СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА РЕЙНО Российский патент 2005 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике заболеваний посредством исследования характеристик крови в организме, и может быть использовано для диагностики риска заболевания синдрома Рейно путем иммуно-генетических исследований.

Известен способ диагностики синдрома Рейно, в соответствии с которым у больного исследуют вязкость крови и при увеличении вязкости крови в три раза, увеличении коэффициента агрегации в пять раз диагностируют наличие заболевания (Батурин И.О., Ковалева З.Д. Нарушение белкового, жирового и углеводного обмена при феномене Рейно//Здравоохранение Казахстана, 1982, №8, с.62-65).

Известно, что клиническое значение лабораторного теста определяется, в частности, его специфичностью (Е.Г. Бутолин, В.Г. Иванов “Клиническая информативность основных лабораторных показателей биологических жидкостей организма”, Ижевск: Издательство Экспертиза, 1998, с.13). Недостаток известного способа состоит в снижении его клинического значения из - за отсутствия специфичности, поскольку из литературы известны случаи синдрома Рейно и при пониженной вязкости крови, что ставит под сомнение утверждение о существенном влиянии повышенной вязкости крови на периферическое сосудистое сопротивление (Орап О.И. Диагностика и лечение болезни и синдрома Рейно: дис. канд. мед. наук / Киев, 1988).

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики синдрома Рейно, в соответствии с которым выполняют иммунологические тесты, в результате которых определяют уровень пропердина, лизоцима и комплемента сыворотки крови и при их достоверном снижении диагностируют наличие заболевания (Орап О.И. Диагностика и лечение болезни и синдрома Рейно: дис. канд. мед. наук. Киев, 1988).

Недостаток этого способа также заключается в снижении его клинического значения из-за отсутствия специфичности.

Кроме того, недостаток выявленных известных способов диагностики заключается в том, что они указывают на отклонения в организме больного, характерные для синдрома Рейно, но не позволяют оценить степень риска возникновения заболевания.

Таким образом, выявленные в результате патентного поиска аналог и прототип заявленного способа диагностики синдрома Рейно при осуществлении не обеспечивают достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также в возможности оценки степени риска возникновения заболевания.

Предлагаемый способ диагностики заболевания синдрома Рейно решает задачу создания соответствующего способа, осуществление которого обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также в возможности оценки степени риска возникновения заболевания.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе диагностики синдрома Рейно, включающем исследование крови больного, диагностируют риск заболевания, для чего выполняют иммуно-генетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA - антигенам первого и второго класса, а именно: локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, при этом если в результате типирования выявляют хотя бы один из антигенов А11, А19, А28, В12, В16, DR3, то констатируют низкий риск заболевания, если в результате типирования выявляют хотя бы один из антигенов В7, DR1, DR5, то констатируют высокий риск заболевания.

Технический результат достигается следующим образом. Исследования последнего десятилетия показали, что гены, кодирующие антигены гистосовместимости, являются многофункциональными: клиническое их значение не ограничивается рамками трансплантологии, а связано также с предрасположенностью к определенным заболеваниям. Данная биологическая роль антигенов совместимости сформировала новое клиническое направление “HLA - болезни”. HLA - это система тканевой совместимости человека (Human Leukocyte Antigens). Это чрезвычайно интенсивно развиваемое направление как зарубежными, так и отечественными исследователями.

Было замечено, что носительство определенных HLA - антигенов у людей значительно завышено при некоторых болезнях, что свидетельствует о генетически детерменированной предрасположенности, “запрограммированном риске” поражаемости человека той или иной формой заболевания (Ю.М. Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, М.: Медицина, 1983, с. 133). Генетическая предрасположенность к синдрому Рейно известна из литературы (Terwindt G.M., Haan J, Ophoff K.A. et al. Clinical аnd genetic analysis of a large Dutch family with autosomal dominant Vasenlar refinopathy, migrane and Raynaud′s phenomenon.// Brain. - 1998. - V.I 21. -№2. - Р.303-316). Это дает основания для диагностики риска возникновения синдрома Рейно с помощью иммуно-генетических тестов и обуславливает достоверность, а следовательно, повышает клиническую ценность результатов диагностики.

