СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ НООТРОПНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2015 года по МПК A61K36/73 A61P25/28 

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции заболеваний ЦНС, и касается лекарственных средств, обладающих ноотропным действием, получаемых из растительного сырья.

Лекарственные средства синтетического происхождения, применяемые в настоящее время для лечения этих заболеваний, имеют недостаточную терапевтическую эффективность и обладают рядом побочных эффектов, например повышенная раздражительность, беспокойство, нарушение сна; тремор, повышение сухожильных рефлексов, головокружение, а также диспептические расстройства, усиление коронарной недостаточности, повышение артериального давления, субфебрилитет, аллергические реакции, изменение картины крови и состояния внутренних органов, что ограничивает их применение, особенно в условиях непрекращающейся трудовой деятельности [1, 2]. Средства на основе растительного сырья могут сыграть существенную роль в решении этой проблемы.

Наиболее близким к предлагаемому решению является сухой экстракт корня шлемника байкальского Scutellaria baicalensis Georgi, обладающий ноотропным действием (прототип) [3].

Задачей данного изобретения является расширение арсенала средств защиты ЦНС, обладающих ноотропным действием, получаемых из растительного сырья.

Поставленную задачу решают применением в качестве средства, обладающего ноотропным действием, высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. в соотношении 1:1, а также их водных и водно-этанольных извлечений.

Новым является то, что впервые в качестве средства, обладающего ноотропным действием, используют высушенные измельченные надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. в соотношении 1:1, а также их водные и водно-этанольные извлечения.

В народной медицине надземную часть манжетки обыкновенной используют в качестве отхаркивающего, противовоспалительного, противодиабетического, диуретического, ангиопротекторного средства, а также для улучшения обмена веществ, при атеросклерозе, малокровии, кровотечениях и заболеваниях женской половой сферы [4]. В экспериментах показано лимфотропное [5], гиполипидемическое [5, 6], гипогликемическое, иммунокорригирующее [6], антиметастатическое действие [7] настоя и экстракта из травы манжетки сухой, гемореологическая активность спиртовой вытяжки, полифенольных соединений и флавоноидов из надземной части растения [8]. Кроме того, манжетка обыкновенная входит в состав средства для лечения бесплодия и сохранения беременности (заявка на патент РФ №94024627, МПК А61К 35/78, опубл. 1997 г.) и гомеопатического средства для лечения паразитарного холецистита, вызванного возбудителем «Opistorehis telineus» (патент РФ №2144372, МПК А61К 35/78, опубл. 2000 г.). В литературе отсутствуют данные о применении надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., а также водных и водно-этанольных извлечений из надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. в качестве средства, обладающего ноотропным действием.

Использование высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., а также водных и водно-этанольных извлечений из надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. по предлагаемому назначению стало возможным благодаря выявлению экспериментально их новых свойств, а именно способности нормализовать функции ЦНС за счет ноотропного действия.

Новое свойство обнаружено в результате проведенного экспериментального изучения ноотропного действия высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. в соотношении 1:1, а также их водных и водно-этанольных извлечений (25%, 40%, 70%, 95%), явным образом не вытекает из уровня техники в данной области и неочевидно для специалиста.

Ноотропное действие высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., а также водных и водно-этанольных извлечений (25%, 40%, 70%, 95%) из надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе.

Предлагаемое средство с успехом может быть использовано в практическом здравоохранении для коррекции заболеваний ЦНС.

Исходя из вышеизложенного, следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».

Изобретение будет понятно из следующего описания.

При проведении экспериментальных исследований использовали порошок высушенных и измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. (далее по тексту - ПМО), а также водных и водно-этанольных извлечений из надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. (далее по тексту - HMO, ОМО и ИМО), полученных следующими способами:

Пример 1: надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., высушенные воздушным способом, измельчают до мелкодисперсного порошка и смешивают в соотношении 1:1 (влажность 6%) (ПМО).

Пример 2: надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., высушенные воздушным способом, измельчают, смешивают в соотношении 1:1 и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 6%). 10,0 г измельченного сырья заливают 115 мл воды (1:10, с учетом коэффициента водопоглощения), нагревают на кипящей водяной бане 15 мин, процеживают горячим, отжимают сырье, после охлаждения доводят объем полученного отвара водой до 100 мл (НМО).

Пример 3: надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., высушенные воздушным способом, измельчают, смешивают в соотношении 1:1 и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 6%). 10,0 г измельченного сырья заливают 115 мл воды (1:10, с учетом коэффициента водопоглощения), нагревают на кипящей водяной бане 30 мин, процеживают горячим, отжимают сырье, после охлаждения доводят объем полученного отвара водой до 100 мл (ОМО).

Пример 4: надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., высушенные воздушным способом, измельчают, смешивают в соотношении 1:1 и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 6%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 700 мл воды очищенной и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (Водное ИМО).

Пример 5: надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., высушенные воздушным способом, измельчают, смешивают в соотношении 1:1 и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 6%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 700 мл 25% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ИМО на 25% этаноле).

