СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА РЕЙНО Российский патент 2005 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике заболеваний посредством исследования характеристик крови в организме, и может быть использовано для диагностики риска заболевания синдрома Рейно путем иммуногенетических исследований.

Известен способ диагностики синдрома Рейно, в соответствии с которым у больного исследуют вязкость крови, и при увеличении вязкости крови в три раза, увеличении коэффициента агрегации в пять раз диагностируют наличие заболевания (Батурин И.О., Ковалева З.Д. Нарушение белкового, жирового и углеводного обмена при феномене Рейно // Здравоохранение Казахстана, 1982, №8, с.62-65).

Известно, что клиническое значение лабораторного теста определяется, в частности, его специфичностью (Е.Г.Бутслин, В.Г.Иванов “Клиническая информативность основных лабораторных показателей биологических жидкостей организма”, Ижевск: Издательство Экспертиза, 1998, с.13). Недостаток известного способа состоит в снижении его клинического значения из-за отсутствия специфичности, поскольку из литературы известны случаи синдрома Рейно и при пониженной вязкости крови, что ставит под сомнение утверждение о существенном влиянии повышенной вязкости крови на периферическое сосудистое сопротивление (Орап О.И. Диагностика и лечение болезни и синдрома Рейно: дис. канд. мед. наук /Киев, 1988).

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики синдрома Рейно, в соответствии с которым выполняют иммунологические тесты, в результате которых определяют уровень пропердина, лизоцима и комплемента сыворотки крови, и при их достоверном снижении диагностируют наличие заболевания (Орап О.И. Диагностика и лечение болезни и синдрома Рейно: дис. канд. мед. наук / Киев, 1988).

Недостаток этого способа также заключается в снижении его клинического значения результатов диагностики из-за отсутствия специфичности.

Кроме того, недостаток выявленных известных способов диагностики заключается в том, что они указывают на отклонения в организме больного, характерные для синдрома Рейно, но не позволяют оценить степень риска возникновения заболевания.

Таким образом, выявленные в результате патентного поиска аналог и прототип заявленного способа диагностики заболевания синдрома Рейно при осуществлении не обеспечивают достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также в возможности оценки степени риска возникновения заболевания.

Предлагаемый способ диагностики заболевания синдрома Рейно решает задачу создания соответствующего способа, осуществление которого обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также в возможности оценки степени риска возникновения заболевания.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе диагностики синдрома Рейно, включающем исследование крови больного, диагностируют риск заболевания, для чего выполняют иммуногенетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA - антигенам первого и второго класса, а именно локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, при этом если в результате типирования выявляют хотя бы один из гаплотипов А3В7, A2DR1, A2DR2, A2DR5, то диагностируют наличие высокого риска возникновения синдрома Рейно.

Технический результат достигается следующим образом. Исследования последнего десятилетия показали, что гены, кодирующие антигены гистосовместимости, являются многофункциональными: клиническое их значение не ограничивается рамками трансплантологии, а связано также с предрасположенностью к определенным заболеваниям. Данная биологическая роль антигенов гистосовместимости сформировала новое клиническое направление “HLA - болезни”. HLA - это система тканевой совместимости человека (Human Leukocyte Antigens). Это чрезвычайно интенсивно развиваемое направление как зарубежными, так и отечественными исследователями. Было замечено, что носительство определенных HLA - антигенов у людей значительно завышено при некоторых болезнях, что свидетельствует о генетически детерменированной предрасположенности, “запрограммированном риске” поражаемости человека той или иной формой заболевания (Ю.М.Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, М.: Медицина, 1983, с.133). Генетическая предрасположенность к синдрому Рейно известна из литературы (Terwindt G.M., Haan J, Ophoff K.A. et al. Clinical end genetic analysis of a large Dutch family with autosomal dominant Vasenlar refinopathy, migrane and Raynaud’s phenomenon.// Brain. - 1998. - V.121. -№2. - Р.303-316). Это дает основания для диагностики риска возникновения синдрома Рейно с помощью иммуногенетических тестов, что придает способу специфичноять, обуславливает достоверность, а следовательно, повышает клиническую ценность результатов диагностики.