Генетические исследования синдрома Рейно были известны ранее. Известны результаты хромосомных исследований на клеточных культурах периферической крови (Galeazzi M. Chromosomal abnormalities in peripheral lymphocytes from idiopatic Raynaud′s phenomenon patients / Aniclini C., Morozzi G., Belhsai F. et al. // Clin. Rheumotology - 1996. - V.15, №4. - Р. 418-419). Однако эта информация носит исследовательский характер и только позволяет предположить, что изучение хромосом у больных с синдромом Рейно может иметь значение для прогноза данного заболевания.

Заявленный способ диагностики синдрома Рейно основан на фактическом материале и открытиях в эксперименте, поскольку клинические исследования HLA - антигенов первого и второго класса в отношении синдрома Рейно являются новым направлением в диагностике данного заболевания и ранее никем не проводились.

Авторами для исследования выбраны HLA - антигены первого и второго класса, как антигены главного комплекса по гистосовместимости, что повышает достоверность, а следовательно, клиническую ценность результатов тестов.

Кроме того, HLA - комплекс выбран благодаря тому, что в настоящее время достоверно известно наличие в HLA - комплексе локализации гена иммунного ответа человека (Ю.М.Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, M.: Медицина, 1983, с.133). Синдром Рейно рассматривают, в частности, как аутоиммунную патологию, что дало основание авторам предположить, что в фенотипе больного должен присутствовать ген иммунного ответа, отвечающий за предрасположенность к синдрому Рейно. Ген иммунного ответа проявляет активность при наличии антигенного стимула. В свою очередь, наличие активного иммунного процесса позволяет выявить маркеры активности гена иммунного ответа (Ю.М.Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, М.: Медицина, 1983, с.147). Опытным путем по результатам статистики, полученной при обследовании больных синдромом Рейно, в результате которого типируют лимфоциты периферической крови по HLA - антигенам первого и второго класса, а именно: локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, автором выявлены антигены А11, А19, А28, В7, В12, В16, DR1, DR3, DR5 - маркеры активности гена иммунного ответа, отвечающего за предрасположенность к синдрому Рейно. Это позволило в заявленном способе при диагностике синдром Рейно использовать в качестве критерия для констатации степени риска заболевания антигены, достоверно являющиеся маркерами активности гена иммунного ответа, отвечающего за предрасположенность к синдрому Рейно. Это обусловило специфичность способа, что повышает достоверность, а следовательно, повышает клиническую ценность результатов диагностики.

В виде гипотезы общепринято предположение, что не HLA-A-B-или HLA-DR-гены являются сами по себе структурами, определяющими восприимчивость к заболеванию, а имеются специальные гены “восприимчивости”, определяющие интенсивность ответа на фактор внешней или внутренней среды организма (Ю.М. Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, М.: Медицина, 1983, с.143).

При этом аллель, побуждающий к высокому иммунному ответу, называют геном-протектором, а побуждающий к низкому иммунному ответу - геном-провокатором заболевания.

Аллель (ген) - провокатор повышает предрасположенность к заболеванию, провоцируя его манифестацию. Естественно, что частота такого аллеля в больной группе завышена (позитивная ассоциация).

Но наряду с антигенами, положительно ассоциированными с болезнью, есть антигены, ассоциированные отрицательно. Это значит, что при выборке больных кодирующий ген встречается крайне редко, т.е. большинство людей-носителей данного гена не предрасположены к данному заболеванию. Такой аллель рассматривают как ген-протектор данной болезни (Ю.М. Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, М.: Медицина, 1983, с.с.145-146).

