СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ Российский патент 2006 года по МПК A61K35/28 A61K35/407 A61K35/48 A61P37/02 

Способ получения препарата для повышения резистентности организма животных.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу получения средства, повышающего резистентность организма животных.

Известен способ получения средства для повышения резистентности организма молодняка животных, включающий очистку железистых тканей от соединительно-тканных и жировых элементов, промывку их и гомогенизацию. В качестве железистых тканей используют тимус, селезенку и поджелудочную железу, которые после гомогенизации смешивают, добавляют поджелудочный сок и консервант хинозол, а затем выдерживают смесь в течение 5-6 суток при 38-40°С с периодическим ежесуточным перемешиванием (Авт. св. №904707, М. Кл. А 61 К 35/26 1982 г. Средство для повышения резистентности организма молодняка животных и способ его получения. Авт. А.М.Смирнов и др.).

Недостатком этого способа является то, что процесс ферментации и гидролиза тканей с помощью ферментов поджелудочной железы и желудочного сока занимает длительное время (до 6 суток), а температурный режим 38-40°С благоприятствует проявлению ростовой активности микрофлоры, что требует добавления консерванта. Полученный таким образом гидролизат содержит взвесь тканей, существенно затрудняющую процесс фильтрации через марлевый фильтр. Для получения очищенного от баланса веществ гидролизат после фильтрации подвергают центрифугированию. Отсутствие в препарате пролонгатора сокращает период его биологического действия в организме.

Для устранения вышеуказанных недостатков предлагается способ получения препарата, повышающего резистентность организма животных, включающий применение известных технологических приемов, в частности замораживание и размораживание паренхиматозных органов животных, таких как селезенка, печень, тестикулы, их гомогенизацию, кислотный гидролиз и очистку янтарной кислотой.

Новым является то, что при получении тканевого гидролизата в гомогенат добавляют янтарную кислоту, новокаин, гель гидрата окиси алюминия. Янтарная кислота - сама по себе универсальный стимулятор обмена веществ живой клетки, естественный эндогенный субстрат окислительно-восстановительных процессов (цикл Кребса) в живых организмах.

Добавление новокаина обусловлено необходимостью снятия болевой реакции при парентеральном методе введения. Кроме того, тканевые препараты, приготовленные на растворе новокаина, оказывают более быстро стимулирующее действие, чем взвеси, приготовленные на физиологическом растворе.

Добавление в гидролизат геля гидрата окиси алюминия позволяет обеспечить более длительный период действия, в связи с чем отпадает необходимость проведения курса учащенного применения препарата.

В конечном итоге получается менее реактогенный препарат, обладающий выраженным антиинфекционным действием.

Пример 1. Получение препарата для повышения резистентности организма с использованием тканей селезенки.

Для получения препарата использовали 500 г селезенки, которую подвергли замораживанию в морозильной камере. После частичного оттаивания подвергли гомогенизации. В полученный гомогенизат добавили 5 частей дистиллированной воды, в которой предварительно растворили янтарную кислоту до рН 4,0. Полученную смесь тщательно перемешали и поместили в термостат. Кислотный гидролиз провели в режиме 45°С. После полного разделения гомогената на жидкую гидролизированную часть и осадок из негидролизированной части тканей, декантировали гидролизат. Дробным добавлением 3% раствора едкого натрия довели рН до нейтральной, равной 7,0.

Требуемое количество порошка новокаина рассчитали с таким условием, чтобы его концентрация в гидролизате находилась в пределах 0,4-0,5%.

Для сорбции биологически активных веществ препарата в гидролизат добавили гель гидрата окиси алюминия из расчета 2-3 мг/мл. Полученный гидролизат расфасовали по флаконам емкостью 50 мл и провели стерилизацию автоклавированием в режиме 1,0 атм в течение 20 минут.

Стерильность препарата оценили по результатам контрольных посевов содержимого флаконов на мясопептонный агар и мясопептонный бульон. Роста микроорганизмов не наблюдали, что свидетельствовало о стерильности гидролизата.

Антиинфекционную активность указанного гидролизата селезенки испытали при моделировании острого инфекционного процесса на белых мышах.

Порядок сравнительной оценки предусматривал однократное внутрибрюшинное введение гидролизатов селезенки в дозе 0,5 мл белым мышам массой 20-21 г с последующим их заражением культурой Е. coli в дозе 4 LD₅₀. Заражение провели спустя сутки, на 7 и 14 день после иммунизации. Результаты наблюдений представлены в таблице 1.

