгезива, содержащему тромбин, фибриноген и фактор XIII, причем тромбин и фибриноген с фактором XIII представлен в виде смеси в форме сыпучих твердых гранул, и эти гранулы имеют размер частиц от 20 до 1000 мкм. Эти гранулы могут иметь многослойную структуру, состоящую из ядра из сахара, слоя фибриногена и наружного слоя тромбина. В соответствии с изобретением предложено, что белковые растворы фибриноген, тромбин, фактор XIII распыляют и сушат в аппарате с псевдоожиженным слоем, причем максимальная температура продукта не превышает 50°С. Технический результат: состав фибринового тканевого адгезива прост для обращения, измерения и нанесения и может храниться без проблем в течение длительного периода времени. 2 н. 15 з.п. ф-лы, 2 ил.
| WO 9744015 A1, 27.11.1997 | |||
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОСТАТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА "ЖЕЛПЛАСТАН" | 1992 |
|
RU2067447C1 |
| Способ получения гемостатической губки | 1978 |
|
SU741878A1 |
| WO 9629990 A1, 03.10.1996. | |||