Генетические исследования синдрома Рейно были известны ранее. Известны результаты хромосомных исследований на клеточных культурах периферической крови (Galeazzi M. Chromosomal abnormalities in peripheral lymphocytes from idiopatic Raynaud's phenomenon patients / Aniclini C., Morozzi G., Bellisai F. et al. // Clin Rheumotology - 1996. - V.15, №4. - Р.418-419). Однако эта информация носит исследовательский характер и только позволяет предположить, что изучение хромосом у больных с синдромом Рейно может иметь значение для прогноза данного заболевания.

Заявленный способ диагностики синдрома Рейно основан на фактическом материале и открытиях в эксперименте, поскольку клинические исследования HLA - антигенов первого и второго класса в отношении синдрома Рейно являются новым направлением в диагностике данного заболевания и ранее никем не проводились.

Авторами для исследования выбраны HLA - антигены первого и второго класса как антигены главного комплекса по гистосовместимости, что повышает достоверность, а следовательно, клиническую ценность результатов тестов.

Кроме того, HLA - комплекс выбран благодаря тому, что в настоящее время достоверно известно наличие в HLA - комплексе локализации гена иммунного ответа человека (Ю.М.Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, M.: Медицина, 1983, с.133, с.143). Синдром Рейно рассматривают, в частности, как аутоиммунную патологию, что дало основание авторам предположить, что в фенотипе больного должен присутствовать ген иммунного ответа, отвечающий за предрасположенность к синдрому Рейно. Ген иммунного ответа проявляет активность при наличии антигенного стимула. В свою очередь, наличие активного иммунного процесса позволяет выявить маркеры активности гена иммунного ответа (Ю.М.Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, M.: Медицина, 1983, с.147). Опытным путем по результатам статистики, полученной при обследовании больных синдромом Рейно, в результате которого типируют лимфоциты периферической крови по HLA - антигенам первого и второго класса, а именно локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, авторами выявлены гаплотипы АЗВ7, A2DR1, A2DR2, A2DR5 - маркеры активности гена иммунного ответа, отвечающего за предрасположенность к синдрому Рейно. У человека система гена иммунного ответа многоаллельна (там же, с.144), что объясняет образование гаплотипов. В данном случае, у больных синдромом Рейно имеются гены-провокаторы, которые благодаря наличию эффекта неравновесного сцепления имеют высокую вероятность сцепления с геном, отвечающим за предрасположенность к синдрому Рейно. Можно предположить, что для болезни Рейно взаимосвязь сублокусов HLA-A, HLA-B, HLA-DR вызвана высоким значением неравновесного сцепления между их антигенами, что и позволило выявить конкретные гаплотипы - маркеры синдрома Рейно. Таким образом, наличие в крови пациента гаплотипов А3В7, A2DR1, A2DR2, A2DR5 является генетическим маркером, указывающим на развитие синдрома Рейно, а следовательно, на высокую степень риска возникновения синдрома Рейно.

Использование в качестве критерия для констатации степени риска заболевания гаплотипов, достоверно являющихся маркерами активности гена иммунного ответа, отвечающего за предрасположенность к синдрому Рейно, обуславливает специфичность способа, что повышает достоверность, а следовательно, повышает клиническую ценность результатов диагностики.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики заболевания синдрома Рейно при осуществлении обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также позволяет оценить степень риска возникновения заболевания.

Способ диагностики синдрома Рейно осуществляют следующим образом. Исследуют кровь больного. Для этого выполняют иммуногенетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA - антигенам первого и второго класса, а именно локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно. При этом, если в результате типирования выявляют хотя бы один из гаплотипов А3В7, A2DR1, A2DR2, A2DR5, то диагностируют наличие высокого риска возникновения синдрома Рейно.

Производили взятие венозной крови. При типировании лимфоцитов использовали стандартный NIH-микролимфоцитотоксический тест и набор HLA-типирующих сывороток ЗАО Межрегионального центра иммуногенетики и гистотипирующих реагентов “Гисанс”.