Таблица 1.
Антиинфекционная активность гидролизатов селезенки при моделировании острого инфекционного процесса культурой Е. coli на белых мышах.ПрепаратЗаражение мышей спустя 12 часов7 дней14 днейГидролизат с добавлением новокаина10/410/410/5Гидролизат с добавлением геля гидрата окиси алюминия10/410/410/30,85% раствор хлорида натрия (контроль)3/33/33/3Примечание: в числителе количество зараженных мышей; в знаменателе - из числа зараженных пало.

Таким образом, добавление в гидролизат геля гидрата окиси алюминия позволило стабилизировать антиинфекционную активность препарата в отдаленные периоды после иммунизации мышей.

Пример 2. Получение препарата для повышения резистентности организма с использованием тканей печени.

Для получения препарата использовали 300 г печени. Ткань печени подвергли замораживанию в морозильной камере. После частичного оттаивания ее подвергли гомогенизации. В полученный гомогенат добавили 5 частей дистиллированной воды, в которой растворили янтарную кислоту до рН 4,0. Полученную смесь тщательно перемешивали. Кислотный гидролиз провели при температуре 45°С. Спустя 3 часа произошло полное разделение содержимого биобутыли с гомогенатом на жидкую часть гидролизата и осадок. Декантированием отделили гидролизат от осадка. Добавив 3% раствора едкого натрия, нейтрализовали повышенную кислотность гидролизата. В гидролизат добавили гель гидрата окиси алюминия из расчета 2-3 мг/мл.

Расфасовку, стерилизацию и контроль на стерильность гидролизата провели, как и в примере 1.

Антиинфекционную активность печеночного гидролизата испытали на белых мышах массой 17-18 г при моделировании острого инфекционного процесса культурой S. aureus в дозе 4LD₅₀. Результаты наблюдений представлены в таблице 2.

Таблица 2.
Антиинфекционная активность гидролизатов печени при моделировании острого инфекционного процесса культурой S. aureus на белых мышах.ПрепаратЗаражение мышей спустя 12 часов7 дней14 днейГидролизат с добавлением новокаина7/47/47/6Гидролизат с добавлением гидрата окиси алюминия7/47/37/4Гидролизат без добавления новокаина и гидрата окиси алюминия7/47/47/60,85% раствор хлорида натрия (контроль)3/33/33/3Примечание: числитель - количество зараженных мышей; знаменатель - число павших мышей.

Исходя из второй серии опытов по испытанию янтарного гидролизата печени установлено, что добавление в препарат геля гидрата окиси алюминия пролонгирует антиинфекционную активность гидролизата в отдаленный период после иммунизации.

Более низкий уровень антиинфекционной активности гидролизата печени по отношению к гидролизату селезенки обусловлен тем, что последняя относится к органам иммунной системы, что и оказывает более выраженное иммуногенное действие.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу получения препарата для повышения резистентности организма животных, который включает замораживание тканей паренхиматозных органов животных, размораживание, гомогенизацию, гидролиз. Гидролиз осуществляют в присутствии янтарной кислоты при pH-4,0 и температуре 45°С. Гидролизат декантируют, после декантирования добавляют 3% раствора едкого натра до pH 7,0, к гидролизату добавляют порошок новокаина до 0,4-0,5% концентрации и гель гидрата окиси алюминия из расчета 2-3 мг/мл. Полученный препарат расфасовывают по флаконам емкостью 50 мл и подвергают стерилизации автоклавированием в режиме 1,0 атм в течение 20 минут. Технический результат: менее реактогенный конечный продукт, обладающий пролонгированным действием и повышенной антиинфекционной активностью, 2 табл.

Способ получения препарата для повышения резистентности организма животных, включающий замораживание тканей паренхиматозных органов, размораживание, гомогенизацию, гидролиз, отличающийся тем, что гидролиз осуществляют в присутствии янтарной кислоты при pH 4,0 в режиме 45°С, гидролизат декантируют, доводят pH гидролизата до 7,0, в гидролизате растворяют порошок новокаина до его концентрации в препарате, равной 0,4-0,5%, и добавляют гель гидрата окиси алюминия из расчета 2-3 мг/мл.