СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ПОРАЖЕНИЯ РОГОВИЦЫ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/48 G01N33/487 

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии и клинической биохимии.

Известен способ диагностики поражений роговицы, заключающийся в нанесении раствора флюоресцеина на роговицу и определении степени и тяжести ее поражения по сопоставлению цвета и оттенка сорбированного флюоресцеина с опорными шкалами цветов, и при окраске, соответствующей пигменту марганцовая голубая и кадмий желтый светлый 1:1, диагностируют отсутствие некротических масс, при окраске, соответствующей пигменту кадмий лимонный чистый, наличие гнойно-некротических масс, а при окраске, соответствующей пигменту марганцовая голубая и кадмий желтый светлый 16:1 и 12:1 - отторжение (А.С. №1143418 SU, МПК 4 А 61 F 9/00. Способ диагностики поражений роговицы. Рогова Н.А., Бадалова Е.Ю. / Ставр. гос. мед. ин-т. - 07.03.1985, бюл. №9).

Данный способ позволяет сделать вывод о наличии или отсутствии поражения роговицы и его стадии, однако, являясь полуколичественным, он не обладает высокой точностью, субъетивен и зависим от многих внешних факторов. Кроме того, этот способ позволяет диагностировать только механическое нарушение целостности роговицы, протяженность повреждения и наличие некротических масс, не учитывая глубинных метаболических нарушений.

Задачей изобретения является повышение точности определения степени поражения роговицы путем получения количественных эквивалентов глубины поражения роговицы с учетом метаболических нарушений на регионарном уровне.

Это достигается за счет того, что берут пробу слезы из нижнего конъюнктивального свода с помощью микрокапилляра и у обследуемых лиц определяют коэффициент К по формуле:

где МДА - содержание малонового диальдегида в мкмоль/л в слезе пациента с поражением роговицы,

СОД - активность Cu²⁺, Zn²⁺ супероксиддисмутазы в Ед/л в слезе пациента с поражением роговицы,

- средняя величина соотношения у 17 здоровых людей, что отражено в таблице (размерность получена при сокращении ),

и при значениях К ниже определяют отсутствие поражения роговицы,

при К от до определяют степень поражения роговицы как легкую,

при К от до - как среднюю,

при К и выше - как тяжелую.

При повреждении роговицы, входящие в состав ее клеток соединения поступают в слезу. В качестве модели мы избрали 3 дозированные микрохирургические операции, при которых объем хирургического вмешательства ограничен геометрически, в том числе с помощью компьютера, определенными зонами роговицы. Все операции относятся к кераторефракционным и направлены на коррекцию различных аномалий рефракции (миопия, гиперметропия), а также астигматизма: радиальная кератотомия (РК), лазерный интрастромальный кератомилез (LASIK) и фоторефрактивная кератэктомия (ФРК). На основании клинического опыта и анализа данных литературы, в качестве модели легкой степени поражения роговицы приняли данные пациентов с типичным неосложненным течением послеоперационного периода после Lasik, в качестве модели средней степени тяжести - после РК, тяжелой степени - после ФРК. За нормальное значение коэффициента приняли данные пациентов с интактной роговицей и отсутствием соматической и офтальмологической патологии.

Так как в основе многих видов патологии, в том числе патологии роговицы, лежит активация свободнорадикального окисления (СРО) и снижение емкости антиоксидантной системы (АОС), для оценки глубины поражения роговицы избрали определение в слезе важных показателей интенсивности СРО - содержания малонового диальдегида (МДА) и емкости АОС - активности супероксиддисмутазы (СОД).

Пробу слезы получают из нижнего конъюнктивального свода с помощью микрокалилляра во избежание повреждения эпителия роговицы.

На основании обследований 17 здоровых людей без поражения роговицы и 46 пациентов с миопией были выделены 4 группы. Каждая клиническая группа отличалась определенной картиной поражения роговицы и для каждой был определен коэффициент К по предлагаемой формуле.

Способ осуществляется следующим образом:

Проводят биохимическое исследование нестимулированной слезы, полученной из нижнего конъюнктивального свода с помощью микрокапилляра, определяя коэффициент К по формуле:

где МДА - содержание малонового диальдегида в мкмоль/л в слезе пациента, определяемое, например, в реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК);

СОД - активность Cu²⁺, Zn²⁺ супероксиддисмутазы в Ед/л в слезе пациента, определяемая, например, в реакции с ксантиноксидазой и тетранитротетразолиевым синим (ТНТС);

- средняя величина соотношения у 17 здоровых людей, что отражено в таблице (размерность получена при сокращении ),

и при значениях К ниже определяют отсутствие поражения роговицы,

при К от до определяют степень поражения роговицы как легкую,

при К от до - как среднюю,

при К и выше - как тяжелую.

