СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ГЕПАТОПРОТЕКТИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2020 года по МПК A61K36/53 A61K36/28 A61P1/16 

Изобретение относится к биологическим составам на основе экстрактов растительного происхождения и может быть использовано в качестве гепатопротектора, а также средства, повышающего сопротивляемость организма к воздействию химических веществ техногенного происхождения, отравлениям промышленными ядами и лекарствами.

Уровень техники

В качестве лекарственных средств, способствующих нормализации метаболических процессов печени и структурно-функциональной целостности клеточных мембран гепатоцитов, широко применяются гепатопротекторные препараты, обладающие достаточно широким спектром действия.

При этом необходимо отметить, что универсальных гепатопротекторов не существует. В зависимости от избирательности действия отдельных групп гепатопротекторов можно выделить: антиоксиданты; ингибиторы микросомальных ферментов печени; препараты, восстанавливающие целостность мембран гепатоцитов; стимуляторы метаболических процессов, стимуляторы желчеобразования.

Наиболее значительную группу гепатопротекторов составляют продукты растительного происхождения, что обусловлено широким спектром действия биологически активных веществ растений, доступностью их в ценовом отношении, минимальным количеством побочных эффектов. Известны препараты, обладающие гепатопротекторным действием, относящиеся к классу растительных полифенольных соединений. Это ряд препаратов, схожих по составу и действию: "Силимарин", "Силибор", "Силибинин", "Карсил" и др.

Известно гепатопротекторное средство, получаемое путем экстракции столбиков с рыльцами кукурузы спиртом этиловым 60% методом многоступенчатого противоточного экстрагирования. Сырье, измельченное до 3-5 мм, экстрагируют при комнатной температуре в соотношении сырье: экстрагент - 1:5,5 методом многоступенчатого противоточного экстрагирования с законченным циклом в батарее из 5 диффузоров при времени экстрагирования на каждой ступени экстракции 4 часа, дополнительно экстрагируют отработанное сырье в 4 и 5 диффузорах используемым экстрагентом, при времени экстрагирования в 4 диффузоре в течение 4 часов, после чего сливают и пропускают через 5 диффузор, выдерживая 16 часов, далее отжимают отработанное сырье, затем объединенное извлечение отстаивают в течение не менее 3 суток при температуре 2-10°С, очищенное извлечение сгущают под вакуумом при 40-50°С, высушивают в вакуум-сушильном шкафу при 40-50°С до получения сухого экстракта и измельчают [1]. Недостатками известного способа являются многостадийность и сложность приготовления и, как следствие, трудоемкость.

Известно гепатопротекторное средство, представляющее собой продукт экстракции этанолом слоевищ ламинарии японской - Laminaria japonica Aresch., семейства ламинариевых - Laminariaceae, содержащий до 30% полифенольных соединений. Вышеописанное средство обладает эффективным гепатопротекторным действием, способствует ускоренному восстановлению каскадов метаболических реакций, обеспечивая нормализацию биохимических показателей углеводного и липидного обмена, а также эндогенной системы антиоксидантной защиты. К недостаткам этого средства можно отнести высокую стоимость продукции [2].

В качестве средств, обладающих гепатопротекторным эффектом, известны также экстракты из гребней калины [3], лимонника китайского [4] и экстракт биомассы Maackia amurensis Rupr.et Maxim [5] и ряд других.

Наиболее близким к заявляемому средству является известный, широко применяемый в медицине препарат "Легалон", содержащий в своем составе в качестве активного агента группу растительных полифенолов-флавоноидов, выделенных из плодов расторопши пятнистой. Препарат «Легалон» является эталонным гепатопротектором, который рекомендован в качестве препарата сравнения при испытании новых средств, обладающих гепатопротекторными свойствами растительной природы [6]. Препарат выпускается в виде драже, капсул и суспензий. «Легалон» обладает выраженным гепатопротекторным и антитоксическим действием [7].

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является расширение ассортимента гепатопротекторных средств.

Поставленная задача решается средством, обладающим гепатопротекторным действием, на основе продукта экстракции 70% этанолом корней Колеуса форсколии (Coleus forskohlii), листьев Колеуса форсколии (Coleus forskohlii), цветков Ромашки лекарственной (Matricaria chamomilla), цветков Каленулы лекарственной (Calendula officinalis) и шрота семян Расторопши пятнистой (Silybum marianum).

Технический результат заключается в проявлении выраженного гепатопротекторного эффекта смеси этаноловых экстрактов корней Колеуса форсколии (Coleus forskohlii), листьев Колеуса форсколии (Coleus forskohlii), цветков Ромашки лекарственной (Matricaria chamomilla), цветков Каленулы лекарственной (Calendula officinalis) и шрота семян Расторопши пятнистой (Silybum marianum), мас. % (табл. 1):

Осуществление изобретения

Предлагаемый препарат готовят следующим образом.

Экстракты готовился методом мацерации, или настаивания.

