СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИКА, ШТАММ STREPTOCOCCUS SALIVARIUS SUBSP. THERMOPHILUS ВКПМ В-7984, ШТАММ STREPTOCOCCUS SALIVARIUS SUBSP. THERMOPHILUS ВКПМ В-7985, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИКА Российский патент 2005 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 A23C9/12 C12N1/20 C12R1/46 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности молочной промышленности, пищевой и медицинской промышленности, и может быть использовано при получении пробиотиков, предназначенных для непосредственного потребления или в качестве биологически активной добавки к продуктам питания, для нормализации полезной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека.

Преимущества пробиотиков по сравнению с кисломолочными продуктами, обладающими пробиотическими свойствами, заключаются в том, что они могут употребляться с различными продуктами питания как в обычных, так и в автономных условиях; удобны при транспортировке и могут доставляться в самые отдаленные уголки страны и одновременно пробиотики способствуют не только восстановлению аутофлоры, но и ряда жизненно важных функций организма человека.

Пробиотические культуры положительно влияют на здоровье человека [1, 2]. Тем не менее для усиления действия пробиотиков in vivo ученые предлагают использовать специальные вещества, которые активизируют действие пробиотических культур в организме человека [3] или композиции, включающие в своем составе микроорганизмы и их комбинации с пребиотиками или олигосахаридами [4, 5, 6].

Известен способ получения кисломолочного продукта, включающий нормализацию молока, внесение "Лактусана", витаминно-минеральной добавки, пастеризацию, гомогенизацию, охлаждение, заквашивание и сквашивание комплексной закваской, охлаждение, розлив и упаковывание продукта. Этот способ касается только получения определенного состава кисломолочного продукта, который имеет короткий срок хранения и осуществим в регионах, где имеется достаточное количество сырьевых ресурсов, в частности молока [7].

Известен способ получения пробиотика "Симбитер-2" и способ производства с его использованием кисломолочного продукта [8]. Способ получения пробиотика предусматривает совместное культивирование в молочной среде бифидобактерий разных видов, уксуснокислых бактерий и пропионовокислых бактерий, которые смешивают с предварительно полученным консорциумом молочнокислых бактерий в соотношении 4:1. Описывается способ получения кисломолочного продукта с пробиотиком "Симбитер-2" на основе молока или пахты, или смеси молока с пахтой, или смеси молока с молочной сывороткой или смеси пахты с сывороткой. Недостатком способа получения пробиотика является то, что при совместном культивировании разных видов бифидобактерий, отличающихся динамикой развития, не всегда можно гарантировать получение пробиотика стабильного качества, где будут представлены в достаточном количестве все используемые виды бифидобактерий. Применение данного пробиотика ограничивается только его использованием для получения кисломолочных продуктов определенного состава и имеющих короткий срок годности.

Наиболее близким к изобретению по совокупности существенных признаков является способ получения сухого бактериального препарата "Бифацид" [9], предусматривающий приготовление питательной среды, термическую обработку ее, охлаждение до температуры инкубирования, раздельное культивирование конкретных штаммов ацидофильных бактерий и бифидобактерий, смешивание их в равных соотношениях, сублимационное высушивание. Недостатком данного способа получения сухого бактериального препарата является использование питательных сред, наиболее благоприятных для накопления клеток конкретных штаммов ацидофильных бактерий и бифидобактерий и не содержащих ингредиентов, способствующих усилению пробиотического действия препарата в организме человека.

Сущность предлагаемого технического решения заключается в том, что в способе получения пробиотика, предусматривающем использование питательной среды на основе обезжиренного молока с повышенной массовой долей сухих веществ, лимоннокислым натрием и с добавлением ингредиентов, обеспечивающих не только получение биомассы с высоким количеством бактериальных клеток пробиотических культур, но и колонизацию применяемых микроорганизмов в кишечнике человека. При этом проводится раздельное культивирование разных видов пробиотических культур (Bifidobacterium adolescentis, Bif. longum, Bif. bifidum, Bif. infantis, Bif. breve, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. plantarum, L. bulgaricus и других), отвечающих современным требованиям для штаммов-пробиотиков, в рациональных условиях, но при их совместном развитии с нелизогенными штаммами Streptococcus salivarius subsp. thermophilus. В качестве нелизогенных культур используют специальные штаммы Streptococcus salivarius subsp. thermophilus, один из которых обладает высокой природной способностью к продуцированию фермента β-галактозидазы (штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ В-7985), а другой (штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ B-7984) - экзополисахаридов: глюкозы и галактозы. Совместное культивирование штаммов пробиотиков со штаммами термофильного молочнокислого стрептококка позволяет увеличивать количество жизнеспособных клеток в пробиотике (табл.1), накапливать биологически активные вещества (антибиотические вещества, молочную кислоту, уксусную кислоту и др.) и получать иммобилизованные клетки штаммов-пробиотиков за счет их прикрепления к полисахаридам.

