СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГЕПАТОПРОТЕКТИВНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2009 года по МПК A61K36/00 A61P1/16 

Изобретение относится к медицине и к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения средства, обладающего гепатопротективной активностью.

Известен способ получения средства, обладающего гепатопротективной активностью (пат. №2259208, опубл. 2005.08.27). Сущность способа заключается в экстракции корневищ и корней лабазника шестилепестного водой при нагревании при соотношении сырье : экстрагент 1:10-15 в течение 30 мин, фильтрации, упаривании до 1/3-1/5 объема и очистки - охлаждением упаренного концентрата, осаждением из него целевого продукта, добавлением трехкратного объема 96% этанола, отстаивания, отфильтровывания осадка, его промывания последовательно 96% этанолом и эфиром. Однако термическое воздействие (упаривание извлечения) является причиной дополнительных затрат энергии, а также может оказать нежелательное воздействие на сохранность биологически активных веществ (БАВ). Использование эфира в качестве растворителя токсично для персонала, огнеопасно и неэкологично.

Известен также способ гепатопротекторного и гипохолестеринемического средства (пат. №2270686, опубл. 2006.02.27). Способ, где в качестве исходного сырья используют амброзию полынно-листную, собранную в фазу развития до цветения, характеризуется тем, что сырье измельчают и экстрагируют трижды этанолом при определенных условиях, извлечения объединяют, фильтруют и упаривают в вакууме. Водно-спиртовой кубовый остаток смешивают с горячей водой и нагревают до полного удаления этанола, затем очищают от липофильных соединений. Полученное очищенное водное извлечение суммы полифенольных соединений делят на две равные порции, одну выпаривают досуха и получают сумму полифенольных соединений - фракцию 1. Вторую порцию последовательно обрабатывают растворителями: сначала эфиром с выделением фракции 2, затем - этилацетатом (фракция 3). После этого обрабатывают бутанолом с выделением фракции 4. На каждую экстракцию берут растворители в определенном количестве от объема водного извлечения. Время каждой экстракции составляет 5 мин, кратность - 5, отстаивание - 5 мин, затем растворители удаляют в вакууме до сухого остатка. Способ позволяет получить средство из амброзии полынно-листной, обладающее эффективным гепатопротекторным и гипохолестеринемическим действием. Однако данный способ получения суммарного препарата очень трудоемок по затратам времени и энергии, сочетается с расходом больших объемов токсичных и огнеопасных растворителей (эфир, этилацетат, бутанол). Применение операции упаривания также неблагоприятно сказывается на сохранении нативных свойств БАВ, присутствующих в растительном объекте.

Наиболее близким к заявляемому способу является способ получения средства, обладающего гепатопротективной активностью «Лохеин», путем экстракции высушенной надземной части солянки холмовой, измельченной до 3-10 мм, 25% спиртом этиловым при комнатной температуре методом перколяции в батарее из 6 перколяторов при соотношении сырье : готовый продукт 1:2,6. Данный способ принят за прототип (пат. №2250777, опубл. 2004.11.10). Однако эффективность экстракции не позволяет в полном объеме перевести в препарат некоторые группы БАВ, обладающие высокой гепатопротективной активностью.

Задача изобретения - повышение эффективности способа.

Технический результат - повышение выхода различных групп БАВ - достигается путем последовательной обработки высушенной надземной части солянки холмовой, измельченной до 1-3 мм, сначала 70% спиртом этиловым, затем водой очищенной при комнатной температуре методом ступенчатого трехкратного противоточного экстрагирования при соотношении сырье : готовый продукт 1:2,6 на каждом этапе по 6 часов с последующим объединением извлечений. Применение двух экстрагентов позволяет более полно извлечь все биологически активные вещества надземной части солянки холмовой (водорастворимый комплекс БАВ, флавоноиды и др.)

Пример 1 (прототип). Высушенную надземную часть солянки холмовой измельчают до 3-10 мм и экстрагируют 25% этиловым спиртом методом многоступенчатой противоточной экстракции на батарее из 6 перколяторов. Время настаивания - 6 часов. Первый слив готового продукта проводят через 36 часов в объеме, соответствующем количеству, в 2,6 раз превышающему массу сырья, загруженному в 1 перколятор (1:2,6). После отстаивания при 7-8°С в течение 2 суток экстракт подвергают фильтрации. Из 390 г (по 65 г на каждую степень экстракции) сухой травы получают 1014 мл жидкого экстракта с содержанием экстрактивных веществ 3,69% (общий выход 37,42 г), что соответствует 233 терапевтическим дозам.

