ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ СОСТАВ, ОБЛАДАЮЩИЙ НООТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2006 года по МПК A61K36/71 A61K9/20 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается лекарственных средств, обладающих ноотропной активностью, получаемых из растительного сырья.

Наиболее близким к предлагаемому является ноотропное лекарственное средство растительного происхождения "Гинсана" (Pharmaton, Швейцария), получаемое из интродуцированного в Швейцарии корня белого женьшеня [1], не имеющего сырьевой базы на территории России.

Новая техническая задача - расширение арсенала способов получения лекарственных средств из отечественного растительного сырья, обладающих ноотропной активностью.

Поставленную задачу решают новым фармацевтическим составом, обладающим ноотропной активностью, содержащим действующее вещество и наполнители, причем, в качестве действующего вещества он содержит сгущенный экстракт княжика сибирского (Atragene speciosa Weinm.) при остаточной влажности 25% и наполнители при следующем соотношении мас.%:

Экстракт княжика густой20,02-21,24Молочный сахар53,54-56,86Микрокристаллическая целлюлоза13,39-14,21Полиплаздон XL-103,03-3,21Крахмал картофельный2,27-2,41Аэросил3,79-4,03Магния стеарат0,97-1,03

Также фармацевтический состав может быть выполнен в виде твердой лекарственной формы, также фармацевтический состав может быть выполнен в виде таблеток.

Лекарственное средство представляет собой таблетки плоскоцилиндрической формы с риской, кремового цвета с темными вкраплениями, специфическим запахом и вкусом.

Качественный и количественный состав таблеток определяют исходя из фармакологических (ноотропный эффект) и технологических (внешний вид, содержание действующих веществ, средняя масса, распадаемость, прочность на истирание и на излом, тест растворения) свойств предлагаемых вариантов таблеток.

Основным ингредиентом лекарственного средства является густой экстракт княжика, полученный методом реперколяции по Н.А.Чулкову [2].

Надземную измельченную часть княжика экстрагируют 25% этанолом в батарее из 5 перколяторов с интервалом слива через 1 сутки при соотношении сырье - жидкий экстракт (1:1). Полученный жидкий экстракт стандартизируют по сухому остатку, содержанию фенолоспиртов и тяжелых металлов.

Жидкий экстракт сгущают под вакуумом при температуре 50°С на роторном испарителе ИР-1М. Выход густого экстракта составляет 13,9±0,1%, содержание влаги до 25%. Проведенные исследования подтверждают то, что густой экстракт княжика проявляет выраженный ноотропный эффект в дозе 100 мг/кг (табл.4-6).

Вспомогательные вещества, применяемые для изготовления таблетируемой массы с экстрактом (молочный сахар, микрокристаллическая целлюлоза, полиплаздон XL-10, аэросил, магния стеарат) широко используют в качестве целевых добавок (вспомогательные вещества) химико-фармацевтической промышленности при производстве таблеток [2].

Технологический процесс получения таблеток состоит из следующих стадий:

1. Подготовка материала.

2. Смешение, гранулирование массы, сушка.

3. Таблетирование и оценка качества таблеток.

4. Фасовка и упаковка.

Во всех прописях количество крахмала, полиплаздона, аэросила и магния стеарата оставалось постоянным, а изменяли соотношение только лактозы и микрокристаллической целлюлозы.

Пример 1 (таблица 1).

1 стадия. Крахмал картофельный и магния стеарат просеивают через вибросито с капроновой тканью для сит №38 и №23 соответственно. Молочный сахар просеивают через сито с размером отверстия 0,5 мм - не должно быть остатка на сите.

2 стадия. В смеситель загружают просеянные молочный сахар, микрокристаллическую целлюлозу, полиплаздон, крахмал, аэросил, тщательно перемешивают и вводят подогретый густой экстракт княжика. Перемешивают до равномерного распределения экстракта в течение 15 мин. Однородную увлажненную массу сушат 20 мин при температуре 55°С. После сушки массу пропускают через гранулятор с отверстием сита 2 мм и опудривают магния стеаратом.

Взятое соотношение исходных ингредиентов (вспомогательных веществ) является оптимальным. Масса обладает хорошей сыпучестью, прессуемостью и точно дозируется.