Использование нелизогенных штаммов термофильного молочнокислого стрептококка снижает вероятность возникновения фаголиза в процессе ферментации питательной среды при получении пробиотика.

В способе применяется специально подобранный штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ В-7985, обладающий высокой природной способностью к продуцированию фермента β-галактозидазы.

Способность к продуцированию фермента β-галактозидазы оценивали по индивидуальному индексу лактозосбраживающей активности. Индекс лактозосбраживающей активности (Iл) определяли как отношение количества лактозы, сброженной конкретным штаммом (Л), к максимальному из выборки количеству сброженной лактозы (Л_мах):Iл=Л/Л_мах. Для получения пробиотика было рекомендовано применять штаммы термофильного молочнокислого стрептококка с индексом лактозосбраживающей активности не ниже 0,85.

Штаммы Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ В-7985 и Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ В-7984 характеризуются культурально-морфологическими, генетическими, физиолого-биохимическими признаками и технологическими свойствами.

Штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ В-7984 представляет собой грамположительные, факультативно-анаэробные, неспорообразующие, неподвижные, каталазоотрицательные кокки. Клетки располагаются парами (диплококки) и в виде цепочек разной длины. При выращивании в жидком гидролизованном молоке растет по всей высоте объема, а на стерильном обезжиренном молоке - образует равномерный по всему столбику молока молочный сгусток. На поверхности плотных питательных сред (гидролизованное молоко с агаром и сахарозой) образует мелкие колонии округлой формы с зернистой структурой, глубинные колонии имеют чечевицеобразную форму.

Содержание ГЦ в ДНК составляет 38,7 мол.%, что подтверждает его таксономическую принадлежность к роду Streptococcus. Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 не имеет плазмидной ДНК, что свидетельствует о его способности стабильно сохранять характерные для него признаки и свойства.

Оптимальная температура развития (37-42)°С, рН питательных сред - 7,2±0,2; не образует каталазу; сбраживает углеводы: лактозу, глюкозу, сахарозу. При сбраживании лактозы образует L(+) - молочную кислоту. Не сбраживает: мальтозу, маннит, салицин, сорбит, рамнозу, декстрин. Может развиваться на питательных средах в интервале рН 5,5-8,3; устойчив к 20% желчи и 2,0% NaCl; неустойчив к 0,1% метиленовой сини и щелочной реакции среды (рН 9,6); не восстанавливает лакмусовое молоко.

Активность сквашивания стерильного молока при внесении 3% штамма составляет 4,0-6,5 час, энергия кислотообразования через 5 ч культивирования в молоке - (60-65)°С, предел кислотообразования через 7 суток - (100±3,4)°С. Количество клеток на стерильном обезжиренном молоке в среднем составляет 9,1·10⁸-2,5·10⁹ в 1 см³; влагоудерживающая способность сгустка, образуемого в молоке, составляет (3,6±0,4) см³. При развитии в молоке нормального состава образует вязкий сгусток, имеющий слизистую консистенцию и обладающий чистым кисломолочным вкусом без посторонних привкусов и запахов. Продуцирует фермент β-галактозидазу: индекс лактозосбраживающей активности - 0,88 (табл.2).

Отличительной особенностью Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 является природная способность к продуцированию достаточно высокого количества экзополисахаридов (247-282) мг/дм³.

Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985 представляет собой грамположительные, факультативно-анаэробные, неспорообразующие, неподвижные, каталазоотрицательные кокки. Клетки располагаются парами (диплококки). При выращивании в жидком гидролизованном молоке растет по всей высоте объема, а на стерильном обезжиренном молоке - образует равномерный по всему столбику молока молочный сгусток с отделением на поверхности сыворотки. На поверхности плотных питательных сред (гидролизованное молоко с агаром и сахарозой) образует мелкие колонии округлой формы с зернистой структурой, глубинные колонии имеют чечевицеобразную форму.