Пример 6: надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., высушенные воздушным способом, измельчают, смешивают в соотношении 1:1 и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 6%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 700 мл 40% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ИМО на 40% этаноле).

Пример 7: надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., высушенные воздушным способом, измельчают, смешивают в соотношении 1:1 и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 6%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 700 мл 70% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ИМО на 70% этаноле).

Пример 8: надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., высушенные воздушным способом, измельчают, смешивают в соотношении 1:1 и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 6%). 50 г измельченного сырья помещают в колбу, заливают 700 мл 95% этанола и нагревают при температуре 80°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ИМО на 95% этаноле).

Фармакологические исследования выполнены на аутбредных мышах-самцах CD-I (I категории, согласно сертификату) массой 20-22 г. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга» (Томск). Эксперименты осуществляли в зимний период. Работы в рамках экспериментальных методик выполняли с 9 до 15 ч. Животных содержали в стандартных условиях вивария на обычном рационе кормления (за исключением тех случаев, где иные условия оговариваются особо) в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г. Страсбург, 1986).

Фармакологические эффекты высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. в соотношении 1:1, а также их водных и водно-этанольных извлечений, оценивали по влиянию на функциональное состояние ЦНС (ориентировочно-исследовательское поведение) на модели «открытое поле» [9], на обучение и память при выработке и воспроизведении условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) после гипоксического воздействия [10]. Гипоксическую травму моделировали в условиях методики гипоксии гермообъема. Животное помещали в герметически закрываемую камеру (объем 0,5 л), выдерживали до наступления атонального судорожного припадка, не допуская гибели. После этого животное извлекали из камеры и через 30 мин оценивали ориентировочно-исследовательское (эксплоративное) поведение в условиях теста «открытое поле», затем у животных вырабатывали УРПИ.

Высушенные измельченные надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., а также водные и водно-этанольные извлечения из надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L., препарат сравнения вводили животным курсом ежедневно в течение пяти дней однократно через зонд в желудок в виде раствора или взвеси в воде очищенной за 1 ч до тестирования. Высушенные надземную и подземную части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. измельчали до мелкодисперсного порошка и вводили в дозе 500 мг/кг. Доза настоя и отвара составила 5 мл/кг. Доза экстрактов составила 100 мг/кг. Данные дозы соответствуют количеству сырья (порошка манжетки) по содержанию экстрактивных веществ. Указанные дозы определены как наиболее активные в предварительных экспериментах. В качестве препарата сравнения (прототип) использовали сухой экстракт корня шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi) в дозе 50 мг/кг. Животные контрольных групп получали эквивалентное количество воды очищенной.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически. О достоверности различий судили методом проверки вероятности нулевой гипотезы с использованием t критерия Стьюдента и критерия Вилкоксона. Различия считали достоверными при р≤0,05.

Пример 9: ориентировочно-исследовательское поведение изучали в условиях модели «открытое поле», представляющей собой один из наиболее часто используемых методических приемов, применяемых для суждения о функциональном состоянии ЦНС [9]. Экспериментальная установка «открытое поле» представляет собой камеру размером 40×40×20 см с квадратным полом и стенками белого цвета. Ее пол, разделенный на 16 квадратов, имеет в каждом из них круглое отверстие диаметром 3 см. Сверху камера освещается электрической лампой накаливания мощностью 100 Вт, расположенной на высоте 1 м от пола. Мышь помещают в один из углов камеры и в течение 2 мин регистрируют количество перемещений с квадрата на квадрат (горизонтальная активность), количество вставаний на задние лапки (вертикальная активность), количество обследований отверстий (норковый рефлекс), количество умываний (груминг) и количество актов дефекации по количеству фекальных шариков (болюсов).

Перенесенная гипоксическая травма вызывает нарушения когнитивного поведения животных. В группе гипоксического контроля отмечается снижение ориентировочно-исследовательской активности (горизонтальной и вертикальной активностей, норкового рефлекса) в 4,6 раза относительно интактных животных (табл. 1).

Порошок высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. (в соотношении 1:1), а также водные и водно-этанольные извлечения из надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. увеличивают двигательную активность в «открытом поле» у животных после гипоксического воздействия в 3,6-3,9 раза относительно гипоксического контроля преимущественно за счет повышения горизонтальной и вертикальной активностей, норкового рефлекса (табл. 1). Экстракт шлемника байкальского (прототип) уступает всем объектам исследования (порошок высушенного растительного сырья и извлечения манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L.) по уровню восстановления показателей ориентировочно-исследовательского поведения животных после перенесенной гипоксической травмы.