3 стадия. Полученную массу таблетируют на таблеточной машине "Kilian" и таблетки стандартизируют. Таблетки распадаются за 8,0±0,4 мин, прочность на излом (прибор Erweka) составляет 105,8±1,69 Н, прочность на истираемость 99,49±0,51%.

Лекарственное средство обладает выраженной ноотропной активностью (табл.7-9).

4 стадия. Таблетки фасуют в контурные ячейковые упаковки по 10 штук.

Пример 2 (таблица 2).

Получение таблетируемой массы проводят, как в примере 1, но без использования микрокристаллической целлюлозы. Масса обладает хорошей сыпучестью и хорошо прессуется, но полученные из нее таблетки не удовлетворяют требованиям нормативной документации (НД) - не более 15 мин - по распадаемости (свыше 20 мин).

Пример 3 (таблица 3).

Получение таблеток проводят по технологической схеме, указанной в примере 1. Таблетируемая масса хорошо прессуется, обладает хорошей сыпучестью, но качество таблеток не удовлетворяет требованиям НД по распадаемости (17 мин).

При использовании молочного сахара без микрокристаллической целлюлозы (пример 2), а также в равных соотношениях 1:1 (пример 3) распадаемость таблеток составила от 20 до 17 мин соответственно. При введении в пропись таблеток микрокристаллической целлюлозы в количестве в четыре раза меньше, чем молочного сахара, распадаемость таблеток удовлетворяет требованиям НД и составляет 8,0±0,7 мин.

Определение подлинности экстрактов и таблеток проводят методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) по качественной реакции на фенолоспирты с ванилин-фосфорным реактивом. Фенолоспирты характерны для сырья княжика сибирского, которые переходят в экстракт и таблетки княжика ("Атрасинол"). Количественное определение фенолоспиртов проведено в унифицированном ряду сырье - жидкий и густой экстракты -таблетки "Атрасинол".

Пример 4 (таблицы 4-7).

Фармакологические исследования выполняли на мышах-самцах линии СВА массой тела 20-22 г. Все животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) были получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биологического моделирования Института фармакологии Томского научного центра СО РАМН.

Эксперименты проводят в осенне-зимний период. Работы в рамках экспериментальных методик выполняют с 10 ч утра и заканчивают к 15 ч. Животных содержат в виварии на обычном рационе кормления при свободном доступе к воде и пище (за исключением тех случаев, где иные условия оговариваются особо). Умерщвление животных осуществляли передозировкой эфирного наркоза.

Исследование влияния густого экстракта княжика сибирского на ориентировочно-исследовательское поведение оценивали на модели "открытое поле", изучали обучаемость условному рефлексу пассивного избегания у мышей, перенесших гипоксическую травму (табл.4, 5). Также для более точной оценки дополнительно выполняли исследования по влиянию препарата на течение иммобилизационного стресса (табл.6).

Ориентировочно-исследовательское поведение изучали в условиях модели "открытое поле", представляющей один из наиболее часто используемых методических приемов, применяемых для суждения о функциональном состоянии центральной нервной системы [3, 4]. Экспериментальная установка "открытое поле" представляет камеру размером 40×40×20 см с квадратным полом и стенками белого цвета. Ее пол, разделенный на 16 квадратов, имеет в каждом из них круглое отверстие диаметром 3 см. Сверху камера освещается электрической лампой накаливания мощностью 100 Вт, расположенной на высоте 1 м от пола. Мышь помещают в один из углов камеры и в течение 2 мин регистрируют количество перемещений с квадрата на квадрат (горизонтальная активность), количество вставаний на задние лапки (вертикальная активность), количество обследований отверстий (норковый рефлекс), количество умываний (груминг) и количество актов дефекации по количеству фекальных шариков (болюсов), вычисляют коэффициент асимметрии поведения в виде отношения количества горизонтальных перемещений к общей двигательной активности, выраженного в процентах.