Содержание ГЦ в ДНК составляет 39,9 мол.%, что подтверждает его таксономическую принадлежность к роду Streptococcus. Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985 не имеет плазмидной ДНК, что свидетельствует о его способности стабильно сохранять характерные для него признаки и свойства. Оптимальная температура развития (37-42)°С, рН питательных сред - 7,2±0,2; не образует каталазу и сбраживает углеводы: лактозу, глюкозу, сахарозу. При сбраживании лактозы образует L(+) - молочную кислоту. Может развиваться на питательных средах в интервале рН 6,0-8,3; устойчив к 20% желчи; неустойчив к NaCl, к щелочной реакции среды (рН 9,60), к 0,1% метиленовой сини и не восстанавливает лакмусовое молоко.

Активность сквашивания стерильного молока при внесении 3% штамма составляет 4,0-7,0 час, энергия кислотообразования через 5 ч культивирования в молоке - (70-75)°С, предел кислотообразования через 7 суток - (109±3,2)°С. Количество клеток на стерильном обезжиренном молоке в среднем составляет 5,0·10⁸-6,0·10⁸ в 1 см³; влагоудерживающая способность сгустка, образуемого в молоке, составляет (5,0±0,1) см³. При развитии в молоке нормального состава образует сгусток средней плотности с отделением сыворотки, обладающий чистым кисломолочным вкусом без посторонних привкусов и запахов. Продуцирует в малых количествах экзополисахариды (47-62) мг/дм³. Отличительной особенностью Streptococcus salivarius subsp. штамма ВКПМ В-7985 является природная способность к продуцированию достаточно высокого количества фермента β-галактозидазы: индивидуальный индекс лактозосбраживающей активности - 1,0 (табл.2).

Технический результат от реализации изобретения заключается в социальном эффекте, направленном на оздоровление населения, и который достигается путем увеличения арсенала пробиотических средств с улучшенными свойствами. Данная цель достигается за счет совместного использования пробиотических культур и специально отобранных природных штаммов: Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985, обладающего высокой способностью к продуцированию β-галактозидазы, и Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ В-7984, продуцирующего экзополисахариды, что увеличивает эпителиальную адгезию пробиотических культур и способствует восстановлению аутофлоры в организме реципиента.

Пример 1. В 1 дм³ обезжиренного молока с массовой долей сухих веществ 12% и с 0,75% лимоннокислого натрия вносят 4 см³ сиропа "Лактусан", перемешивают и стерилизуют при температуре 112°С в течение 20 мин, охлаждают до температуры 38°С и вносят 100 см³ 5%-ного стерильного раствора витамина С и перемешивают. Приготовленную среду переносят в ферментер, в который вносят 40 см³ активизированной культуры Bifidobacterium adolescentis, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985. После чего начинают процесс наращивания биомассы бактерий, осуществляемый при температуре 37°С, до наступления стационарной фазы развития штамма-пробиотика, корректируют рН 5%-ным раствором аммиака до 6,0. Затем в случае использования биомассы в жидком виде ее разливают в стерильные флаконы, герметически укупоривают и маркируют. Для получения биомассы в сухом виде ее смешивают с защитной средой (сахарозо-желатиновая), разливают во флаконы или на лотки и сушат методом сублимации. После сушки флаконы стерильно укупоривают; массу, высушенную на лотках, расфасовывают в пакеты. Хранят жидкий готовый пробиотик при температуре 4°С не более 30 суток, а сухой при температуре минус 18°С не более 6 месяцев.

Пример 2. В 2 дм³ обезжиренного молока с массовой долей сухих веществ 13% и с 0,75% лимоннокислого натрия вносят 10 см³ сиропа "Лактусан", перемешивают и стерилизуют при температуре 112°С в течение 20 мин, охлаждают до температуры 38°С и вносят 200 см³ 5%-ного стерильного раствора витамина С и перемешивают. Приготовленную среду переносят в равных количествах в два ферментера, в один из которых вносят 40 см³ активизированной культуры Bifidobacterium bifidum, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; в другой - 30 см³ Lactobacillus acidophilus, 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985. После чего начинают процесс наращивания биомассы бактерий, осуществляемый при температуре 37°С, до наступления стационарной фазы развития штамма-пробиотика, корректируют рН 5%-ным раствором аммиака до 6,0. Затем готовую биомассу из первого ферментера вносят в готовую биомассу во втором ферментере, получая полипробиотик, перемешивают, разливают в стерильные флаконы, герметически укупоривают и маркируют. Для получения биомассы в сухом виде ее смешивают с защитной средой (сахарозо-желатиновая), разливают во флаконы или на лотки и сушат методом сублимации. После сушки флаконы стерильно укупоривают; массу, высушенную на лотках, расфасовывают в пакеты. Хранят жидкий готовый пробиотик при температуре 4°С не более 30 суток, а сухой при температуре минус 18°С не более 6 месяцев.