Приготовляются этанольные экстракты предварительно измельченных до 0,5-3,0 мм листьев и корней Колеуса форсколии, цветков Ромашки лекарственной, цветков Календулы лекарственной, шрота семян Расторопши пятнистой путем помещения 25 г каждого растительного субстрата и 300 мл 70-% этилового спирта в герметично закрытую стеклянную посуду на 7 суток с периодическим встряхиванием. Настаивание производится в помещении с постоянной температурой воздуха 23°С без доступа света. По окончании процедуры экстракты дважды фильтруются через сменные ватно-марлевые фильтры, после чего помещаются в холодильную камеру при температуре +2-+4°С.

Готовят средство гепатопротекторного действия, которое содержит следующее соотношение компонентов, мас. %: спиртовой экстракт листьев Колеуса форсколии - 20%; спиртовой экстракт корней Колеуса форсколии - 20%; спиртовой экстракт цветков Ромашки лекарственной - 20%; спиртовой экстракт цветков Календулы лекарственной - 20%; спиртовой экстракт шрота семян Расторопши пятнистой - 20%.

Этаноловый экстракт Колеуса форсколии продемонстрировал выраженный гепатопротекторный эффект в эксперименте с моделированием острого тетрахлорметан-индуцированного токсического гепатита у мышей. Было продемонстрировано выраженное ускорение регенерации гепатоцитов, восстановление тканевой структуры, ликвидация очагов некроза и воспалительной инфильтрации. Кроме того, применение спиртового экстракта колеуса существенно снижает уровни АЛТ, ACT, щелочной фосфатазы, прямого и связанного билирубина в сыворотке крови, что говорит о стабилизации мембран гепатоцитов и эритроцитов и предотвращении высвобождения печеночных ферментов и различных форм билирубина в кровь [8].

Экстракт цветков Календулы лекарственной обладает выраженным противовоспалительным эффектом, значительно повышает выживаемость клеток печени при токсическом поражении, в значительной мере благодаря сохранению целостности клеточных мембран. Кроме того, экстракт Календулы лекарственной предохраняет от повреждения систему антиоксидантной защиты клетки. Показан гепатопротекторный эффект Календулы лекарственной при острых повреждениях печени тетрахлорметаном и цисплатином. Потенциальным источником активности экстракта цветков Календулы лекарственной называются его антиоксидантная активность и способность к инактивации кислородных радикалов [9].

Экстракт Ромашки лекарственной также выступает в роли антиоксидантного средства, нейтрализующего свободные радикалы, образующиеся в патогенезе токсических и лекарственных поражений печени, чем обеспечивается ее многообещающий гепатопротекторный эффект [10].

Клинические и экспериментальные исследования показывают, что препараты Расторопши демонстрируют гепатопротекторный эффект при токсических и алкогольных поражениях печени, а также при вирусном гепатите С, предупреждают возникновение и развитие цирроза печени различного генеза, оказывает терапевтическое воздействие при жировом гепатозе различного генеза. Кроме того, Расторопша перспективна для защиты печени при химиотерапии опухолей [11].

Результат испытания гепатопротективного средства на белых лабораторных крысах линии Вистар в сравнительном аспекте.

Проводили исследование заявляемого гепатопротективного средства на морфофункциональное состояние белых крыс линии Вистар при экспериментальном остром гепатите Исследование проведено на 4-х группах самцов в возрасте 6 месяцев, по 25 животных в каждой.

Первая группа служила интактным контролем, во второй группе моделировался острый токсический гепатит путем введения CCl₄ в дозе 5 мг/кг в 50% масляном растворе, в третьей группе параллельно с моделированием острого токсического гепатита вводился препарат сравнения - «Легалон» в дозировке 100 мл/кг внутрижелудочно при помощи зонда; в четвертой группе параллельно с моделированием острого токсического гепатита вводился исследуемый препарат в той же дозировке.

Выведение животных из эксперимента осуществлялось через сутки после вышеописанных манипуляций.

Осуществлялся забор крови для общего и биохимического анализа, извлекалась печень, проводилось макроскопическое исследование, затем осуществлялась проводка и заливка в парафин по стандартным методикам.

Для патоморфологического анализа приготовлялись срезы толщиной 5 мкм с последующей окраской гематоксилин-эозином и суданом III в целях дифференцировки жировой и вакуольной дистрофии.

Достоверность различий в показателях разных групп определялась при помощи t-критерия Стьюдента.

Результаты биохимических и гематологических исследований представлены в табл. 2, 3.

При патоморфологическом исследовании установлено, что морфологическая картина печени интактных крыс соответствовала возрастной норме.

У контрольных животных цвет печени животных различен: печень охряно-красная, светло-коричневая с множественными кровоизлияниями, у 30% животных светло-серые участки чередуются с темно-красными. По структуре печень в большинстве случаев рыхлая, в отдельных случаях с уплотненными участками. У большинства крыс на разрезе печень сухая, кровь не выступает, в ряде случае кровь на разрезе выступает умерено.