Пример 2 (предлагаемый способ). Высушенную надземную часть солянки холмовой измельчают до 1-3 мм и последовательно экстрагируют трехкратно в каждом перколяторе 70% спиртом этиловым, затем водой очищенной. Время настаивания - 6 часов. Первичное спиртовое и вторичное водное извлечения на каждом этапе собирают в количестве, в 2,6 раза превышающем массу сырья, загруженную в 1 перколятор (1:2,6), и только из «головных» для каждого экстрагента перколяторов.

Согласно схеме (см. чертеж) первый слив готового продукта (ГП) (первичное спиртовое извлечение) проводят через 18 часов в объеме, соответствующем количеству, в 2,6 раза превышающему массу сырья, загруженному в 1 перколятор (1:2,6). На этой же стадии в этанольную батарею вводят в работу 4-й запасной перколятор, параллельно формируют «водную» батарею: на сырье в 1-ом перколяторе, освобожденное от этанольного извлечения, подают воду очищенную.

Через 6 часов (5-ая стадия) с 4-ого перколятора проводят второй слив спиртового готового продукта, вводят в работу 5-й запасной, сырье в котором обрабатывают извлечением из 4-го, а 2-й переводят в «водную» батарею.

На 6-й стадии с 5-ого перколятора сливают третью порцию этанольного готового продукта, вводят в работу 6-й запасной, где сырье обрабатывают извлечением из 5-го, а 3-й включают в «водную» батарею.

На 7-й стадии из 6-ого перколятора получают готовый продукт (этанольную батарею переводят в остановочный период). На этой же стадии с 3-го перколятора проводят первый слив готового продукта из «водной» батареи (вторичное водное извлечение) в объеме, соответствующем количеству, в 2,6 раза превышающему массу сырья, загруженному в 1 перколятор (1:2,6).

После этого 4-й перколятор переводят из этанольной батареи в «водную», 1-й перколятор из батареи исключают и отправляют на перезагрузку. Далее по схеме.

Первичное спиртовое и вторичное водное извлечения объединяют, отстаивают в течение 3-х суток при температуре 7-8°С и подвергают фильтрации. Из 390 г сухого сырья получают 2028 мл жидкого экстракта с содержанием экстрактивных веществ 1,86% (общий выход 37,72 г), что соответствует 235 терапевтическим дозам.

Комплексный анализ качества готового продукта, полученного методом-прототипом и предлагаемым способом при одинаковом расходе сырья, показывает, что оба метода в равной степени истощают сырье по экстрактивным веществами (ЭВ) (не менее 90%). Метод-прототип и предлагаемый способ экстракции статистически равнозначно обеспечивают извлечение глицинбетаина (ГБ): не менее 80% от их количества в сырье (табл.1).

Содержание флавоноидов в экстракте, полученном предлагаемым способом, в 2,3 раза превышает соответствующий показатель экстракта, изготовленного методом-прототипом, обеспечивающим выход флавоноидов не более 30%. Доброкачественность экстракта по флавоноидам, свидетельствующая об удельном содержании последних в общей массе экстрактивных веществ, вдвое выше у продукта, полученного предлагаемым методом. Метод перколяции с использованием 25% спирта этилового, обеспечивая близкий с предлагаемым способом выход общей массы товарного продукта (суммы экстрактивных веществ), не позволяет получить экстракт со столь же высоким содержанием флавоноидов и соответствующим уровнем доброкачественности по этой группе БАВ.

Терапевтическая адекватность продукта, полученного по новой технологии, подтверждена экспериментально. При остром поражении печени тетрахлорметаном экстракт, полученный предлагаемым способом, эффективнее продукта, изготовленного по методу-прототипу, снижал общую токсичность тетрахлорметана, тормозил образование продуктов липопероксидации, способствовал восстановлению основных функций печени. У экстракта, полученного предлагаемым методом экстрагирования, выявлено наличие желчегонной активности, отсутствующее у продукта, получаемого с использованием 25% спирта этилового (табл.2).

Таким образом, предлагаемый способ получения экстракта из надземной части солянки холмовой является более эффективным, так как позволяет при сохранении водорастворимого комплекса БАВ обогатить извлечение фенольными соединениями, обладающими высокой гепатопротективной и желчегонной активностью и, как следствие, усилить терапевтическое действие и повысить фармакотерапевтическую активность препарата при патологии печени.