Пример 3. В 3 дм³ обезжиренного молока с массовой долей сухих веществ 14% и с 0,75% лимоннокислого натрия вносят 15 см³ сиропа "Лактусан", перемешивают и стерилизуют при температуре 112°С в течение 20 мин, охлаждают до температуры 38°С и вносят 300 см³ 5%-ного стерильного раствора витамина С и перемешивают. Приготовленную среду переносят в равных количествах в три ферментера, в один из которых вносят 30 см³ активизированной культуры Lactobacillus acidophilus, 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; во второй - 40 см³ Lactobacillus casei, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; в третий - 40 см³ Lactobacillus plantarum, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985. После чего начинают процесс наращивания биомассы бактерий, осуществляемый при температуре 37°С, до наступления стационарной фазы развития штамма-пробиотика, корректируют рН 5%-ным раствором аммиака до 6,0. Затем, готовую биомассу из первого ферментера смешивают в стерильных условиях с готовой биомассой из второго и третьего ферментеров в равных количествах, получая полипробиотик, перемешивают, разливают в стерильные флаконы, герметически укупоривают и маркируют. Для получения биомассы в сухом виде ее смешивают с защитной средой (сахарозо-желатиновая), разливают во флаконы или на лотки и сушат методом сублимации. После сушки флаконы стерильно укупоривают; массу, высушенную на лотках, расфасовывают в пакеты. Хранят жидкий готовый пробиотик при температуре 4°С не более 30 суток, а сухой при температуре минус 18°С не более 6 месяцев.

Пример 4. В 4 дм³ обезжиренного молока с массовой долей сухих веществ 14% и с 0,75% лимоннокислого натрия вносят 20 см³ сиропа "Лактусан", перемешивают и стерилизуют при температуре 112°С в течение 20 мин, охлаждают до температуры 38°С и вносят 400 см³ 5%-ного стерильного раствора витамина С и перемешивают. Приготовленную среду переносят в равных количествах в четыре ферментера, в один из которых вносят 30 см³ активизированной культуры Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; во второй - 40 см³ Bifidobacterium adolescentis, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; в третий - 40 см³ Lactobacillus casei, 5 см³ Str. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; в четвертый - 40 см³ Bifidobacterium breve, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985. После чего начинают процесс наращивания биомассы бактерий, осуществляемый при температуре 37°С, до наступления стационарной фазы развития штамма-пробиотика, корректируют рН 5%-ным раствором аммиака до 6,0. Затем готовую биомассу из первого ферментера смешивают в стерильных условиях с готовой биомассой из второго, третьего и четвертого ферментеров в равных количествах, получая полипробиотик, перемешивают, разливают в стерильные флаконы, герметически укупоривают и маркируют. Для получения биомассы в сухом виде ее смешивают с защитной средой (сахарозо-желатиновая), разливают во флаконы или на лотки и сушат методом сублимации. После сушки флаконы стерильно укупоривают; массу, высушенную на лотках, расфасовывают в пакеты. Хранят жидкий готовый пробиотик при температуре 4°С не более 30 суток, а сухой при температуре минус 18°С не более 6 месяцев.

Пример 5. В 5 дм³ обезжиренного молока с массовой долей сухих веществ 12% и с 0,75% лимоннокислого натрия вносят 20 см³ сиропа "Лактусан", перемешивают и стерилизуют при температуре 112°С в течение 20 мин, охлаждают до температуры 38°С и вносят 500 см³ 5%-ного стерильного раствора витамина С и перемешивают. Приготовленную среду переносят в равных количествах в пять ферментеров, в один из которых вносят 30 см³ активизированной культуры Lactobacillus acidophilus, 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; во второй - 30 см³ Lactobacillus delbmeckii subsp. bulgaricus, 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 10 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; в третий - 40 см³ Lactobacillus plantarum, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; в четвертый - Bifidobacterium bifidum, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985; в пятый - Bifidobacterium infantis, 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7984 и 5 см³ Streptococcus salivarius subsp. thermophilus штамм ВКПМ В-7985. После чего начинают процесс наращивания биомассы бактерий, осуществляемый при температуре 37°С, до наступления стационарной фазы развития штамма-пробиотика, корректируют рН 5%-ным раствором аммиака до 6,0. Затем готовую биомассу из первого ферментера смешивают в стерильных условиях с готовой биомассой из второго, третьего, четвертого и пятого ферментеров в равных количествах, получая полипробиотик, перемешивают, разливают в стерильные флаконы, герметически укупоривают и маркируют. Для получения биомассы в сухом виде ее смешивают с защитной средой (сахарозо-желатиновая), разливают во флаконы или на лотки и сушат методом сублимации. После сушки флаконы стерильно укупоривают; массу, высушенную на лотках, расфасовывают в пакеты. Хранят жидкий готовый пробиотик при температуре 4°С не более 30 суток, а сухой при температуре минус 18°С не более 6 месяцев.