Пример 10: влияние на обучение и память исследовали при выработке и воспроизведении условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ). Методика УРПИ [10] основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства у грызунов. Экспериментальная установка представляет собой камеру, состоящую из двух отсеков - большого (светлого) и малого (темного). Животное помещают в светлый отсек и через некоторое время оно переходит в темный, после чего отверстие, соединяющее оба отсека, перекрывают дверкой и на пол темного отсека, представляющего собой решетку из параллельных чередующихся электродов, подают электрический ток импульсами продолжительностью 50 мс частотой 5 Гц и амплитудой 50 мА. Через 10 с дверку открывают и животное может выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животных вырабатывают условный рефлекс избегания темного пространства. При проверке рефлекса животное помещают в угол камеры светлого отсека, противоположный от входа, и наблюдают в течение 3 мин. Регистрируют время первого захода в темный отсек (латентное время захода), суммарное время пребывания в темном отсеке, количество животных с выработанным рефлексом. Критерием наличия рефлекса считают отсутствие захождения животного в темный отсек в течение 3 мин с момента помещения мыши в светлую камеру. Проверку сохранности рефлекса осуществляют на 14 и 21 сут после выработки рефлекса.

Перенесенная гипоксическая травма способствует ухудшению сохранности УРПИ при проверках рефлекса в группе гипоксического контроля, что показывает нарушение когнитивного поведения у животных (табл. 2).

Порошок высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. (в соотношении 1:1), а также их водные и водно-этанольные извлечения увеличивают сохранность условного рефлекса пассивного избегания и способствуют воспроизводимости рефлекса от 70 до 90% при проверках на 14 и 21 сут после выработки у животных, перенесших гипоксическую травму (табл. 2). При этом экстракт шлемника байкальского (прототип) существенно уступает всем объектам исследования (порошок высушенного растительного сырья и извлечения манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L.) по воспроизводимости условного рефлекса в поздние сроки (21 сут) при проверке.

Таким образом, в результате исследования установлено выраженное ноотропное действие высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. в соотношении 1:1, а также их водных и водно-этанольных извлечений на некоторые показатели состояния ЦНС экспериментальных животных (увеличение сохранности УРПИ и двигательной активности после гипоксического воздействия), превосходящее экстракт шлемника байкальского (прототип) по уровню восстановления показателей ориентировочно-исследовательского поведения и воспроизводимости условного рефлекса в поздние сроки после перенесенной гипоксической травмы.

На основании проведенных экспериментальных исследований можно сделать вывод о том, что применение высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. в соотношении 1:1, а также их водных и водно-этанольных извлечений, является перспективным для получения более высокого лечебного эффекта.

Положительный эффект достигнут благодаря использованию высушенных измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. в соотношении 1:1, а также их водных и водно-этанольных извлечений, в качестве ноотропного средства, что позволило расширить арсенал средств, обладающих ноотропным действием, с повышенной специфической активностью.

Литература

1. Машковский M.Д. Лекарственные средства - М.: Новая Волна, 2002. - T. 1. - С. 131-142.

2. Малин Д.И. Побочное действие психотропных средств. - М.: Вузовская книга, 2000. - С. 184-189.

3. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Литвиненко В.И. и др. Шлемник байкальский. Фитохимия и фармакологические свойства. - Томск: Изд-во Томского ун-та, 1994. - С. 151-180.

4. Крылов Г.В, Казакова Η.Ф., Степанов Э.В. Зеленая аптека. - Кемерово: Современ. отеч. кн., 1993. - С. 148.

5. Зыков Α.Α., Головнев В.Α., Белкина О.М. Изменение жирнокислотного состава крови и лимфы на фоне действия биофлавоноидами манжетки обыкновенной при инфаркте миокарда // Бюллетень Сибирского отделения АМН СССР. - 2000. - №1. - С. 63-64.

6. Зорина Е.В. Фармакогностическое изучение видов рода Alchemilla Пермского края: автореф. дис.… канд. фарм. наук. - Пермь, 2009. - С. 17-20.

7. Мурин И.И., Баева В.М., Козлов А.М. Оценка влияния препаратов растительного происхождения на процесс рецидивирования злокачественных опухолей // Изыскание и создание природных лекарственных средств: Межвузовский сборник научных трудов с международным участием, посвященный 25-летию кафедры фармакогнозии и ботаники Яросл. гос. мед. академии / под ред. проф. Н.С. Фурсы. - Ярославль: ООО «ЯрМедиаГруп», 2009. - С. 210-213.

8. Плотников М.Б., Колтунов Α.Α., Алиев О.И. и др. Гемореологические свойства экстрактов из некоторых растений, содержащих флавоноиды // Раст. ресурсы. - 1998. - №1. - С. 87-90.

9. Walsh R.Ν., Cummins R.A. The open - field test: a critical review // Psychol. Bull. - 1976. - V. 83. - P. 482-504.

10. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Дж. П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. - М.: Высшая школа, 1991. - С.175-177.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему ноотропным действием. Применение смеси высушенных и измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной, взятых в соотношении 1:1, или водного экстракта такой смеси, или водно-этанольного экстракта такой смеси, в качестве средства, обладающего ноотропным действием. Вышеописанное средство обладает выраженным ноотропным действием. 2 табл., 10 пр.

Применение смеси высушенных и измельченных надземной и подземной частей манжетки обыкновенной, взятых в соотношении 1:1, или водного экстракта такой смеси, или водно-этанольного экстракта такой смеси, в качестве средства, обладающего ноотропным действием.