Опытным путем было установлено, что у части исследуемой группы больных синдромом Рейно антигены A11, A19, А28, В 12, В 16, DR3 имеют достоверно низкую фенотипическую частоту, по сравнению со здоровой группой людей. На основании этого сделан вывод, что антигены А11, A19, А28, В12, В16, DR3 являются генами-протекторами данной болезни.

Так же опытным путем установлено, что у части исследуемой группы больных синдромом Рейно антигены В7, DR1, DR5 имеют достоверно высокую фенотипическую частоту, по сравнению со здоровой группой людей. На основании этого сделан вывод, что антигены В7, DR1, DR5 являются генами-провокаторами данной болезни.

Благодаря четкому разделению выявленных опытным путем антигенов А11, A19, А28, В7, В12, В16, DR1, DR3, DR5 - маркеров активности гена иммунного ответа, отвечающего за предрасположенность к синдрому Рейно, на гены-протекторы и гены-провокаторы, обеспечивается с помощью заявленного способа возможность диагностики степени риска заболевания синдромом Рейно.

При этом, если в результате типирования выявляют хотя бы один из антигенов А11, A19, А28, В12, В16, DR3, то констатируют низкий риск заболевания, поскольку в фенотипе больного присутствуют гены-протекторы.

Если в результате типирования выявляют хотя бы один из антигенов В7, DR1, DR5, т.е. гены-провокаторы, то констатируют высокий риск заболевания.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики заболевания синдрома Рейно при осуществлении обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также в возможности оценки степени риска возникновения заболевания.

Способ диагностики синдрома Рейно осуществляют следующим образом. Исследуют кровь больного. Для этого выполняют иммуно-генетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA - антигенам первого и второго класса, а именно: локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно. Диагностируют риск заболевания. Если в результате типирования выявляют хотя бы один из антигенов A11, A19, А28, В12, В 16, DR3, то констатируют низкий риск заболевания. Если в результате типирования выявляют хотя бы один из антигенов В7, DR1, DR5, то констатируют высокий риск заболевания.

Производили взятие венозной крови. При типировании лимфоцитов использовали стандартный NIH-микролимфоцитотоксический тест и набор HLA-типирующих сывороток ЗАО Межрегионального центра иммуногенетики и гистотипирующих реагентов “Гисанс”.

Для доказательства критерия “промышленная применимость” приводим следующие результаты исследований. Исследовали группу пациентов с синдромом Рейно из 84 человек в возрасте от 18 до 22 лет. Все пациенты предъявляли идентичные жалобы на изменение окраски кожи кистей и стоп в виде цианоза и гиперемии; похолодание, онемение, гипергидроз, парастезии, незначительную пастозность в области пальцев кистей и стоп. Все пациенты имели второй класс ишемии конечностей, тетрапоражение было зарегистрировано у 82,1% пациентов.

Данные контрольной группы по частоте встречаемости контролируемых генов в популяции брали из среднестатистических данных, полученных Зарецкой Ю.М. для русского населения, рассчитанных на 1000 человек (Зарецкая Ю.М. “Клиническая иммуногенетика”, М.: Медицина, 1983, с.38).

Ниже приведена Таблица сравнения частот встречаемости антигенов системы HLA у пациентов с синдромом Рейно в сравнении с данными Зарецкой Ю.М.

Таблица

Частота встречаемости антигенов по системе HLA %АнтигенГруппа пациентовКонтрольная группаА117,0±2,712,9А1915,1±3,931,4А282,3±1,68,0В735,7±5,220,6В1211,9±3,521,1В164,8±2,39,7DR121,1±4,89,0DR318,3±4,632,0DR538,0±5,820,0

Из таблицы видны достоверные различия в частоте встречаемости антигенов по системе HLA у пациентов с синдромом Рейно с контрольной группой. При этом достоверно выделяются гены-протекторы: А11, А19, А28, В12, В16, DR3 и гены-провокаторы: В7, DR1, DR5.

