СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ КАПИЛЛЯРНОЙ ГЕМАНГИОМЫ У ДЕТЕЙ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для первичной диагностики гемангиом у детей.

Существуют различные способы диагностики гемангиом, которые, в основном, позволяют установить наличие опухоли, связь с окружающими структурами, определить индивидуальные размеры орбиты и патологического очага: совокупность клинических признаков, ультразвуковое обследование, рентгенография, компьютерная томография, ядерно-магнитный резонанс и др. (А.Ф.Бровкина с соавт. Офтальмоонкология. - М.: Медицина, 2002, с.242; Патент РФ №2246900, 2005 г. Способ ультразвуковой диагностики опухолей и опухолеподобных образований орбиты).

Наиболее близким техническим решением является способ выявления группы риска при злокачественных опухолях глаза и орбиты (заявка RU 94039616/14 A1, A61F 9/00, 1994), заключающийся в определении степени агрегации тромбоцитов в выделенной и обогащенной тромбоцитами плазме крови при действии стандартного стимула. Критерием выделения больного в группу повышенного риска является снижение степени агрегации тромбоцитов на 55±5% по сравнению с контрольной группой. Способ способствует своевременной и правильной диагностике злокачественных опухолей органа зрения.

Однако при использовании данного способа возможно лишь общее представление о характере патологического процесса без установления конкретного диагноза.

Авторами в научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено сведений об известности способа прогнозирования развития гемангиом у детей.

Задачей изобретения является определение группы риска возникновения данного заболевания.

Технический результат - получение критериев прогноза развития капиллярных гемангиом у детей.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе, включающем исследование лимфоцитов периферической крови, проводят гистотипирование по локусам А и В I класса системы HLA и при выявлении антигенов А23 и/или А24, и/или В50 прогнозируют риск возникновения капиллярной гемангиомы у детей.

Предлагаемый способ позволяет прогнозировать риск развития гемангиом у детей при наличии или отсутствии данного заболевания у родителей на любых этапах обследования больных, даже в состоянии ремиссии, что расширяет диагностическую ценность метода.

Исследования последнего десятилетия показали, что клиническое значение генов, кодирующих антигены гистосовместимости, не ограничиваются рамками трансплантологии, а связано с предрасположенностью к определенным заболеваниям. Данная биологическая роль антигенов гистосовместимости сформировала новое клиническое направление «HLA-болезни». HLA - это система тканевой совместимости человека (Human Leukocyte Antigens). Это чрезвычайно интенсивно развиваемое направление как зарубежными, так и отечественными исследователями. Было замечено, что носительство определенных HLA-антигенов у людей значительно завышено при некоторых болезнях, что свидетельствует о генетически детерминированной предрасположенности, «запрограммированном риске» поражаемости человека той или иной формой заболевания. В виде гипотезы общепринято предположение, что не HLA-A, В являются сами по себе структурами, определяющими восприимчивость к заболеванию, а имеются специальные гены «восприимчивости», определяющие интенсивность ответа на фактор внешней или внутренней среды организма. При этом аллель, побуждающий к низкому иммунному ответу - геном-провокатором заболевания. Аллель (ген) - провокатор повышает предрасположенность к заболеванию, провоцируя его манифестацию. Естественно, что частота такого аллеля в больной группе завышена (позитивная ассоциация). Но наряду с антигенами, положительно ассоциированными с болезнью, есть антигены, ассоциированные отрицательно. Это значит, что при выборке больных кодирующий ген встречается крайне редко, т.е. большинство людей-носителей данного гена не предрасположены к данному заболеванию. Такой аллель рассматривают как ген-протектор данной болезни (Ю.М.Зарецкая «Клиническая иммуногенетика», М.: Медицина, 1983, с.133-146).

Способ осуществляют следующим образом.

Берут кровь из локтевой вены в объеме 10 мл с гепарином. Выделяют лимфоциты на градиенте плотности фиколл - верографин ρ=1,077.

Проводят гистотипирование лимфоцитов в стандартном лимфоцито-токсическом тесте с использованием антител HLA-AB-сывороток по методу, предложенному национальным институтом здоровья в Бетезде (NIH-метод).

Устанавливают фенотип (набор антигенов HLA-A и В). При выявлении антигенов HLA-A23 и/или А24, и/или В50 прогнозируют высокий риск развития капиллярной гемангиомы у детей.

По предложенному способу проведено обследование 15 больных гемангиомой (18 глаз) в возрасте от 3 мес до 14 лет.

Были определены антигены, ответственные за риск возникновения капиллярной гемангиомы у детей. В качестве контроля выступили данные обследования 108 доноров Республиканской станции переливания крови (см. таблицу).

1. Частота встречаемости антигена Ах выражается в процентах от общего числа обследованных лиц. Частоту антигена (f) вычислили по формуле:

, где n - число носителей данного антигена;

N - число обследованных.

2. Достоверность различий в частоте встречаемости антигенов рассчитывалась согласно критерию Пирсона:

где 0,5n - поправка на непрерывность для малых выборок.

