СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2005 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных соединений из растительного сырья.

Известен способ получения суммы флавоноидов из плодов расторопши пятнистой (препарат "Силибор"), заключающийся в экстракции сырья этиловым спиртом, упаривании экстракта, растворении остатка в этиловом спирте, обработке четыреххлористым углеродом и экстракции смесью хлороформ-этиловый спирт в соотношении 2:1 [1].

Однако флавоноиды способствует накопление аскорбиновой кислоты в печени и одновременно замедляют выведение ее из организма. Флавоноиды усиливают ферментативное окисление аскорбиновой кислоты до дегидроаскорбиновой кислоты и таким образом предохраняют ее от дальнейшего окисления и выведения из организма. Дегидроаскорбиновая кислота растворяется в жирах лучше аскорбиновой и, проникая через мембраны, интенсивнее накапливается в органах [2]. И, как следствие, препарат, полученный известным способом, обладает низкой регенеративной активностью гепатоцитов. Также возможны побочные явления - кожные аллергические реакции [3, 4].

Цель изобретения - усиление специфической активности.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения средства, обладающего гепатопротективной активностью, в качестве сырья используют корневища и корни лабазника шестилепестного, экстракцию ведут водой, водорастворимый полисахаридный комплекс осаждают этанолом.

Сопоставительный анализ заявляемого решения с прототипом показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что в качестве сырья используют корневища и корни лабазника шестилепестного, экстракцию ведут дистиллированной водой при нагревании в соотношении сырье:экстрагент 1:10-1:15 в течение 30 мин, вытяжку упаривают в вакууме до 1/3-1/5 объема, водорастворимый полисахаридный комплекс осаждают трехкратным объемом 96% этанола, отфильтровывают, очищают и высушивают.

Таким образом, заявленный способ соответствует критерию изобретения "новизна". Известны технические решения [1], в которых получение гепатопротективных средств заключается в использовании других видов лекарственных растений. Однако, при приведенных выше недостатках не достигается поставленная цель, которая указана в заявляемом техническом решении. Это позволяет сделать вывод о его соответствии критерию "существенные отличия".

Способ получения средства, обладающего гепатопротективной активностью, осуществляют следующим образом. Высушенное и измельченное в порошок с размером частиц 1-3 мм сырье лабазника шестилепестного количественно помещают в круглодонную колбу, заливают горячей дистиллированной водой (90-95°С) в соотношении 1:10-1:15 и экстрагируют на кипящей водяной бане с обратным холодильником на протяжении 30 мин. Экстракт фильтруют через вату, упаривают в вакууме до 1/3-1/5 объема, охлаждают. К полученной вытяжке приливают трехкратный объем 96% этилового спирта, отстаивают в течение 24 ч, выпавший в осадок водорастворимый полисахаридный комплекс отфильтровывают, очищают 96% этанолом, этиловым эфиром и высушивают при комнатной температуре.

Экспериментально установлено, что полученное средство обладает выраженной гепатопротективной активностью.

Экспериментальные исследования проведены на 38 крысах "Вистар" массой 120-160 г. Животные были разбиты на 4 группы.

1 группа - интактные.

У животных 2-й группы вызывали токсическое поражение печени путем 5-кратного (с интервалом 24 ч) внутримышечного введения 50% раствора четыреххлористого углерода (CCl₄) в персиковом масле из расчета 0,3 мл на 100 г массы.

Крысам 3-ей группы вводили препарат "Силибор" из расчета 10 мг на 100 г массы перорально 7-кратно с интервалом 24 ч на фоне отравления CCl₄ (5-кратно, через каждые 24 ч). После 5-го введения CCl₄ животные еще 2 раза получали препарат.

Животные 4-й группы получали средство из корневищ и корней лабазника шестилепестного (1 мл на 100 г массы) 7-кратно перорально с интервалом 24 ч при одновременном отравлении CCl₄. Последний вводили 5 раз вместе с препаратом, затем 2 раза животные получали только препарат.

Всех крыс умерщвляли путем вскрытия яремной вены под эфирным наркозом. Забой производили между 8-9 ч утра для исключения влияния суточной периодичности митотической активности на результат опыта.

Для изучения регенерационных процессов брали кусочки печени 1,0×1,0×1,5 см, которые фиксировали в нейтральном формалине, после заливали в парафин для приготовления срезов толщиной 5-7 мкм, окрашивали их гематоксилином и эозином.

По полученным препаратам подсчитывали некоторые морфологические показатели, характеризующие пролиферетивную активность гепатоцитов (Саркисов, 1977):

- количество митотически делящихся клеток и на этой основе митотический индекс как отношение числа митозов к общему количеству просмотренных клеток;

- число двухъядерных клеток и определяли индекс двухъядерных клеток;

- диаметр ядер гепатоцитов.

Все полученные результаты обрабатывали с применением методов вариационной статистики (Стрелков, 1966). Существенность различий средних величин оценивали по критерию Стьюдента (Лакин, 1972).

Введение CCl₄ вызывало существенное усиление процессов репаративной регенерации, о чем свидетельствовало увеличение:

- числа митозов в гепатоцитах с 0,36 до 0,86%;

- диаметра ядер гепатоцитов с 5,35 до 7,02 мкм;

- индекса двухъядерных клеток с 18,9 до 22,1 (табл. 1).

Одновременное введение подопытным крысам препарата "Силибор" вводит к существенному увеличению числа митозов в гепатоцитах, но практически не влияет на другие показатели регенерации (табл. 1).