В таблице показано, что применение коэффициента, отражающего соотношение двух показателей, изменяющихся в противоположных направлениях, более достоверно, чем каждого из них в отдельности.

Таким образом, предложен новый неинвазивный способ определения степени поражения роговицы по соотношению уровней МДА и СОД в слезе при хирургической травме, который можно использовать при оценке тяжести бытовой и производственной травмы роговицы, при вирусном, бактериальном или ином генезе поражения роговицы.

Клинический пример №1

Мужчина, 20 лет без офтальмопатологии, в слезе содержание МДА - 1,4 мкмоль/л, активность СОД - 26,4 Ед/л,

, что свидетельствует об отсутствии поражения роговицы.

Клинический пример №2

Больная К.И. (амбулаторная карта №690644), 28 лет, OD: миопия средней степени, 11 дней после операции Lasik, проведено биохимическое исследование нестимулированной слезы, взятой микрокапилляром из нижнего конъюнктивального свода, определили содержание МДА - 1,9 мкмоль/л, активность СОД - 23,8 Ед/л, по предлагаемой формуле определили коэффициент К:

, что соответствует легкой степени поражения роговицы.

Клинический пример №3

Больной Ф. (амбулаторная карта №664550), 19 лет, OS: миопия средней степени, 16 дней после операции радиальная кератотомия, проведено биохимическое исследование нестимулированной слезы, взятой микрокапилляром из нижнего конъюнктивального свода, определили содержание МДА - 1,9 мкмоль/л, активность СОД - 20,3 Ед/л, по предлагаемой формуле определили коэффициент К:

, что соответствует средней степени поражения роговицы

Клинический пример №4

Больной К. (амбулаторная карта №690972), 20 лет, OD: миопия высокой степени, 13 дней после операции ФРК, проведено биохимическое исследование нестимулированной слезы, взятой микрокапилляром из нижнего конъюнктивального свода, определили содержание МДА - 2,5 мкмоль/л, активность СОД - 17,2 Ед/л, по предлагаемой формуле определили коэффициент К:

, что соответствует тяжелой степени поражения роговицы.

Таблица.
Изменение содержания МДА (мкмоль/л), активности СОД (Ед/л) в слезе, отношения (М±m), коэффициента и степени поражения роговицы у пациентов с миопией после операции LASIK, РК и ФРК№ группы и ее характеристикаnВозраст (годы) M±mДни после операции М±mСодержание МДААктивность СОДКоэффициент КСтепень поражения роговицыМ±mВ % к контролюM±mВ % к контролюM±mВ % к контролю1.Здоровые лица (контроль)1723,3±1,0 1,39±0,6810025,8±0,510054,0±2,01000Отсутствие поражениядостоверность отличия 1 и 2 групп   р>0,5 р<0,01 р<0,001   2. Операция LASIK1020,9±1,313,8±0,51,88±0,9413522,7±0,88875,3±5,313921,3Легкаядостоверность отличия 2 и 3 групп   р>0,5 р<0,05 р<0,001   3. Операция РК1422,7±0,813,1±0,62,06±0,8414820,2±0,5578101,7±2,518847,7Средняядостоверность отличия 3 и 4 групп   р>0,5 р<0,01 р<0,001   4. Операция ФРК1522,7±0,712,1±0,62,18±0,6315717,4±0,2867121,0±5,022467,0Тяжелая

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для определения степени поражения роговицы при оценке тяжести хирургической, бытовой и производственной травмы, а также при вирусном, бактериальном и ином генезе поражения. Сущность изобретения состоит в том, что в пробе нестимулированной слезы рассчитывают соотношение содержания малонового диальдегида в мкмоль/л к активности Cu²⁺, Zn²⁺ супероксиддисмутазы в Ед/л в слезе пациента, и рассчитывают коэффициент К по предлагаемой формуле, по значению которого определяют степень поражения роговицы. Техническим результатом является повышение точности определения степени поражения роговицы с учетом метаболических нарушений на регионарном уровне. 1 табл.

Способ определения степени поражения роговицы путем биохимического исследования нестимулированной слезы, отличающийся тем, что у пациентов пробу слезы берут из нижнего конъюнктивального свода с помощью микрокапилляра и определяют коэффициент К по формуле:

где

МДА - содержание малонового диальдегида в мкмоль/л в слезе пациента, определяемое в реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК);

СОД - активность Cu²⁺, Zn²⁺ супероксиддисмутазы в Ед/л в слезе пациента, определяемая в реакции с ксантиноксидазой и тетранитротетразолиевым синим (ТНТС);

- средняя величина соотношения у 17 здоровых людей,

и при значениях К ниже определяют отсутствие поражения роговицы,

при К от до определяют легкую степень поражения роговицы,

при К от до - определяют среднюю степень поражения роговицы,

при К и выше определяют тяжелую степень поражения роговицы.