Гипоксическую травму изучали в условиях гипоксии гермообъема. Для более детальной оценки влияния гипоксической травмы у мышей изучали не только выживаемость в условиях гипоксии, но и оценивали функциональное состояние центральной нервной системы по состоянию ориентировочно-исследовательского поведения и памяти по воспроизведению условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ), который вырабатывают непосредственно перед гипоксическим воздействием, как это описано ниже. Гипоксию гермообъема моделировали помещением мышей, предварительно отобранных по массе (г), в герметически закрываемую камеру объемом 250 мл. Мышей выдерживали до наступления судорожного припадка, после чего животных извлекали из камеры, давали отсидеться 1 ч и затем у них изучали ориентировочно-исследовательское поведение в "открытом поле". Методика условного рефлекса пассивного избегания [3, 5] основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства у грызунов. Экспериментальная установка представляет камеру, состоящую из двух отсеков - большого (светлого) и малого (темного). Животное помещают в светлый отсек и через некоторое время оно переходит в темный, после чего отверстие, соединяющее оба отсека, перекрывают дверкой и на пол темного отсека, представляющего собой решетку из параллельных чередующихся электродов, подают электрический ток импульсами продолжительностью 50 мс частотой 5 Гц и амплитудой 50 мА. Через 20 с дверку открывают и животное может выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животных вырабатывали условный рефлекс избегания темного пространства. Для выработки рефлекса животное помещали в угол камеры светлого отсека, противоположный от входа, и наблюдали в течение 3 мин. Регистрировали время первого захода в темный отсек (латентное время захода), суммарное время пребывания в темном отсеке, количество животных с выработанным рефлексом. Сохраненным рефлекс считали, если в течение 3 мин наблюдения животное ни разу не посетило темный отсек. Если латентное время захода превышало 150 с, это считалось признаком наличия рефлекса. Проверку наличия рефлекса осуществляли через 24 и 48 ч после гипоксического воздействия.

Иммобилизационный стресс создавали подвешиванием животных за шейную складку на 22 ч [6]. По истечении указанного времени мышей снимали и через 15 мин после стресса у них изучали ориентировочно-исследовательское поведение в "открытом поле", регистрируют эмоциональную реакцию по методу Brady и Nauta [7], определяли количество лейкоцитов в периферической крови, после чего животных забивали и определяли массу селезенки, тимуса, надпочечников, подсчитывали количество язв на слизистой оболочке желудка и рассчитывали весовые коэффициенты органов в пересчете на 20 г массы тела. Затем по методу Ю.И.Добрякова [6] определяли степень выраженности стресса в баллах. При оценке поведенческих показателей использовали балльную шкалу, аналогичную принятой в методе Ю.И.Добрякова в нашей модификации [8].

Препараты и экстракты вводили зондом в желудок в виде раствора или взвеси в воде очищенной 5-кратно в течение 5 дней (5-й раз за 1 ч до тестирования). В качестве препаратов сравнения использовали пирацетам ("Ноотропил", Chieh-Polfa Group) в дозе 400 мг/кг как эталонный препарат на ноотропную активность.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием параметрического критерия Фишера и непараметрического критерия Вилкоксона [9, 10].

Результаты исследования приведены в табл.4-7.

Как показывают данные в таблицах 4 и 5, густой экстракт княжика во всех дозах практически в равной мере улучшает указанные поведенческие показатели при регистрации через 1 ч после гипоксической травмы. При проверке через 24 ч после гипоксического воздействия густой экстракт княжика восстанавливает воспроизводимость рефлекса приблизительно в равной мере во всех исследованных дозах от 75 до 92%.

При проведении исследований по влиянию на поведение и состояние внутренних органов при остром иммобилизационном стрессе густой экстракт княжика положительно влиял на поведение животных, перенесших стресс. Это выражалось в активации поведения, нормализации изменений коэффициента асимметрии поведения и эмоциональной реакции, измененных стрессом. Отмечено также снижение лейкоцитоза и количества язв в желудке (табл.6). При этом эффект экстракта княжика превосходит по ноотропной активности (сохранность ориентирвочно-исследовательского поведения в открытом поле и условного рефлекса пассивного избегания после гипоксической травмы) эталонный препарат "Гинсана" и соответствует с незначительным преимуществом эффекту пирацетама. В условиях данной методики оптимальной является доза 100 мг/кг. Густой экстракт княжика и таблетки на его основе не отличаются по фармакологической активности.