Значения а, b, с, d находились из четырехпольной таблицы:

антиген+-больныеАbздоровыеСd

N=n₁+n₂, где n₁ - выборка 1-й группы, n₂ - выборка 2-й группы.

3. Величина относительного риска рассчитывалась по формуле Woolf, 1955:

где а, b, с, d - количество больных и здоровых индивидов, обладающих или не обладающих данным аллелем.

Эта формула до настоящего времени является наиболее употребимой при расчете величины относительного риска.

Атрибутивный риск или этиологическая фракция вычислялась для RR>1

, где EF - этиологическая фракция,

F - частота встречаемости антигена у больных.

Расчетом показателей относительного риска возникновения и этиологической фракции (EF) было подтверждено, что у носителей антигенов А23 и/или А24, и/или В50 высок вероятный риск развития гемангиомы.

Таким образом, использование данного способа позволяет применять иммунологический мониторинг для своевременного прогнозирования гемангиом у детей, что способствует формированию группы риска возникновения данного заболевания при рождении и последующему диспансерному наблюдению.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1

Больной С. 5 лет, м/к 70-2240-2006 г., обратился в клинику с жалобами на появление новообразования на конъюнктиве правого глаза. Со слов мамы, в 3-летнем возрасте появилось «красное пятнышко» на конъюнктиве, увеличивается в размере постепенно. В Уфимский НИИ глазных болезней обратилась в 5-летнем возрасте, где был выставлен диагноз: OD - Гемангиома конъюнктивы глазного яблока. OS - Здоров.

При поступлении острота зрения OU - 1,0

Объективно: при биомикроскопии - OD - в нижне-внутреннем секторе конъюнктивы глазного яблока новообразование плоское с новообразованными сосудами, размер 0,4×0,3 см. Преломляющие среды прозрачные. Глазное дно: без видимой глазной патологии.

Фенотип пациента HLA - A23, 24, А32 (10)В8В13, В41.

В детском отделении под наркозом удалена гемангиома правого глаза в пределах здоровой ткани.

Гистологическое заключение: капиллярная гемангиома.

Пример 2

Больной Я. (5 лет), м.к. 70-1320-2006 г., поступил в Уфимский НИИ глазных болезней с диагнозом OD - гемангиома нижнего века.

Со слов мамы около 5 недель назад на нижнем веке OD у наружного угла появилась «красная царапина», затем «узелок», отмечается быстрый рост.

При поступлении острота зрения OU - 0,8, на нижнем веке у наружнего угла в 0,7 см от ресничного края - округлое новообразование на широком основании диаметром 0,5 см, плотное, безболезненное, ярко-красного цвета.

Фенотип пациента HLA - A2, 28, A23, 24 B49, В50

В детском отделении под наркозом удалено новообразование нижнего века правого глаза с одномоментной пластикой.

Патогистологическое заключение: капиллярная гемангиома кожи.

Пример 3

Больная Г., 3 мес, поступила в Уфимский НИИ глазных болезней (м.к. №70-3285-2006) с диагнозом OS - Гемангиома верхнего века. Ребенок от вторых родов, вес 3766, рост 52 см при рождении, родилась с асфиксией легкой степени. Примерно через 2 недели после рождения мама заметила на нижнем веке левого глаза «красную полоску», которая в дальнейшем стала увеличиваться и по площади и по объему. В 2-х мес.возрасте обратились в Уфимский НИИ глазных болезней, где ребенок был обследован. Острота зрения на момент поступления OU - следит за игрушкой, взгляд фиксирует. OS - на веке новообразование примерно 0,7×0,4 см, ограниченное, выступающее над поверхностью кожи. Преломляющие среды прозрачные, глазное дно без видимой патологии.

Фенотип пациента HLA-A24, А26, А33, А10, В27.

В детском отделении под наркозом удалена гемангиома верхнего века.

Патогистологическое заключение: капиллярная гемангиома.

Распределение антигенов HLA I класса у больных с гемангиомойHLAЧастота встречаемостиRREFχ²Pбольные, n=15контроль, n=108А_х %Р_х %А_х %Р_х %А2320,00,1062,780,0148,440,1765,12<0,02А2426,70,1445,560,0286,170,2245,29<0,02В2733,30,18311,10,057   >0,05В4426,70,1448,330,042  2,94>0,05В5013,30,0690,930,00513,30,1224,10<0,05Примечание: RR (RR - relative risk) - показатель относительного риска возникновения гемангиомы; EF - показатель этиологической фракции, при RR>1.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностическим методам. Для осуществления прогнозирования риска развития капиллярной гемангиомы у детей проводят иммуногенетическое типирование лимфоцитов периферической крови по локусам А и В I класса системы HLA. При выявлении антигенов А23 и/или А24, и/или В50 прогнозируют высокий риск возникновения заболевания. Использование способа позволяет проводить мониторинг для своевременного прогнозирования гемангиомы у детей. 1 табл.

Способ прогнозирования развития опухоли глаза путем исследования лимфоцитов периферической крови, отличающийся тем, что проводят гистотипирование по локусам А и В I класса системы HLA и при выявлении антигенов А23, и/или А24, и/или В50 прогнозируют риск возникновения капиллярной гемангиомы у детей.