Для доказательства критерия “промышленная применимость” приводим следующие результаты исследований. Исследовали группу пациентов с синдромом Рейно из 84 человек в возрасте от 18 до 22 лет, проживающих в г. Екатеринбурге. Все пациенты предъявляли идентичные жалобы на изменение окраски кожи кистей и стоп в виде цианоза и гиперемии; похолодание, онемение, гипергидроз, парастезии, незначительную пастозность в области пальцев кистей и стоп. Все пациенты имели второй класс ишемии конечностей, тетрапоражение было зарегистрировано у 82,1% пациентов.

Данные контрольной группы по частоте встречаемости контролируемых гаплотипов в популяции взяты из среднестатистических данных для жителей города Екатеринбурга, которые опубликованы в Сборнике научных трудов “Внедрение лоабораторно-диагностических технологий в практику здравоохранения” // Рыбина И.В., Пономарева Л.В., Лившиц А.А., Неволина Е.П. “Распределение антигенов системы HLA I и II классов в популяции жителей г. Екатеринбурга” // Екатеринбург, 2000, с.132-135.

Ниже приведена таблица наиболее часто встречаемых HLA-гаплотипов у пациентов с синдромом Рейно в сравнении с контрольной группой.

ТаблицаГаплотипы, наиболее часто встречающиеся в популяции жителей г. Екатеринбурга.Гаплотипы, наиболее часто встречающиеся у пациентов с синдромом Рейно.А1В8А1В8А2В7А2В7А2В12 А2В13  А3В7А3В35 А9В7 B7DR2 B7DR5B7DR5B35DR5  A2DR1 A2DR2 A2DR5A2B7DR5 A2B35DR5 

Из таблицы видны достоверные различия в частоте встречаемости антигенов системы HLA у пациентов с синдромом Рейно с контрольной группой: достоверно выделяются гаплотипы, которые отсутствуют в контрольной группе и имеются только в группе пациентов с синдромом Рейно, - А3В7, A2DR1, A2DR2, A2DR5. Последнее подтверждает достоверность их использования в качестве маркеров данного заболевания.

Способ может быть использован в совокупности с общепринятыми методами диагностики синдрома Рейно для рационального выбора терапии.

Пример. Больной К., 19 лет, обратился с жалобами на похолодание, онемение, гипергидроз, цианоз кожных покровов кистей и стоп. Больной был госпитализирован в отделение сосудистой хирургии для диагностики и выбора лечения. Диагностику проводили с помощью функциональных методов исследования: ультразвуковое исследование, капилляроскопия, реовазография, а также была взята биопсия мягких тканей верхней трети предплечья. Результаты исследований показали на отклонения в организме больного, характерные для синдрома Рейно. Для определения степени риска возникновения заболевания были выполнены иммуногенетические тесты в соответствии с заявленным способом. В результате тестирования были выявлены гаплотипы А3В7, A2DR2, A2DR5, что указывало на наличие у данного больного высокого риска возникновения синдрома Рейно. В результате больному была назначена специфическая терапия с учетом высокого риска заболевания.

Изобретение относится к области иммуногенетики и может быть использовано для диагностики синдрома Рейно. Сущность изобретения состоит в том, что проводят типирование лимфоцитов периферической крови по HLA - антигенам первого и второго класса, а именно локусы HLA-А, В и локусы HLA-DR соответственно, при выявлении хотя бы одного из гаплотипов А3В7, A2DR11, A2DR2, A2DR5 диагностируют наличие высокого риска возникновения синдрома Рейно. Техническим результатом является повышение точности диагностики и возможность оценки риска развития заболевания. 1 табл.

Способ диагностики синдрома Рейно, включающий исследование крови больного, отличающийся тем, что диагностируют риск заболевания, для чего выполняют иммуногенетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA-антигенам первого и второго классов, а именно: локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, при этом, если в результате типирования выявляют хотя бы один из гаплотипов АЗВ7, A2DR11, A2DR2, A2DR5, то диагностируют наличие высокого риска возникновения синдрома Рейно.