Таким образом, густой экстракт княжика и таблетки на его основе (табл.7, 8) проявляют выраженный ноотропный эффект в дозе 100 мг/кг, которая включена в таблетки. Так как вспомогательные вещества, такие как аэросил, магния стеарат, нерастворимы в воде, то таблетки вводятся животным в виде суспензии, что не мешает всасыванию действующих веществ в желудочно-кишечном тракте.

Литература

1. Chinna С. Current clinical aspects of ginseng research // Osterreichische Apoteker - Zeitung. - 1992. - В.19, №46. - S.377-381.

2. Иванова А.А. Технология лекарственных форм. - М.: Медицина, 1991. - 4.2. - С.134-220).

3. Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Я.Буреш, О.Бурешова, Дж.П.Хьюстон - М.: Высшая школа, 1991. - 398 с.

4. Walsh R.N. The open - field test: a critical review / R.N.Walsh, R.A.Cummins // Psychol. Bull. - 1976. - V.83. - P.482-504.

5. Методические рекомендации по скринингу и доклиническому испытанию антигипоксических средств Мин. Здравоохранения СССР. - М.: 1989. - 20 с.

6. Добряков Ю.И. Скрининговый метод оценки антистрессорного действия препаратов // Стресс и адаптация: Тез. Всесоюз. симпоз. - Кишинев, 1978. - С.172.

7. Brady J.V. Subcortical mechanisms in emotional behavioral effective changes following septal forebrain lesions in albino rat / J.V.Brady, W.J.H.Nauta // J. comparative and physiol. psychol. - 1953. - V.46, №3. - P.339-341.

8. Суслов Н.И. Патогенетическое обоснование психофармакологических эффектов препаратов природного происхождения. Дисс. докт. мед. наук. - Томск, 1995. - 406 с.

9. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Медицина, 1963. - С.81-147.

10. Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике. - М.: Наука, 1984. - 425 с.

Таблица 1Пропись 1Экстракта княжика густого (остаточная влажность 25%)0,066 г20,63%Вспомогательных веществ (молочный сахар, 55,20%микрокристаллическая целлюлоза, 13,80%полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магниядо 0,32 г10,37%стеарат)  Таблица 2Пропись 2Экстракта княжика густого (остаточная влажность 25%)0,066 г20,63%Вспомогательных веществ (молочный сахар, полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магния стеарат)до 0,32 г79,37%Таблица 3Пропись 3Экстракта княжика густого (остаточная влажность 25%)0,066 г20,63%Вспомогательных веществ (молочный сахар, 34,50%микрокристаллическая целлюлоза, 34,50%полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магния стеарат)До 0,32 г10,37%

Таблица 4
Влияние густого экстракта княжика сибирского в сравнении с пирацетамом на основные показатели ориентировочно-исследовательского поведения в "открытом поле" и сохранность условного рефлекса пассивного избегания у мышей после гипоксического воздействия (Х_ср±m; n=12)Группы наблюдения, дозаСуммарная двигательная активностьКоэффициент асимметрииДоля животных с наличием рефлексам, %1 час24 часа1 час24 часа24 часаИнтактный контроль35±451±444±350±6100Гипоксический54±3*60±2*90±4*85±4*25*контрольр<0,05р<0,05р<0,05р<0,05р<0,05Экстракт50±756±452±556±3^#75^#княжика, 20 мг/кг   р<0,05р<0,05Экстракт43±848±3^#52±4^#65±3^#92^#княжика, 100 мг/кг р<0,05р<0,05р<0,05р<0,05Экстракт38±449±557±5^#70±5^#82^#княжика, 500 мг/кг  р<0,05р<0,05р<0,05Экстракт42±619±4^#55±3^#49±4^#75^#княжика, 2000 мг/кг р<0,05р<0,05р<0,05р<0,05Гинсана42±643±4*59±4^#75±583,3^#100 мг/кг р<0,05р<0,05 р<0,05Пирацетам,42±657±4^#63±5^#47±3100^#400 мг/кг р<0,05р<0,05 р<0,05Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля;
# - различия достоверны в отношении гипоксического контроля.