Литература

1. Патент 5589168 США, А 23 С 009/12, C 12 R 001/46 Probiotic / Alien; William D.; Linggood; Margaret А. - Заявл. 02.09.1994; опубл. 31.12.1996.

2. Ганина В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнолоогии: монография. М.: МГУПБ, 2001, - 169 с.

3. Патент 5728691 США, А 61 К 035/74, А 23 С 009/12 Quinolonylcarboxamidocephalosporin derivatives and pharmaceutical compositions containing them /Corpi Constantino, Miguel Angel. - заявл. 07.10.1994; опубл. 22.08.1996.

4. Патент СА 2199140, С 12 N 1/00, С 12 N 11/04, C 12 N 1/16 Probiotic composition / Deeth Williams Wall LLP. - Заявл. 18.09.1995; опубл. 26.03.1998.

5. Патент СА 2347891, A 23 L 1/03, A 23 L 1/303. А 61 К 35/74 Composition comprising micronutrients in combination with prebiotics, probiotics, and/or synbiotics, /Ziotkin, Stanley Н. -Заявл. 26.08.1999; опубл. 08.03.2001.

6. Патент СА 2353544, США, МКИ5 А 23 С 009/12 Preparation that contains oligosaccharides and probiotics, - опубл. 13.06.2001.

7. Патент №2157639 РФ, А 23 С 9/12 Способ производства кисломолочного продукта / Ганина В.И., Калинина Л.В., Шалыгина A.M. и др. - Заявл. 22.06.1999; опубл. 20.10.2000. Бюл. №29.

8. Патент №97108832 UA, С 12 N 1/20; А 23 С 9/12 Способ получения пробиотика "Симбитер-2" и способ производства с его использованием кисломолочного продукта / Янковский Д.С., Дымент Г.С., Потребчук Е.П., Товкачевская Л.Д. - Заявл. 09.06. 1996; опубл. 27.04. 1999.

9. Патент №2083666 РФ, С 12 N 1/20, А 23 С 9/12 Способ получения сухого бактериального препарата "Бифацид" / Ганина В.И., Семенихина В.Ф., Иноземцева В.Ф. и др. - Заявл. 27.07.1995; опубл. 10.07.1997. Бюл. №19 (прототип).

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к пищевой, молочной и медицинской промышленности, и может быть использовано при получении пробиотиков. Способ предусматривает подготовку питательной среды, стерилизацию ее и охлаждение. В подготовленной питательной среде проводят культивирование штамма пробиотика совместно с двумя нелизогенными штаммами термофильного стрептококка в соотношении 4:1 и 3:2 соответственно. Наращивание биомассы каждого штамма пробиотика Штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ В-7984 или Штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ В-7985 ведут отдельно друг от друга. Смешивают их в равных количествах, расфасовывают, сушат и упаковывают. Изобретение позволяет увеличить арсенал пробиотических средств с улучшенными свойствами. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Способ получения пробиотика, включающий подготовку питательной среды, содержащей обезжиренное молоко с заданным содержанием сухих веществ, лимоннокислый натрий - 0,75 мас.%, стерилизацию, охлаждение, раздельное культивирование штамма пробиотика - лактобацилл и бифидобактерий с накоплением биомассы, расфасовку и сублимационную сушку, упаковку, отличающийся тем, что осуществляют культивирование лактобацилл и/или бифидобактерий совместно со штаммами Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ B-7984 и Streptococcus salivarius subsp. thermophilus B-7985 в соотношении соответственно 4:1 или 3:2 и смешивание накопленной биомассы в равных количествах, при этом в питательную среду дополнительно вносят сироп "Лактусан" в количестве 0,3-0,6 мас.%, а после охлаждения среды в нее вносят витамин С в количестве 0,4-0,6 мас.%.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что питательная среда содержит обезжиренное молоко с содержанием сухих веществ 12-14 мас.%.3. Штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ B-7984, используемый для получения пробиотика.4. Штамм Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ВКПМ B-7985, используемый для получения пробиотика.