Таблица 1
Сравнительная фармакологическая оценка растительных препаратов№ гр.ПрепаратКол. жив.ДозаМитотический индекс, %Индекс двухъядерных клетокДиаметр ядра гепатоцитов, мкм1-10-0,36±0,03618,9±1,825,35±0,362-9-0,86±0,062^*122,1±0,837,02±0,143Силибор9100
мг/кг1,05±0,176^*1,222,4±2,54^*17,82±0,36^*14Полисахариды лабазника1010
мл/кг1,63±0,192^*1-325,1±1,08^*1-38,29±0,27^*1-3Примечание: звездочкой отмечены достоверные отличия; цифры рядом со звездочкой указывают, по отношению к какой группе эти различия достоверны.

Применение водорастворимого полисахаридного комплекса из корневищ и корней лабазника шестилепестного значительно ускоряет процессы репаративной регенерации на клеточном и внутриклеточном уровне, превосходя в этом отношении официальный препарат "Силибор".

Пример 1. 100 г предварительно высушенного и измельченного в порошок с размером частиц 1-3 мм сырья лабазника шестилепестного помещают в круглодонную колбу, заливают 1000 мл горячей дистиллированной воды (90-95°С) и экстрагируют на кипящей водяной бане с обратным холодильником на протяжении 30 мин. Экстракт фильтруют, упаривают в вакууме до 330 мл, охлаждают. К охлажденному экстракту приливают 1000 мл 96% этанола, полученную смесь энергично взбалтывают и отстаивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Выпавший в осадок водорастворимый полисахаридный комплекс отфильтровывает через бумажный фильтр, промывают 200 мл 96% этанола и 100 мл этилового эфира, высушивают на воздухе.

Фармакологическая активность:

- митотический индекс - 1,57±0,188%;

- индекс двухъядерных клеток - 24,7±2,03;

- диаметр ядра гепатоцитов - 8,01±0,32 мкм.

Пример 2. 100 г предварительно высушенного и измельченного в порошок с размером частиц 1-3 мм сырья лабазника шестилепестного помещают в круглодонную колбу, заливают 1200 мл горячей дистиллированной воды (90-95°С) и экстрагируют на кипящей водяной бане с обратным холодильником на протяжении 30 мин. Экстракт фильтруют, упаривают в вакууме до 300 мл, охлаждают. К охлажденному экстракту приливают 900 мл 96% этанола, полученную жидкость энергично взбалтывают и отстаивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Выпавший в осадок водорастворимый полисахаридный комплекс отфильтровывают через бумажный фильтр, промывают 200 мл 96% этанола и 100 мл этилового эфира, высушивают на воздухе.

Фармакологическая активность:

- митотический индекс - 1,52±0,143%;

- индекс двухъядерных клеток - 25,4±1,63;

- диаметр ядра гепатоцитов - 8,08±0,22 мкм.

Пример 3. 100 г предварительно высушенного и измельченного в порошок с размером частиц 1-3 мм сырья лабазника шестилепестного помещают в круглодонную колбу, заливают 1500 мл горячей дистиллированной воды (90-95°С) и экстрагируют на кипящей водяной бане с обратным холодильником на протяжении 30 мин. Экстракт фильтруют, упаривают в вакууме до 300 мл, охлаждают. К охлажденному экстракту приливают 900 мл 96% этанола, полученную жидкость энергично взбалтывают и отстаивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Выпавший в осадок водорастворимый полисахаридный комплекс отфильтровывают через бумажный фильтр, промывают 200 мл 96% этанола и 100 мл этилового эфира, высушивают на воздухе.

Фармакологическая активность:

- митотический индекс - 1,65±0,188%;

- индекс двухъядерных клеток - 24,9±2,13;

- диаметр ядра гепатоцитов - 8,31±0,29 мкм.

Таким образом, усиление специфической активности средства, полученного выше указанным способом, выражается в увеличении митотического индекса в 1,6 раза; индекса двухъядерных клеток в 1,2 раза; диаметра ядер гепатоцитов в 1,2 раза по сравнению с прототипом.

ЛИТЕРАТУРА

1. А.С. СССР №603386, А 61 К 35/78, 1978.

2. Растительные лекарственные средства /Под ред. Н.П.Максютиной. - г. Киев: 3доровье, 1985, с.85-102.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х томах. Т. 1, М.: Медицина, 1987, с.516.

4. Справочник по клинической фармакологии и фармакотерапии /Под ред. И.С.Чекмана, А.П.Пелещука, О.А.Пятака. Киев: Здоровье, 1987, с.309.

Изобретение относится к области лекарственных средств и может быть использовано для получения средства, обладающего гепатопротекторной активностью. Сущность изобретения заключается в экстракции корневищ и корней лабазника шестилепестного водой при нагревании при соотношении сырье:экстрагент 1:10-15 в течение 30 минут, фильтрации, упаривании до 1/3-1/5 объема и очистки - охлаждением упаренного концентрата, осаждением из него целевого продукта добавлением трехкратного объема 96% этанола, отстаивания, отфильтровывания осадка, его промывания последовательно 96% этанолом и эфиром. Техническим результатом является усиление специфической активности и фармакологического действия. 1 табл.

Способ получения средства, обладающего гепатопротекторной активностью путем экстракции растительного сырья растворителем при нагревании, упаривания, очистки и высушивания, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности, в качестве сырья используют корневища и корни лабазника шестилепестного (Filipendula hexapetala G), экстракцию проводят водой при соотношении сырье:экстрагент 1:10-15 в течение 30 мин полученный экстракт фильтруют, упаривают до 1/3-1/5 объема, а очистку проводят охлаждением упаренного концентрата, осаждением из него целевого продукта добавлением трехкратного объема 96%-ного этанола, отстаиванием, отфильтровыванием осадка, его промыванием последовательно 96%-ным этанолом и эфиром.