При микроскопическом исследовании отмечено нарушение структуры печеночной паренхимы, дольчатое строение паренхимы не сохранено. Среди клеток большое количество лейкоцитов, макрофагов. В гепатоцитах большое количество вакуолей, в том числе липидных, что подтверждается окраской суданом III. Отдельные клетки очень крупные и фактически представляют собой сплошную вакуоль. В 65% случаев обнаружены множественные очаги некрозов разных размеров, в которых структурные элементы отдельных клеток не визуализируются, а ткань печени представляет собой гомогенную бесструктурную массу. В 33% случаев отмечаются обширные некрозы. Кровеносные сосуды (центральные вены, капилляры) в печени этих животных расширены (гиперемия кровеносных сосудов), проницаемость стенок для клеток крови повышена, отмечаются очаговые кровоизлияния.

Патологические изменения в печени крыс третьей (препарат сравнения) и четвертой (гепатопротективное средство) групп носят значительно меньшую выраженность. Межгрупповых различий в этих группах не отмечено. В печени всех животных прослеживается балочное и дольчатое строение. При этом немногочисленные очаги дистрофии чередуются с участками, представленными неповрежденными и двуядерными гепатоцитами (признаки регенерации) или гепатоцитами в состоянии начального этапа зернистой дистрофии. Жировая дистрофия встречается в 13% случаев. Так же существенно меньше гепатоцитов в состоянии некрозов. Отмечено отсутствие очаговых кровоизлияний, межбалочные капилляры умерено гиперемированы, отсутствуют и признаки отечности. Сосуды в области триад умеренно расширены. При этом в 21% гепатоцитов отмечены мелкие вакуоли.

Предлагаемое изобретение за счет своего состава имеет следующие преимущества по сравнению с другими известными техническими решениями:

- повышение, регенерирующих, гепатопротективных, противовоспалительных свойств;

- отсутствие аллергического действия;

- является экологически чистым препаратом.

Источники информации

1. Пат. РФ 2522281 С2, 2014, кл. A61K 9/36/899.

2. Пат РФ 2405622 С1, 2010, кл. А61К 36/03.

3. Пат РФ 2177330 С1, 2010, кл. А61К 36/35.

4. Пат РФ 2179031 С1, 2002, кл. А61К 36/79.

5. Пат РФ 2244553, 2005, кл. А61К 36/48.

6. Венгеровский А.И., Маркова И.В. и др. Методические указания по изучению гепатозащитной активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва. - 2000. - С. 228-231.

7. Лекарственные препараты зарубежных фирм в России, М., - Астрафармсервис, 1993, с. 350).

8. Geng, D. Hepatoprotective effects of Coleus forskohlii (wild.) Briq. against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice / D. Geng, L. Cong, Y. Li-tao, L.-J. Weng, Y.-Y. Han // Journal of Chemical and Pharmaceutical Research - 2014. - 6(5). - P. 130-135.

9. Asadi-Samani, M. Medicinal plants with hepatoprotective activity in Iranian folk medicine / M. Asadi-Samani, N. Kafash-Farkhad, N. Azimi, A. Fasihi, E. Alinia-Ahandani, M. Rafieian-Kopaei // Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. - 2015. - 5(2). - P. 146-157.

10. Obuyanwe Nwoye, L. Protective and therapeutic effects of Chamomilla Recutita extract on subacute ethanol intoxication in white albino rats / L. Obuyanwe Nwoye // African Journal of Biotechnology. - 2013. - 12(18). - P. 2378-2385.

11. Кароматов, И.Д. Лечебные свойства флаволигнана расторопши силимарина / И.Д. Кароматов // Электронный научный журнал «Биология и интегративная медицина». 2018. - №10(27). - С. 115-146.

Настоящее изобретение относится к средству, обладающему гепатопротекторным действием, содержащему следующее соотношение компонентов, мас. %: этаноловый экстракт корней Колеуса форсколии (Coleus forskohlii) - 20, этаноловый экстракт листьев Колеуса форсколии (Coleus forskohlii) - 20, этаноловый экстракт цветков Ромашки лекарственной (Matricaria chamomilla) - 20, этаноловый экстракт цветков Календулы лекарственной (Calendula officinalis) - 20, этаноловый экстракт шрота семян Расторопши пятнистой (Silybum marianum) - 20. Техническим результатом настоящего изобретения является проявление выраженного гепатопротекторного эффекта. 3 табл.

Средство, обладающее гепатопротекторным действием, содержащее следующее соотношение компонентов, мас. %: этаноловый экстракт корней Колеуса форсколии (Coleus forskohlii) - 20, этаноловый экстракт листьев Колеуса форсколии (Coleus forskohlii) - 20, этаноловый экстракт цветков Ромашки лекарственной (Matricaria chamomilla) - 20, этаноловый экстракт цветков Календулы лекарственной (Calendula officinalis) - 20, этаноловый экстракт шрота семян Расторопши пятнистой (Silybum marianum) - 20.