Таблица 5
Влияние густого экстракта княжика сибирского в сравнении с пирацетамом на содержание лейкоцитов в периферической крови и процесс язвообразования в желудке у животных, перенесших иммобилизационный стресс (Х_ср±m; n=12)Группа наблюдения, дозаКоличество лейкоцитов, г/лКоличество язв в желудкеБаллыИнтактный контроль7,2±0,60°00Стрессовый14,5±1,9*2,0±0,3*24контрольр<0,001р<0,001 Экстракт7,5±1,6#0,9±0,2#13княжика, 20 мг/кгр<0,001р<0,01 Экстракт5,4±0,3#0,2±0,1#9княжика, 100 мг/кгр<0,001р<0,001 Экстракт8,0±1,0#0,5±0,3#11княжика, 500 мг/кгр<0,001р<0,05 Экстракт9,0±0,8#0,3±0,2#11княжика, 2000 мг/кгр<0,001р<0,001 Гинсана9,1±0,9^#0.4±0.2^#11100 мг/кгр<0,001р<0.001 Пирацетам,9,1±0,9#0,4±0,2#10400 мг/кгр<0,001р<0,001 Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля;
# - различия достоверны в отношении стрессового контроля

Таблица 6
Влияние таблеток княжика сибирского в сравнении с пирацетамом на основные показатели ориентировочно-исследовательского поведения в "открытом поле" и сохранность условного рефлекса пассивного избегания у мышей после гипоксического воздействия (Х_ср±m; n=12)Группа наблюдения, дозаСуммарная двигательная активностьКоэффициент асимметрииДоля животных с наличием рефлекса, %1 час24 часа1 час24 часа24 часаИнтактный контроль35±448±244±350±6100Гипоксический54±3*60±2*90±4*85±4*25*контрольр<0,05р<0,05р<0,05р<0,05р<0,05Таблетки50±544±452±5^#63±3^#90^#княжика, 640 мг/кг  р<0,05р<0,05р<0,05Экстракт43±848±3^#52±4^#65±3^#92^#княжика, 100 мг/кг р<0,05р<0,05р<0,05р<0,05Гинсана42±643±4*59±4^#75±583,3^#100 мг/кг р<0,05р<0,05 р<0,05Пирацетам,49±357±463±5^#47±3100^#<0,05400 мг/кг  р<0,05  Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля;
# - различия достоверны в отношении гипоксического контроля.

Таблица 7
Влияние таблеток княжика в сравнении с пирацетамом на содержание лейкоцитов в периферической крови и процесс язвообразования в желудке у животных, перенесших иммобилизационный стресс (Х_ср±m; n=12)Группа наблюдения, дозаКоличество лейкоцитов, г/лКоличество язв в желудкеБаллыИнтактный контроль7,2±0,60±00Стрессовый14,5±1,9*2,0±0,3*24контрольр<0,001р<0,001 Таблетки6,5±0,6^#0,2±0,2^#9княжика, 640 мг/кгр<0,001р<0,01 Экстракт5,4±0,3^#0,2±0,1^#9княжика, 100 мг/кгр<0,001р<0,001 Гинсана9,1±0,9#0.4±0.2#11100 мг/кгр<0,001р<0.001 Пирацетам,9,1±0,9^#0,4±0,2^#10400 мг/кгр<0,001р<0,001 Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля;
# - различия достоверны в отношении стрессового контроля

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и используется как ноотропное средство. Ноотропное средство, содержащее сгущенный экстракт княжика сибирского, полученный путем сгущения жидкого спиртового экстракта княжика сибирского под вакуумом при температуре 50°С до содержания влаги 25%, и наполнители, включающие молочный сахар, микрокристаллическую целлюлозу, полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магния стеарат, взятые в определенном соотношении. Средство обладает эффективным ноотропным действием. 1 з.п. ф-лы, 7 табл.

1. Ноотропное средство, содержащее экстракт княжика сибирского, отличающееся тем, что оно содержит сгущенный экстракт княжика сибирского, полученный путем сгущения жидкого спиртового экстракта княжика сибирского под вакуумом при температуре 50°С до содержания влаги 25%, и наполнители, включающие молочный сахар, микрокристаллическую целлюлозу, полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магния стеарат при следующем соотношении, мас.%:

Экстракт княжика сибирского сгущенный20,02-21,24Молочный сахар53,54-56,86Микрокристаллическая целлюлоза13,39-14,21Полиплаздон XL-103,03-3,21Крахмал картофельный2,27-2,41Аэросил3,79-4,03Магния стеарат0,97-1,03