Таблица 1 - Выбор метода получения средства, обладающего гепатопротективной активностью (М±m) Показатель Метод-прототип Предлагаемый метод Первичное спиртовое извлечение Вторичное водное извлечение Объединенное извлечение Масса обработанного сырья, г 390,0 390,0 390,0 390,0 Объем полученного извлечения, мл 1014 1014 1014 2028 Соотношение компонентов 1:2,6 1:2,6 1:2,6 1:5,2 Время экстрагирования, ч 6 6 6 6 Концентрация этанола в экстракте, % 22,7±0,9 68,2±0,5 36,9±0,5 57,5±1,5 Сумма ЭВ* в 100 г сырья, г 10,05±0,09 7,41±0,44 2,95±0,29 10,21±0,09 Сумма ЭВ в экстракте, % 3,69±0,05 2,58±0,32 1,13±0,02 1,86±0,02 Сумма ЭВ в экстракте на 100 г сырья, г 9,59±0,07 6,71±0,23 2,94±0,02 9,65±0,78 Истощаемость сырья по ЭВ, % 95,4±0,5 90,3±1,Г 99,3±0,2 94,7±1,4 Сумма флавоноидов в 100 г сырья, г 0,472±0,02 Сумма флавоноидов в экстракте, % 0,054±0,001 0,085±0,001 0,022±0,004 0,058±0,002 Сумма флавоноидов в экстракте на 100 г сырья, г 0,14±0,02 0,22±0,04 0,55±0,03 0,31±0,02¹ Истощаемость сырья по флавоноидам, % 29,7±1,5 50,2±2,9 11,5±1,3 66,0±2,9¹ Доброкачественность экстракта (Σ флавоноидов к Σ ЭВ) 1,4±0,2 3,3±0,1 1,86±0,1 3,2±0,2 Сумма ГБ* в 100 г сырья, г 0,74±0,05 Сумма ГБ в экстракте, % 6,72±0,55 7,78±0,5 3,68±0,1 6,52±0,6 Сумма ГБ в экстракте на 100 г сырья, г 0,64±0,06 0,53±0,04 0,11±0,01 0,64±0,08 Истощаемость сырья по ГБ, % 87,2±4,3 70,5±0,8 H,58±U 85,2±4,2 Доброкачественность экстракта (Σ ГБ к Σ ЭВ) 6,7±0,3 7,7±0,4 3,7±0,1 6,6±0,3 Примечание к табл.1 - Различия достоверны (р<0,05)¹ - по сравнению с методом-прототипом.
* - ЭВ - экстрактивные вещества; ГБ - глицинбетаин.

Таблица 2 - Сравнительная оценка фармакологической эффективности предлагаемого способа в сравнении с методом-прототипом (М±m, n=8-10) Показатели Интактные животные Гепатит Предлагаемый способ Метод-прототип +гепатит Щелочная фосфатаза, мкмоль/л-ч 4,2±0,1 15,6±0,2¹ 4,5±0,2 ^2,3 4,9±0,1 ² Основания Шиффа, Е/мг липидов 2,9±0,4 6,8±0,7^l 3,3±0,2 ²'³ 3,9±0,3 ² МДА аскорбат-зависимый, нмоль/мг белка·мин 0,36±0,08 2,90±0,12¹ 0,84±0,12 ²'³ 1,24±0,16 ² Общее количество желчи за 4 часа, мл/кг 16,2±2,4 8,8±0,5¹ 15,6±1,6²'³ 10,1±1,7 Скорость секреции желчи, мл/кг·ч 3,8±0,4 2,3±0,1¹ 3,7±0,6 ²'³ 2,5±0,4 Примечание к табл.2 - Различия достоверны (р<0,05) по сравнению с¹ - интактными животными;² - гепатитом;³ - методом-прототипом.

Изобретение относится к медицине и к химико-фармацевтической промышленности. Экстракцию предварительно измельченной до 1-3 мм надземной части солянки холмовой проводят этиловым спиртом методом перколяции при соотношении сырье : готовый продукт 1:2,6, при этом высушенную траву последовательно обрабатывают сначала 70% спиртом этиловым, затем водой очищенной методом ступенчатого трехкратного противоточного экстрагирования на каждом этапе по 6 ч с последующим объединением извлечений. Изобретение позволяет повысить извлечение биологически активных веществ. 2 табл., 1 ил.

Способ получения средства, обладающего гепатопротективной активностью, путем экстракции предварительно измельченной до 1-3 мм надземной части солянки холмовой этиловым спиртом методом перколяции при соотношении сырье: готовый продукт 1:2,6, отличающийся тем, что высушенную траву солянки холмовой последовательно обрабатывают сначала 70%-ным спиртом этиловым, затем водой очищенной методом ступенчатого трехкратного противоточного экстрагирования на каждом этапе по 6 ч с последующим объединением извлечений.