Для оценки силы ассоциации между выявленными антигенами-провокаторами и болезнью синдром Рейно использовали критерий относительного риска. Биологический смысл этого показателя - риск развития заболевания у носителей антигена, по сравнению с индивидами, не несущими данный антиген.

Показатель вычисляют по формуле:

R=fп(1-fк)/fк(1-fп), где fп - фракция носителей антигена среди пациентов; fк - фракция носителей антигена в контрольной группе. Показатель относительного риска больше двух считают значимым (Зарецкая Ю.М. “Клиническая иммуногенетика”, М.: Медицина, 1983, с.66).

Рассчитывали величину относительного риска для генов-провокаторов.

RB7=0,36(1-0,21):0,21(1-0,36)==2,12

RDR1=0,21(1-0,09):0,09(1-0,21)=2,78

RDR5=0,38(1-0,20):0,20(1-0,38)=2,45

Из результатов расчета видно, что все показатели относительного риска больше двух, что позволяет их считать значимыми. Это подтверждает, что наличие в HLA - фенотипе антигенов В7, DR1, DR5 указывает на высокий риск возникновения заболевания синдрома Рейно.

Способ может быть использован в совокупности с общепринятыми методами диагностики синдрома Рейно для рационального выбора терапии.

Пример 1. Больной К., 29 лет, обратился с жалобами на похолодание и онемение кожных покровов кистей. Больной был госпитализирован в отделение сосудистой хирургии для диагностики и выбора лечения. Диагностику проводили с помощью функциональных методов исследования: ультразвуковое исследование, капилляроскопия, реовазография. Результаты исследований показали на отклонения в организме больного, характерные для синдрома Рейно. Для определения степени риска возникновения заболевания были выполнены иммуно-генетические тесты в соответствии с заявленным способом. В результате тестирования были выявлены антигены-протекторы A11, A28, В 12, что указывало на наличие у данного больного низкого риска возникновения синдрома Рейно. В результате больному была назначена специфическая терапия с учетом низкого риска заболевания.

Пример 2. Больной К., 19 лет, обратился с жалобами на похолодание, онемение, гипергидроз, цианоз кожных покровов кистей и стоп. Больной был госпитализирован в отделение сосудистой хирургии для диагностики и выбора лечения. Диагностику проводили с помощью функциональных методов исследования: ультразвуковое исследование, капилляроскопия, реовазография, а также была взята биопсия мягких тканей верхней трети предплечья. Результаты исследований показали на отклонения в организме больного, характерные для синдрома Рейно. Для определения степени риска возникновения заболевания были выполнены иммуно-генетические тесты в соответствии с заявленным способом. В результате тестирования был выявлен ген - провокатор В7, что указывало на наличие у данного больного высокого риска возникновения синдрома Рейно. В результате больному была назначена специфическая терапия с учетом высокого риска заболевания.

Изобретение относится к области иммуногенетики и может быть использовано для диагностики синдрома Рейно. Сущность изобретения состоит в том, что проводят типирование лимфоцитов периферической крови по HLA - антигенам первого и второго класса, а именно: локусы HLA-А, В и локусы HLA-DR соответственно, при выявлении хотя бы одного из антигенов A11, A19, А28, В 12, В 16, DR3, констатируют низкий риск заболевания, а при выявлении хотя бы одного из антигенов В7, DR1, DR.5, констатируют высокий риск заболевания. Техническим результатом является повышение точности диагностики и возможность оценки риска развития заболевания. 1 табл.

Способ диагностики синдрома Рейно, включающий исследование крови больного, отличающийся тем, что диагностируют риск заболевания, для чего выполняют иммуногенетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA-антигенам первого и второго классов, а именно: локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, при этом, если в результате типирования выявляют хотя бы один из антигенов А11, А19, А28, В 12, В 16, DR3, то констатируют низкий риск заболевания, если в результате типирования выявляют хотя бы один из антигенов В7, DR1, DR5, то констатируют высокий риск заболевания.